一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及保健品【技术领域】，具体涉及一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品及其制备方法。该兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，包括：乳矿物盐、酪蛋白磷酸肽、乳清蛋白、牛磺酸、酵母β-葡聚糖、D-甘露糖醇、木糖醇柠檬酸、羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁。该兼具补钙和增强免疫力功能的保健品的制备方法，包括以下步骤：步骤一，称量、混合；步骤二，粉碎过筛；步骤三，配制质量分数为0.5%的羧甲基纤维素钠溶液；步骤四，制粒、干燥；步骤五，整粒；步骤六，总混；步骤七，压片。本发明制得的保健品，具有很好的补钙作用，且增强免疫力的效果好，且利于人体吸收，该保健品还具有口感好，并适用于糖尿病的患者，且能避免儿童容易蛀牙的优点。
【专利说明】一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及保健品【技术领域】，具体涉及一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品及其制备方法。
【背景技术】
[0002]钙是构成机体骨骼和牙齿的主要成分，这部分的钙占其总量的99%。骨骼作为人体最根本的支柱，存在的形式主要为羟磷灰石，其余的常以结合的或游离的离子状态存在于软组织、细胞外液及血液中，组成混溶钙池。混溶钙池的钙是维持多种正常生理状态所必需的。就我国现有膳食结构的营养调查表明，居民钙摄入量普遍偏低。仅达RDA的50%左右。因此钙缺乏是较常见的营养性疾病。主要表现为骨骼的病变。儿童时期生长发育旺盛，对钙的需要量较多，如长期摄钙不足，并常伴蛋白质和维生素D缺乏，可引起生长迟缓，新骨结构异常，骨钙化不良，骨骼变形，发生佝偻病。我国南方地区发病率在20%左右，北方有些地区更高达50%。
[0003]免疫(immune)是指机体对外来异物的一种反应，是机体识别“自己”与“非己”物质，并对非己异物加以排斥、清除，以维持机体内环境平衡稳定的一种生理性防御反应。过去的概念认为免疫就是机体对病原(微生物、寄生虫)以及其有害产物(如毒素)的不同程度的抵抗力。简言之，免疫就是机体抗感染的防御功能。近年来免疫学发展很快，研究的领域逐渐扩大，远远超出了抗细菌感染的狭隘范围，在医学和生物学中日益发挥着重要的作用。目前认为免疫对机体有三种功能:(I)防御功能:抗感染或防止其他抗原异物入侵；(2)自我稳定:清除衰老、死亡或损伤的细胞；(3)免疫监视:消灭突变的细胞。免疫功能异常可造成身体损害。
[0004]因此，补钙和增强免疫力对于人体相当重要。但是，随着社会竞争的加剧、各种压力的增加、生活习惯的改变、环境污染越来越严重以及人们膳食不够均衡，导致人们身体多数存在钙缺乏和免疫力低下的情况。随着人们保健意识的逐渐增强，保健品逐渐被人们所接受和认可。但是，现有的保健品中，同时兼具补钙和增强免疫力功能的不多，且同时补钙和增强免疫力的效果不理想。中国发明专利申请CN102524407A公开了一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片，但其配方组分中的碳酸钙、牛初乳粉和全脂奶粉主要是起补钙的作用，其余组分均作为辅料使用，因此，该专利对于增强免疫力的效果不理想，且其用于补钙的全脂奶粉由于脂肪含量较高，不利于人体健康。另外，该专利由于在牛初乳粉和全脂奶粉中含有较高的糖分，因此，该专利的钙咀嚼片不适合于患有糖尿病的患者。此外，中国发明专利申请CN103340400A公开了具有增强免疫力、补钙及抗衰老功能的食品，其补钙和增强免疫力的效果不理想，且其不容易被人体吸收和利用，且该专利的食品由于含有的糖分较高，同样不适合于患有糖尿病的患者。
【发明内容】
[0005]本发明的目的之一在于针对现有技术的不足，提供一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品。
[0006]本发明的目的之二在于针对现有技术的不足，提供一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品的制备方法。
[0007]为了实现上述目的之一，本发明采用如下技术方案:
一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，它包括以下重量百分比的组分:
乳矿物盐30%~40%
酪蛋白磷酸肽1%~4%
乳清蛋白3%~6%
牛磺酸4%~7%
酵母β -葡聚糖0.05%~0.1%
D-甘露糖醇30%~40% 木糖醇10%~15%
柠檬酸0.5%^1%
羧甲基纤维素钠0.1%~0.5%
硬脂酸镁1%~4%。
[0008]优选的，一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，它包括以下重量百分比的组分:
乳矿物盐33%~38%
酪蛋白磷酸肽2%~4%
乳清蛋白4%~6%
牛磺酸4%~6%
酵母β -葡聚糖0.05%~0.08%
D-甘露糖醇33%~38%
木糖醇12%~15%
柠檬酸0.5%~0.8%
羧甲基纤维素钠0.1%~0.5%
硬脂酸镁1%~4%。
[0009]优选的，一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，它包括以下重量百分比的组分:
乳矿物盐33%~36%
酪蛋白磷酸肽2%~3%
乳清蛋白4%~5%
牛磺酸5%~6%
酵母β -葡聚糖0.06%~0.08%
D-甘露糖醇34%~37%
木糖醇12%~14%
柠檬酸0.6%~0.8%
羧甲基纤维素钠0.2%~Ο.5%
硬脂酸镁1%~3%。[0010]更为优选的，一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，它包括以下重量百分比的组分:
乳矿物盐35.6%
酪蛋白磷酸肽2.66%
乳清蛋白4.46%
牛横酸5.6%
酵母β -葡聚糖0.07%
D-甘露糖醇35.26%
木糖醇13.35%
柠檬酸0.7%
羧甲基纤维素钠0.3%
硬脂酸镁2%。
[0011]为了实现上述目的之二，本发明采用如下技术方案:
上述所述的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品的制备方法，它包括以下步骤:步骤一，称量、混合:按配方量称取各原料；将原料中的牛磺酸、酪蛋白磷酸肽、乳清蛋白、酵母β -葡聚糖和柠檬酸用等量倍增法混合均匀后，再与木糖醇、D-甘露糖醇和乳矿物盐用等量倍增法混合均匀，得到混合物；
步骤二，粉碎过筛:将步骤一得到的混合物粉碎并通过70-100目筛，得到粉碎混合物； 步骤三，配制质量分数为0.19Tl%的羧甲基纤维素钠溶液；
骤四，制粒、干燥:将步骤三的0.19Tl%的羧甲基纤维素钠溶液喷入步骤二得到的粉碎混合物中制备颗粒，控制进风温度为65°C~80°C，控制粉碎混合物的温度为50°C~60°C，控制烘干温度为55°C~65°C，以及控制颗粒的水分含量为2%~8% ；
步骤五，整粒:将步骤四制得的颗粒用16~30目筛进行整粒；
步骤六，总混:往步骤五中得到的颗粒加入配方量的硬脂酸镁，然后混合均匀，得到总混合物；
步骤七，压片:将步骤六中得到的总混合物进行压片，即制得兼具补钙和增强免疫力功能的保健品。
[0012]上述技术方案中，所述步骤三配制质量分数为0.5%的羧甲基纤维素钠溶液的具体配制方法为:按配方量称量羧甲基纤维素钠，然后往羧甲基纤维素钠中逐次加入少量的水以使得羧甲基纤维素钠溶液充分溶胀后，再逐步加水稀释，得到0.5%的羧甲基纤维素钠溶液。
[0013]上述技术方案中，配制0.1°/Tl%的羧甲基纤维素钠溶液时，所使用的水为热水；或者在溶胀羧甲基纤维素钠时进行加热；热水或加热的温度为40°c~85°C。
[0014]上述技术方案中，步骤二中，粉碎过筛所用的过筛目数为80目。
[0015]上述技术方案中，步骤四中，控制进风温度为70°C，控制粉碎混合物的温度为52°C，控制烘干温度为58°C，控制颗粒的水分含量为5%。
[0016]上述技术方案中，步骤五中，整粒所用的筛为20目。 [0017]本发明与现有技术相比较，有益效果在于:
(I)本发明提供的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，由于以乳矿物盐作为配方组分，从而使得本发明的保健品具有很好的补钙作用，且利于人体吸收；而且，乳矿物盐不但具有补钙作用，还有助于增强人体免疫力。另外，配方中所用的酪蛋白磷酸肽不仅具有促进钙吸收的作用，也具有增强免疫力的功效。
[0018](2)本发明提供的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，组分中的乳矿物盐、牛磺酸、酪蛋白磷酸肽、乳清蛋白和酵母β_葡聚糖均具有增强免疫力的作用，从而使得本发明的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品增强免疫力的效果好，且上述组分均利于人体吸收。
[0019](3)本发明提供的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，组分中的D-甘露糖醇和木糖醇均是糖醇类物质，其在肠道内可作为益生元，促进益生菌的增殖，达到调节肠道的作用，进而间接起到促进人体免疫功能的作用，从而使得本发明的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品增强免疫力的效果好。
[0020](4)本发明提供的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，组分中的柠檬酸、羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁分别作为调味剂、粘合剂和润滑剂，从而使得本发明的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品的口感好，且易于制备。
[0021](5)本发明提供的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，由于组分中不含有糖分，因此为无糖产品，从而适用于患有糖尿病的患者，同时也避免儿童容易蛀牙。
[0022](6)本发明提供的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品的制备方法，由于在配制羧甲基纤维素钠溶液，先将羧甲基纤维素钠进行充分溶胀，在进行稀释，因此能够避免羧甲基纤维素钠形成团状物而难以完全溶解。
[0023](7)本发明提供的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品的制备方法，具有制备方法简单，操作性强，并能够适合大规模生产的优点。
【具体实施方式】
[0024]下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
[0025]实施例1。
[0026]一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，它包括以下重量组分:
乳矿物盐35.6kg、酪蛋白磷酸肽2.66kg、乳清蛋白4.46kg、牛磺酸5.6kg、酵母β -葡聚糖0.07kg、D-甘露糖醇35.26kg、木糖醇13.35kg、朽1檬酸0.7kg、羧甲基纤维素钠0.3kg、硬脂酸镁2kg。
[0027]上述一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，它包括以下步骤:
步骤一，称量、混合:按配方量称取各原料；将原料中的牛磺酸、酪蛋白磷酸肽、乳清蛋白、酵母β -葡聚糖和柠檬酸用等量倍增法混合均匀后，再与木糖醇、D-甘露糖醇和乳矿物盐用等量倍增法混合均匀，得到混合物；
步骤二，粉碎过筛:将步骤一得到的混合物粉碎并通过80目筛，得到粉碎混合物；步骤三，配制质量分数为0.5%的羧甲基纤维素钠溶液；具体配制方法为:按配方量称量羧甲基纤维素钠，然后往羧甲基纤维素钠中逐次加入少量的水以使得羧甲基纤维素钠溶液充分溶胀后，再逐步加水稀释，得到0.5%的羧甲基纤维素钠溶液；其中，配制0.5%的羧甲基纤维素钠溶液时，所使用的水为热水，热水的温度为60°C ；
步骤四，制粒、干燥:将步骤三的0.5%的羧甲基纤维素钠溶液喷入步骤二得到的粉碎混合物中制备颗粒，并控制进风温度为70°C，控制粉碎混合物的温度为52°C，控制烘干温度为58°C，以及控制颗粒的水分含量为5% ；
步骤五，整粒:将步骤四制得的颗粒用20目筛进行整粒；
步骤六，总混:往步骤五中得到的颗粒加入配方量的硬脂酸镁，然后混合均匀，得到总混合物；
步骤七，压片:将步骤六中得到的总混合物进行压片，即制得兼具补钙和增强免疫力功能的保健品。
[0028]本实施例1制得的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，具有很好的补钙作用，且增强免疫力的效果好，并且利于人体吸收，该保健品还具有口感好，并适用于糖尿病的患者，且能避免儿童容易蛀牙的优点。
[0029]实施例2。
[0030]一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，它包括以下重量组分:
乳矿物盐30kg、酪蛋白磷酸肽4kg、乳清蛋白6kg、牛磺酸4.45kg、酵母β -葡聚糖
0.05kg、D-甘露糖醇40kg、木糖醇10kg、朽1檬酸1kg、羧甲基纤维素钠0.5kg、硬脂酸镁4kg。
[0031]上述一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，它包括以下步骤:
步骤一，称量、混合:按配方量称取各原料；将原料中的牛磺酸、酪蛋白磷酸肽、乳清蛋白、酵母β -葡聚糖和柠檬酸用等量倍增法混合均匀后，再与木糖醇、D-甘露糖醇和乳矿物盐用等量倍增法混合均匀，得到混合物；
步骤二，粉碎过筛:将步骤一得到的混合物粉碎并通过70目筛，得到粉碎混合物；步骤三，配制质量分数为0.1%的羧甲基纤维素钠溶液；具体配制方法为:按配方量称量羧甲基纤维素钠，然后往羧甲基纤维素钠中逐次加入少量的水以使得羧甲基纤维素钠溶液充分溶胀后，再逐步加水稀释，得到0.1%的羧甲基纤维素钠溶液；其中，配制0.1%的羧甲基纤维素钠溶液时进行加热，加热的温度为40°C ；
步骤四，制粒、干燥:将步骤三的0.1%的羧甲基纤维素钠溶液喷入步骤二得到的粉碎混合物中制备颗粒，并控制进风温度为65°C，控制粉碎混合物的温度为50°C，控制烘干温度为55°C，以及控制颗粒的水分含量为2% ；
步骤五，整粒:将步骤四制得的颗粒用25目筛进行整粒；
步骤六，总混:往步骤五中得到的颗粒加入配方量的硬脂酸镁，然后混合均匀，得到总混合物；
步骤七，压片:将步骤六中得到的总混合物进行压片，即制得兼具补钙和增强免疫力功能的保健品。
[0032]本实施例2制得的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，具有很好的补钙作用，且增强免疫力的效果好，并且利于人体吸收，该保健品还具有口感好，并适用于糖尿病的患者，且能避免儿童容易蛀牙的优点。
[0033]实施例3。
[0034]一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，它包括以下重量组分:
乳矿物盐40kg、酪蛋白磷酸肽1kg、乳清蛋白3kg、牛磺酸7kg、酵母β -葡聚糖0.1kg、D-甘露糖醇30kg、木糖醇15kg、朽1檬酸0.5kg、羧甲基纤维素钠0.1kg、硬脂酸镁3.3kg。
[0035]上述一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，它包括以下步骤: 步骤一，称量、混合:按配方量称取各原料；将原料中的牛磺酸、酪蛋白磷酸肽、乳清蛋白、酵母β -葡聚糖和柠檬酸用等量倍增法混合均匀后，再与木糖醇、D-甘露糖醇和乳矿物盐用等量倍增法混合均匀，得到混合物；
步骤二，粉碎过筛:将步骤一得到的混合物粉碎并通过90目筛，得到粉碎混合物；步骤三，配制质量分数为1%的羧甲基纤维素钠溶液；具体配制方法为:按配方量称量羧甲基纤维素钠，然后往羧甲基纤维素钠中逐次加入少量的水以使得羧甲基纤维素钠溶液充分溶胀后，再逐步加水稀释，得到1%的羧甲基纤维素钠溶液；其中，配制1%的羧甲基纤维素钠溶液时进行加热，加热的温度为85°C ；
步骤四，制粒、干燥:将步骤三的1%的羧甲基纤维素钠溶液喷入步骤二得到的粉碎混合物中制备颗粒，并控制进风温度为80°C，控制粉碎混合物的温度为55°C，控制烘干温度为60°C，以及控制颗粒的水分含量为8% ；
步骤五，整粒:将步骤四制得的颗粒用30目筛进行整粒；
步骤六，总混:往步骤五中得到的颗粒加入配方量的硬脂酸镁，然后混合均匀，得到总混合物；
步骤七，压片:将步骤六中得到的总混合物进行压片，即制得兼具补钙和增强免疫力功能的保健品。
[0036]本实施例3制得的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，具有很好的补钙作用，且增强免疫力的效果好，并且利于人体吸收，该保健品还具有口感好，并适用于糖尿病的患者，且能避免儿童容易蛀牙的优点。
[0037]实施例4。
[0038]一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，它包括以下重量组分:
乳矿物盐33kg、酪蛋白磷酸肽3kg、乳清蛋白5kg、牛磺酸4kg、酵母β -葡聚糖0.06kg、D-甘露糖醇38kg、木糖醇13kg、朽1檬酸0.6kg、羧甲基纤维素钠0.4kg、硬脂酸镁2.94kg。
[0039]上述一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，它包括以下步骤:
步骤一，称量、混合:按配方量称取各原料；将原料中的牛磺酸、酪蛋白磷酸肽、乳清蛋白、酵母β -葡聚糖和柠檬酸用等量倍增法混合均匀后，再与木糖醇、D-甘露糖醇和乳矿物盐用等量倍增法混合均匀，得到混合物；
步骤二，粉碎过筛:将步骤一得到的混合物粉碎并通过100目筛，得到粉碎混合物；步骤三，配制质量分数为0.8%的羧甲基纤维素钠溶液；具体配制方法为:按配方量称量羧甲基纤维素钠，然后往羧甲基纤维素钠中逐次加入少量的水以使得羧甲基纤维素钠溶液充分溶胀后，再逐步加水稀释，得到0.8%的羧甲基纤维素钠溶液；其中，配制0.8%的羧甲基纤维素钠溶液时，所使用的水为热水，热水的温度为80°C ；
步骤四，制粒、干燥:将步骤三的0.8%的羧甲基纤维素钠溶液喷入步骤二得到的粉碎混合物中制备颗粒，并控制进风温度为75°C，控制粉碎混合物的温度为60°C，控制烘干温度为65°C，以及控制颗粒的水分含量为6% ；
步骤五，整粒:将步骤四制得的颗粒用16目筛进行整粒；
步骤六，总混:往步骤五中得到的颗粒加入配方量的硬脂酸镁，然后混合均匀，得到总混合物；
步骤七，压片:将步骤六中得到的总混合物进行压片，即制得兼具补钙和增强免疫力功能的保健品。
[0040]本实施例4制得的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，具有很好的补钙作用，且增强免疫力的效果好，并且利于人体吸收，该保健品还具有口感好，并适用于糖尿病的患者，且能避免儿童容易蛀牙的优点。
[0041]实施例5。
[0042]一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，它包括以下重量组分:
乳矿物盐37kg、酪蛋白磷酸肽2kg、乳清蛋白4kg、牛磺酸5kg、酵母β -葡聚糖0.08kg、D-甘露糖醇35.92kg、木糖醇14kg、朽1檬酸0.8kg、羧甲基纤维素钠0.2kg、硬脂酸镁1kg。
[0043]上述一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，它包括以下步骤:
步骤一，称量、混合:按配方量称取各原料；将原料中的牛磺酸、酪蛋白磷酸肽、乳清蛋白、酵母β -葡聚糖和柠檬酸用等量倍增法混合均匀后，再与木糖醇、D-甘露糖醇和乳矿物盐用等量倍增法混合均匀，得到混合物；
步骤二，粉碎过筛:将步骤一得到的混合物粉碎并通过95目筛，得到粉碎混合物；步骤三，配制质量分数为0.3%的羧甲基纤维素钠溶液；具体配制方法为:按配方量称量羧甲基纤维素钠，然后往羧甲基纤维素钠中逐次加入少量的水以使得羧甲基纤维素钠溶液充分溶胀后，再逐步加水稀释，得到0.3%的羧甲基纤维素钠溶液；其中，配制0.3%的羧甲基纤维素钠溶液时，所使用的水为热水，热水的温度为70°C ；
步骤四，制粒、干燥:将步骤三的0.3%的羧甲基纤维素钠溶液喷入步骤二得到的粉碎混合物中制备颗粒，并控制进风温度为68°C，控制粉碎混合物的温度为58°C，控制烘干温度为62°C，以及控制颗粒的水分含量为4% ；
步骤五，整粒:将步骤四制得的颗粒用18目筛进行整粒；
步骤六，总混:往步骤五中得到的颗粒加入配方量的硬脂酸镁，然后混合均匀，得到总混合物；
步骤七，压片:将步骤六中得到的总混合物进行压片，即制得兼具补钙和增强免疫力功能的保健品。
[0044]本实施例5制得的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，具有很好的补钙作用，且增强免疫力的效果好，并且利于人体吸收，该保健品还具有口感好，并适用于糖尿病的患者，且能避免儿童容易蛀牙的优点。
[0045]实施例6。
[0046]—种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，它包括以下重量组分:
乳矿物盐36kg、酪蛋白磷酸肽2.5kg、乳清蛋白3.5kg、牛磺酸6kg、酵母β -葡聚糖0.09kg、D-甘露糖醇33kg、木糖醇14.51kg、朽1檬酸0.9kg、羧甲基纤维素钠0.5kg、硬脂酸镁 3kg。
[0047]上述一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，它包括以下步骤:
步骤一，称量、混合:按配方量称取各原料；将原料中的牛磺酸、酪蛋白磷酸肽、乳清蛋白、酵母β -葡聚糖和柠檬酸用等量倍增法混合均匀后，再与木糖醇、D-甘露糖醇和乳矿物盐用等量倍增法混合均匀，得到混合物；
步骤二，粉碎过筛:将步骤一得到的混合物粉碎并通过85目筛，得到粉碎混合物；步骤三，配制质量分数为0.6%的羧甲基纤维素钠溶液；具体配制方法为:按配方量称量羧甲基纤维素钠，然后往羧甲基纤维素钠中逐次加入少量的水以使得羧甲基纤维素钠溶液充分溶胀后，再逐步加水稀释，得到0.6%的羧甲基纤维素钠溶液；其中，配制0.6%的羧甲基纤维素钠溶液时，所使用的水为热水，热水的温度为50°C ；
步骤四，制粒、干燥:将步骤三的0.6%的羧甲基纤维素钠溶液喷入步骤二得到的粉碎混合物中制备颗粒，并控制进风温度为78°C，控制粉碎混合物的温度为56°C，控制烘干温度为64°C，以及控制颗粒的水分含量为3% ；
步骤五，整粒:将步骤四制得的颗粒用27目筛进行整粒；
步骤六，总混:往步骤五中得到的颗粒加入配方量的硬脂酸镁，然后混合均匀，得到总混合物；
步骤七，压片:将步骤六中得到的总混合物进行压片，即制得兼具补钙和增强免疫力功能的保健品。
[0048]本实施例6制得的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，具有很好的补钙作用，且增强免疫力的效果好，并且利于人体吸收，该保健品还具有口感好，并适用于糖尿病的患者，且能避免儿童容易蛀牙的优点。
[0049]增强免疫力功能的动物试验
1.1实验样品
实验样品为上述实施例1制备的样品。
[0050]1.2动物实验及环境
实验动物为山东大学动物实验中心提供的健康SPF昆明种小鼠。将实验动物分为4个免疫大组，每大组40只，每免疫大组分为对照组和低、中、高剂量组，各10只。选用雌性小鼠80只，体重18 g _22g，分为第一免疫组和第二免疫组，第一免疫组用于迟发型变态反应(DTH)实验、血清溶血素的测定、抗体生成细胞数的测定；第二免疫组用于小鼠碳廓清实验；选用雄性小鼠80只，体重18-22g，作为第三免疫组和第四免疫组，第三免疫组用于小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验，第四免疫组用于小鼠淋巴细胞转化实验和小鼠NK细胞活性测定。实验环境温度22°C ±2°C，相对湿度50%±10%。
[0051]1.3剂量选择与受试动物给予方式
推荐量为每日4.5g,每人按60kg体重计,相当于0.075g/日/kg.bw,按相当于人体推荐量的5倍、10倍、30倍确定小鼠的低、中、高剂量，即各组小鼠每日使用量分别为0.375g/kg.bw、0.75 g/kg.bw、2.25g/kg.bw,经口每日一次灌胃给予小鼠受试物,灌胃体积按20ml/kg.bw。灌胃前用蒸馏水配制受试物，低、中、高剂量组中受试物的浓度分别为0.0187g/ml、0.0375 g/ml、0.1125 g/ml，对照组以等体积的蒸馏水代替受试物，连续给予30天后测定各项免疫指标。实验小鼠以小鼠专用词料喂词。
[0052]1.4主要仪器与试剂
动物天平、分析天平、洁净工作台、游标卡尺(精密度0.01mm)、微量注射器(25μ I)、CO2培养箱、恒温水浴、离心机、紫外分光光度计、酶联免疫检测仪、光学显微镜、微量加样器(20-200 μ 1、100-1000 μ I)。
[0053]无菌手术器械、200目筛网、玻璃平皿、纱布试管血细胞计数器24孔和96孔平底细胞培养板、96孔U型底细胞培养板。计时器血色素吸管玻片架、绵羊红细胞(SRBC)生理盐水、刀豆蛋白Α、补体(豚鼠血清)、Hank ‘s液(pH7.2-7.4)、青链霉素、SA缓冲液、琼脂糖、MTT、小牛血清、RPMI1640培养液、PBS缓冲液(pH7.2-7.4)、乳酸锂、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯磷酸盐、氧化型辅酶1、1%冰醋酸、lmlo/L HC1、0.1%ΝΡ40(ν/ν)、酸性异丙醇(96ml异丙醇加 4ml lmlo/L 的 HCl),YAC-1 细胞、0.21o/L 的 Tris-HCl 缓冲、液(pH8.2)印度墨汁、lg/LNa2C03、鸡红细胞、甲醇、丙酮Giemsa染液等。
[0054]1.5实验方法
1.5.1脏器体重比值测定
小鼠称重后颈椎脱白处死小鼠，取其胸腺、脾脏，去尽筋膜，用滤纸吸干脏器表面血污并称重，计算胸腺体重比值与脾脏体重比值。所得数据，用SPSS统计软件进行方差分析。
[0055]1.5.2迟发型变态反应(足趾增厚法)(DTH)
取新鲜脱纤维羊血，用生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2%( v/v用生理盐水配制)压积SRBC (2000r/min, IOmin) 0.2ml，致敏后4天，测量左后足趾部厚度，同一部位测量三次，取平均值。然后再测量部位皮下注射20% (v/v用生理盐水配制)压积SRBC20微升，于注射后24h测量左后足趾部厚度，以攻击前后足趾厚度之差值(足趾肿胀度)来标示DTH的程度。
[0056]所得数据为计量资料，用SPSS统计软件进行方差分析，若受试物组攻击前后足趾厚度之差值高于对照组，且差异有显著性(P > 0.05)，可判定该受试物有提高小鼠迟发型变态反应能力的作用。
[0057]1.5.3ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)
无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’ s洗液2次，每次1000r/min离心lOmin。然后将细胞悬浮于ImlRPMI 1640的完全培养液中，计数活细胞数，调整细胞浓度为3X106次方个/ml。将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，在其中一孔加75 μ I ConA液(相当于7.5 μ 1/ml),另一孔作为对照，置5%C02、37°C C02孵箱培养68h后，每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPMI 1640培养液，同时每孔加入50 μ IMTT (5mg/ml),继续培养4h。每孔加入Iml酸性异丙醇，吹打均匀，使紫色结晶完全溶解，然后将液体移入比色杯中，用紫外分光光度计，在570nm波长处测定其光密度值(0D值)。计算试验孔OD值与对照孔OD值之差，以此表示淋巴细胞的增值能力。
[0058]所得数据为计量资料，用SPSS统计软件进行方差分析，若受试物组淋巴细胞的增值能力高于对照组，且差异有显著性(P <0.05)，可判定该受试物有提高ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力的作用。
[0059]1.5.4抗体生成细胞测定(Jerne改良玻片法)
取脱纤维羊血，用生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2% (v/v，用生理盐水配制)压积SRBC (2000r/min, IOmin) 0.2ml，将SRBC免疫5天后的小鼠处死，取脾，制成细胞悬液。将10g/L琼脂糖加热溶解后，与等量双倍Hank’ s液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加10% (v/v，用SA液配制)压积SRBC50y 1、脾细胞悬液20 μ 1，迅速混合后，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入CO2培养箱孵育1.5h，然后将补体(用SA缓冲液按1:8稀释)加入玻片架凹槽内，继续温育1.5h后，计数溶血空斑数。
[0060]所得数据为计量资料，用SPSS统计软件进行方差分析，若受试物组溶血空斑数高于对照组，且差异有显著性(P < 0.05)，可判定该受试物有增加小鼠抗体细胞数的作用。[0061]1.5.5小鼠血清溶血素的测去脱纤维羊血定
取脱纤维羊血，用生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2% (v/v，用生理盐水配制)压积SRBC (2000r/min, 10min)0.2ml，免疫5天后，摘除小鼠眼球取血于离心管内，放置约lh，将凝固血与管壁剥离，离心(2000r/min，lOmin)，收集血清。用生理盐水将血清倍比稀释，将不同稀释度血清分别置于微量血凝实验板内，每孔100 μ 1，再加入0.5% (v/v，用生理盐水配制)悬液100μ 1，混匀，置湿盒内，于37°C温箱孵育3h，记录血球凝集程度。计算抗体积数(血清对倍稀释指数与凝集度乘积之和)。
[0062]血清凝集程度分为5级(O -1V)记录，按以下标准判定。
[0063]O级:SRBC全部下沉，集中在孔底部形成致密的圆点状，四周液体清晰。
[0064]I级:SRBC大部分沉集在孔底成园点状，四周有少量凝集的SRBC。
[0065]II级:凝集的SRBC在孔底形成薄层，中心可以明显见到一个疏松的红点。
[0066]III级:凝集的SRBC均匀地铺散在孔底成一薄层，中心隐约可见一个小红点。
[0067]IV级:凝集的SRBC均匀地铺散在孔底成一薄层，凝块有时成卷折状。
[0068]所得数据为计量资料，用SPSS统计软件进行方差分析，若受试物组血清溶血素抗体积数高于对照组，且差异有显著性(P < 0.05)，可判定该受试物有提高小鼠血清溶血素水平的作用。
[0069]1.5.6小鼠碳廓清实验
小鼠尾静脉注射1:5稀释的印度墨汁，待墨汁注入，立即计时，注入墨汁后2min、lOmin，分别从内眦静脉丛取血20μ 1，并将其加入2ml lg/LNa2C03溶液中。用紫外分光在600nm波长处测光密度值(0D值)，以Na2CO3溶液作空白对照。将小鼠处死，取其肝脏和脾脏称重。按下式计算吞噬指数a:
【权利要求】
1.一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，其特征在于:它包括以下重量百分比的组分: 乳矿物盐30%~40% 酪蛋白磷酸肽1%~4% 乳清蛋白3%~6% 牛磺酸4%~7% 酵母β -葡聚糖0.05%~0.1% D-甘露糖醇30%~40% 木糖醇10%~15% 柠檬酸0.5%^1% 羧甲基纤维素钠0.1%~0.5% 硬脂酸镁1%~4%。
2.根据权利要求1所述的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，其特征在于:它包括以下重量百分比的组分: 乳矿物盐33%~38% 酪蛋白磷酸肽2%~4% 乳清蛋白4%~6% 牛磺酸4%~6% 酵母β -葡聚糖0.05%~0.08% D-甘露糖醇33%~38% 木糖醇12%~15% 柠檬酸0.5%~0.8% 羧甲基纤维素钠0.1%~0.5% 硬脂酸镁1%~4%。
3.根据权利要求1所述的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，其特征在于:它包括以下重量百分比的组分: 乳矿物盐33%~36% 酪蛋白磷酸肽2%~3% 乳清蛋白4%~5% 牛磺酸5%~6% 酵母β -葡聚糖0.06%~0.08% D-甘露糖醇34%~37% 木糖醇12%~14% 柠檬酸0.6%~0.8% 羧甲基纤维素钠0.2%~Ο.5% 硬脂酸镁1%~3%。
4.根据权利要求1所述的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品，其特征在于:它包括以下重量百分比的组分: 乳矿物盐35.6%酪蛋白磷酸肽2.66% 乳清蛋白4.46% 牛横酸5.6% 酵母β -葡聚糖0.07% D-甘露糖醇35.26% 木糖醇13.35% 柠檬酸0.7% 羧甲基纤维素钠0.3% 硬脂酸镁2%。
5.权利要求1至4任意一项所述的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品的制备方法，其特征在于:它包括以下步骤: 步骤一，称量、混合:按配方量称取各原料；将原料中的牛磺酸、酪蛋白磷酸肽、乳清蛋白、酵母β -葡聚糖和柠檬酸用等量倍增法混合均匀后，再与木糖醇、D-甘露糖醇和乳矿物盐用等量倍增法混合均匀，得到混合物； 步骤二，粉碎过筛:将步骤一得到的混合物粉碎并通过70-100目筛，得到粉碎混合物； 步骤三，配制质量分数为0.19Tl%的羧甲基纤维素钠溶液； 步骤四，制粒、干燥:将步骤三的0.19Tl%的羧甲基纤维素钠溶液喷入步骤二得到的粉碎混合物中制备颗粒，控制进风温度为65°C~80°C，控制粉碎混合物的温度为50°C~60°C，控制烘干温度为55°C~65°C，以及控制颗粒的水分含量为2%~8% ； 步骤五，整粒:将步骤四制得的颗粒用16~30目筛进行整粒； 步骤六，总混:往步骤五中得到的颗粒加入配方量的硬脂酸镁，然后混合均匀，得到总混合物； 步骤七，压片:将步骤六中得到的总混合物进行压片，即制得兼具补钙和增强免疫力功能的保健品。
6.根据权利要求5所述的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品的制备方法，其特征在于:所述步骤三配制质量分数为0.5%的羧甲基纤维素钠溶液的具体配制方法为:按配方量称量羧甲基纤维素钠，然后往羧甲基纤维素钠中逐次加入少量的水以使得羧甲基纤维素钠溶液充分溶胀后，再逐步加水稀释，得到0.5%的羧甲基纤维素钠溶液。
7.根据权利要求6所述的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品的制备方法，其特征在于:配制0.19Tl%的羧甲基纤维素钠溶液时，所使用的水为热水；或者在溶胀羧甲基纤维素钠时进行加热；热水或加热的温度为40°C~85°C。
8.根据权利要求5所述的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品的制备方法，其特征在于:步骤二中，粉碎过筛所用的过筛目数为80目。
9.根据权利要求5所述的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品的制备方法，其特征在于:步骤四中，控制进风温度为70°C，控制粉碎混合物的温度为52°C，控制烘干温度为58°C，控制颗粒的水分含量为5%。
10.根据权利要求5所述的一种兼具补钙和增强免疫力功能的保健品的制备方法，其特征在于:步骤五中，整粒所用的筛为20目。
【文档编号】A23L1/09GK103976216SQ201410212761
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2014年5月20日 优先权日:2014年5月20日
【发明者】杭伟锋, 陈家标, 聂雄鹏, 刘婷婷, 周春晖 申请人:广东太阳神集团有限公司