通过抑制p68与钙调蛋白相互作用来预防癌症转移及抑制炎症的方法

通过抑制p68与钙调蛋白相互作用来预防癌症转移及抑制炎症的方法
【专利摘要】本发明揭示用于抑制癌症转移及炎症的组合物及方法。所述方法一般涉及对一受治疗者施用一含有能选择性地抑制p68RNA解旋酶在癌细胞中结合到钙调蛋白(CaM)的药剂的组合物。
【专利说明】通过抑制P68与钙调蛋白相互作用来预防癌症转移及抑制 炎症的方法
[0001] 先前相关申请资料
[0002] 本申请对在2012年3月14日提交的美国61/610, 853号临时专利申请 (U.S.ProvisionalPatentApplicationSerialNo. 61/610, 853)提出优先权要求，而且据 此通过引用将所述美国临时专利申请全部并入本专利。
[0003] 关于美国联邦资助的研宄或发展的声明
[0004] 本发明是在美国政府支持下由美国国家卫生研宄院（NationalInstitutesof Health)根据"CA118113号协议"（AgreementCA118113)作出的。美国政府拥有所述发明 的某些权利。

【技术领域】
[0005] 本发明一般涉及细胞迀移，尤其涉及用于抑制癌细胞转移及炎症的多种组合物及 方法。
[0006] 背景
[0007] 虽然癌症的研宄及治疗方面已有极大进步，但癌症在美国是排名第二的主要死亡 原因。这些死亡中大约有90%是由于癌症转移，而癌症转移指的是癌细胞从其起源组织迀 移并在其他部位移生的能力。


【发明内容】

[0008] 本发明揭示用于抑制细胞迀移的组合物及方法。由于转移及炎症涉及异常的细胞 迀移。因此，本发明揭示用于抑制癌细胞转移或炎症的组合物及方法。所述方法一般涉及对 一需要给药的受治疗者施用一含有能选择性地抑制P68核糖核酸解旋酶（P68RNA解旋酶） 在癌细胞中结合到钙调蛋白（CaM)的药剂的组合物。
[0009] 在有些实施例中，所述药剂是一种肽，该种肽含有人p68的IQ基序或一能结合 人钙调蛋白（CaM)的保守性变体。所述人p68的IQ基序含有氨基酸序列FVSAGIQTSF RTGNPTGTYQ(SEQIDN0:8)。然而，所述药剂也可以是含有氨基酸序列FVSAGIQTSF RTGNPTG(SEQIDN0:7)或FVSAGIQTSFRTGNPTGAYG(SEQIDN0:4)的肽。
[0010] 在有些实施例中，用于本发明揭示的方法中的多种肽的分子大小及电荷相同，以 便对癌细胞进行有效渗透。在有些实施例中，所述肽的长度为6至30个氨基酸。在有些实 施例中，所揭示的肽进一步含有一细胞渗透（内化）序列。
[0011] 在其他实施例中，所述药剂是一选择性地结合癌细胞中的P68RNA解旋酶的IQ基 序的抗体。
[0012] 本发明也揭示多种用于识别用于抑制癌症转移的药剂的方法。这些方法一般涉及 在适合P68肽结合到钙调蛋白（CaM)肽的条件下，使一候选药剂接触一含有p68肽及钙调 蛋白（CaM)肽的试样，以及测定所述p68肽结合到所述钙调蛋白（CaM)肽。在这些方法中， 与一对照试样相比，P68/钙调蛋白（CaM)结合的减少显示药剂抑制癌症转移。在一个例子 中，所述p68肽至少含有人p68核糖核酸（RNA)解旋酶的IQ基序或一能结合人钙调蛋白 (CaM)的保守性变体，而且所述钙调蛋白（CaM)肽至少含有人钙调蛋白（CaM)的p68结合区 域或一能结合P68的保守性变体。
[0013] 本发明也揭示多种用于治疗癌症及抑制癌症转移的药用组合物。所述多种药用组 合物可以含有一可选择性地抑制P68核糖核酸（RNA)解旋酶结合到钙调蛋白（CaM)的肽及 一药学上可接受的载体。在有些实施例中，所述药用组合物按用于抑制癌症在受治疗者身 上转移的单位剂量施用。在有些实施例中，介于大约1及2mg/kg之间的剂量的所述结合剂 有效。在有些实施例中，所述药用组合物进一步含有一抗肿瘤药剂。
[0014] 本发明也揭示一含有人p68的IQ基序或一能结合人钙调蛋白（CaM)的保守性变 体及一细胞渗透序列的隔离肽。

【专利附图】

【附图说明】
[0015] 图1A为一柱形图，其显示人细胞角蛋白-18信使核糖核酸（CK-18mRNA)水平（定 量逆转录-聚合酶链反应[RT-PCR]，相对于0 -肌动蛋白）：（1)得自以P印IQ治疗（柱 形1-5)、以一横跨氨基酸584-602的p68肽片段（"P印Y593"，SEQIDNO:2)治疗（柱形 6-10)、以磷酸化的P印Y593肽（"P印PhoY593"，SEQIDNO:3)(柱形11-15)或一横跨氨基 酸549-568的p68肽片段（"P印IQ"，SEQIDN0:4)治疗（柱形16-20)(各片段在N-末端 与TAT细胞可渗透性序列（SEQIDNO:6)融合）的、带有SW620肿瘤的异种移植物的小鼠 的脾脏提取物的人细胞角蛋白-18信使核糖核酸（CK-18mRNA)水平；或（2)在无肿瘤植入 但直接注射100个SW620细胞（102细胞/脾）的情况下，得自采集自小鼠的脾脏的人细胞 角蛋白-18信使核糖核酸（CK-18mRNA)水平。
[0016] 图1B为一图表，其显示在经过28日的细胞增生之后以缓冲剂治疗14日（柱形 1)、以P印Y593肽治疗14日（柱形2)、以P印PhoY593治疗14日（柱形3)或以P印IQ治疗 14日（柱形4)的情况下，采集自小鼠的SW620肿瘤的肿瘤重量（g)。
[0017] 图1C为一折线图，其显示SW620肿瘤在以缓冲剂（--)、P印Y593肽（---)、 P印PhoY593(-^_)或P印IQ(-A-)治疗之后，其肿瘤体积（mm3)为时间的函数而随时间变 化，所述肿瘤体积以下列公式计算：肿瘤体积=n/6X(宽度）2x长度。图1D为一柱形图， 其显示以缓冲剂治疗（柱形1)、以P印IQ治疗（柱形2)、以P印Y593肽治疗（柱形3)或以 P印Ph〇Y593治疗（柱形4)的SW620细胞中的溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU)掺入（经过48小 时的培养之后的折叠变化）。
[0018] 图2为一柱形图，其显示以缓冲剂治疗（柱形1)、以P印IQ治疗（柱形2)或以一 带有TAT的乱序重排肽（"P印Scram"，SEQIDNO:5)治疗（柱形3)的SW480细胞在（相 对于缓冲剂对照物的）一"博伊登室趋化性试验"(BoydonChamberassay)中的细胞迀移。
[0019] 图3A为一柱形图，其显示表达：（1)以靶向p68的核糖核酸干扰（RNAi) (" + "代表 "siRNA(p68) "）或非靶核糖核酸干扰（RNAi) ("NT"）治疗；及⑵以空载体（Vec)转染或以 一表达血凝素（HA)标记的p68("HA-p68"）的载体转染（所述p68为野生型（"WT"）或所述 p68含有IQ基序中的突变（"IQ-M")、三磷酸腺苷酶（ATPase)活性缺失突变（"LGLD"）或 Y593F突变）的SW480细胞的（相对于缓冲剂对照物的）一"博伊登室趋化性试验"(Boydon Chamberassay)中的细胞迀移。图3B为一柱形图，其显示以siRNA(p68)治疗并以空载体 (Vec)或一表达WT、IQ-M、LGLD或Y593FHA-p68s的载体转染的SW480细胞的转移（在划 痕创伤之后在一固定微观区域中的相对数量）。
[0020] 图4为一柱形图，其显示三磷酸腺苷酶（ATPase)活性（yM水解自三磷酸腺苷的 无机磷酸盐），包括在：（1)存在存在对照（柱形1及5)、得自酵母的RNA提取物（柱形2) 或体外组装微管（MT)培养基（柱形3-4、6-11)的情况下，（2)存在对照（柱形1-3)、0? 5mM CaCl2(Ca2+)(柱形4-6、8、10-11)或5mM乙二醇二乙醚二胺四乙酸（EGTA)(柱形7及9)的 情况下，以及（3)存在（柱形5-11)或不存在（柱形1-4)重组钙调蛋白（CaM)的情况下， 对照组（柱形5-7)、HA-p68WT(柱形1-4、8-10)或免疫提纯自"SW480划痕试验"的细胞溶 解产物的LGLD(柱形11)的三磷酸腺苷酶（ATPase)活性。
[0021] 图5A为一图表，其显示在经过26日的细胞增生之后以缓冲剂治疗14日（柱形1)、 以P印Scram治疗14日（柱形2)或以P印IQ治疗14日（柱形3)的情况下，所采集的4T1 肿瘤的肿瘤重量（g)。图5B及5C为柱形图，其显示以缓冲剂治疗（柱形1)、以P印Scram 治疗（柱形2)或以PepIQ治疗（柱形3)的荷载4T1肿瘤的小鼠的肺脏中的转移结节的数 目（图5B)及平均体积（图5C)。图?为一柱形图，其显示来自以缓冲剂治疗（柱形1)、 以PepScram治疗（柱形2)或以PepIQ治疗（柱形3)的荷载4T1肿瘤的小鼠的肝组织切 片中的微转移病灶数目。所述微转移病灶数目按从每一肝脏的随机选择的三个组织切片随 机选择的4个区域计算，而p值则通过成对"斯图顿特t-检验"（Student'st-Tests)来 计算。
[0022] 图6为一柱形图，其显示人细胞角蛋白-18信使核糖核酸（CK-18mRNA)水平（定 量逆转录-聚合酶链反应[RT-PCR]，相对于0 -肌动蛋白）：得自以P印IQ治疗（柱形1-5) 或以P印Scram治疗（柱形6-10)的、带有SW620肿瘤的异种移植物的小鼠的脾脏提取物 的人细胞角蛋白-18信使核糖核酸（CK-18mRNA)水平；或在无肿瘤植入但直接注射100个 SW620细胞（102细胞/脾）的情况下，得自采集自小鼠的脾脏的人细胞角蛋白-18信使核 糖核酸（CK-18mRNA)水平。
[0023] 图7A为一柱形图，其显示人细胞角蛋白-18信使核糖核酸（CK-18mRNA)水平（定 量逆转录-聚合酶链反应[RT-PCR]，相对于肌动蛋白）：（1)得自以空载体转染（柱 形1-6)、以一表达增强绿色荧光蛋白（eGFP)的载体转染（柱形7-12)或以一包含融合 到增强绿色荧光蛋白（eGFP)的C-末端的横跨氨基酸584-602的p68肽片段的融合蛋白 ("eGFP-IQ"，SEQIDN0:6)转染（柱形13-18)的、带有SW620肿瘤的异种移植物的小鼠 的脾脏提取物的人细胞角蛋白-18信使核糖核酸（CK-18mRNA)水平；或（2)在无肿瘤植入 但直接注射100个SW620细胞（102细胞/脾）的情况下，得自采集自小鼠的脾脏的人细胞 角蛋白-18信使核糖核酸（CK-18mRNA)水平。
[0024] 图7B为一图表，其显示采集自运载以一表达eGFP-IQ(柱形1)或eGFP(柱形2) 的载体转染的SW620细胞肿瘤的小鼠的小鼠脾脏的荧光强度（任意单位）。图7C为一图 表，其显示在经过28日的细胞增生之后所采集的以空载体（Vec)转染（柱形1)或以一表 达eGFP(柱形2)或eGFP-IQ(柱形3)的SW620肿瘤的肿瘤重量（g)。图7D为一柱形图， 其显示以一表达eGFP(柱形1)或eGFP-IQ(柱形2)的载体转染的SW620细胞在（相对于 eGFP对照物的）一"博伊登室趋化性试验"（BoydonChamberassay)中的细胞迀移。p值 通过成对"斯图顿特t_检验"（Student'st-Test)来计算。
[0025] 图8为一柱形图，其显不以Ong/ml(柱形1)、50ng/ml(柱形2)、100ng/ml(柱形 3)或500ng/ml(柱形4)的表皮细胞生长因子（EGF)治疗的SW480细胞在（相对于对照物 的）"博伊登室趋化性试验"（BoydonChamberassay)中的细胞迀移。
[0026]图9为一柱形图，其显示：在不存在培养基（柱形1)的情况下、在存在核糖核酸 (RNA)培养基（柱形2)的情况下、在存在MT培养基（柱形3-4)的情况下以及在最理想地 存在0. 5mMCaCl2(Ca2+)(柱形4)的情况下，免疫提纯自SW480细胞（无划痕创伤处置）的 细胞溶解产物的HA-p68的三磷酸腺苷酶（ATPase)活性（yM水解自三磷酸腺苷的无机磷 酸盐）。
[0027] 图10A为一示意图，其显示类似于p68与钙调蛋白（CaM)的相互作用的"p68_CaM" 融合蛋白。图10B为一柱形图，其显示以siRNA(p68)治疗并以一空载体（Vec)(柱形1)或 一表达P68或p68-CaM的载体（柱形2)转染的SW480细胞在（相对于Vec对照物的）"博 伊登室趋化性试验"(BoydonChamberassay)中的细胞迀移。图10C为一柱形图，其显示： (1)在不存在培养基（柱形1)的情况下、在存在核糖核酸（RNA)培养基（柱形2)的情况 下、或在存在MT培养基（柱形3-4)的情况下，（2)在存在0.5mMCaCl2(Ca)的情况下，以及 (3)在最理想地存在4mMATP(柱形1-3)的情况下，组氨酸标记的p68-CaM的三磷酸腺苷酶 (ATPase)活性（yM水解自三磷酸腺苷的无机磷酸盐）。
[0028] 图11为一柱形图，其显示以缓冲剂对照物治疗（柱形1)、以P印IQ治疗（柱形 2)或以PepScram治疗（柱形3)的4T1细胞在（相对于对照物的）"博伊登室趋化性试 验"（BoydonChamberassay)中的细胞迁移。

【具体实施方式】
[0029]I?定义
[0030] 术语"肿瘤性细胞"指的是经历异常细胞增殖（"瘤形成"）的细胞。肿瘤性细胞 的增生超过其周围的正常组织或与其周围的正常组织不协调。即使在刺激因素停止之后， 所述增生典型地以相同的过量方式持续，而且典型地导致肿瘤形成。
[0031] 术语"转移"指的是恶性肿瘤细胞从一个器官或部位扩散到另一非相邻的器官或 部位。癌细胞可以从一原发性肿瘤"脱离"、"泄漏"或"溢出"、进入淋巴管及血管、通过血液 循环，然后定居下来并在身体的其他部位的正常组织中生长。当肿瘤细胞转移时，新肿瘤称 为继发性或转移性癌症或肿瘤。
[0032] 术语"抗癌"或"抗肿瘤"指的是能抑制或预防癌症生长、癌症侵袭及/或癌症转 移的组合物，如药物或生物制剂。
[0033] 术语"个人"、"宿主"、"受治疗者"及"患者"在本文中可相互替代使用，指的是给 药或治疗的对象的任何个人。所述受治疗者可以是脊椎动物（如哺乳动物）。因此，所述受 治疗者可以是人类患者或牲畜患者。
[0034] 术语"治疗有效"指的是所使用的组合物的数量足以改善一疾病或紊乱的一个或 多个病因或症状。这样的改善只需要病因或症状减轻或改变，而不一定是消除病因或症状。
[0035] 术语"药学上可接受的"指的是那些与合理的利益/风险比率相称的、在没有过多 毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症的条件下，在合理的医疗判断范围内适合用于 接触人类及动物的组织的化合物、材料、组合物及/或剂型。
[0036] 术语"治疗"指的是在意图治愈、改善、稳定或预防一疾病、病理状态或紊乱的情况 下对一患者进行的医学管理。这个术语包括积极疗法（即特殊导向改善一疾病、病理状态 或紊乱的疗法），也包括病因疗法（即导向去除所述相关疾病、病理状态或紊乱的病因的疗 法）。此外，这个术语包括纾缓疗法（即为减轻症状而不是治愈所述疾病、病理状态或紊乱 而设计的疗法）；预防性疗法（即导向最小化或部分地或全面地抑制所述相关疾病、病理状 态或紊乱的发展的疗法）；支持性疗法（即用于补充另一导向改善所述相关疾病、病理状态 或紊乱的特异疗法的疗法）。
[0037] 术语"预防"指的是防止或减缓一疾病或状态或减低所述疾病或状态的严重性的 疗法。因此，如果某疗法可以治疗某表现一疾病的症状的受治疗者的所述疾病，则该种疗法 也可以预防尚未患上一些或所有所述症状的受治疗者患上该疾病。
[0038] 术语"抑制"指的是一活性、反应、状态、疾病或其他生物参数的减低。这个术语包 括但不限于所述活性、反应、状态或疾病的完全根除。这个术语也可以包括（例如）所述活 性、反应、状态或疾病比天然或对照水平减低10%。因此，所述减低可以是比所述天然或对 照水平低 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100% 或它们之间的任何数 量。
[0039] 术语"肽"、"蛋白"及"多肽"在本文中可相互替代使用，指的是一包括两个或多个 氨基酸（所述氨基酸由一个氨基酸的羧基键合到另一氨基酸的a-氨基）的天然或合成分 子。
[0040] 术语"融合蛋白"指的是通过在一个多肽的氨基末端与另一个多肽的羧基末端之 间形成的肽键连接两个或多个多肽而形成的多肽。所述融合蛋白可以通过所述组分多肽的 化学偶联来形成，或所述融合蛋白可以表达为一来自编码单一相邻融合蛋白的核酸序列的 单一多肽。一单链融合蛋白为一带有一单一相邻多肽主链骨架的融合蛋白。融合蛋白可以 通过使用分子生物学的传统技术将框架中的两个基因连接成为一单一核酸，然后在所述融 合蛋白的生产条件下使所述核酸在一适当的宿主细胞中表达来制备。
[0041] 术语"小分子"指的是一分子量少于2, 000道尔顿（Daltons)或少于1，500道尔 顿（Daltons)或少于1,000道尔顿（Daltons)的分子，比如一有机化合物或有机金属化合 物。所述小分子可以是一亲水、疏水或两亲化合物。
[0042] 本文中使用的"肽模拟物"一词的意思是肽的模拟物，包括标准肽化学的某些变 更。狀t旲拟物典型地提尚原狀的某些特性，比如提尚稳定性、提尚功效、提尚输送、提尚半发 期等等。基于已知的多肽序列制造肽模拟物的方法在（例如）美国5, 631，280号专利、美国 5, 612, 895号专利及美国5, 579, 250号专利中揭示。肽模拟物的使用可以涉及一非氨基酸 残基与多个非酰胺键在一给定位置掺合。本发明的一个实施例为一肽模拟物，所述肽模拟 物中的化合物的一键、一肽主链骨架或一氨基酸成分以一合适的模拟物替换。非天然氨基 酸的一些非限定性例子（可以是合适的氨基酸模拟物）包括丙胺酸、L-a-氨基丁酸、 L-氨基丁酸、L-a-氨基异丁酸、L-e-氨基己酸、7-氨基庚酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、 N-e-Boc-N-a-CBZ-L-赖氨酸、N-e-Boc-N-a-Fmoc-L-赖氨酸、L-蛋氨酸砜、L-正亮氨 酸、L-正缴氨酸、N-a-Boc-N- 8CBZ-L-鸟氨酸、N- 6 -Boc-N-a-CBZ-L-鸟氨酸、Boc-p-硝 基-L-苯丙氨酸、Boc-羟脯氨酸以及Boc-L-硫代脯氨酸。
[0043] 术语"抗体"指的是选择性地结合一目标抗原的天然或合成抗体。所述术语包括 多克隆及单克隆抗体。除了完整的免疫球蛋白分子之外，也包括在术语"抗体"中的是那些 免疫球蛋白分子的多个片段或多个聚合体，以及选择性地结合所述目标抗原的免疫球蛋白 分子的人版本或人源化版本。
[0044] 术语"变体"指的是一具有相对于野生型的一个或多个变形（比如一个或多个氨 基酸残基的替换、插入、删除及/或切断）及它们的生物活性片段的肽（例如IQ基序）。在 有些实施例中，一变体肽为在结构上或序列与SEQIDNOS:l?8或其一对钙-钙调蛋白具 有结合活性的片段中包含的一参考肽相关的肽，但所述肽具有一个或多个与参考肽相关的 氨基酸替换。这样的变体可能是所述野生型肽的环化变体，而且可能包括天然或非天然氨 基酸（例如氨基酸类似物）。
[0045] 术语"特异性地结合"指的是一确定所述抗原或受体在一异质种群的蛋白及其他 生物体中的存在的结合反应。一般上，一"特异性地结合"一第二分子（例如抗体）的第一 分子（例如抗体）具有的相对于该第二分子的亲合常数（Ka)大于大约lO^1 (例如106M' 107]\1_1、108]?_ 1、109]?_1、101°]?_1、10 11]?_1以及1012]?_1或更高）。
[0046]II.组合物
[0047] 本发明揭示在其所揭示的组合物及方法中使用的抑制p68核糖核酸（RNA)解旋酶 与钙调蛋白（CaM)在一细胞中相互作用的多种药剂。在有些实施例中，所述药剂结合p68 并阻滞P68结合到钙调蛋白（CaM)。在其他实施例中，所述药剂结合钙调蛋白（CaM)并阻滞 P68结合到钙调蛋白（CaM)。
[0048] A.肽及肽模拟物
[0049] 在有些实施例中，抑制p68与钙调蛋白（CaM)相互作用的药剂为一隔离肽或肽模 拟物。关于某种肽的任何揭示应理解为包括揭示该种肽的肽模拟物。
[0050] 在有些实施例中，所述肽为p68核糖核酸（RNA)解旋酶的一片段，该片段选择性地 结合钙调蛋白（CaM)或其一保守性变体。这样的片段可以称为"CaM-结合片段"。在有些 实施例中，这个P68肽含有p68的IQ基序，或其一能选择性地结合钙调蛋白（CaM)的保守 性变体。
[0051] 一般上，一选择性地结合一第二分子的第一分子（比如所揭示的多种肽）具有的 相对于该第二分子的结合亲合力大于大约1〇 5(例如 更高）摩尔/升（M/1)。
[0052] 如本文中所述，所揭示的多种肽具有多种不同长度及结构。在一些方面，每一种肽 的长度为大约4至50个氨基酸之间，包括大约4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19、20、25、30、35、40、45或50个氨基酸。所述肽可以少于大约100个氨基酸残基，包括 少于大约 100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、20 个氨基酸残。所述 肽的长度可能为大于大约8个氨基酸残基，包括大于大约8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19、20、25、30、35、40、45 或 50 个氨基酸残基。
[0053] 在有些实施例中，所述CaM-结合肽的氨基酸序列为FVSAGIQTSFRTGNPTGTYQ(SEQ 其他实施例中，所述CaM-结合肽是这个序列的结合钙调蛋白（CaM)的保守性变体。在有些 实施例中，所述CaM-结合肽含有所述SEQIDN0:4中的10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或20个氨基酸。例如，与人p68(AccessionNo.NP_004387)的氨基酸566及568相比，所 述SEQIDNO:4含有一个在位置18的T至A替换及一个在位置20的Q至G替换。
[0054] 为了提高效率，所揭示的隔离多肽可以是聚合体。例如，多抗原肽系统（MAPS)是 基于许多肽抗原在其上锚定的径向分支赖氨酸枝的一小免疫惰性芯分子。结果是，一巨大 分子的肽抗原-核心分子摩尔比率高，而且不需要进一步共轭至一载体蛋白。
[0055] 因此，所述隔离多肽可能有两个或多个CaM-结合片段，包括2、3、4、5、6、7、8、9、 10、11、12、13、14、15或更多个片段。在一些方面，所述隔离多肽无支链，其中两个或多个片 段在相同的线性多肽上。在其他方面，所述隔离多肽包括两个或多个氨基酸支链，包括2、 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15个或更多氨基酸支链。因此，所述隔离多肽可能具有 一带有2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10个或更多支链赖氨酸残基的肽基核心，其中两个或多个所述 CaM-结合片段键合到两个或多个支链赖氨酸残基。此外，每个所述支链可能是单体或聚合 体。
[0056] 在一些方面，至少一个CaM-结合片段距离所述多肽的氨基末端少于大约0至大约 20个氨基酸，包括距离所述氨基末端大约0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、 17、18、19或20个氨基酸。
[0057] 所揭示的肽可能是人工序列，而且可能是在体外合成及/或重组地合成。所揭示 的肽可能隔离自天然蛋白质。所述多种具有至少两个相邻序列的肽在天然蛋白质中不相 邻。
[0058] 1.细胞渗透肽
[0059] 所揭示的组合物可以键合至一细胞渗透肽（亦称"蛋白转导域"），以有效地进入 所述细胞。
[0060] 细胞渗透肽为短肽，它们促进多种分子载荷（例如其他肽）的细胞摄取。所述"载 荷"一词通过经由共价键的化学键合或通过非共价相互作用与所述细胞渗透肽发生联系。 细胞渗透肽的氨基酸组成成分一般含有高相对丰度的带正电荷的氨基酸，比如赖氨酸或精 氨酸，或具有含有一交替式样的、极性/带电荷氨基酸及非极性疏水氨基酸的多个序列。这 两种类型的结构依次称为聚阳离子型或两亲型。
[0061] 细胞渗透肽有不同的大小、氨基酸序列及电荷，但所有细胞渗透肽具有一个明显 特征，该特征是它们易位质膜及促进将多种分子载荷传送至细胞质或细胞器的能力。易 位的机制可能涉及所述质膜中的直接渗透、内吞作用介导侵入或通过形成一过渡结构来易 位。
[0062] 细胞渗透肽的非限定例子包括聚精氨酸、触角足基因序列、HIV-lTat及多种相 关的肽、SynBl、SynB3、PTD-4、PTD-5、细胞穿透肽、Antp_3A(Antp突变体）、BuforinII、 Transportan、MAP(原型两亲性肽）、K-FGF、Ku70、Prion、pVEC、Pep-1、SynBl、Pep-7、HN-1、 BGSC(双-狐盐-亚精胺-胆固醇）以及BGTC(双-狐盐-三氨乙基胺-胆固醇）。
[0063] 2?融合蛋白
[0064] 在有些实施例中，多种所揭示的肽为融合蛋白。融合蛋白亦称嵌合蛋白，是通过连 接两个或多个最初为不同蛋白编码的基因。这个融合基因的转译导致一具有得自每个初始 蛋白的功能特性的单一多肽。也可以通过重组DNA技术来人工制造重组融合蛋白，以用于 生物学研宄或治疗。在一大规模突变（一般为一染色体易位）造成一含有来自两个不同基 因的编码序列的部分的新编码序列时，嵌合突变体蛋白天然生成。
[0065] 融合蛋白的功能成为可能是因为许多蛋白功能域模式化。换句话说，一多肽对应 于一已知域（比如一酪氨酸激酶域）的线性部分可以在不损坏其固有酶能力的情况下，从 所述蛋白的其他域去除。因此，本发明所揭示的任何功能域可以用于设计一融合蛋白。
[0066] 重组融合蛋白为通过一融合基因的基因工程创造的蛋白。这典型地涉及将终止 密码子从为第一蛋白编码的cDNA序列去除，然后通过结扎或重叠延伸聚合酶链式反应 (PCR)，将第二蛋白的cDNA序列添加在框架中。该DNA序列将接着由一细胞表达为一单一 蛋白。所述蛋白可以设计成包括两个初始蛋白的全序列或任一初始蛋白的一部分。
[0067] 如果所述两个实体为蛋白，也经常添加接头（或"间隔区"）肽，这使得所述蛋白 更可能独立地折叠并表现得像预期的那样。尤其是在所述接头使得可能进行蛋白提纯的情 况下，蛋白或肽融合蛋白中的接头有时设计成带有用于蛋白酶或化学剂的分裂位点，这使 得能够释放所述两个蛋白。这个技术经常用于通过融合一谷胱甘肽S转移酶（GST)蛋白、 FLAG肽或一可以使用镍或钴树脂隔离（亲合色谱法）的六组氨酸肽（亦称6x组氨酸标记， 6xhis-tag)来识别及提纯蛋白。嵌合蛋白也可以以毒素或与它们连结的抗体来制造，以研 宄疾病发展。
[0068] 可选择地，内部核糖体进入位点（IRES)的元件可以用于创造多基因或多顺反子 信息。IRES元件能够绕过依赖5'甲基化帽的转译的核糖体扫描模型，并开始在内部位点进 行转译。来自小核糖核酸病毒家族的两个成员（脊髓灰质炎病毒及脑心肌炎病毒）的IRES 元件以及一来自哺乳动物的信息的内部核糖体进入位点（IRES)已经被描述。IRES元件可 以键合到异源开放阅读框。多个开放阅读框可以一起转录，每一开放阅读框由一个内部核 糖体进入位点（IRES)隔离，以创造多顺反子信息。由于所述内部核糖体进入位点（IRES)， 核糖体可进入每一开放阅读框，以供进行有效的转译。多个基因可以以一单一启动子/增 强子有效地表达，以转录一单一信息。
[0069] B?抗体
[0070] 在有些实施例中，抑制p68与钙调蛋白（CaM)的相互作用的是一抗体。可以用于 本发明所揭示的多种组合物及方法的多种抗体包括任何类别的完整免疫球蛋白（即一完 整的抗体）、其片段及至少含有一抗体的抗原结合可变域的合成蛋白。在多个抗体之中，所 述可变域的序列不同，而且用于每一特定抗体相对于其特定抗原的键合及特异性。然而，所 述可变性在抗体的整个可变域并非通常是均匀分布。所述可变性一般集中在三个称为"互 补决定区"（CDRs)或超变区的片段，两种区都在轻链可变域及重链可变域中。所述可变域 的较为高度保守部分称为框架（FR)。天然重链及轻链的可变域各包括四个框架（FR)区，这 些框架区主要采用由三个互补决定区（⑶Rs)连接的片状结构，这形成多个环路，这些 环路连接所述片状结构（在有些情况下形成所述片状结构的一部分）。每一域中 的所述互补决定区（CDRs)由所述框架（FR)非常接近地连接在一起，而来自另一个域的互 补决定区（CDRs)有助于形成抗体的抗原结合位点。因此，本发明所揭示的抗体至少含有对 结合P68或钙调蛋白（CaM)及抑制p68与钙调蛋白（CaM)的相互作用有必要的互补决定区 (CDRs)〇
[0071] 本发明也揭示具有生物活性的抗体的片段。不论是否结合到其他序列，所述片段 包括特定区域或特定氨基酸残基的插入、删除、替换或其他选定的变形，条件是所述片段与 未修饰抗体或抗体片段相比，其活性并未显著地改变或削弱。
[0072] 也可以采用技术来生产p68的CaM-结合域的特异性单链抗体。用于生产单链抗 体的方法广为本领域中的技术人员所知。可以通过使用一短肽接头将重链及轻链的可变域 融合来创造一单链抗体，从而在一单分子上重新构成一抗原结合位点。多种单链抗体可变 区片段（scFvs)已经在不会显著地破坏抗原结合或所述结合的特异性的情况下开发，在所 述多种单链抗体可变区片段（scFvs)中，一个可变域的C-末端经由一个15至25氨基酸肽 或接头栓系到另一个可变域的N-末端。选择所述接头是为了允许所述重链及轻链在它们 的适当构象取向中结合在一起。
[0073] 可以通过连接两个单链抗体可变区片段（scFvs)来设计多个二价单链可变区片 段（di-scFvs)。这可以通过产生一带有两个VH区及两个VL区的、可获得串列单链抗体可 变区片段（scFvs)的单肽来完成。单链抗体可变区片段（scFvs)也可以以所述两个可变 区折叠在一起太短的接头肽（长度大约为五个氨基酸）来设计，迫使单链抗体可变区片段 (scFvs)二聚化。这个类别称为二价抗体。已经证实二价抗体的分离常数比相应的单链抗 体可变区片段（scFvs)低40倍，意思是它们对它们的目标有较高的亲合力。更短的接头 (长度为一个或两个氨基酸）导致三聚体（三链抗体或三价抗体）形成。四价抗体也已经 生产。它们对它们的目标的亲合力比二价抗体来得较高。
[0074] -单克隆抗体可以从一充分同质种群的抗体（即所述种群中的单一抗体相同，除 了于所述抗体分子的小子集中可能存在的可能天然突变之外）中取得。单克隆抗体包括 "嵌合"抗体（其中所述重链及/或轻链的一部分相同于或类似于源自一特定物种或属于一 特定抗体类别或子类别的抗体中的相应序列，而其余的链相同于或类似于源自另一物种或 属于另一抗体类别或子类别的抗体中的相应序列）以及这样的嵌合抗体的片段，只要它们 表现所期望的对抗活性。
[0075] 单克隆抗体可以使用任何产生单克隆抗体的程序来制造。在一杂种细胞方法中， 一小鼠或其他合适的宿主动物一般以一免疫剂来免疫，以引出生产或有能力生产将会特异 性地结合到所述免疫剂的抗体的淋巴细胞。可选择地，所述淋巴细胞可以在体外免疫。
[0076] 抗体也可以通过重组DNA方法制造。可以通过使用传统程序（例如通过使用能够 特异性地结合到编码鼠科抗体的所述重链及轻链的基因的寡核苷酸探针），轻易地对编码 所揭示的抗体的DNA进行隔离及编序。也可以使用噬菌体表面显示技术来产生及筛选多个 文库的抗体或活性抗体片段。
[0077] 人抗体及人源化抗体
[0078] 许多非人抗体（例如那些源自小鼠、大鼠或兔子者）在人身上天然抗原，因此可能 在施用于人时引起不良的免疫反应。因此，在所述方法中使用人抗体及人源化抗体是为了 降低抗体施用于人时引起不良的免疫反应的机会。
[0079] 可以使用在接受免疫时有能力在不存在内源性免疫球蛋白的生产的情况下产生 一完整系列的人抗体的转基因动物（例如小鼠）。例如，嵌合及生殖细胞系突变体小鼠身上 的抗体重链连接区（J(H))基因的同合型缺失导致抑制内源性抗体的产生。转移这样的生 殖细胞系突变体小鼠身上的人生殖细胞系免疫球蛋白基因微阵列，将导致在抗原激发时产 生人抗体。
[0080] 可选择地，所述抗体在其他物种中产生并"人源化"，以施用于人。非人（鼠科）抗 体的人源化形式为嵌合免疫球蛋白、含有源自非人免疫球蛋白的小序列的免疫球蛋白链或 其片段（比如Fv、Fab、Fab'、F(ab'）2)、或其他抗原-结合子序列的抗体）。人源化抗体包 括人免疫球蛋白（受体抗体），其中源自所述受体抗体的一互补决定区（CDR)的残基由源自 具有期望的特异性、亲合力及能力的一非人物种（比如小鼠、大鼠或兔子）的一互补决定区 (CDR)的残基（供体抗体）替换。在有些例子中，所述人免疫球蛋白的Fv框架残基由相应 的非人残基替换。人源化抗体也可能含有在所述受体抗体或在所述引入互补决定区（CDR) 或框架序列中都找不到的残基。一般上，所述人源化抗体将含有基本上全部的、至少一个可 变域及一般为两个可变域，其中所有或基本上所有所述互补决定区（CDRs)相应于一非人 免疫球蛋白的那些互补决定区，而且全部或基本上全部框架（FR)区域是一人人免疫球蛋 白共有序列的那些框架（FR)区域。所述人源化抗体最理想地也将含有至少一免疫球蛋白 恒定区域（Fc)的一部分，一般上是一人免疫球蛋白的恒定区的一部分。
[0081] 用于人源化非人抗体的方法在本领域中广为人知。一般上，一人源化抗体具有从 一非人来源引入其中的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基经常被称为"引入"残 基，这些残基一般取自一"引入"可变域。抗体人源化技术一般涉及使用重组DNA技术来处 理编码一抗体的一个或多个多肽链的DNA序列。人源化实质上可以通过用啮齿动物的互补 决定区（CDRs)或互补决定区（CDR)序列替换一人抗体的相应序列。因此，一非人抗体（或 其一片段）的人源化形式是一嵌合抗体或片段，其中基本上少于一完整人可变域已经由来 自一非人物种的相应序列替换。在实践中，人源化抗体典型地是其中有些互补决定区（CDR) 残基以及（可能）一些框架（FR)残基由来自啮齿动物抗体中的类似位点的残基替换的人 抗体。
[0082] 为了减低抗原性，用于制成所述人源化抗体的人可变域（包括轻链及重链）的选 择非常重要。根据"最佳适合"方法，一啮齿动物抗体的可变域的序列对整个文库的已知人 可变域序列进行筛查。然后，最接近所述啮齿动物的可变域序列的人可变域序列被接受为 所述人源化抗体的人框架（FR)。另一方法使用源自轻链或重链的一特定子群的所有人抗体 的共有序列的一特定框架。相同的框架可以用于几个不同的人源化抗体。
[0083] 人源化抗体可以通过使用亲代序列及人源化序列的三维模型来对亲代序列及多 种人源化产物进行分析的程序制备。三维免疫球蛋白模型为本领域的技术人员常有及熟 悉。可使用图解及显示选定的候选免疫球蛋白序列的可能三维构象结构的计算机程序。对 这些显示进行检查使得能够对候选免疫球蛋白序列的功能中的残基的可能角色进行分析， 即对影响所述候选免疫球蛋白序列结合其抗原的能力的残基进行的分析。照这样，可以从 所述共有序列及引入序列选择及结合框架（FR)残基，以实现所期望的抗体特性，比如增加 对目标抗原的亲合力。一般上，所述互补决定区（CDR)残基直接地及最充分地涉及影响抗 体结合。
[0084] 所述抗体可以结合到一培养基或以一可测定等分标记，或两者结合并标记。预期 可用于本发明所述的组合物的可测定等分包括荧光标记、酶促标记及放射性标记。
[0085] 单链抗体
[0086] 通过使用一短肽接头将所述重链及轻链的可变域融合在一起，创造一单链抗体， 从而在一单分子上重新构成一抗原结合位点。多种单链抗体可变区片段（scFvs)已经在不 会显著地破坏抗原结合或所述结合的特异性的情况下开发，在所述多种单链抗体可变区片 段（scFvs)中，一个可变域的C-末端经由一个15至25氨基酸肽或接头栓系到另一个可变 域的N-末端。选择所述接头是为了允许所述重链及轻链在它们的适当构象取向中结合在 一起。这些Fvs缺乏所述天然抗体的重链及轻链中存在的恒定区（Fc)。
[0087] 单价抗体
[0088] 体外方法也适合用于制备单价抗体。可以使用常规技术来实现抗体的消化，以产 生抗体片段，尤其是Fab片段。例如，可以使用木瓜蛋白酶来执行消化。抗体的木瓜蛋白酶 消化典型地产生两个相同的抗原结合片段，所述片段称为Fab片段，每一片段有一单抗原 结合位点及一残基Fc片段。胃蛋白酶治疗产生一片段，其称为F(ab'）2片段，该片段有两 个抗原结合位点而且还能够交联抗原。
[0089] 在抗体消化中产生的Fab片段也含有所述轻链的恒定域及所述重链的第一恒定 域。Fab'片段与Fab片段的不同，是由于在所述重链域的羧基末端添加少许残基，包括一个 或多个源自抗体铰链区的半胱氨酸。所述？( &13'）2片段是二价片段，其包括由一在所述铰 链区的二硫桥键连接的两个Fab'片段。Fab' -SH在本文中是用于其中所述恒定域的半胱氨 酸残基载有一自由巯基的Fab'片段的名称。最初产生的抗体片段是成对的Fab'片段，所 述成对的Fab'片段之间有铰链半胱氨酸。抗体片段的其他化学耦合亦为已知。
[0090] 杂交抗体
[0091] 本发明所揭示的抗体可能为一杂交抗体。在杂交抗体中，一个重链及轻链对与在 一个抗原表位的抗体中找到的重链及轻链对同源，而另一重链及轻链对则与在另一抗原表 位的抗体中找到的重链及轻链对同源。这导致多功能强度的特性，即同时结合至少两个不 同的抗原表位的能力。这样的杂种可以通过产生各自的成分抗体的杂交瘤的融合来形成， 或通过重组技术形成。当然这样的杂种也可以使用嵌合链来形成。
[0092] 抗体片段的结合物及融合物
[0093] 可以通过将所述抗体或其一片段与一治疗剂耦合，将所述抗体的靶向功能用于治 疗。所述抗体或片段（例如一免疫球蛋白恒定区（Fc)的至少一部分）与所述治疗剂的这 样的耦合，可以通过制作一免疫结合物或通过制作一包括所述抗体或抗体片段及所述治疗 剂的融合蛋白来实现。
[0094] C.药用组合物
[0095] 本发明揭示多种含有有效治疗量的一种或多种所揭示的抑制p68结合到钙调蛋 白（CaM)的治疗剂及一药学上可接受的载体的药用组合物。适合用于施用本发明中提供的 化合物的药物载体包括本领域的技术人员已知的任何适合用于特定给药方式的载体。
[0096] 所述药用化合物可以制备成合适的药物制剂，比如用于口服给药的溶液、悬浮液、 药片、分散药片、药丸、胶囊、粉末、缓释制剂或酏剂，或供用于肠胃外给药的无菌溶液或悬 浮液，以及透皮贴剂及干粉吸入剂。
[0097] 在有些实施例中，所述组合物制备供单剂量给药。为了制备一组合物，使质量分数 数量的化合物在一选定的有效浓度的载体中溶解、悬浮、分散或混合，使得所治疗的疾病状 态获得减轻或更多症状获得改善。
[0098] 活性药剂包括在所述药学上可接受的载体中，其数量足以在没有对所治疗的患者 造成不良的副作用的情况下发挥有用治疗效果。所述有效治疗浓度可以通过在体外系统、 活体外系统及活体内系统中对所述化合物进行测试来确定，然后从所述系统外推，供用于 人用剂量。
[0099] 所述药用组合物中的活性化合物的浓度将取决于所述活性化合物的吸收率、失活 率及排泄率、所述化合物的物理化学特性、剂量日程表、给药数量以及本领域的技术人员已 知的其他因素。
[0100] 药物制备成提供多种单位剂型，包括大约〇? 01mg、0.lmg或lmg至大约500mg、 lOOOmg或2000mg，而且在一个实施例中，药物制备成每单位剂型含大约10mg至大约500mg 的活性成分或主要成分组合。
[0101] 在所述组合物展现溶解度不足的情况下，可以使用多种用于增溶化合物的方法。 这些方法包括但不限于使用助溶剂（比如二甲亚砜（DMS0))、使用表面活性剂（比如TWEENs )、或溶解在碳酸氢钠水溶液中。
[0102] 液状的药学上可给药组合物可以（例如）通过以下方法来制备：在一载体中（例 如在水、盐水、右旋糖水溶液、甘油、乙二醇类、乙醇及类似物中）溶解、分散或混合一以上 说明的活性组合物或自选药用辅料，从而形成一溶液或悬浮液。如果需要，将施用的药用组 合物也可以含有少量的无毒辅助物质，比如润湿剂、乳化剂、增溶剂、pH缓冲剂及类似物，例 如乙酸酯、柠檬酸钠、环糊精衍生物类、山梨醇酐单月桂酸酯、三乙醇胺乙酸钠、三乙醇胺油 酸酯及其他这样的药用辅料。
[0103] 可以制备含有0.005%至100%范围的活性成分而其余成分由无毒载体补足的剂 型或组合物。所预期制备的组合物可以含有0.001%至100%的活性成分，或（在一个实施 例中）含有〇. 1 %至95%的活性成。
[0104] D.组配物
[0105]多种抗癌（抗肿瘤）药物可用于与本发明的方法及组合物组配。抗肿瘤药 物包括阿西维辛（Acivicin)、阿柔比星（Aclarubicin)、盐酸阿可达佐（Acodazole Hydrochloride)、阿克罗宁（AcrQnine)、阿多来新（Adozelesin)、阿地白介素 (Aldesleukin)、六甲喃胺（Altretamine)、安波霉素（Ambomycin)、乙酸阿美蒽醌 (AmetantroneAcetate)、氨苯哌酮（Aminoglutethimide)、安卩丫啶（Amsacrine)、阿那 曲挫（Anastrozole)、安曲霉素（Anthramycin)、门冬醜胺酶（Asparaginase)、曲林菌素 (Asperlin)、阿扎胞苷（Azacitidine)、阿扎替派（Azetepa)、阿佐霉素（Azotomycin)、巴 马司他（Batimastat)、苯佐替派（Benzodepa)、比卡鲁胺（Bicalutamide)、比生群二盐酸 盐（BisantreneHydrochloride)、二甲横酸双奈法德（BisnafideDimesylate)、比折来新 (Bizelesin)、硫酸博来霉素（BleomycinSulfate)、布喹那钠（BrequinarSodium)、溴匹立 明（Bropirimine)、甲磺酸丁二醇二醋（Busulfan)、放线菌素C(Cactinomycin)、卡芦睾酮 (Calusterone)、卡醋胺（Caracemide)、卡贝替姆（Carbetimer)、卡钼（Carboplatin)、卡莫 司汀（Carmustine)、盐酸卡柔比星（CarubicinHydrochloride)、卡折来新（Carzelesin)、 西地芬戈（Cedefingol)、苯丁酸氮芥（Chlorambucil)、西罗霉素（Cirolemycin)、顺-二氯 二氨合钼（Cisplatin)、克拉屈滨（Cladribine)、酒石酸阿利马嘆（CrisnatolMesylate)、 环磷酰胺（Cyclophosphamide)、阿糖胞苷（Cytarabine)、氮稀挫胺（Dacarbazine)、 放线菌素D(Dactinomycin)、盐酸柔红霉素（DaunorubicinHydrochloride)、地西 他滨G)ecitabine)、右奥马钼（Dexormaplatin)、地扎呱宁（Dezaguanine)、甲横酸 地扎呱宁（DezaguanineMesylate)、亚胺醌（Diaziquone)、多西他赛（Docetaxel)、 阿得里亚霉素（^Doxorubicin)、盐酸阿霉素（DoxorubicinHydrochloride)、屈洛 昔芬（Droloxifene)、梓檬酸屈洛昔芬（DroloxifeneCitrate)、屈他雄酮丙酸醋(DromostanolonePropionate)、达佐霉素（Duazomycin)、依达曲沙（Edatrexate)、 盐酸依氟鸟氨酸（EflomithineHydrochloride)、依沙芦星（Elsamitrucin)、恩洛 钼（Enloplatin)、恩普氨醋（Enpromate)、依匹呢啶（Epipropidine)、盐酸表柔比星 (EpirubicinHydrochloride)、厄布洛挫（Erbulozole)、盐酸依索比星（Esorubicin Hydrochloride)、雌莫司汀（Estramustine)、雌莫司汀磷酸钠（EstramustinePhosphate Sodium)、依他硝挫（Etanidazole)、乙碘油I131(EthiodizedOilI131)、依托泊苷 (Etoposide)、依托泊苷磷酸醋（EtoposidePhosphate)、氯苯乙啼胺（Etoprine)、盐酸法屈 挫（FadrozoleHydrochloride)、法扎拉滨（Fazarabine)、芬维A胺（Fenretinide)、氟尿 苷（Floxuridine)、磷酸氟达拉滨（FludarabinePhosphate)、氟尿啼啶（Fluorouracil)、 氟西他滨（Flurocitabine)、磷喹酮（Fosquidone)、福司曲星钠（FostriecinSodium)、 吉西他滨（Gemcitabine)、盐酸吉西他滨（GemcitabineHydrochloride)、胶体金Au 198(GoldAu198)、轻基脈（Hydroxyurea)、盐酸伊达比星（IdarubicinHydrochloride)、 异环磷酰胺（Ifosfamide)、伊莫福新（Ilmofosine)、干扰素a-2a(Interferon Alfa_2a)、干扰素a-2b(InterferonAlfa_2b)、干扰素a_nl(InterferonAlfa-nl)、 干扰素a_n3(InterferonAlfa_n3)、干扰素 0_la(InterferonBeta-la)、干扰 素y-lb(InterferonGamma-lb)、异丙钼（Iproplatin)、盐酸依立替康（Irinotecan Hydrochloride)、乙酸兰瑞肽（LanreotideAcetate)、来曲挫（Letrozole)、乙酸亮 丙瑞林（LeuprolideAcetate)、盐酸利阿挫（LiarozoleHydrochloride)、洛美曲 索钠（LometrexolSodium)、罗莫司丁（Lomustine)、盐酸洛索蒽醌（Losoxantrone Hydrochloride)、马索丙考（Masoprocol)、美登素（Maytansine)、盐酸氮芥 (MechlorethamineHydrochloride)、乙酸甲地孕酮（MegestrolAcetate)、乙酸美仑 孕酬（MelengestrolAcetate)、美法仑（Melphalan)、美诺立尔（Menogaril)、疏基口票 呤（Mercaptopurine)、甲氨蝶呤（Methotrexate)、甲氨蝶呤钠（MethotrexateSodium)、 氯苯氨啶（Metoprine)、美乌替派（Meturedepa)、米丁度胺（Mitindomide)、米托克 星（Mitocarcin)、丝裂红素（Mitocromin)、丝裂吉菌素（Mitogillin)、丝裂马菌素 (Mitomalcin)、丝裂霉素（Mitomycin)、丝裂帕菌素（Mitosper)、米托坦（Mitotane)、盐 酸米托蒽醌（MitoxantroneHydrochloride)、霉酷酸（MycophenolicAcid)、诺考达挫 (Nocodazole)、诺加霉素（Nogalamycin)、奥马钼（Ormaplatin)、亚横酰卩比啶（Oxisuran)、 多西紫杉醇（Paclitaxel)、培门冬酶（Pegaspargase)、佩里霉素（Peliomycin)、戊氮 芥（Pentamustine)、硫酸培洛霉素（PeplomycinSulfate)、过磷酰胺（Perfosfamide)、 呢泊溴焼（Pipobroman)、丙酰呢嗪二甲焼磺酸醋（Piposulfan)、盐酸略克森特仑 (PiroxantroneHydrochloride)、光神霉素（Plicamycin)、普洛美坦（Plomestane)、P卜吩 姆钠（PorfimerSodium)、泊非罗霉素（Porfiromycin)、泼尼莫司汀（Prednimustine)、 盐酸甲基辛肼（ProcarbazineHydrochloride)、卩票呤霉素（Puromycin)、卩票呤霉素盐酸盐 (PuromycinHydrochloride)、卩比挫咲喃菌素（Pyrazofurin)、异戊稀腺苷（Riboprine)、 罗格替胺（Rogletimide)、沙芬戈（Safingol)、盐酸沙芬戈（SafingolHydrochloride)、 雌莫司汀（Semustine)、辛曲秦（Simtrazene)、磷酸乙酰天冬氨酸钠（Sparfosate Sodium)、稀疏霉素（Sparsomycin)、盐酸螺旋锗（SpirogermaniumHydrochloride)、螺 莫司汀（Spiromustine)、螺钼（Spiroplatin)、链黑菌素（Streptonigrin)、链脲霉素 (Streptozocin)、氯化锁Sr89(StrontiumChlorideSr89)、横氯苯脈（Sulofenur)、他 利霉索（Talisomycin)、紫杉烧（Taxane)、紫杉化合物（Taxoid)、替可加兰钠（Tecogalan Sodium)、替加氟（Tegafur)、盐酸替洛蒽醌（TeloxantroneHydrochloride)、替莫泊芬 (Temoporfm)、替尼泊苷（Teniposide)、替罗昔隆（Teroxirone)、睾内醋（Testolactone)、 硫挫嗓呤胺（Thiamiprine)、硫鸟嗓呤（Thioguanine)、三胺硫磷（Thiotepa)、噻挫呋林 (Tiazofurin)、替拉扎明（Tirapazamine)、盐酸拓扑替康（TopotecanHydrochloride)、 枸橡酸托瑞米芬（ToremifeneCitrate)、乙酸曲托龙（TrestoloneAcetate)、磷酸曲 西瑞宾（TriciribinePhosphate)、三甲曲沙（Trimetrexate)、葡萄糖酸酸三甲曲沙 (TrimetrexateGlucuronate)、曲普瑞林（Triptorelin)、盐酸妥布氯挫（Tubulozole Hydrochloride)、尿喃啶氮芥（UracilMustard)、尿烧亚胺（Uredepa)、伐普肽 (Vapreotide)、维替泊芬（Verteporfm)、硫酸长春喊（VinblastineSulfate)、硫酸酸 基长春喊（VincristineSulfate)、长春地辛（Vindesine)、硫酸长春地辛（Vindesine Sulfate)、硫酸长春匹定（VinepidineSulfate)、硫酸长春甘醋（VinglycinateSulfate)、 硫酸环氧长春喊（VinleurosineSulfate)、酒石酸长春瑞滨（VinorelbineTartrate)、 硫酸长春罗定（VinrosidineSulfate)、硫酸利定（VinzolidineSulfate)、伏氯挫 (Vorozole)、折尼钼（Zeniplatin)、净司他丁（Zinostatin)、盐酸佐柔比星（Zorubicin Hydrochloride)〇
[0106] III?方法
[0107] A.治疗癌症
[0108] 本发明揭示涉及多种对一需要给药的受治疗者施用一能抑制p68与钙调蛋白 (CaM)相互作用的组合物来治疗一受治疗者身上的癌症的方法。具体地说，本发明所揭示的 方法抑制癌症转移。
[0109] 本发明所揭示的方法中的癌症可以是一经历无调节增生、侵袭及/或转移的受治 疗者身上的任何细胞。在一些方面，所述癌症可以是任何正在接受放射治疗的任何赘生物 或肿瘤。可选择地，所述癌症可以是在使用标准方法进行治疗时对放射治疗不够敏感的一 赘生物或肿瘤。
[0110] 所述癌症可以是一肉瘤、恶性淋巴瘤、白血病、癌、胚细胞瘤或生殖细胞肿瘤。可以 使用本发明所揭示的组合物治疗的一具代表性但非限定性的癌症清单包括白血病、B细胞 恶性淋巴瘤、T细胞恶性淋巴瘤、蕈样肉芽肿病、霍奇金病、骨髓白血病、膀胱癌、脑癌、神经 系统癌、头部及颈部癌、头部及颈部的鳞状细胞癌、肾癌、肺癌类（比如小细胞肺癌及非小 细胞肺癌）、成神经细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、肝癌、鳞状细胞癌（口部、喉 部、喉门、喉及肺的鳞状细胞癌）、结肠癌、子宫颈癌、子宫颈癌、乳癌、上皮癌、肾癌、泌尿生 殖器癌、肺癌、食道癌、头部及颈部癌、大肠癌、造血系统癌、睾丸癌、结肠及直肠癌、前列腺 癌及胰腺癌。
[0111] B.治疗炎症
[0112] 本发明揭示多种抑制炎症及/或治疗一受治疗者身上的炎症的方法。这些方法涉 及对一需要给药的受治疗者施用一能抑制P68与钙调蛋白（CaM)相互作用的组合物。
[0113] 所述炎症可以是变应性紊乱、哮喘、儿童哮鸣、慢性阻塞性肺部疾病、肺支气管发 育不良、囊肿性纤维化病、间质性肺病（例如结节病、肺纤维化病、硬皮肺病及普通型间质 性肺炎）、耳鼻喉疾病（例如鼻炎、鼻息肉及中耳炎）、眼部疾病（例如结膜炎及巨乳头性结 膜炎）、皮肤疾病（例如银肩病、皮炎及湿瘆）、风湿性疾病（例如类风湿性关节炎、关节病、 关节病性关节炎、骨关节炎、系统性红斑狼疮、系统性硬化症）、脉管炎疾病（例如亨-舍紫 癜、吕弗勒氏综合症及川崎病）、心血管疾病（例如动脉粥样硬化）、肠胃疾病（例如肠胃 系统中的嗜伊红细胞疾病、炎性肠病、肠易激综合症、大肠炎、腹腔及胃出血）、泌尿系统疾 病（例如血管球性肾炎、间质性膀胱炎、肾炎、肾病、肾病综合症、肝肾综合症及中毒性肾损 害）、中枢神经系统疾病（例如脑缺血、脊髓损伤、偏头痛、多发性硬化及睡眠呼吸紊乱）、 内分泌腺体疾病（例如自身免疫性甲状腺疾病、糖尿病相关炎症）、风瘆、过敏反应、血管性 水肿、夸休可尔症的水肿、痛经、烧伤引起的氧化损伤、多发性创伤、疼痛、中毒性油综合症、 内毒素休克、脓毒症、细菌感染症（例如源自幽门螺杆菌、铜绿假单胞菌或痢疾志贺菌的感 染症）、霉菌感染症（例如外阴阴道假丝酵母菌病）、病毒感染症（例如肝炎、脑膜炎、副流 行性感冒及呼吸道合胞病毒感染）、美镰状细胞血症、嗜伊红细胞过多综合症以及恶性肿瘤 (例如霍奇金氏淋巴瘤、白血病（例如嗜伊红细胞白血病及慢性骨髓性白血病）、肥大细胞 增多症、真性红细胞增多症及卵巢癌）。具体地说，本发明的化合物可能对治疗以下疾病有 用：变应性紊乱、哮喘、鼻炎、结膜炎、慢性阻塞性肺部疾病（COPD)、囊肿性纤维化病、皮炎、 风瘆、嗜伊红细胞肠胃疾病、炎症性肠病、类风湿性关节炎、骨关节炎及疼痛。
[0114] C?给药
[0115] 视是否需要局部或全身治疗或视需治疗的部位而定，本文中揭示的组合物（包括 药用组合物）可以以许多方式给药。例如，本文中所揭示的组合物可以通过静脉内、腹膜 内、肌肉内、皮下、腔内或经皮的方式给药。所述组合物可以通过口服、肠胃外（例如静脉 内）、肌肉内注射、腹膜内注射、经皮、体外、眼部、阴道、直肠、鼻内、局部或类似方式给药，包 括局部鼻内给药或通过吸入剂给药。
[0116] 所述组合物的肠胃外给药（如果使用肠胃外给药）方式一般是通过注射。注射药 剂可以以传统剂型制备，其可能是液体溶液或悬浮液、适合在注射之前溶解液体中的悬浮 液的固体剂型、或乳化剂。肠胃外给药的一个经修改的方式涉及慢释或缓释体系，使得能够 维持一个恒定的剂量。
[0117] 本文中揭示的组合物可以预防性地对患者或有罹患癌症风险的受治疗者给药。因 此，所述方法可以进一步涉及在施用本文中揭示的组合物之前识别有罹患癌症风险的受治 疗者。
[0118] 所述组合物的精确需要数量将因不同受治疗者而有不同，取精确数量取决于受治 疗者所属物种、其年龄、体重及整体状态、正在治疗的变应性紊乱、所使用的特定核酸或载 体、给药方式等等。因此，不可能为每一组合物指定一精确的数量。然而，在已知本文中的 教导的情况下，本领域中的技术人员当能够仅使用常规实验来确定一适当数量。例如，可以 根据经验确定用于施加所述组合物的有效剂量及日程表，而进行这样的确定在本领域的技 术范围之内。所述组合物的给药剂量范围大得足以对症状产生预期的效果。所述剂量不应 大到导致副作用，比如有害的交叉反应、过敏反应等等。一般上，所述剂量将随患者的年龄、 状态、性别及疾病的程度、给药途径或方案是否包括其他药物而变化，而且可以由本领域中 的技术人员确定。如果发生任何禁忌，所述剂量可以由个别医生调整。剂量可以改变，而且 可以每日一个或多个剂量给药，为时一日或数日。可以在关于已知种类的药物产品的适当 剂量文献中获得关于给药剂量的指导。
[0119] D?筛选方法
[0120] 本发明揭示识别可以用于治疗癌症或炎症的药剂的多种方法。所述方法可能涉及 在允许P68与钙调蛋白（CaM)肽结合的情况下提供一含有p68肽及钙调蛋白（CaM)肽的试 样，使所述试样接触一候选药剂，测定所述P68肽与所述钙调蛋白（CaM)肽的结合水平，以 及对所述结合水平与一对照试样进行比较。在这个方法中，与所述对照试样相比，P68/钙 调蛋白（CaM)结合的减少可以识别一可以用于治疗癌症的药剂。
[0121] P68与钙调蛋白（CaM)的结合可以使用常规方法来测定，比如不扰乱蛋白结合的 免疫测定方法。所述方法可以是基于细胞或无细胞的测定。在其最简单及直接的意义上 而言，免疫测定是涉及抗体与抗原之间的结合的结合测定。许多种类及格式的免疫测定广 为人知，而且可用于测定本发明所揭示的生物标记。免疫测定的例子是酶联免疫吸附测 定（ELISAs)、放射免疫测定（RIA)、放射免疫沉淀测定（RIPA)、免疫珠俘获测定、韦斯顿印 迹分析、斑点印迹分析、凝胶迀移测定、流式细胞术、蛋白阵列、多微珠阵列测定、磁俘获、 活体成像、荧光共振能量转移（FRET)以及光漂白后荧光恢复（FRAP)/光漂白后荧光定位 (FLAP)〇
[0122] p68与钙调蛋白（CaM)的结合可以使用荧光激活细胞分选术（FACS)测定。例如， 本发明揭示以融合到荧光蛋白的P68及钙调蛋白（CaM)转染的多个细胞系。这些细胞系可 以促成对已生物表达者进行高通量筛选及促成小分子以它们的生理形式结合到P68及钙 调蛋白（CaM)。
[0123] 一般上，可以从天然产品或合成（或半合成）提取物的大文库或化学品文库识别 候选药剂。因此，实质上任何数目的化学提取物或化合物可以使用本文中描述的模范方法 筛选。这样的提取物或化合物包括但不限于植物提取物、真菌提取物、原核提取物或动物提 取物、发酵液、合成化合物以及现有化合物的变形。许多方法也可以用于产生任何数目的 化学化合物（包括但不限于糖类化合物、油脂化合物、肽化合物及核酸化合物）的随机或 定向合成（例如半合成或全合成）。合成化合物文库可从市场上获得，例如从化学品文库 的承办商获得，这些化学品文库包括但不限于ChemBridgeCorporation(美国加利福尼州 圣迭戈市）、ChemDiv(美国加利福尼州圣迭戈市）、LifeChemicals(康奈提格州橙市）及 Maybridge(英国康沃尔郡）。
[0124] 可选择地，多个文库的细菌、霉菌、植物或动物提取物形式的天然化合物可从市 场上从许多来源获得，这些来源包括02H(英国剑桥市）、MerLionPharmaceuticalsPte Ltd(新加坡科学园II，新加坡117528邮区）及GalapagosNV(比利时梅赫伦市）。
[0125] 此外，天然及合成产生的提取物文库可以（例如）通过标准萃取及分馏方法或通 过标准合成方法结合固相有机合成、微波法合成及其他可能够制造大量供筛选的化合物的 快速吞吐量方法来生产。此外，如果需要，可以使用标准的化学、物理或生物化学方法来容 易地修饰或调整任何提取物文库或化合物（包括样品类型及样品溶解）。
[0126] 当发现一粗提取物具有期望的活性时，有必要进一步分馏阳性引导性提取物，以 隔离造成所观察到作用的化学成分。本文中描述的用于测定化合物的混合物中的活性的相 同的方法可以用于提纯所述活性成分及测试其衍生物。这样的异源提取物的分馏及提纯方 法在本领域中广为人知。如果需要，可对被证明是对治疗有用的药剂的化合物进行化学修 饰。被识别为具有治疗价值的化合物随后可以使用疾病或状态的体外细胞模型及动物模型 (比如本文中所揭示者）进行分析。
[0127] 候选药剂包括多种化学物质种类，但经常是有机分子，例如分子量大于100道尔 顿（Daltons)及小于大约2, 500道尔顿（Daltons)的小有机化合物。候选药剂可以包括对 与蛋白发生相互作用（尤其是氢键合）有必要的功能基团，而且一般包括至少一个胺基团、 羰基团、羟基团或羧基团，例如包括至少两个所述功能化学基团。所述候选药剂通常含有周 期碳或异环结构及/或以一个或多个上述功能基团代换的芳结构或多芳结构。
[0128] 在有些实施例中，所述候选药剂是蛋白。在一些方面，所述候选药剂是天然蛋白或 天然蛋白的片段。因此，可以使用（例如）含有蛋白或蛋白细胞提取物的随机或定向消化 液的细胞提取物。照这样，可以制造多个文库的原核及真核蛋白，以使用本文中的方法进行 筛查。所述文库可以是细菌蛋白、霉菌蛋白、病毒蛋白、真核蛋白及人蛋白。
[0129] 实施例
[0130] 实施例1 :p68的肽片段（氨基酸549-568)抑制癌症转移
[0131] 材料及方法
[0132] 反应物、细胞系、抗体及克隆：
[0133] 所述血凝素（HA)肽由AnaSpec合成。编码血凝素-标记p68 ("HA-taggedp68"） 的DNA序列被克隆到pHM6载体内。细胞系SW480/SW620购买自ATCC并遵照供应商的说明 培养。抗P68的多克隆（Pabp68)及单克隆（P68-RGG)抗体与先前报告（Yangetal.，2005 年）的相同。血凝素-标记（HA-tag)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH)、核纤层蛋白A/ (3(]^1111；[11六/0、|15调蛋白（0&1)、€[-微管蛋白（(1-1：1113111；[11)、|3-微管蛋白（|3-1：1113111；[11)、 驱动蛋白-l(kinesin-l)的重链、动力蛋白中间链l(Dyneinintermediate1)及0-肌动 蛋白（0-actin)抗体分别购买自CellSignaling、Abnova、SantaCruz、Abeam及AnaSpec0
[0134] 源自细胞提取物的血凝素-标记蛋白的免疫提纯：通过瞬时转染表达血凝素-标 记（HA-tagged)蛋白的SW480细胞在带有10%FBS的L-15培养基中培养。所述细胞经历 不同处理（比如划痕创伤）。收集所述细胞并在添加有所述蛋白酶的NETS缓冲剂中细胞溶 解。为了减少非特异性的蛋白-蛋白相互作用在所述免疫提纯中发生，600mM(最终浓度） 的6-氨基己酸（6-AcA)连同800mM(最终浓度）的氯化钠（NaCl)被添加到所述提取物，并 在室温条件下温育2小时。将一可从市场上获得的多克隆抗血凝素抗体添加到所制备的提 取物（500y1提取物/20y1的Abs)。所述混合物在4°C的温度条件下温育过夜。在温育 之后，将蛋白G琼脂糖微珠（50y1，以3mg/ml的BSA预处理）添加到所述混合物中，然后再 温育2小时。将所述蛋白G琼脂糖微珠置于NETS缓冲剂中清洗6次。将所述微珠结合蛋 白直接用于一些测定（比如三磷酸腺苷酶测定），或使用所述血凝素肽来洗提所述结合血 凝素-标记蛋白。所述带有结合蛋白的微珠在洗提缓冲剂中悬浮，然后装在一小圆柱形容 器中。将所述血凝素肽（〇 ) (500yg/ml洗提缓冲剂）流经所述圆柱形容器，以洗提所述微 珠结合蛋白。收集分馏物并通过"十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳"（SDS-PAGE)及 免疫印迹进行分析，以识别含有血凝素-标记蛋白的分馏物。进一步将所洗提的蛋白放在 随后的试验缓冲剂中透析（比如放在结合缓冲剂中透析），然后通过离心法浓缩。
[0135] SW620肿瘤的异种移植物及正位4T1肿瘤的转移抑制：所有动物实验根据 美国乔治亚州立大学（GeorgiaStateUniversity)的"实验动物护理及使用委员 会"（InstitutionalAnimalCareandUseCommittee,IACUC)的指南进行。以 5x106SW620 细胞或2x1064T1细胞对裸鼠或Balb/c小鼠（6至7周，HarlanLaboratory供应）进行 皮下注射或正位注射。按适当的时间间隔，通过腹膜内注射对所述荷瘤小鼠施用适当剂量 的肽。每2日对肿瘤形成及体积进行估定。在4周的时间过程中，根据公式4p/3x(宽度 /2)2x(长度/2)，以肿瘤的两个互相垂直的直径来测量肿瘤体积。在所述实验结束时对所述 肿瘤及器官进行收集及称重。从所采集的肿瘤及器官制备组织切片。通过苏木精-伊红染 色（H&E)或免疫染色对组织切片进行分析。为了对SW620肿瘤进行转移分析，从脾脏制备 组织提取物，从所述组织提取物提取总核糖核酸（totalRNAs)。以隔离的核糖核酸（RNAs) 执行逆转录-聚合酶链反应（RT-PCRs)。为了测定4T-1细胞的转移，对肺脏及肝脏进行了 检查。
[0136] 结果
[0137] 对含有Y593氨基酸的一 p68肽片段（通过与Y593磷酸化p68竞争）抑制上皮细 胞间质转型（Epithelial-MesenchymalTransition,EMT)的能力进行实验，这是由于抑制 上皮细胞间质转型（EMT)显示该p68肽片段对干涉转移有用处。合成了三种肽。最前两种 肽含有分别带有Y593磷酸化（"P印PhoY593"）及不带Y593磷酸化（"P印Y593"）的p68 的氨基酸584至602。第三种肽含有p68的氨基酸549至568, p68的所述氨基酸549至 568含有一IQ基序（"P印IQ"）。所述P印IQ及P印Y593作为对照肽使用。所述三种肽在 N-末端与TAT细胞可渗透性序列融合（参阅表4的序列）。
[0138] 所述肽以2mg/kg的剂量（腹膜内注射，每日一剂，为时两周）用于治疗SW620 肿瘤的一个裸鼠异种移植物。使用SW620细胞是因为它们含有高度Y593磷酸化的 p68(Carter,CL,etal.Oncogene29:5427-5436(2010) ；Yang,L,etal.MolCancer Res3:355-363(2005))。现已公认SW620肿瘤的异种移植物会转移到淋巴结，而且 通过检验脾脏中的SW620细胞，可以对所述转移进行分析（Liu,K，etal.JImmunol 171:4164-4174(2003))。
[0139] 所述P印Ph〇Y593肽对SW620的转移几乎没有起任何作用（见表1)，而癌症转移在 很大程度上由所述P印IQ肽降低（见图1A)。如肿瘤生长及使用抗Ki-67的抗体进行的免 疫染色所显示的那样（见图1B及图1C)，以任何所述肽进行的治疗对肿瘤生长率并没有重 大作用。始终如一地，所述肽对SW620细胞的体外增殖没有任何作用（见图1D)。

【权利要求】
1. 一种用于抑制一受治疗者身上癌症的转移的方法，包括对一需要给药的受治疗者施 用一含有能选择性地抑制P68RNA解旋酶在癌细胞中结合到钙调蛋白（CaM)的药剂的组合 物。
2. -种用于治疗一受治疗者身上的一炎症的方法，包括对一需要给药的受治疗者施用 一含有能选择性地抑制P68RNA解旋酶结合到钙调蛋白（CaM)的药剂的组合物。
3. 如权利要求1或2所述的方法，其中所述药剂为一包括p68的IQ基序或一 能结合CaM的保守性变体。如权利要求3所述的方法，其中所述肽包括氨基酸序列 FVSAGIQTSFRTGNPTG(SEQ ID N0:7)〇
4. 如权利要求4所述的方法，其中所述肽包括氨基酸序列FVSAGIQTSFRTGNPTGAYG (SEQ ID NO:4)〇
5. 如权利要求3所述的方法，其中所述肽进一步包括一细胞渗透肽序列。
6. 如权利要求3所述的方法，其中所述肽的长度为6至30个氨基酸。
7. 如权利要求1或2所述的方法，其中所述药剂为一选择性地结合癌细胞中的p68RNA 解旋酶的IQ基序的抗体。
8. -种用于识别用于抑制一受治疗者身上的癌症转移的药剂的方法，包括： (a) 在适合p68肽结合到CaM肽的条件下，使一候选药剂接触一含有p68肽的试样，以 及 (b) 测定所述p68肽结合到所述CaM肽， 其中所述P68肽含有人p68RNA解旋酶的IQ基序或一能结合人CaM的保守性变体， 其中所述CaM肽含有人CaM的p68结合区域或一能结合p68的保守性变体， 其中，与一对照试样相比，结合的减少显示药剂抑制癌症转移。
9. 如权利要求9所述的方法，其中所述肽包括氨基酸序列FVSAGIQTSFRTGNPTG (SEQ ID NO:7)〇
10. 如权利要求10所述的方法，其中所述肽包括氨基酸序列 FVSAGIQTSFRTGNPTGAYG(SEQ ID N0:4)〇
11. 一种药用组合物，包括一可选择性地抑制P68RNA解旋酶结合到钙调蛋白（CaM)的 肽及一药学上可接受的载体，所述药用组合物按用于抑制癌症在受治疗者身上转移的单位 剂量施用。
12. -种隔离肽，包括人p68的IQ基序或一能结合人CaM的保守性变体及一细胞渗透 肽序列。
13. -种药用组合物，包括一可选择性地抑制p68RNA解旋酶结合到钙调蛋白（CaM)的 肽及一药学上可接受的载体中的一抗肿瘤药剂。
【文档编号】C12Q1/68GK104507970SQ201380023852
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2013年3月13日 优先权日:2012年3月14日
【发明者】刘志仁, 王海珍 申请人:普罗达生物科技有限公司, 刘志仁