一种含有β-葡聚糖酶的生长猪专用酶及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种含有β-葡聚糖酶的生长猪专用酶及其制备方法，属于饲料酶制剂【技术领域】。所述生长猪专用酶由以下重量份数的酶制剂组成：中草药粉剂0.5-2份，木聚糖酶80-10份，蛋白酶20-40份，果胶酶10-20份，纤维素酶10-15份，β-葡聚糖酶15-25份，中温α-淀粉酶10-15份。其中β-葡聚糖酶产自地衣芽孢杆菌（Βacillus?licheniformis）β-10-25，保藏编号CCTCC?NO：M2013538，制备方法如下：斜面菌种活化培养获得液体种子；发酵阶段采用低温培养基补入和分批接种相结合的方法；发酵液经过滤、浓缩、精滤、干燥得获得热稳定性好的β-葡聚糖酶。所得复合酶能提高饲料转化率，降低饲料成本。
【专利说明】一种含有β-葡聚糖酶的生长猪专用酶及其制备方法
【技术领域】:
[0001]本发明属于酶制剂【技术领域】，具体涉及一种生长猪专用酶及其制备方法。
【背景技术】:
[0002]随着近代酶技术及生物技术的发展，高效能生物活性物质——酶制剂已能大规模地工业化生产，并被应用于饲料工业中，许多实验和实际应用结果都表明，饲用酶制剂作为一种饲料添加剂能有效地提高饲料的利用率、促进动物生长和防治动物疾病的发生，与抗生素和激素类物质相比，具有卓越的安全性，引起了全球范围内饲料行业的高度重视。
[0003]饲料酶制剂是为了提高动物对饲料的消化、利用或改善动物体内的代谢效能而加入饲料中的酶类物质。目前可以在饲料中添加的酶制剂包括淀粉酶、α-半乳糖苷酶、纤维素酶、β -葡聚糖酶、葡萄糖氧化酶、脂肪酶、麦芽糖酶、甘露聚糖酶、果胶酶、植酸酶、蛋白酶、角蛋白酶、木聚糖酶等。由于饲料原料结构的复杂性，目前饲料工业生产中更多使用的是复合酶制剂。复合酶制剂是一种新型的饲料添加剂，在国外其应用始于20世纪70年代，而我国的饲料工业在20世纪90年代才开展酶制剂的应用。因此，加大对饲料复合酶制剂的研究对于我国的养殖业发展具有非常重要的意义。
[0004]饲用酶种类繁多，在畜禽生产中均取得了相当好的效果。前苏联科学家在早期断奶仔猪日粮中添加淀粉糊精酶，使得日增重提高14.6%，碳水化合物消化率提高77.2%。据美国有关资料报道，Collier在早期断奶仔猪日粮中补充酶制剂(含蛋白酶、淀粉酶、葡聚糖酶)，结果实验组比对照组日增重提高了 25%，饲料转化率提高了 15.5%。西德学者曾多次进行育肥猪添加复合酶制剂的实验研究，在以大麦为主的日粮中，添加0.1%的复合酶制剂，结果为:实验组比对照组生长速度提高5.1%，饲料利用率提高4.1%。可见，酶制剂能显著提高畜禽对饲料的消化吸收，促`进生长，降低饲料成本，并且作为一种绿色饲料添加剂，它的使用具有安全性，有利于畜牧业生产走上经济节约型的发展道路。
[0005]目前，市场上针对饲料的复合酶多种多样，但是有的配比不合理，达不到应有的效果，导致畜禽生长缓慢，生产力低下；有的活性低，添加量大，导致饲养成本高。鉴于粮食的短缺是困扰我国饲料工业发展的主要因素，因此，要选择有利于节约粮食资源的畜牧业发展道路，提高饲料利用率，充分利用有限的粮食资源获得尽可能多的畜产品。
【发明内容】
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[0006]本发明的目的在于针对上述缺陷提供一种配比合理，活性高的单一酶种复配的生长猪专用酶及其制备方法。
[0007]本发明的目的通过以下技术方案实现:
[0008]一种含有β_葡聚糖酶的生长猪专用酶，由以下重量份数的组分组成:中草药粉剂0.5-2份，木聚糖酶80-100份，蛋白酶20-40份，果胶酶10-20份，纤维素酶10-15份，β -葡聚糖酶15-25份，中温α -淀粉酶10-15份。
[0009]所述木聚糖酶、蛋白酶、果胶酶、纤维素酶和中温α -淀粉酶均为湖南鸿鹰祥生物工程股份有限公司产品；
[0010]所述中草药粉剂的制备方法如下:
[0011]称取黄芪20-30份；党参10-18份；柴胡10-15份；麦冬10-15份；分别将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加3-6倍重量的水，控制温度70°C~90°C保持2~4h，然后降温至45-60°C，加入混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，IlOff功率下超声萃取0.5~1.5h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得中草药粉剂；
[0012]所述混合酶添加量为混合物料总重量的5-10% ；
[0013]所述混合酶的重量份数组成为:P -葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，戊聚糖酶15-20份，普鲁兰酶20-30份，(6-淀粉酶10-15份，果胶酶10-15份，酸性蛋白酶10-15份，木瓜蛋白酶5-10份，葡萄糖氧化酶5-10份，酸性磷酸酶5-10份；
[0014]所述乙醇和丙醇的质量比例为1:1-1.5。
[0015]所述0 -葡聚糖酶制备方法如下:
[0016](I)种子培养
[0017]将地衣芽孢杆菌斜面菌种经三级摇瓶发酵及一级种子罐发酵；
[0018]所述种子培养的培养基为:酵母粉0.5%，蛋白胨I%，可溶性淀粉I%，NaCl 1%,pH4.5-7.0，121-123°C灭菌 30_40min。
[0019](2)发酵罐发酵`
[0020]将一级种子罐发酵液以3%接种量接入含有3L发酵培养基的发酵罐中，培养温度35-45 °C，搅拌速度200-300r/min，通风量(V/V) 1:1-3，培养时间10_15h ;然后将IL经过121°C灭菌20min，温度为10°C的发酵培养基补入发酵罐，待温度升至35_45°C时恒温培养15-20h ;此时，将一级种子罐发酵液以2%接种量追加接入发酵罐，恒温培养10-15h ;继续将IL经过121°C灭菌20min，温度为10°C的发酵培养基补入发酵罐，待温度升至35_45°C时恒温培养10-15h ;
[0021]所述发酵培养基组成为:麦麸75g，玉米粉55g，米糠25g，豆饼粉20g，P -葡聚糖2g，中草药剂粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米浆3g，硫酸铵2g，磷酸氢二钾2g，磷酸二氢钾2g，柠檬酸钠3g，消泡剂0.5g,纯净水1000mL, pH值4.5-7.0，121°C灭菌20min ；
[0022]所述发酵培养基的调配方法为:按比例准确称取原料，将原料中的纯净水、玉米粉、豆饼粉投入配料罐中，调节PH值3-7，加入中温淀粉酶(3u/g玉米粉)与高温淀粉酶(30u/g玉米粉)，同时边搅拌边升温至70°C保温15-30min，然后缓慢升温至90°C保温15-30min进行液化，最后加入其它原料，搅拌均匀，pH3_7，121_123°C灭菌30_40min备用。
[0023]溶解氧控制:通过调整搅拌转速及通风量，控制溶解氧15-30% ；
[0024]PH控制:通过补氨水或稀磷酸，控制发酵过程中pH值保持在3-7 ；
[0025]补料控制:当发酵液中的还原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml时,开始添加补料培养基，补料量以维持发酵液还原糖含量为2mg/ml-5mg/ml ；
[0026]放罐标准:60-80%菌体衰老自溶，酶活力增长缓慢。
[0027](3)发酵液经过滤、浓缩、精滤、干燥得P -葡聚糖酶。
[0028]所述地衣芽孢杆菌具体为地衣芽孢杆菌(B acillus licheniformis) 0-10-25。该菌株已于2013年11月3日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为:湖北省武汉市武昌区珞珈山武汉大学生命科学学院)，保藏号为CCTCC NO:M2013538o
[0029]该菌株特点如下:
[0030]所述菌株在固体平板上菌落为白色，边缘不整齐，表面干燥不透明，镜检为革兰氏阳性细菌，细胞形态呈短杆状，芽孢中生，椭圆形，不膨大。
[0031]所述菌株生理生化特征:V-P试验( + )，淀粉水解( + )，酪素水解( + )，明胶水解( + )，硝酸盐还原( + )，吲哚试验(_)，利用柠檬酸盐( + )，硝酸还原( + )，甘露醇( + )，木糖(+ )。
[0032]优选的，一种生长猪专用酶按如下重量份数组成:中草药粉剂1份，木聚糖酶90份，蛋白酶30份，果胶酶15份，纤维素酶12份，^ -葡聚糖酶20份，中温a -淀粉酶12份。
[0033]所述生长猪专用酶适用于饲料加工厂和养殖场自配饲料，使用时应与饲料中的其它原料混合均匀。建议每吨全价料添加量为80-150g (饲料中小麦用量低于30%，添加量为80-100g/t，小麦用量超过30%，添加量为100-150g/t)。
[0034]有益效果:
[0035]1、本发明所添加的`P -葡聚糖酶酶活力高达8000-10000u/ml，是原始菌株的2.5倍；在50-70°C条件下具有较高酶活，最适反应温度为65°C ;适用反应pH值范围为5.0 ;在室温下保存6个月后酶活损失小于25%，4°C保存12个月后酶活损失小于20%。比现有的^ -葡聚糖酶酶活力高，酶作用最适PH值范围宽泛，热稳定性及储存稳定性均较高，特别适合反应温度高、液化工艺与糖化工艺并存的工业化需求。
[0036]2、本发明所使用的(6-葡聚糖酶具有良好的热稳定性，在60°C条件下保存Ih后仍能保持80%以上酶活，70°C条件下保存IOmin后保持20%以上酶活。
[0037]3、相较于添加有普通(6-葡聚糖酶的生长猪专用酶，在同样的用量下本发明对淀粉的酶解率更高，从而提高饲料转化率，降低饲料成本。
[0038]4、本发明中添加了中草药粉剂，其具有天然抗菌和增强免疫力的作用，可以有效的提高畜禽动物的抗应激能力、免疫功能以及抗病防御机能。另外，中草药粉剂中添加了具有抗热应激原作用的黄芩、柴胡，使得本发明产品具有更好的稳定性和保存活性，较没有添加中草药粉剂的产品在长时间高温条件下的保存活性提高了 15%。
[0039]5、本发明配比合理，有效的补充了内源酶的不足，促进营养物质的消化吸收，提高了饲料利用率，节约了饲养成本。
【具体实施方式】:
[0040]实施例1中草药粉剂的制备方法
[0041]一种中草药粉剂的制备方法如下:
[0042]称取黄芪25份；党参15份；柴胡12份；麦冬12份；分别将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加5倍重量的水，控制温度80°C保持3h，然后降温至50°C，加入混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为6，酶解3h，最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，IlW超声萃取lh，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得中草药粉剂。
[0043]所述混合酶添加量为混合物料总重量的8%。
[0044]所述混合酶的重量份数组成为:P -葡萄糖苷酶12份，木聚糖酶18份，戊聚糖酶18份，普鲁兰酶25份，β -淀粉酶18份，果胶酶12份，酸性蛋白酶12份，木瓜蛋白酶8份，葡萄糖氧化酶8份，酸性磷酸酶8份。
[0045]所述乙醇和丙醇的质量比例为1:1.2。
[0046]实施例2 —种β -葡聚糖酶的制备方法
[0047]一种β -葡聚糖酶的制备方法，包括如下步骤:
[0048](I)液体种子扩大培养
[0049]①一级种子培养:将活化后的斜面菌种2环接入500毫升摇瓶中，培养基装量100毫升，旋转式摇床180转/分，培养温度40°C，培养时间IOh ；
[0050]②二级种子培养:将一级种子按照10%的接种量接入500毫升二级种子摇瓶中，培养条件与一级种子相同；
[0051]③三级种子培养:将二级种子以10%接种量接入5000毫升三级种子摇瓶中，培养基装量1000毫升，旋转式摇床100转/分，培养温度40°C，培养时间12h ；
[0052]④一级种子罐培养:将三级种子以10%接种量接入总容积为150L的一级种子罐，发酵培养基装量100L，培养温度41 °C，搅拌速度300rpm，通风量(V/V) 1: 1.5，罐压0.05Mpa,培养时间15h ；
[0053]所述种子培养基组成为:酵母粉0.5 %，蛋白胨I %，可溶性淀粉I %，NaCl I %，pH5.5，121°C 灭菌 35min。
`[0054](2)发酵罐发酵
[0055]将一级种子罐发酵液以3%接种量接入含有3L发酵培养基的发酵罐中，培养温度37°C，搅拌速度250r/min，通风量(V/V) 1:1-3，培养时间12h ;然后将IL经过121°C灭菌20min，温度为10°C的发酵培养基补入发酵罐，待温度升至37°C时恒温培养18h ;此时，将一级种子罐发酵液以2%接种量追加接入发酵罐，恒温培养12h ;继续将IL经过121°C灭菌20min，温度为10°C的发酵培养基补入发酵罐，待温度升至37°C时恒温培养12h ；
[0056]所述发酵培养基组成为:麦麸75g，玉米粉55g，米糠25g，豆饼粉20g，β -葡聚糖2g，中草药剂粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米浆3g，硫酸铵2g，磷酸氢二钾2g，磷酸二氢钾2g，柠檬酸钠3g，消泡剂0.5g,纯净水1000mL, pH值5.5，121°C灭菌20min ；
[0057]所述发酵培养基的调配方法为:按比例准确称取原料，将原料中的纯净水、玉米粉、豆饼粉投入配料罐中，调节PH值5.5，加入中温淀粉酶(3u/g玉米粉)与高温淀粉酶(30u/g玉米粉)，同时边搅拌边升温至70°C保温20min，然后缓慢升温至90°C保温20min进行液化，最后加入其它原料，搅拌均匀，调初始PH5.5，121°C灭菌35min备用。
[0058]所述中草药粉剂的制备方法同实施例1.[0059](3)发酵液经过滤、浓缩、精滤、干燥得β -葡聚糖酶。
[0060]经上述制备方法得到的β -葡聚糖酶液体酶活力为10000u/ml。
[0061]实施例3 —种饲用复合酶制剂的制备方法
[0062]一种生长猪专用酶，由以下重量份数的酶制剂组成:
[0063]中草药粉剂1份，木聚糖酶90份，蛋白酶30份，果胶酶15份，纤维素酶12份，β -葡聚糖酶20份，中温α -淀粉酶12份。
[0064]取产自湖南鸿鹰祥生物工程股份有限公司的木聚糖酶90份，蛋白酶30份，纤维素酶12份，中温α -淀粉酶12份，果胶酶15份，以及实施例1所得的中草药粉剂1份，实施例2所述的(6-葡聚糖酶20份于25°C条件下在混合机中搅拌均匀，搅拌时间为5分钟。搅拌均匀装箱后于常温或冷室中保存。
[0065]实施例4 一种饲用复合酶制剂的制备方法
[0066]一种生长猪专用酶，由以下重量份数的酶制剂组成:
[0067]中草药粉剂0.5份，木聚糖酶80份，蛋白酶20份，果胶酶10份，纤维素酶10份，^ -葡聚糖酶25份，中温a -淀粉酶15份。
[0068]取产自湖南鸿鹰祥生物工程股份有限公司的木聚糖酶80份，蛋白酶20份，纤维素酶10份，中温a -淀粉酶15份，果胶酶10份，以及实施例1所得的中草药粉剂0.5份，实施例2所述的P -葡聚糖酶25份于25°C条件下在混合机中搅拌均匀，搅拌时间为5分钟。搅拌均匀装箱后于常温或冷室中保存。
[0069]实施例5 —种饲用复合酶制剂的制备方法
[0070]—种生长猪专用酶，由以下重量份数的酶制剂组成:
[0071]中草药粉剂2份，木聚糖酶100份，蛋白酶40份，果胶酶20份，纤维素酶15份，^ -葡聚糖酶15份，中温a -淀粉酶10份。
[0072]取产自湖南鸿鹰祥生物工程股份有限公司的木聚糖酶100份，蛋白酶40份，纤维素酶15份，中温a -淀粉酶10份，果胶酶20份，以及实施例1所得的中草药粉剂2份，实施例2所述的P -葡聚糖酶15份于25°C条件下在混合机中搅拌均匀，搅拌时间为5分钟。搅拌均匀装箱后于常温或冷室中保存。
[0073]实施例6效果对比实验
`[0074]选取120头30Kg生长猪，按血统及性别无差异分为实验组和对照组，每组3个重复，每个重复20头猪。实验期为28天，实验组每吨饲料添加本实施例3所述复合酶制剂120g，对照组不添加复合酶制剂，于试验期的始末日早晨空腹称重，计算饲料日增重和料肉比，并对毛色进行打分。实验结果如下表所示:
[0075]
【权利要求】
1.一种含有3 -葡聚糖酶的生长猪专用酶，由以下重量份数的组分组成:中草药粉剂0.5-2份，木聚糖酶80-10份，蛋白酶20-40份，果胶酶10-20份，纤维素酶10-15份，(6-葡聚糖酶15-25份，中温a -淀粉酶10-15份； 所述P -葡聚糖酶由地衣芽孢杆菌(B acillus licheniformis) ^ -10-25经生物发酵制得，所述菌株保藏编号为CCTCC N0:M2013538o
2.如权利要求1所述一种含有(6-葡聚糖酶的生长猪专用酶，其特征在于，所述中草药粉剂的制备方法如下: 称取黄芪20-30份；党参10-18份；柴胡10-15份；麦冬10-15份；分别将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加3-6倍重量的水，控制温度70°C~90°C保持2~4h，然后降温至45-60°C，加入混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，IlOff功率下超声萃取0.5~1.5h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得中草药粉剂。
3.如权利要求2所述的一种含有3-葡聚糖酶的生长猪专用酶，其特征在于，所述混合酶制剂组成如下:3 -葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，戊聚糖酶15-20份，普鲁兰酶20-30份，(6-淀粉酶10-15份，果胶酶10-15份，酸性蛋白酶10-15份，木瓜蛋白酶5-10份，葡萄糖氧化酶5-10份，酸性磷酸酶5-10份。
4.如权利要求1所 述一种含有(6-葡聚糖酶的生长猪专用酶，其特征在于，(6-葡聚糖酶的制备方法，包括如下步骤: 地衣芽孢杆菌3-10-25经斜面菌种活化培养后进行一、二、三级液体种子和种子罐培养；将一级种子罐发酵液以3%接种量接入含有3L发酵培养基的发酵罐中，培养温度35-45 °C，搅拌速度200-300r/min，通风量(V/V) 1:1-3，培养时间10_15h ;然后将IL经过121°C灭菌20min，温度为10°C的发酵培养基补入发酵罐，待温度升至35_45°C时恒温培养15-20h ;此时，将一级种子罐发酵液以2%接种量追加接入发酵罐，恒温培养10-15h ;继续将IL经过121°C灭菌20min，温度为10°C的发酵培养基补入发酵罐，待温度升至35_45°C时恒温培养10-15h ; 发酵液经过滤、浓缩、精滤、干燥得3 -葡聚糖酶。
5.如权利要求4所述的一种含有3-葡聚糖酶的生长猪专用酶，其特征在于，所述种子培养的培养基为:酵母粉0.5 %，蛋白胨I %，可溶性淀粉I %，NaCl I %，pH4.5-7.0 ； 所述发酵培养基组成为:麦麸75g，玉米粉55g，米糠25g，豆饼粉20g，3 -葡聚糖2g，中草药剂粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米浆3g，硫酸铵2g，磷酸氢二钾2g，磷酸二氢钾2g，柠檬酸钠3g，消泡剂0.5g,纯净水1000mL, pH值4.5-7.0 ； 所述发酵培养基的调配方法为:按比例准确称取原料，将原料中的纯净水、玉米粉、豆饼粉投入配料罐中，调节PH值3-7,加入中温淀粉酶(3u/g玉米粉)与高温淀粉酶(30u/g玉米粉)，同时边搅拌边升温至70°C保温15-30min，然后缓慢升温至90°C保温15_30min进行液化，最后加入其它原料，搅拌均匀，PH3-7，121-123°C灭菌30-40min备用。
6.一种制备如权利要求1所述含有(6-葡聚糖酶的生长猪专用酶的方法，包括如下步骤: 按照原料组成将木聚糖酶，蛋白酶，果胶酶，纤维素酶，(6-葡聚糖酶，中温a-淀粉酶，中草药粉剂混合均匀即可；所述木聚糖酶、蛋白酶、果胶酶、纤维素酶和中温α -淀粉酶为湖南鸿鹰祥生物工程股份有限公司产品； 所述中草药粉剂的制备方法如下: 称取黄芪20-30份；党参10-18份；柴胡10-15份；麦冬10-15份；分别将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加3-6倍重量的水，控制温度70°C~90°C保持2~4h，然后降温至45-60°C，加入混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，IlOff功率下超声萃取0.5~1.5h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得中草药粉剂； 所述混合酶添加量为混合物料总重量的5-10% ； 所述混合酶的重量份数组成为:β -葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，戊聚糖酶15-20份，普鲁兰酶20-30份，β-淀粉酶10-15份，果胶酶10-15份，酸性蛋白酶10-15份，木瓜蛋白酶5-10份，葡萄糖氧化酶5-10份，酸性磷酸酶5-10份； 所述乙醇和丙醇的质量比例为1:1-1.5 ； 所述β-葡聚糖酶制备方法如下: (1)种子培养 将地衣芽孢杆菌β -10-25斜面菌种经三级摇瓶发酵及一级种子罐发酵； 所述种子培养的培养基为:酵母粉0.5%，蛋白胨1%，可溶性淀粉1%，NaCll %,ρΗ4.5-7.0,121-123°C灭菌 30_40min ； (2)发酵罐发酵 将一级种子罐发酵液以3%接种量接入含有3L发酵培养基的发酵罐中，培养温度35-45°C，搅拌速度200-300r/min，通风量(V/V) 1:1-3,培养时间10_15h ;然后将IL经过121°C灭菌20min，温度为10°C的发酵培养基补入发酵罐，待温度升至35_45°C时恒温培养15-20h ;此时，将一级种子罐发酵液以2%接种量追加接入发酵罐，恒温培养10-15h ;继续将IL经过121°C灭菌20min，温度为10°C的发酵培养基补入发酵罐，待温度升至35_45°C时恒温培养10-15h ; 所述发酵培养基组成为:麦麸75g，玉米粉55g，米糠25g，豆饼粉20g，β -葡聚糖2g，中草药剂粉40g，海藻糖35g，酵母粉6g，玉米浆3g，硫酸铵2g，磷酸氢二钾2g，磷酸二氢钾2g，柠檬酸钠3g，消泡剂0.5g,纯净水1000mL, pH值4.5-7.0,121°C灭菌20min ； 所述发酵培养基的调配方法为:按比例准确称取原料，将原料中的纯净水、玉米粉、豆饼粉投入配料罐中，调节PH值3-7,加入中温淀粉酶(3u/g玉米粉)与高温淀粉酶(30u/g玉米粉)，同时边搅拌边升温至70°C保温15-30min，然后缓慢升温至90°C保温15_30min进行液化，最后加入其它原料，搅拌均匀，调初始PH3-7，121-123°C灭菌30_40min备用； 溶解氧控制:通过调整搅拌转速及通风量，控制溶解氧15-30% ； PH控制:通过补氨水或稀磷酸，控制发酵过程中pH值保持在3-7 ； 补料控制:当发酵液中的还原糖含量降至3mg/ml-8mg/ml时,开始添加补料培养基,补料量以维持发酵液还原糖含量为2mg/ml-5mg/ml ； 放罐标准:60-80%菌体衰老自溶，酶活力增长缓慢； (3)发酵液经过滤、浓缩、精滤、干燥得β-葡聚糖酶。
7.如权利要求1所述的一种含有β_葡聚糖酶的生长猪专用酶，其特征在于:由以下重量份数的组分组成:中草药粉剂1份，木聚糖酶90份，蛋白酶30份，果胶酶15份，纤维素酶12份，^ -葡聚糖酶20份，中温a -淀粉酶12份。
8.如权利要求1所述的一种含有(6-葡聚糖酶的生长猪专用酶在生长猪饲养中的应用 。
【文档编号】C12N9/88GK103805582SQ201310738210
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2013年12月27日 优先权日:2013年12月27日
【发明者】李洪兵, 张锦杰, 李贵骏, 朱永明, 易继云 申请人:湖南鸿鹰生物科技有限公司