一种粪便细菌的保存液的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种粪便保存液的配方，按照配方所述配置保存液，将采集的粪便直接置于保存液中，无需冻存，即可达到稳定其中微生物构成的作用。使用该配方保存粪便样本可以在常温下达到冻存粪便样本的效果，从而使采样者在任何时候都可以进行采样和样品的保存，也能够用于粪便样本的长途运输。
【专利说明】一种粪便细菌的保存液
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物【技术领域】，具体而言，涉及一种粪便细菌的保存液。
【背景技术】
[0002] 人肠道中生存着10万亿到100万亿个细菌，分属数百到上千个不同的种属，其数 量为人体细胞数量的10倍，基因数量是人体基因数量的150-200倍。这些共生在人体肠道 中的微生物是人体一大"未发现的"器官，更有学者认为人本身就是人体细胞和细菌共同组 合而成的共生生物体。它们与人体共生，以人体摄入的食物以及肠道分泌物为食，合成必须 氨基酸，维生素，短链脂肪酸等重要物质进入人体，促进宿主健康；相反，其中一些病原菌也 分泌有害物质进入体内，损害宿主的健康。由于肠道菌群的复杂和多样性,人类对其结构多 样性和功能重要性一直缺乏足够的认知。直至近几年，随着第二代测序等技术的进步，微生 物组的黑盒才得以打开，并借助无菌动物的验证，发现了肠道微生物与大量的疾病直接相 关，甚至在许多疾病中扮演了病因的角色。并且，其中大量的疾病，例如肥胖，糖尿病，动脉 粥样硬化，炎症性肠炎等都是高发病率重要公共卫生问题。
[0003] 由于肠道微生物寄居在人的肠道内，因此最便捷，也是目前采用的最主要的方式 是研究人体排出的粪便的微生物，以此代表大肠内的共生微生物。粪便采集之后，通过提取 细菌的总DNA，扩增核糖体16S rRNA可变区，测序，以及一系列生物信息学分析，可以了解 粪便中的细菌构成，进一步研究其和人体健康疾病之间的关系。
[0004] 由于粪便离体后，其环境也发生了变化，例如无氧环境转变成有氧环境，其中提供 微生物代谢的能量来源也进入只消耗而不补充的状态。与此同时，其中的部分细菌还保持 了活性，继续代谢和生长，而由于环境的变化，不同细菌其增长与死亡的速率已经不同于排 便前。因此，需要对粪便进行一些保存措施，尽量将其中微生物的构成稳定在刚刚离体时的 状态，从而最好的代表大肠中的共生微生物。目前采用的保存方法为采集粪便后立即冻存 在-20°C或者更低的温度中。由于细菌在低温状态下代谢速率极大的降低，因此可以在一段 时间内维持粪便中细菌的构成。
[0005] 就其效果而言，冻存在_20°C或者更低的温度中是可以在一段时间内（一周以上） 保持粪便内的细菌构成不发生显著的变化。然而其最大的缺陷则是冻存条件在某些时候无 法实现，例如采样者外出，采得的粪便需要携带一段时间才可以拿回实验室冻存，或者采样 者与实验室并不在同一地点，需要采样后通过快递等方式寄送到实验室后才可以冻存，而 在这个过程中，微生物的构成可能已经发生了改变。然而目前国内并没有任何技术来解决 这一问题。
【发明内容】
[0006] 本发明涉及一种粪便保存液的配方，按照配方所述配置保存液，将采集的粪便直 接置于保存液中，无需冻存，即可达到稳定其中微生物构成的作用。使用该配方保存粪便样 本可以在常温下达到冻存粪便样本的效果，从而使采样者在任何时候都可以进行采样和样 品的保存，也能够用于粪便样本的长途运输。
[0007] 本保存液配方（配方1)如下：
[0008] 表1.保存液配方
【权利要求】
1. 一种粪便细菌的保存液，其特征在于，所述保存液配方为： 异硫氰酸胍（GuanidineThiocyanate) 0.47% EDTA- '.fi-'j(EDTANa：) 1.86% 氯化钠(NaC.l) 0.9% 梓檬酸钠（sodiumcitra) 0.74% 95%乙醇 95% 余量为水 且所述的保存液的pH为7. 4。
2. 权利要求1所述的保存液的制备方法，其特征在于，按照以上配方称取各成分，无菌 去离子水溶解后，高压灭菌，室温保存即得。
3. 权利要求1所述的保存液在保存粪便细菌中的应用。
4. 根据权利要求3所述的音乐，其特征在于，保存粪便细菌的方法如下： (1) 采集至少〇. 2g新鲜粪便样品； (2) 立即使用本发明保存液室温下密封，避光浸泡保存样品，所述的粪便样本和保存液 用量的比例为1 :l(w/v)。
【文档编号】C12N1/04GK104480012SQ201410699015
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年11月27日 优先权日:2014年11月27日
【发明者】何彦, 周宏伟, 尹恝 申请人:南方医科大学