一种家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法
【专利摘要】本发明公开了一种家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法，其主要步骤包括：1、家蚕饲喂至3龄起蚕，单体放置；2、用涂抹微孢子虫病原液的桑叶圆片接种家蚕；3、进行分组分区；4、12天后进行磨蚕镜检；5、统计感染率，筛选抗性种质。该家蚕微粒子病抗性评价方法旨在解决现有方法存在的个体间病原摄取量差异较大、筛查结果数据存在误差的问题，为家蚕抗性育种提供一种稳定可靠的家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法。
【专利说明】一种家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法
【技术领域】
[0001]本发明属于蚕业养殖育种领域，具体涉及一种家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法。
【背景技术】
[0002]家蚕微粒子病是由家蚕微粒子原虫(Nosema bombycis)引起的一种传染性蚕病。家蚕微孢子虫不仅可以通过食下感染家蚕，还能够通过胚种从母代感染到子代，进而入侵家蚕各组织，最终导致家蚕死亡。由于迄今为止尚无有效的治疗方法，该病一旦发生则对蚕业生产尤其是蚕种生产造成巨大经济损失。培育抗病品种可能成为解决家蚕微粒子疫病的最为有效的途径。
[0003]随着分子生物学技术的进步，分子标记和转基因技术在抗病品种选育得到广泛应用，利用转基因技术、诱变或杂交创新育种材料是提高抗性品种选育的快速有效手段。
[0004]开展蚕微粒子病抗性品种选育，首先需要设计一种可靠稳定的筛查方法，确保调查数据的真实性、结果可重复。目前育种单位普遍采用将各个品种家蚕分开进行群体人工感染来检测其对于蚕微粒子病的抗性，然而该方法存在着一定的不足，主要在于群体中每个个体的病原吸收量与其桑叶的摄取量存在相关性，而个体间的桑叶摄取量存在差异，导致实验数据存在较大误差，同时群体饲养容易造成个体间蚕微粒子的交叉感染，对实验结果产生影响，而且该方法选用的试验用蚕并没有限定其蚕龄期，蚕龄期大的培育时间长，导致筛查周期较长，不利于快速育种筛查。
【发明内容】
[0005]为了解决上述问题，本发明公开了一种家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法，以解决现有的家蚕微粒子抗性筛查方法存在的个体间病原摄取量差异较大、育种结果数据存在误差的问题，提供了一种严格控制单体病原摄入量的家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法，该方法能够明显减小同一品种家蚕单体间的相互影响，使得筛查结果更加准确可靠，缩短抗蚕微粒子病蚕种育种筛查所用周期。
[0006]一种家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法，其主要步骤包括:
步骤一:以家蚕品种“大造”作为对照，选取几种试验用蚕，饲养至3龄起蚕，选取大小均一的起蚕放入28孔昆虫饲育盒中，每头蚕单孔放置；
步骤二:用切桑工具准备直径为1.0 cm的桑叶圆片，使用移液枪吸取3-7 μ I家蚕微孢子虫病原液涂抹于桑叶表面，所述家蚕微孢子虫病原液的浓度为15-1O7个/mL,晾干后放入饲育盒，每头一片；
步骤三:4h之后，选择吃完桑叶的蚕作为进一步试验用蚕，每个品系分3组，每组分3个重复区，每区50头，继续进行单体饲养；
步骤四:12天后，进行磨蚕镜检，调查每个品系的感染头数；
步骤五:记录各组感染率,通过家蚕的感染率了解各种质对于家蚕微粒子病的抗性，以此筛选出抗性优良的种质。
[0007]作为一种优选方式，步骤一中，选用3龄眠起后8_12h的起蚕。
[0008]作为一种优选方式，步骤二中，选择桑叶切片时尽量远离主叶脉，叶面无缺口和孔洞。
[0009]作为一种优选方式，步骤二中，将蚕微粒子病原液涂抹于桑叶上时，应将3-7 μ I蚕微粒子病原液用移液枪滴于桑叶的背面，并用玻璃棒涂抹开来。
[0010]作为一种优选方式，步骤四中，试验用蚕若在12天内(进行磨蚕镜检前)发生死亡，通过镜检确定其致病菌。
[0011]本家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法通过将每个品种的家蚕进行单体饲养，其具体操作方法为严格控制每头试验用蚕的蚕微粒子感染桑叶的食用量，保证各个蚕龄期试验用蚕的初始蚕微粒子病原的摄入量一致，避免出现个体间因食桑量差距所产生的育种结果的误差，同时将每头试验用蚕进行单体饲养，防止试验用蚕之间长时间接触发生交叉感染的概率，保证实验结果的可靠性，以更加有效的方式在不同品种的家蚕中挑选出对蚕微粒子病抗性较高的蚕种，提高育种的可重复性和可信度。
[0012]本筛查方法根据3龄蚕的食量对其蚕微粒子感染桑叶的食用量也进行了相应的调整，以蚕能够在4h内吃完为准。选用3龄蚕作为本方法的实验用蚕，主要是因为该蚕龄期的家蚕已经具备一定体型，易于操作，且培养时间较短，可以缩短筛查周期。2龄蚕体型较小，会加大操作难度，进行病原感染桑叶的摄入时可不好控制桑叶量，而选用4、5龄蚕的话则会延长实验用蚕的饲养时间，从而延长了家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查所需的周期，所以3龄蚕为本筛查方法的最佳操作蚕龄期。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0014]图1为实施例1的感染率及其数据标准差结果图；
图2为实施例2的感染率及其数据标准差结果图。
【具体实施方式】
[0015]本发明公开了一种家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法，该方法能够明显减小同一品种家蚕单体间的相互影响，使得育种结果更加准确可靠，缩短抗蚕微粒子病蚕种育种抗性筛查所用周期。
[0016]下面将对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0017]实施例1:
本实施例的具体步骤为:
步骤一:选取高白、防1、研7几种试验用蚕,饲养至3龄起蚕,选取大小均一的起蚕放Λ 28孔昆虫饲育盒中，每头蚕单孔放置；
步骤二:用切桑工具准备直径为1.0 cm的桑叶圆片，使用移液枪吸取3-7 μ I家蚕微孢子虫病原液涂抹于桑叶表面，所述家蚕微孢子虫病原液的浓度为16个/mL,晾干后放入饲育盒，每头一片；
步骤三:4h之后，选择吃完桑叶的蚕作为进一步试验用蚕，每个品系分3组，每组分3个重复区，每区50头，继续进行单体饲养；
步骤四:12天后，进行磨蚕镜检，调查每个品系的感染头数；
步骤五:记录各组感染率,通过家蚕的感染率了解各种质对于家蚕微粒子病的抗性，以此筛选出抗性优良的种质。
[0018]实施例2:
本实施例的具体步骤为:
步骤一:选取高白、防1、研7几种试验用蚕，饲养至3龄起蚕，选取大小均一的起蚕根据不同品系放入不同昆虫饲育盒中，进行群体饲养；
步骤二:用切桑工具准备直径为1.0 cm的桑叶圆片，使用移液枪吸取3-7 μ I家蚕微孢子虫病原液涂抹于桑叶表面，所述家蚕微孢子虫病原液的浓度为16个/mL，晾干后以每头一片的量放入饲育盒；
步骤三:4h之后，将每个品系分3组，每组分3个重复区，每区50头，每50头进行群体饲养;
步骤四:12天后，进行磨蚕镜检，调查每个品系的感染头数；
步骤五:记录各组感染率,通过家蚕的感染率了解各种质对于家蚕微粒子病的抗性，以此筛选出抗性优良的种质。
[0019]实施例1的实验结果如图1所示，实施例2的实验结果如图2所示。
[0020]通过将图1与图2进行对比可以看出，进行群体饲养的筛查方式(实施例2)在感染率上普遍低于单体饲养(实施例1)，而且群体饲养的感染率在标准差方面也明显要大于单体饲养的感染率，证明进行群体饲养会影响到某些个体蚕微粒子病原的摄入量，导致病原摄入量不均匀，各区数据浮动区间较大，数据的准确性不高，而采用本发明公开的抗蚕微粒子病蚕种的选育方法可以降低各区间感染率的标准差，更好的区分不同种类家蚕对于蚕微粒子病的抗性，为筛选出高蚕微粒子抗性的家蚕品种提供了更加准确可靠地实验结果。
[0021]以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属【技术领域】的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
【权利要求】
1.一种家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法，其特征在于，其主要步骤包括: 步骤一:以家蚕品种“大造”作为对照，选取几种试验用蚕，饲养至3龄起蚕，选取大小均一的起蚕放入28孔昆虫饲育盒中，每头蚕单孔放置； 步骤二:用切桑工具准备直径为1.0挪的桑叶圆片，使用移液枪吸取3-7^ 1家蚕微孢子虫病原液涂抹于桑叶表面，所述家蚕微孢子虫病原液的浓度为105-107个/1111，晾干后放入饲育盒，每头一片； 步骤三:处之后，选择吃完桑叶的蚕作为进一步试验用蚕，每个品系分3组，每组分3个重复区，每区50头，继续进行单体饲养； 步骤四:12天后，进行磨蚕镜检，调查每个品系的感染头数； 步骤五:记录各组感染率，通过家蚕的感染率了解各种质对于家蚕微粒子病的抗性，以此筛选出抗性优良的种质。
2.根据权利要求1所述的一种家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法，其特征在于，步骤一中，选用3龄眠起后8-1211的起蚕。
3.根据权利要求1所述的一种家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法，其特征在于，步骤二中，选择桑叶切片时尽量远离主叶脉，叶面无缺口和孔洞。
4.根据权利要求1所述的一种家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法，其特征在于，步骤二中，将家蚕微孢子虫病原液涂抹于桑叶上时，应将3-7 9 1病原液用移液枪滴于桑叶的背面，并用玻璃棒涂抹开来。
5.根据权利要求1所述的一种家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法，其特征在于，步骤四中，若试验用蚕在12天内(进行磨蚕镜检前)发生死亡，通过镜检确定其致病菌。
【文档编号】C12R1/90GK104404125SQ201410795167
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年12月17日 优先权日:2014年12月17日
【发明者】杨琼, 邢东旭, 李丽, 罗国庆, 肖阳, 李庆荣, 叶明强 申请人:广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所