用于制备具有稳定低聚半乳糖含量的乳制品的方法与流程

文档序号:13109498阅读:402来源:国知局
发明领域本发明涉及用于制备具有稳定低聚半乳糖(GOS)含量的乳制品的方法,并且涉及通过本方法制备富低聚半乳糖的乳制品。发明背景低聚半乳糖(或半乳糖寡糖)(GOS)是在人体和动物体内不可消化的碳水化合物,其包含由糖苷键连接的两个或更多个半乳糖分子,通常情况下至多九个。GOS也可包含一个或多个葡萄糖分子。GOS的有益效果之一是它们充当益生元化合物的能力,其通过选择性地促进有益结肠微生物的增殖而向消费者提供生理益处。已确认的健康效应已使得GOS作为多种类型的食物的食品成分而愈受关注。β-半乳糖苷酶(EC3.2.1.23)通常情况下将乳糖水解成为单糖D-葡萄糖和D-半乳糖。在β-半乳糖苷酶的酶反应中,该酶水解乳糖并且瞬时地结合半乳糖单糖成为半乳糖-酶复合物。随即使用水来水解共价的半乳糖-酶中间体,从而导致D-半乳糖和D-葡萄糖的释放。然而,在高乳糖浓度情况下一些β-半乳糖苷酶能够在名为转半乳糖基化作用的过程中将半乳糖转移到D-半乳糖或者D-葡萄糖的羟基基团上,由此产生了低聚半乳糖。在高乳糖浓度情况下多数β-半乳糖苷酶能够将半乳糖转移到乳糖或者更高阶的低聚糖的羟基基团上。双歧杆菌属(Bífídobacterium)通常用于乳品工业。包含双歧杆菌的制品的摄取还具有促进健康的效应。此效应不仅通过肠道内容物的较低的pH实现,而且还在其肠道菌群受到例如抗生素的摄取而干扰的个体中通过双歧杆菌重新形成肠道菌群的能力实现了此效应。此外,双歧杆菌具有竞争潜在有害的肠道微生物的潜能。已知低聚半乳糖提高了双歧杆菌的生长。有可能通过双歧杆菌利用低聚半乳糖作为碳源的独特能力而产生了这一效应。低聚半乳糖膳食补充剂据认为还具有若干长期疾病防护效应。例如,低聚半乳糖的摄入已经显示在小鼠中针对直肠癌的发展是高度保护性的。对于开发低廉且有效的方法来制备低聚半乳糖以用于在工业中来改善膳食补充剂以及乳制品而言存在极大关注。来自两岐双岐杆菌(Bifidobacteriumbifidum)DSM20215的截短约580氨基酸(BIF3-d3)的细胞外乳糖酶已经作为处于包含溶解于水的乳糖的溶液中的转半乳糖基化酶而受到了描述(等人(2001),Appl.Microbiol.Biotechnol.,57:647-652)。WO01/90317还描述了作为转半乳糖基化酶的截短变体(OLGA347),并且在WO2012/010597中示出OLGA347将半乳糖部分转移到D-果糖、N-乙酰基-半乳糖胺和木糖上。US2012/0040051描述了一种方法,其用于制备具有高低聚半乳糖(GOS)含量和低乳糖含量的可易于吸收的乳制品,以及用该方法制备增强的低聚半乳糖乳制品,其使用例如来自任意来源的乳糖酶,包括来自曲霉属(Aspergillus),酵母属(Saccharomyces)以及克鲁维酵母菌属(Kluyveromyces)的乳糖酶。使用来自环状芽孢杆菌(Bacciluscirculans)的β-半乳糖苷酶通过乳糖溶液或脱脂乳进行的低聚半乳糖合成描述于TheJournalofAgriculturalandFoodChemistry2012,60,6391-6398。WO2008/037839公开了用于制备包含低聚半乳糖的制品的方法,其通过在添加果糖或者任选地乳糖后用β-半乳糖苷酶来处理乳基原料并且终止该反应混合物的酶促反应来进行。EP0458358公开了包含低聚半乳糖的脱脂乳粉末以及用于制备该物质的方法。其中所描述的过程包括将β-半乳糖苷酶添加到浓缩的乳品中而产生酶促反应以及加热所述反应混合物至75-80℃来终止酶促反应,随后对反应混合物进行喷雾干燥。US2006/0223140公开了转糖基方法以及具有转糖基活性的糖苷酶。CN101396048涉及用于富低聚半乳糖的乳品的制备方法,其包括如下步骤:加热乳品、分离脂肪以得到脱脂乳、巴氏灭菌、冷却、通过固定化β-半乳糖苷酶进行水解、UHT杀菌、冷却以及封装。在本发明中,低浓度乳糖到GOS的有效原位转化是通过使用β-半乳糖苷酶进行乳基基质的处理而提供的,诸如来自由具有SEQIDno1的887个氨基酸组成两岐双岐杆菌DSM20215的截短乳糖酶。此外,在乳基乳制品应用中已发现在常规储存条件下原位制备的低聚半乳糖(GOS)的含量随时间推移并不稳定,并且高度依赖于乳基产品中极低量的残余β-半乳糖苷酶活性。这一问题也存在于发酵型乳制品中,诸如,具有较低pH的酸奶,其中残余β-半乳糖苷酶活性甚至降低更多。β-半乳糖苷酶在乳基质中高度稳定并且在巴氏灭菌法中完全灭活β-半乳糖苷酶需要与缓冲溶液相比的令人吃惊的高组合的处理时间和温度。因此,本发明描述了一种方法,其使得实现了将转半乳糖基化β-半乳糖苷酶用于不同乳制品中原位生成稳定的GOS,而对重要的乳制品质量特征并无由残余β-半乳糖苷酶活性导致的负面影响,诸如质地和口感。发明概述本发明人已发现,β-半乳糖苷酶多肽,诸如本文公开的源自双歧杆菌属的β-半乳糖苷酶多肽,是低聚半乳糖的有效生产者,例如,当在包含低浓度乳糖的组合物(诸如乳制品)中温育时原位进行,其中它们具有乳糖到GOS的高效转化从而产生更低量的游离乳糖。然而也发现产生的GOS的含量并不随着时间而稳定,甚至在通常施用于,例如酸奶生产的高温巴氏灭菌步骤(95℃,5分钟)后不稳定。乳制品中低聚半乳糖的存在具有提高有益微生物菌株(益生菌)生长的优点,诸如在产品本身中和/或消费产品的人或动物中的促健康性双歧杆菌属物种(Bifdobacteriumsp.)。已发现GOS稳定性与源自双歧杆菌属的β-半乳糖苷酶多肽活性相关,并且令人吃惊地是已发现甚至是少量残余β-半乳糖苷酶多肽活性(低至当前条件下所使用的初始活性的1.1%)亦足够降解所形成的GOS。这一过程甚至发生在低储存温度和低pH下,例如在酸奶中,其中源自双歧杆菌属的β-半乳糖苷酶多肽根据在缓冲液中的测量其在“标准”酸奶巴氏灭菌步骤(95℃,6分钟)后并无活性。本发明涉及特定的处理条件,其实现了低聚半乳糖从低乳糖浓度的溶液(例如乳或者用于酸奶生产的乳基)中高效原位生成。本发明的第二个方面涉及完全灭活β-半乳糖苷酶多肽(诸如源自双歧杆菌属的活性β-半乳糖苷酶)所需的特定灭活条件(巴氏灭菌时间与温度的关系),并且对于给定乳制品确保随时间稳定的GOS。本发明的一个方面涉及处理包含低聚半乳糖的乳基基质以获得具有稳定低聚半乳糖含量的乳制品的方法,其中所述乳基基质包含具有转半乳糖基化活性的活性β-半乳糖苷酶,诸如源自双歧杆菌属的活性β-半乳糖苷酶,该方法包括加热处理所述乳基基质以获得基本上不具有残余的β-半乳糖苷酶多肽活性的步骤,诸如低于0.0213LAU/ml、诸如低于0.0192LAU/ml、诸如低于0.017LAU/ml、诸如低于0.0149LAU/ml、诸如低于0.0149LAU/ml、诸如低于0.0107LAU/ml、诸如低于0.0085LAU/ml、诸如低于0.0064LAU/ml、诸如低于0.0043LAU/ml,或者更优选地诸如低于0.00213LAU/ml(例如,如方法2中描述所测定)。重要的是具有便利的工业加工并且同时具有可接受的产品质量。已发现在130℃以上的温度热处理所述乳基基质,可产生产品的异味、变性、褐变,而在90℃以下的温度热处理导致对工业过程而言可能不相容的滞留时间。因此在本发明的另一个方面涉及处理包含低聚半乳糖的乳基基质的方法,其中所述乳基基质包含β-半乳糖苷酶,诸如源自双歧杆菌属的β-半乳糖苷酶,其具有转半乳糖基化活性,该方法包括在90℃至130℃范围内的温度(T)热处理所述乳基基质至少x秒的时间段的步骤,以获得经热处理的乳制品,其中x通过x=153,377,215,802.625e-0.20378144T与温度T相关联;其中在至少14天的时间段内低聚半乳糖的含量变化在0.4%(w/v)以内。在另一个方面,本发明涉及通过根据本发明的方法而获得的经热处理的乳制品。在另一个方面,本发明涉及根据本发明的方法而处理的乳基基质。发明描述附图简述图1示出了乳基中(在实施例1中定义)BIF_917的残余LAU(描述于方法2)活性,其为以秒为单位的巴氏灭菌时间的函数,在:A)60℃,B)72℃和C)95℃。图2示出了磷酸钠缓冲液中(在实施例1中定义)BIF_917的残余LAU(描述于方法2)活性,其为以秒为单位的巴氏灭菌时间的函数,在:A)60℃,B)72℃和C)95℃。图3示出了无乳糖乳中(在实施例1中定义)BIF_917的残余LAU(描述于方法2)活性,其为以秒为单位的巴氏灭菌时间的函数,在:A)60℃,B)72℃和C)95℃。图4示出了用于在枯草芽孢杆菌中重组表达的BIF_1326变体的质粒图谱。图5示出了SDS-PAGE,其示出了使用HyperQ柱以NaCl梯度洗脱而纯化的截短变体。图6示出了转半乳糖基化活性的比率。比率是受体存在下的Abs420除以受体不存在下的Abs420乘以100来计算的。等于或者低于系数100的变体为纯水解变体,而在该水平以上反映了相对转半乳糖基化活性。图7示出了30℃下在酸奶基质中3小时所选变体的低聚半乳糖(GOS)生成效率。在这一实施例中,GOS是等于和高于DP3的积累量低聚糖。图8示出了SDS-PAGE凝胶,其示出了所表达的来自表2的不同变体和检测到的降解片段。下栏示出了降解带的放大和标识。图9示出了BIF_917在95℃和121℃下灭活所需时间的半对数曲线图。趋势线方程描述了温度与灭活时间之间的关系。序列表SEQIDNO:1(在本文也称为(BIF_917))是SEQIDNO:22的887个氨基酸的截短片段。SEQIDNO:2(在本文也称为(BIF_995))是SEQIDNO:22的965个氨基酸的截短片段。SEQIDNO:3(在本文也称为(BIF_1068))是SEQIDNO:22的1038个氨基酸的截短片段。SEQIDNO:4(在本文也称为(BIF_1172))是SEQIDNO:22的1142个氨基酸的截短片段。SEQIDNO:5(在本文也称为(BIF_1241))是SEQIDNO:22的1211个氨基酸的截短片段。SEQIDNO:6(在本文也称为(BIF_1326))是SEQIDNO:22的1296个氨基酸的截短片段。SEQIDNO:7是两岐双岐杆菌糖苷水解酶催化核心SEQIDNO:8是核苷酸序列,其编码来自两岐双岐杆菌DSM20215的胞外乳糖酶SEQIDNO:9是编码BIF_917的核苷酸序列SEQIDNO:10是编码BIF_995的核苷酸序列SEQIDNO:11是编码BIF_1068的核苷酸序列SEQIDNO:12是编码BIF_1172的核苷酸序列SEQIDNO:13是编码BIF_1241的核苷酸序列SEQIDNO:14是编码BIF_1326的核苷酸序列SEQIDNO:15是用于生成以上BIF变体的正向引物SEQIDNO:16是用于BIF_917的反向引物SEQIDNO:17是用于BIF_995的反向引物SEQIDNO:18是用于BIF_1068的反向引物SEQIDNO:19是用于BIF_1241的反向引物SEQIDNO:20是用于BIF_1326的反向引物SEQIDNO:21是用于BIF_1478的反向引物SEQIDNO:22是来自两岐双岐杆菌DSM20215的胞外乳糖酶。SEQIDNO:23是来自两岐双岐杆菌DSM20215的胞外乳糖酶的信号序列。详细描述定义根据详细描述,应用以下缩写和定义。应当指出,本文所用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指代,除非上下文另行明确指出。因此,例如,提到“多肽”包括多种此类多肽,并且提到“配方”包括提及一种或多种配方和本领域技术人员已知的它们的等同物,以此类推。除非另有定义,否则本文所用的全部科技术语都具有本领域普通技术人员通常理解的含义。以下术语在下文提供。在本文的上下文中,“原位”应意指活性酶与乳基基质的组合。“转半乳糖基酶”意指除其它活性外还能够将半乳糖转移到D-半乳糖或者D-葡萄糖的羟基基团上从而产生低聚半乳糖的酶。在一个方面,转半乳糖基酶通过在乳糖中进行酶反应来鉴定,其中在任意给定时间产生的半乳糖的量低于产生的葡萄糖的量。在本文的上下文中,术语“转半乳糖基化活性”意指将半乳糖部分转移到除水以外的分子上。可以根据反应中的任意给定时间产生的[葡萄糖]–[半乳糖]或者通过反应中的任意给定时间产生的GOS的直接定量来测量活性。可以以多种方法实施这一测量,诸如实施例中所示出的HPLC方法。当对转半乳糖基化活性的测量进行比较时,其在给定的初始乳糖浓度下实施,诸如例如,3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%(w/w)。在本文的上下文中,术语“β-半乳糖苷酶活性”意指酶水解β-半乳糖苷的能力,诸如例如,乳糖水解为葡萄糖和半乳糖单糖。在计算转半乳糖基化活性:β-半乳糖苷酶活性的情况下,β-半乳糖苷酶活性以反应中的任意给定时间产生的[半乳糖]来测量。可以以多种方法实施这一测量,诸如实施例中所示出的HPLC方法。在本文的上下文中,术语“具有转半乳糖基化活性的β-半乳糖苷酶”意指转半乳糖基化活性比率在100%以上,诸如在150%、175%或200%以上的β-半乳糖苷酶。具有转半乳糖基化活性的β-半乳糖苷酶的示例可源自但不限于米曲霉菌(Aspergillusorryzae)、环状芽孢杆菌(Bacilluscirculans)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)、双歧杆菌属、嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophilusa)和植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)(C.Oliveira等人/BiotechnologyAdvances29(2011)600–609)。在本文中,使用邻-硝基苯氧基-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG)的术语“转半乳糖基化活性的比率”如下计算:比率是受体存在下的Abs420除以受体不存在下的Abs420乘以100来计算的。等于或者低于系数100的变体为纯水解变体,而在该水平以上反映了相对转半乳糖基化活性。转半乳糖基化活性的比率=(Abs420+纤维二糖/Abs420-纤维二糖)*100%,其中Abs420+纤维二糖是使用下文方法3所描述的在反应中包括纤维二糖的情况下在420nm下的吸光度读数,并且Abs420-纤维二糖是使用下文方法3所描述的但是在反应中无纤维二糖的情况下在420nm的吸光度读数。上述方程仅对吸光度介于0.5和1.0之间的稀释液有效。在本文的上下文中,术语“转半乳糖基化活性:β-半乳糖苷酶活性的比率”意指([葡萄糖]-[半乳糖]/[半乳糖])。在本文的上下文中,术语[葡萄糖]意指由HPLC测量的以重量%为单位的葡萄糖浓度。在本文的上下文中,术语[半乳糖]意指由HPLC测量的以重量%为单位的半乳糖浓度。在本文的上下文中,术语“已转半乳糖基化的乳糖”意指半乳糖分子已共价连接到乳糖分子上,诸如例如,共价连接到该乳糖分子中任意的自由羟基基团上或者通过内部转半乳糖基化作用而生成,例如形成异乳糖。在本文的上下文中,本文公开的多肽在低聚半乳糖(GOS)生产中性能的评估在乳基测定法中检测。通过HPLC实施低聚半乳糖(GOS)、乳糖、葡萄糖以及半乳糖的定量。在DionexICS3000上进行样品分析。IC参数如下:流动相:ddH20,流:等度,0,3ml/分钟,柱:RSO低聚糖柱,Ag+4%交联(Phenomenex,TheNetherlands),柱温:70℃,进样体积:10μL,检测器:RI,积分:手动,样品制备:Milli-Q水中20倍稀释(0.1ml样品+1.9ml水),并且通过0.2μm注射器式过滤器进行过滤,定量:占标准品峰面积百分比的峰面积。使用GOS糖浆(VivinalGOS,FrieslandFoodDomo,TheNetherlands)作为GOS定量的标准品。此评估结果在表3中示出,并且进一步描述于实施例1中。在本文的上下文中,术语“其多肽是冷冻干燥的”意指通过在适当的压力下并且以适当的除水时间段来对多肽的液体进行冷冻干燥而获得该多肽。在本文的上下文中,术语“其多肽是在溶液中”是指在溶剂中可溶而不析出溶液的多肽。用于此目的的溶剂包括多肽可存在于其中的任意环境,诸如含水缓冲液或者盐溶液、发酵液或者表达宿主的细胞质。在本文的上下文中,术语“稳定剂”意指用于稳定多肽的任何稳定剂,例如多元醇(诸如例如,甘油或者丙二醇)、糖或者糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物(例如,芳香硼酸酯)。在一个方面,稳定剂为甘油。在本文的上下文中,术语“碳水化合物物质”意指具有通式Cm(H2O)n的有机化合物,即,仅由碳、氢和氧组成,后两者成2:1的原子比例,诸如二糖。在本文的上下文中,术语“二糖”是通过共价键结合在一起的两个单糖单元,所述共价键已知通过脱水反应形成糖苷键,其导致从一个单糖失去氢原子并从另一单糖失去羟基基团。未修饰的二糖的式为C12H22O11。在一个方面,二糖是乳果糖、海藻糖、鼠李糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、岩藻糖或纤维二糖。在另一个方面,二糖是乳糖。术语“分离的”意指多肽至少基本上不含至少一种其它组分,其与该序列在自然界中天然关联或者在自然界中存在。在一个方面,如本文所用的“分离的多肽”是指这样的多肽,其如SDS-PAGE所测定为至少30%纯度,至少40%纯度,至少60%纯度,至少80%纯度,至少90%纯度,以及至少95%纯度。术语“基本上纯的多肽”在本文意指多肽制备物,其包含最多10重量%,优选地最多8重量%,更优选地最多6重量%,更优选地最多5重量%,更优选地最多4重量%、最多3重量%,甚至更优选地最多2重量%,最优选地最多1重量%并且甚至最优选地最多0.5重量%的在天然情况下与之关联的其它多肽物质。因此,优选的是,基本上纯的多肽为占制备物中存在的全部多肽物质的至少92重量%纯度,优选地至少94重量%纯度,更优选地至少95重量%纯度,更优选地至少96重量%纯度,更优选地至少96重量%纯度,更优选地至少97重量%纯度,更优选地至少98重量%纯度,甚至更优选地至少99重量%纯度,最优选地至少99.5重量%纯度,并且甚至最优选地100重量%纯度。本文公开的多肽优选地处于基本上纯的形式。尤其是,优选的是多肽处于“基本上纯的形式”,既,该多肽制备物基本上不含在天然情况下与之关联的其它多肽物质。这可通过,例如,使用众所周知的重组方法或者通过经典纯化方法来制备该多肽而实现。此处,术语“基本上纯的多肽”与术语“分离的多肽”和“分离形式的多肽”是同义的。术语“纯化的”或者“纯”意指给定组分以高水平状态存在-例如,至少约51%纯度诸如至少51%纯度,或者至少约75%纯度诸如至少75%纯度,或者至少约80%纯度诸如至少80%纯度,或者至少约90%纯度诸如至少90%纯度,或者至少约95%纯度诸如至少95%的纯度,或者至少约98%纯度诸如至少98%的纯度。该组分理想地是组合物中存在的主要活性组分。与本发明相关的术语“微生物”,包括任意可能包含根据本发明的核苷酸序列或者编码具有本文所定义的特定性质的多肽的核苷酸序列和/或通过其获得的产物的“微生物”。在本文的上下中,“微生物”可包括能够发酵乳品基质的任意细菌或者真菌。与本发明相关的术语“宿主细胞”包括任意细胞,其包含编码具有本文所定义的特定性质的多肽的核苷酸序列或表达载体,其如上述所描述并且用于生产具有本文所定义的特定性质的多肽。在一个方面,所述生产为重组生产。术语“乳品”,在本发明的上下文中,应理解为从任意哺乳动物,诸如奶牛、绵羊、山羊、野牛(buffalo)或骆驼而获得的乳分泌物。在本文的上下中,术语“乳基基质”意指任意生制和/或经加工的乳品物质或者源自乳品组分的物质。乳基基质可根据本领域已知的方法进行均质化和/或巴氏灭菌。如本文所用的“均质化”意指强度混合以获得可溶的悬浮液或乳液。其可经实施以用于将乳脂破碎成更小的尺寸,以便其不再从乳品中分离。这可通过迫使乳品在高压下通过小的孔来完成。本文所用的“巴氏灭菌”意指减少或消除乳基基质中活的生物体的存在,诸如微生物。优选地,通过保持指定时间段的指定温度和压力来达到巴氏灭菌。指定温度通常通过加热达到。可选择温度和持续时间以在乳品中杀灭或灭活某些细菌,诸如有害细菌,和/或灭活酶。随后可有急冷的步骤。本发明上下文中的“乳制品”可为任意食品产品,其中主要组分之一为乳基基质。优选地,该主要组分为乳基的。在本文的上下文中,“主要组分之一”意为具有组成占乳制品总干重超过20%的干物质的组分,优选地超过30%或者超过40%,而所述“主要组分”意为具有占乳制品总干重超过50%的干物质的组分,优选地超过60%或者超过70%。在本文的上下文中的“发酵型乳制品”应理解为任意乳制品,其中任意类型的发酵形成了生产过程的部分。发酵型乳制品的示例为如酸奶、酪乳、法式鲜奶油、奶渣和清爽干酪的产品。发酵型乳制品的另一示例为奶酪。在一个方面,酸奶是凝固型、搅拌型或者饮用型酸奶。在另一个方面,发酵型乳制品是乳酸菌(Acidophilus)乳品、Leben、Ayran、Kefir或Sauermilch。可通过本领域已知的任意方法制备发酵乳制品。术语“发酵”意指通过微生物(诸如起始物培养物)的作用将碳水化合物向醇或酸的转化。在一个方面,发酵包括乳糖到乳酸的转化。在本文的上下文中,“微生物”可包括能够发酵乳品基质的任何细菌或真菌。在本文的上下文中,术语“Pfam结构域”意指在鉴定为Pfam-A或者Pfam-B的蛋白序列内区域,鉴定基于多序列比对和隐马尔科夫基序的存在(“ThePfamproteinfamiliesdatabase”:R.D.Finn,J.Mistry,J.Tate,P.Coggill,A.Heger,J.E.Pollington,O.L.Gavin,P.Gunesekaran,G.Ceric,K.Forslund,L.Holm,E.L.Sonnhammer,S.R.Eddy,A.BatemanNucleicAcidsResearch(2010)DatabaseIssue38:D211-222.)。Glyco_hydro2N(PF02837)、Glyco_hydro(PF00703)、Glyco_hydro2C(PF02836)以及细菌Ig样结构域(组4)(PF07532)可引为Pfam结构域的示例。如本文所用“对应位置的位置”意指在特定查询多肽与参考多肽间进行的如本文描述的比对。随即以在具有最高序列同一性的比对中对应的氨基酸来鉴定对应于参比多肽中特定位置的位置。“变体”或“多个变体”是指多肽或核苷酸。术语“变体”可与术语“突变体”互换使用。变体包括分别在氨基酸或者核苷酸序列上的一个或多个位置处的插入、置换、易位、截短和/或反转。短语“变体多肽”、“多肽变体”、“多肽”、“变体”和“变体酶”意指具有氨基酸序列的多肽/蛋白质,该序列具有或包含选定的氨基酸序列,或者与该选定的氨基酸序列相比受到了修饰,该选定氨基酸序列诸如例如SEQIDNO:1、2、3、4或者5。如本文所用,“参考酶”、“参考序列”、“参考多肽”意指酶和多肽,任意所述变体多肽是基于该酶和多肽的,例如SEQIDNO:1、2、3、4或者5。“参考核酸”意指编码参考多肽的核苷酸序列。如本文所用,术语“参考序列”与“受试序列”可互换地使用。如本文所用,“查询序列”意指外来序列,其与参考序列进行了比对来检视其是否处于本发明的范围内。因此,此种查询序列可为,例如,现有技术的序列或者第三方序列。如本文所用,术语“序列”可指多肽序列或者核酸序列,这取决于上下文。如本文所用,术语“多肽序列”与“氨基酸序列”可互换地使用。“变体”的信号序列可与野生型芽孢杆菌信号肽的信号序列或者将分泌该多肽的任意信号序列相同或者不同。变体可作为包含异源多肽的融合蛋白质来表达。例如,变体可包含另一个蛋白质的信号肽或者设计用于协助所表达融合蛋白的识别和纯化的序列,诸如His-Tag序列。为了描述设想由本公开内容所涵盖的多种变体,将采用以下的命名以便参考。在置换包括数字和字母的情况下,例如,592P,则这是指{根据编号系统的位置/置换的氨基酸
当前第1页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1