混菌好氧发酵秸秆尾菜制备蛋白饲料方法
【专利摘要】本发明主要涉及混菌好氧发酵秸秆尾菜制备蛋白饲料方法。一种混菌好氧发酵秸秆尾菜制备蛋白饲料方法，其主要特点是：将秸秆、尾菜、菜粕、糠麸，均匀搅拌，使其含水量达到50—60％；加入相对于干料总量为2—6％的硫酸铵，相对于干料总量为1—4％的尿素；用1％石灰水调pH至5.5—6.5；接入相对于干料总量为8—12％由白地霉菌、乳酸菌、黑曲霉菌混合的菌液，混合菌液的重量比为白地霉菌50—70％，乳酸菌20—25％，黑曲霉菌5—10％；在温度为28-32℃，通风条件下发酵24-36小时，制成发酵蛋白饲料。本发明利用现代生物技术，优选最佳的组合菌，生产工艺简便，节省设备和能源，所需投资少。
【专利说明】混菌好氧发酵秸秆尾菜制备蛋白饲料方法
【技术领域】：
[0001] 本发明主要涉及一种混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法。
【背景技术】：
[0002] 我国人口众多，而蛋白质严重缺乏，增产或进口鱼粉又有一定的困难，这就严重的 影响着我国畜牧业的快速发展。大力发展营养价值高，生产成本低的蛋白饲料，是饲料工业 发展的趋势。我国农产品下脚料如秸杆、尾菜等原料资源相当丰富，利用这些原料生产畜禽 饲料，是近年来科技工作者关注的问题。但目前所报道的不够完善，难以形成工业化生产， 主要问题是：
[0003] 传统的厌氧发酵秸杆的处理方法是将玉米杆、麦草、豆秸、花生秧、红薯秧、马铃薯 秧、稻草经粉碎混和麸皮、豆柏、菜柏、花生柏、无机盐，加入多种酶制剂和厌氧微生物发酵 齐IJ，经厌氧发酵生产饲料。这种技术的缺点是：（1).在制备厌氧微生物发酵剂时，所需的菌 种种类多，添加的辅料多，特别是要添加价格昂贵的多种酶制剂，操作复杂，能耗和投资都 比较大。（2).厌氧发酵饲料生产周期长，一般需要7 - 30天，菌细胞生长繁殖缓慢，产品细 胞数少，蛋白含量低。（3).饲料生产占用的厂房面积大，生产周期长，能源耗费大，难以实现 工业化生产。
[0004] 尾菜是指在制备精菜时被切掉的废菜叶和废菜帮，约占精菜的1/3-1/2,这些废弃 物若不经合理处理，随意堆积，可造成腐烂变质，每到夏秋季蔬菜收获季节，这些大量的腐 烂尾菜都会有蚊蝇滋生，臭气不可闻，对环境产生严重污染。现在处理尾菜的方法是将尾菜 送到价格昂贵的菜饼制作机上，通过清洗打碎压滤工序，再将滤渣干燥制成菜饼或饲料，这 种处理方法既浪费了水资源，又流失尾菜的营养元素。因尾菜含水量为70-90%，其中许多 营养元素如维生素、糖分和矿物质都在菜叶中，通过压滤就将营养成分流失。所制备的菜饼 粉也只剩下纤维素和少量非水溶性矿物质，同时在清洗尾菜时又需大量的水。
【发明内容】
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[0005] 本发明的目的在于避免现有技术的不足之处而提供一种混菌好氧发酵秸杆尾菜 制备蛋白饲料方法。
[0006] 本发明的目的可以通过采用以下技术方案来实现：一种混菌好氧发酵秸杆尾菜 制备蛋白饲料方法，其主要特点是：将秸杆、尾菜、菜柏、糠麸，均匀搅拌，使其含水量达到 50- 60% ;加入相对于干料总量为2 - 6%的硫酸铵，相对于干料总量为1 一4%的尿素；用 1 %石灰水调pH至5. 5 - 6. 5 ;接入相对于干料总量为8 -12 %由白地霉菌、乳酸菌、黑曲霉 菌混合的菌液，混合菌液的重量比为白地霉菌50- 70%，乳酸菌20- 25%，黑曲霉菌5- 10% ;在温度为28-32°C，通风条件下发酵24-36小时，制成发酵蛋白饲料。制成的发酵产 品可按比例拌入畜禽混合饲料中直接饲喂，以保持其细胞活性。
[0007] 所述的混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法，所述的白地霉菌或乳酸菌或黑 曲霉菌的菌液培养方法包括有：
[0008] A.斜面菌种的制备：
[0009] a.白地霉菌斜面菌种的制备：葡萄糖1 %、酵母膏1 %、蛋白胨0.5%、琼脂粉2%、 加水加热溶解后，用1% NaOH调pH至5. 5 - 6.5,经115°C，20分钟蒸汽灭菌，然后分装于 15 X 2cm灭菌的试管，摆成斜面待凝固后备用；
[0010] b.乳酸菌斜面菌种的制备：
[0011] 番茄汁琼脂培养基的制备：酵母膏1%、蛋白胨1%、番茄汁20%、CaCO3L 5%、琼 脂粉2%、加热溶解后，用1% NaOH调pH至5. 5 - 6.5,经115°C，20分钟蒸汽灭菌，然后分 装于15 X 2cm灭菌的试管，摆成斜面待凝固后备用；
[0012] c.黑曲霉囷斜面囷种的制备：
[0013] 马铃薯-蔗糖琼脂培养基的制备：
[0014] 马铃薯20%，蔗糖2%，琼脂L 8%，加水溶解后，用1 % NaOH调pH至5. 5-6· 5,经 115°C，20分钟蒸汽灭菌，然后分装于15 X 2cm灭菌的试管，摆成斜面待凝固后备用；
[0015] d.分别取上述三种母种斜面菌，在无菌操作条件下，转种于上述制备的琼脂斜面 培养基上，经28-32 °C，24-48小时培养，即得斜面菌种，为一级菌种；
[0016] B.液体培养液的制备及液体菌种的培养：
[0017] e.液体培养液的制备：在1升新鲜豆腐浆水或啤酒糟水，或粉丝浆水或尾菜汁中， 加入麸皮1 一3g、玉米粉5- 7. 5g，（NH4) 2S041-2g，磷酸0. 5- 1毫升，用1 %石灰水调pH至 5. 5-6. 5,115°C 20分钟蒸汽灭菌；
[0018] f.将一级菌种接种于液体培养液，经28-32°C，24-48小时培养，其培养菌液为二 级菌种；
[0019] g.将二级菌种再扩大培养，上摇床振荡培养经28-32°C，振幅100- 150r/分钟， 18-24小时培养，其菌液为三级菌种；
[0020] h.将三级菌种再扩大培养，上发酵罐或发酵槽，经28_32°C通气搅拌发酵培养 18-24小时，其菌液为四级菌种。
[0021] 所述的混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法，所述的混合菌液的重量比为白 地霉菌50- 70%，乳酸菌20- 25%，黑曲霉菌5 -10%。
[0022] 所述的混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法，还包括有发酵后的蛋白饲料经 低温干燥或风干或晾干或晒干后包装储存。
[0023] 所述的混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法，所述的秸杆为玉米杆、玉米芯、 麦草杆、豆秸秧、花生秧、红薯秧、马铃薯秧、杂草。
[0024] 所述的混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法，所述的尾菜包括有白菜、小白 菜、莲花菜、菠菜、芹菜、花菜、白萝卜、红萝卜、花心菜、油菜、韭菜、葱、蒜苗、娃娃菜的任意 一种或任意组合的菜叶和菜帮。
[0025] 所述的混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法，所述的尾菜的含水量为70- 90% ;粉碎小于10mm。
[0026] 所述的混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法，所述的秸杆粉碎后，经0.5- 1. 5%的硫酸进行酸化和蒸煮处理。
[0027] 所述的混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法，其特征是所述的秸杆、尾菜、菜 柏、糖鼓的重量比为1 一3 ：2一6:1 -3 ：0. 2一1。
[0028] 本发明采用的白地霉菌是一种很粗生的营养价值类似产肮假丝酵母的微生物，能 在碳水化合物丰富的秸杆上迅速生长，细胞富含蛋白质、脂肪、维生素和核酸。可同化利用 硫酸铵、尿素等非蛋白氮；而配伍菌乳酸菌和黑曲霉菌，黑曲霉菌具有很强的淀粉糖化能 力，能将秸杆中的纤维素和淀粉物质转化为被白地霉菌和乳酸菌吸收利用的单糖或双糖， 这样就能将有机物中的非氮物质转化为蛋白质。乳酸菌是一类微需氧菌或厌氧菌，在秸杆 发酵开始初期就繁殖，到发酵结束后，因密封缺氧仍能繁殖，能分解秸杆原料中的糖等碳水 化合物形成乳酸，引起乳酸发酵。能产生一系列酶系，将秸杆中的纤维素、半纤维素和抗营 养因子进行生物分解。乳酸本身既是营养物质，又抑制秸杆中有害微生物生长的作用，而且 在結杆微生物发酵中，可提高結杆的适口性，营养性和耐储性。三菌在同一条件下、同一发 酵时间，完成各自的发酵功能，起到菌种间的互补作用，有效地利用秸杆尾菜原料，提高饲 料的营养价值。
[0029] 本发明是采用液固态发酵技术，它的可行性在于液态培养菌种，优点是：一是液体 培养液是利用食品、饮料行业产生的废液和尾菜汁液如豆腐浆水，粉丝浆水，啤（白）酒糟 液，尾菜汁液加无机盐，调整PH值，因为这些废液营养丰富，适于混菌种的快速生长繁殖。 二是新鲜浆水或废水或尾菜汁液可以不灭菌，添加无机盐调整PH值后，可直接接入白地霉 菌、乳酸菌，黑曲霉菌进行液体发酵培养。这样节省了设备和能源，三是液体培养菌种，菌细 胞繁殖快，菌液细胞浓度高，加入固体原料的菌量大可抵抗杂菌污染。
[0030] 本发明的有益效果是：本发明利用现代生物技术，优选最佳的组合菌，利用混菌 好氧菌液固态发酵技术，对秸杆原料不经氨化处理，将粉碎的尾菜直接拌入秸杆粉，接入菌 齐U，周期仅需18 - 24小时。发酵料可风干、晒干或直接拌入混合饲料，饲喂畜禽。本发明产 品活性细胞数多达100- 200亿/克，粗蛋白含量高达20- 26. 3%。
[0031] 本发明成本低,可做蛋白源配置奶牛、羊、猪、鸡、鸭、鱼饲料,用量可达饲料总量 的5-30%，可代替部分玉米、豆柏和鱼粉，经饲喂试验证明，奶牛每头每天可多增产牛奶 I. 73Kg，奶脂提高0. 14%，饲喂育肥猪每头每天可多增重100克，而瘦肉率高，味香；饲喂肉 鸭除每只每天多增重10克外，鸭表现活泼有神，羽毛滑润。
[0032] 本发明的饲料饲喂畜禽，一方面改善畜禽胃肠道环境和菌群结构，以调节胃肠发 酵，减少乳酸的产生，提高PH值的稳定性，促进乳酸菌，纤维素菌为主体的有益菌群繁殖及 活力提高，增加整个肠道酵母菌、乳酸菌、纤维素菌等有益菌的有效浓度，促进畜禽胃肠对 饲料的分解、合成，消化吸收利用，从而增加采食量，提高畜禽对饲料的利用率，促进生产性 能的发挥。
[0033] 本发明的发酵饲料作为活性的细胞前体进入畜禽胃肠道后，繁殖和生长活力增 强，能有效的抑制病原微生物的繁殖，参与病原微生物的生存竞争，排斥病原菌在胃肠粘膜 表面的附着。协助机体消除毒素及其代谢产物，防止毒素和废物的吸收，增强机体免疫和抗 病能力，对防止畜禽消化系统疾病起到保健作用，同时对幼年畜禽可刺激胃肠发育。
[0034] 本发明的发酵饲料含有未知生长因子促进剂，能增强畜禽的生长，特别是对增加 幼年畜禽的生长发育有明显效果。
[0035] 本发明适用饲料工业，畜牧业和禽类、鱼类养殖业；食品、饮料、淀粉发酵工业的废 水废渣处理。最适合大型养殖场自产自用，获利更多；也适用于有出口任务的猪场应用（肉 质滑嫩无腥味）。
【具体实施方式】：
[0036] 以下通过所示之最佳实施例作进一步详述：
[0037] 实施例1 :经0.5% H2SO4处理的玉米芯粉，白菜尾菜，菜柏，麸皮，其中玉米芯粉： 白菜尾菜：菜柏：麸皮的重量比为1 :3 :2 :0. 5,并加入相对于干料总量硫酸铵为4%，尿素 3%，充分混匀后，调固体发酵料含水分50%，用1 %的石灰水调pH值到5. 5,然后加入相对 于干料总量为12%的白地霉菌、乳酸菌、黑曲霉菌混合的菌液，白地霉菌、乳酸菌、黑曲霉 菌的重量比为白地霉菌65%，乳酸菌25 %，黑曲霉菌10 %。充分搅拌混合均匀后，堆放待 温度至32°C时，铺于地面上，厚度10cm，经室温32°C发酵培养24小时，其产品粗蛋白可达 21. 99%，氨基酸占粗蛋白81. 52%。
[0038] 实施例2 :经1% H2SO4处理的麦秸粉，莲花菜尾菜，菜柏，麸皮，其中麦秸粉：莲花 菜尾菜：菜柏：麸皮的重量比为1 :3 :3 :1，并加入相对于干料总量硫酸铵为2%，尿素1%， 调固体发酵料含水分55 %，充分混匀后，用1 %的石灰水调pH值到6. 5,然后加入相对于干 料总量为8%的白地霉菌、乳酸菌、黑曲霉菌混合的菌液，白地霉菌、乳酸菌、黑曲霉菌的重 量比为白地霉菌70%，乳酸菌25%，黑曲霉菌5%。充分搅拌混合均匀后，堆放待温度至 30°C时，铺于地面上，厚度10cm，经室温30°C发酵培养24小时，其产品粗蛋白可达20. 5%， 氣基酸占粗蛋白80. 25 %。
[0039] 实施例3 :经I. 5% H2SO4处理的玉米杆粉，并蒸煮处理，加入芹菜尾菜、菜柏、麸皮， 其中玉米杆粉：芹菜尾菜：菜柏：麸皮的重量比为2 :4 :3 :1，并加入相对于干料总量硫酸铵 为4%、尿素3 %，调固体发酵料含水分55 %，用1 %的石灰水调pH至5. 5，然后加入相对于 干料总量为9%的白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌混合的菌液，白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌 的重量比为白地霉菌65 %，乳酸菌20 %，黑曲霉菌15 %，充分搅拌混合均匀后，堆放待温度 上升至35°C时，铺于地面上，厚度10cm，经室温32°C发酵培养20小时，其产品粗蛋白可达 21. 58%，氨基酸占粗蛋白79. 82%。
[0040] 实施例4 :经I. 5% H2SO4处理的玉米杆粉，并蒸煮处理，加入菠菜尾菜、菜柏、麸 皮，其中玉米杆粉：菠菜尾菜：菜柏：麸皮的重量比为2 :4 :2 :1，并加入相对于干料总量硫 酸铵为4%、尿素2 %，调固体发酵料含水分50 %，用1 %的石灰水调pH至5. 5，然后加入相 对于干料总量为10%的白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌混合的菌液，白地霉菌、乳酸菌和黑曲 霉菌的重量比为白地霉菌65%，乳酸菌25%，黑曲霉菌10%，充分搅拌混合均匀后，堆放待 温度至28°C时，铺于地面上，厚度10cm，经室温28°C发酵培养24小时，其产品粗蛋白可达 20. 48 %，氨基酸占粗蛋白78. 25 %。
[0041] 实施例5 :经1% H2SO4处理的豆秸秧粉，并蒸煮处理，加入花菜尾菜、菜柏、麸皮， 其中豆秸秧粉：花菜尾菜：菜柏：麸皮的重量比为2 :4 :3 :0. 5,并加入相对于干物质为4% 的硫酸铵，尿素3 %，充分搅拌均匀后，调固体发酵料含水分55 %，用1 %的石灰水调pH至 6. 0,然后加入相对于干料总量为10%的白地霉囷、乳Ife囷和黑曲霉囷混合的囷液，白地霉 菌、乳酸菌和黑曲霉菌的重量比为白地霉菌65 %，乳酸菌25 %，黑曲霉菌10 %，充分搅拌混 合均匀后，送发酵架上，发酵培养，厚度8cm，经室温28°C发酵培养18小时，其产品粗蛋白可 达24. 52 %，氨基酸占粗蛋白80. 66 %。
[0042] 实施例6 :经I^H2SO4处理的豆秸秧粉，并蒸煮处理，加入小白菜尾菜、菜柏、麸皮， 其中豆秸秧粉：小白菜尾菜：菜柏：麸皮的重量比为2 :5 :3 :2,并加入相对于干物质为4% 的硫酸铵，尿素3 %，充分搅拌均匀后，调固体发酵料含水分50 %，用1 %的石灰水调pH至 6. 0,然后加入相对于干料总量为11 %的白地霉囷、乳Ife囷和黑曲霉囷混合的囷液，白地霉 菌、乳酸菌和黑曲霉菌的重量比为白地霉菌70 %，乳酸菌20 %，黑曲霉菌10 %，充分搅拌混 合均匀后，送发酵架上，发酵培养，厚度8cm，经室温32°C发酵培养24小时，其产品粗蛋白可 达24. 72 %，氨基酸占粗蛋白78. 66 %。
[0043] 实施例7 :经I^H2SO4处理的花生秧粉，并蒸煮处理，加入娃娃菜尾菜、菜柏、麸皮， 其中花生秧粉：娃娃菜尾菜：菜柏：米糠的重量比为2 :5 :2 :3,并加入相对于干物质为2% 的硫酸铵，尿素1 %，充分搅拌均匀后，调固体发酵料含水分50 %，用1 %的石灰水调pH至 6. 0,然后加入相对于干料总量为11 %的白地霉囷、乳Ife囷和黑曲霉囷混合的囷液，白地霉 菌、乳酸菌和黑曲霉菌的重量比为白地霉菌65 %，乳酸菌25 %，黑曲霉菌10 %，充分搅拌混 合均匀后，送发酵架上，发酵培养，厚度8cm，经室温32°C发酵培养24小时，其产品粗蛋白可 达21. 03%，氨基酸占粗蛋白86. 62%。
[0044] 实施例8 :经1%H2S04&理的花生秧粉，并蒸煮处理，加入白萝卜尾菜、菜柏、麸皮， 其中花生秧粉：白萝卜尾菜：菜柏：米糠的重量比为2 :5 :2 :2,并加入相对于干物质为3% 的硫酸铵，尿素2 %，充分搅拌均匀后，调固体发酵料含水分55 %，用1 %的石灰水调pH至 6. 5,然后加入相对于干料总量为10 %的白地霉囷、乳Ife囷和黑曲霉囷混合的囷液，白地霉 菌、乳酸菌和黑曲霉菌的重量比为白地霉菌70%，乳酸菌25%，黑曲霉菌5%，充分搅拌混 合均匀后，送发酵架上，发酵培养，厚度l〇cm，经室温30°C发酵培养18小时，其产品粗蛋白 可达21. 13%，氨基酸占粗蛋白85.86%。
[0045] 实施例9 :红薯秧粉、红萝卜尾菜、菜柏、米糠，其中红薯秧粉：红萝卜尾菜：菜柏： 米糠的重量比为1 :4 :2 :1，并加入相对于干物质为4%的硫酸铵，尿素3%，充分搅拌均匀 后，调固体发酵料含水分50%，用1 %的石灰水调pH至6. 0,然后加入相对于干料总量为 10%的白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌混合的菌液，白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌的重量比为 白地霉菌65 %，乳酸菌25 %，黑曲霉菌10 %，充分搅拌混合均匀后，充分搅拌混合均匀后， 堆放待温度上升至32°C时，铺于地面发酵，厚度10cm，经室温28°C发酵培养24小时，发酵结 束后，其广品粗蛋白可达21. 3%，氣基酸占粗蛋白81. 0%。
[0046] 实施例10 :取马铃薯秧粉、油菜尾菜，菜柏、麸皮，其中马铃薯秧粉：油菜尾菜：菜 柏：米糠的重量比为1 :2 :2 :0. 5,并加入相对于干物质为3%的硫酸铵，尿素2%，充分搅拌 均勻后，调固体发酵料含水分55%，用1 %的石灰水调pH至6. 0,然后加入相对于干料总量 为12%的白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌混合的菌液，白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌的重量 比为白地霉菌70 %，乳酸菌20 %，黑曲霉菌10 %，充分搅拌混合均匀后，充分搅拌混合均匀 后，堆放待温度上升至35°C时，铺于地面发酵，厚度10cm，经室温32°C发酵培养18小时，发 酵结束后，其广品粗蛋白可达21. 0%，氣基酸占粗蛋白81. 02%。
[0047] 实施例11 :培养白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌混合菌液100kg。
[0048] 白地霉菌、乳酸菌和黑曲霉菌分别按下述方法培养。
[0049] 白地霉菌菌液培养70公斤：
[0050] A.斜面菌种的制备：
[0051] a.葡萄糖lg、酵母膏lg、蛋白胨0· 5g、琼脂粉2g、加水IOOml后，经115? 20分钟 蒸汽灭菌，然后分装于15 X 2cm灭菌的试管，每管分装3ml，摆成斜面待凝固后备用。
[0052] b.取母种斜面菌，在无菌操作条件下，转种于上述制备的琼脂斜面培养基上，经 28 °C，24小时培养，即得菌种斜面菌，一级菌种。
[0053] B.液体种子培养液的制备及液体菌种的培养：
[0054] a.液体培养液的制备；在1升新鲜豆腐浆水或啤酒糟水，或粉丝浆水中或尾菜汁 中，加入麸皮lg，玉米粉5g，（NH4) 2SO4Ig,磷酸0. 5毫升，用1 %的石灰水调pH至6. 0,经 115 °C 20分钟蒸汽灭菌。
[0055] b.挑取两接种环一级菌种接种于IOOml液体培养液中，经32°C，24小时培养，其培 养菌液为二级菌种。
[0056] c.将二级菌种IOOml接种于IOOOml液体培养液中，上摇床振荡培养32 °C，振幅 IOOr/分钟，18小时，其培养菌液为三级菌种。
[0057] d.将三级菌种IOOOml接种于10000ml液体培养液中，上发酵罐或发酵槽，在32°C 通气搅拌情况下发酵培养24小时，其菌液为四级菌种。
[0058] e.将四级菌种7000ml接种于70000ml液体培养液中，上发酵罐或发酵槽，在32 °C 通气搅拌情况下发酵培养24小时，其白地霉菌液为70公斤。
[0059] 乳酸菌液培养20公斤：
[0060] A.斜面菌种的制备：
[0061] a.酵母膏1 %、蛋白胨1 %、番茄汁20%、CaCO3L 5%、琼脂粉2%、加热溶解后，用 1 % NaOH调pH至5. 5 - 6. 5,经115°C，20分钟蒸汽灭菌，然后分装于15 X 2cm灭菌的试管， 摆成斜面待凝固后备用；
[0062] b.取母种斜面菌，在无菌操作条件下，转种于上述制备的番茄汁琼脂斜面培养基 上，经32°C，24小时培养，即得菌种斜面菌，为一级菌种。
[0063] B.液体种子培养液的制备及液体菌种的培养：
[0064] a.液体培养液的制备：在1升新鲜豆腐浆水或啤酒糟水，或粉丝浆水或尾菜汁 中，加入麸皮lg，玉米粉5g，（NH4) 2SO4Ig,磷酸0. 5毫升，用1 %的石灰水调pH至6. 0,经 115 °C 20分钟蒸汽灭菌。
[0065] b.挑取两接种环一级菌种接种于IOOml液体培养液中，经32°C，24小时培养，其培 养液为二级菌种。
[0066] c.将二级菌种IOOml接种于IOOOml液体培养液中，上摇床振荡培养，经28°C，24 小时，其培养液为三级菌种。
[0067] d.将三级菌种IOOOml接种于10000ml液体培养液中，上发酵罐或发酵槽，在28°C 通气搅拌情况下发酵培养24小时，其菌液为四级菌种。
[0068] e.将四级菌种2000ml接种于20000ml液体培养液中，上发酵罐或发酵槽，在28 °C 通气搅拌情况下发酵培养24小时，其乳酸菌液为20公斤。
[0069] 黑曲霉囷囷液培养10公斤：
[0070] A.斜面菌种的制备：
[0071] a.葡萄糖lg、酵母膏lg、蛋白胨0. 5g、麦芽汁lml、琼脂粉2g、加水IOOml后，经 115°C 20分钟蒸汽灭菌，然后分装于15 X 2cm灭菌的试管，每管分装3ml，摆成斜面待凝固 后备用。
[0072] b.取母种斜面菌，在无菌操作条件下，转种于上述制备的琼脂斜面培养基上，经 32 °C，24小时培养，即得菌种斜面菌，一级菌种。
[0073] B.液体种子培养液的制备及液体菌种的培养：
[0074] a.液体培养液的制备；在0. 5升新鲜豆腐浆水或啤酒糟水，或粉丝浆水中，加入玉 米粉3. 5g，（NH4) 2S040. 5g，磷酸0· 25毫升，用1 %的石灰水调pH至6. 0,经115°C 20分钟蒸 汽灭菌。
[0075] b.挑取两接种环一级菌种接种于IOOml液体培养液中，经28°C，48小时培养，其培 养菌液为二级菌种。
[0076] c.将二级菌种IOOml接种于IOOOml液体培养液中，上摇床振荡培养28°C，振幅 IOOr/分钟，18小时，其培养菌液为三级菌种。
[0077] d.将三级菌种IOOOml接种于10000ml液体培养液中，上发酵罐或发酵槽，在28°C 通气搅拌情况下发酵培养24小时，即为10公斤黑曲霉菌菌液。
[0078] 用同样的方法培养白地霉菌液65公斤，乳酸菌菌液25公斤和黑曲霉菌10公斤， 然后将菌液混合，即为固体发酵原料的混合菌液。
[0079] 本发明营养成份分析及有关实验：
[0080] 1.分析样品：本发明发酵产品。
[0081] 2.分析方法；见表1。
[0082] 表1菌体蛋白饲料主要成分分析方法
【权利要求】
1. 一种混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法，其特征是：将秸杆、尾菜、菜柏、糠 麸，均匀搅拌，使其含水量达到50- 60% ;加入相对于干料总量为2 - 6%的硫酸铵，相对于 干料总量为1 一4%的尿素；用1 %石灰水调pH至5. 5 -6. 5 ;接入相对于干料总量为8- 12 %由白地霉菌、乳酸菌、黑曲霉菌混合的菌液，混合菌液的重量比为白地霉菌50- 70 %， 乳酸菌20- 25%，黑曲霉菌5 -10%;在温度为28-32°C，通风条件下发酵24-36小时，制成 发酵蛋白饲料。
2. 权利要求1所述的混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法，其特征是所述的白地 霉菌或乳酸菌或黑曲霉菌的菌液培养方法包括有： A. 斜面菌种的制备： a. 白地霉菌斜面菌种的制备：葡萄糖1 %、酵母膏1 %、蛋白胨0.5%、琼脂粉2%、加水 加热溶解后，用1 % NaOH调pH至5. 5-6. 5,经115°C，20分钟蒸汽灭菌，然后分装于15 X 2cm 灭菌的试管，摆成斜面待凝固后备用； b. 乳酸菌斜面菌种的制备： 番茄汁琼脂培养基的制备：酵母膏1 %、蛋白胨1 %、番茄汁20%、CaC03l. 5%、琼脂粉 2%、加热溶解后，用1% NaOH调pH至5. 5 - 6.5,经115°C，20分钟蒸汽灭菌，然后分装于 15 X 2cm灭菌的试管，摆成斜面待凝固后备用； c. 黑曲霉囷斜面囷种的制备： 马铃薯-蔗糖琼脂培养基的制备： 马铃薯20%，蔗糖2%，琼脂1.8%，加水溶解后，用1% NaOH调pH至5.5-6. 5,经 115°C，20分钟蒸汽灭菌，然后分装于15 X 2cm灭菌的试管，摆成斜面待凝固后备用； d. 分别取上述三种母种斜面菌，在无菌操作条件下，转种于上述制备的琼脂斜面培养 基上，经28-32 °C，24-48小时培养，即得斜面菌种，为一级菌种； B. 液体培养液的制备及液体菌种的培养： a. 液体培养液的制备：在1升新鲜豆腐浆水或啤酒糟水，或粉丝浆水或尾菜汁中，力口 入麸皮1 一3g、玉米粉5 -7. 5g，（NH4)2S041 -2g，磷酸0. 5- 1毫升，用1%石灰水调pH至 5. 5-6. 5,115°C 20分钟蒸汽灭菌； b. 将一级菌种接种于液体培养液，经28-32°C，24-48小时培养，其培养菌液为二级菌 种； c. 将二级菌种再扩大培养，上摇床振荡培养经28-32°C，振幅100- 150r/分钟，18-24 小时培养，其菌液为三级菌种； d. 将三级菌种再扩大培养，上发酵罐或发酵槽，经28-32°C通气搅拌发酵培养18-24小 时，其菌液为四级菌种。
3. 如权利要求1或2所述的混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法，其特征是所述 的混合菌液的重量比为白地霉菌50- 70%，乳酸菌20- 25%，黑曲霉菌5 -10%。
4. 如权利要求1或2所述的混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法，其特征是还包 括有发酵后的蛋白饲料经低温干燥或风干或晾干或晒干后包装储存。
5. 如权利要求1所述的混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法，其特征是所述的秸 杆为玉米杆、玉米芯、麦草杆、豆秸秧、花生秧、红薯秧、马铃薯秧、杂草。
6. 如权利要求1所述的混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法，其特征是所述的尾 菜包括有白菜、小白菜、莲花菜、菠菜、芹菜、花菜、白萝卜、红萝卜、花心菜、油菜、韭菜、葱、 蒜苗、娃娃菜的任意一种或任意组合的菜叶和菜帮。
7. 如权利要求1所述的混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法，其特征是所述的尾 菜的含水量为70- 90% ;粉碎小于10mm。
8. 如权利要求1所述的混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法，其特征是所述的秸 杆粉碎后，经〇. 5 - 1. 5%的硫酸进行酸化和蒸煮处理。
9. 如权利要求1至7所述的混菌好氧发酵秸杆尾菜制备蛋白饲料方法，其特征是所述 的稻軒、尾菜、菜柏、糖鼓的重量比为1 一3:2 -6:1 -3 :0. 2 -1。
【文档编号】C12R1/645GK104286400SQ201410529202
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年10月9日 优先权日:2014年10月9日
【发明者】孙荣高, 代积文, 代凤雷, 曾学平, 高小青 申请人:甘肃长业生态生物科技有限公司