用于促进脑发育和认知的包含FUT2‑依赖性低聚糖和乳糖‑N‑新四糖的组合物的制作方法

本发明涉及包含fut2-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖的营养组合物，其用于促进婴儿的脑生长和发育。本发明还涉及包含至少两种所述营养组合物的婴儿营养套盒以及该套盒用于促进婴儿的脑生长和发育的用途。

背景技术：

在发育期间，特别是在生命的最初几年，儿童显示具有高度神经可塑性的神经发育的有趣模式。人们对于脑生长和发育与认知发展的关系了解不足，因此这是一个不断增长的研究领域。

一些新的进展意图证明婴儿，特别是早产儿或极低胎龄新生儿的脑生长和认知发展之间的联系(j.pediatr.2009；155：344-9(《儿科学杂志》，2009年，第155卷，第344-349页))。

因此，人们对于支持脑生长，特别是早产儿的脑生长以有利于其认知和/或心理运动发育有着巨大的兴趣和需求。

特别地，需要用于脑生长和/或认知和/或心理运动发育的营养组合物，特别是用于早产或低出生体重(lbw)或经历宫内生长迟缓(iugr)或由于营养不良例如次最佳宫内营养和/或疾病而遭受生长迟缓的婴儿和幼儿(优选地婴儿)的营养组合物。

母乳是对于婴儿最有营养的健康食品。它含有婴儿健康成长所需的各种营养素，例如蛋白质、脂质、碳水化合物、矿物质、维生素和微量元素。它还含有免疫相关组分，例如iga、白细胞、低聚糖、溶菌酶、乳铁蛋白、干扰素-γ、核苷酸、细胞因子等。这些化合物中的若干种在胃肠道中并且在一定程度上在上呼吸道中提供被动保护，防止病原体粘附到粘膜上，从而保护母乳喂养的婴儿免受侵入性感染。人乳还含有必需脂肪酸、酶、激素、生长因子、多胺和其他生物活性化合物，其可能在与母乳喂养相关的健康益处中起重要作用。

人乳尤其富含基于乳糖的低聚糖。这些通常不可消化的低聚糖是通过一系列糖基转移酶(例如那些转移的n-乙酰基-葡糖胺、半乳糖、唾液酸或岩藻糖)的作用产生的乳糖的延伸。除了两种岩藻糖基转移酶fut2(分泌基因)和fut3(路易斯基因)外，确切地说，关于哪一种糖基转移酶参与形成哪一种特定乳低聚糖的知识相对较少。已知两者都参与不同岩藻糖基低聚糖的形成，因为两者都具有多态性，通过不同等位基因导致无效突变和缺失酶活性。随后不同的酶活性体现在特定岩藻糖基低聚糖的可测量的变异。

已提出通过补充长链多不饱和脂肪酸来促进认知和心理运动发育，许多临床试验也已经考察了这一假设。然而，最近的组合这些数据的荟萃分析显示补充对神经发育没有显著影响(schulzkesm,patolesk,simmerk,longchainpolyunsaturatedfattyacidsupplementationinpreterminfants(review)thecochranelibrary2011,issue2(schulzkesm、patolesk、simmerk，“早产儿中的长链多不饱和脂肪酸补充(综述)”，考克兰图书馆，2011年，第2期))。

早产儿的认知发展也可通过大量增加蛋白质和能量摄入量来改善(ibrandt,e.j.stickerandm.j.lentze,catch-upgrowthofheadcircumferenceofverylowbirthweight,smallforgestationalagepreterminfantsandmentaldevelopmenttoadulthood,j.pediatr.2003；142:463-8(ibrandt、e.j.sticker和m.j.lentze，“极低出生体重、小于胎龄早产儿的头围的追赶性生长以及到成年的精神发育”，《儿科学杂志》，2003年，第142卷，第463-468页))。然而，大的肠内喂食体积和/或喂食食物的高蛋白质/能量密度可能诱导喂食不耐受。此外，导致尿素产量增加的高蛋白质摄入量，可能增加早产儿肾功能不全和代谢性酸中毒的风险。此外，婴儿期的高蛋白质/能量摄入量与代谢健康的长期改变(增加的肥胖、ii型糖尿病和心血管疾病的风险)相关(kkong&rjfloos,rapidinfancyweightgainandsubsequentobesity:systematicreviewsandhopefulsuggestions；actapaediatrica,2006；95:904-908(kkong和rjfloos，“婴儿期体重快速增加及后来的肥胖：系统评价和有希望的建议”，《儿科学报》，2006年，第95卷，第904-908页)；jrotteveel,mmvanweissenbruch,jwrtwisk,hadelemarre-vandewaal,infantandchildhoodgrowthpatterns,insulinsensitivity,andbloodpressureinprematurelybornyoungadultspediatrics2008；122:313-321(jrotterveel、mmvanweissenbruch、jwrtwisk、hadelemarre-vandewaal，“早产青年人的婴儿和幼儿生长模式、胰岛素敏感性和血压”，《儿科》，2008年，第122卷，第313-321页))。

wo2014/043368和wo2013/057049提出了通过施用人乳低聚糖来改善个体的脑生长和认知发展并增强记忆功能的方法和组合物。然而，这些方法和组合物不是特别适合在产后特别早期时用于婴儿或早产儿。

因此，仍然需要用于促进婴儿的脑生长和发育的改良的营养组合物，特别是针对具有低出生体重(lbw)的早产儿，以及经历宫内生长迟缓(iugr)或由于营养不良例如次最佳宫内营养和/或疾病而遭受生长迟缓的婴儿。

此外，特别需要用于由自然表达低水平岩藻糖基转移酶2(fut2)的母亲诞下的婴儿的营养组合物。本发明人惊奇地发现，与在来自表达高水平fut2的母亲的母乳中发现的lnnt水平相比，这些fut2-缺陷型母亲的母乳中不仅包含低水平的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖，而且还包含较低水平的其他人乳低聚糖，例如乳糖-n-新四糖(lnnt)。

因此，还特别需要在泌乳期间补充婴儿的营养，以便在所述时间期间确保最佳水平的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)。

此外，特别需要弥补与在离乳期和母乳喂养停止后可能出现的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)有关的营养缺口。这些需要通过如下所公开的本发明的主题来满足。

技术实现要素：

本发明人惊奇地发现，在产后特别早期时，摄入含有岩藻糖基转移酶2基因(fut2)依赖性低聚糖和升高水平的乳糖-n-新四糖(lnnt)的母乳的婴儿显示出更高的头围生长速率。头围生长速率是所提出的脑追赶性生长和发育的代表。

因此，在第一方面，本发明提供了用于在0至4个月之间的婴儿中，优选地在0至2个月之间的婴儿中，并且更优选地在0至1个月之间的婴儿中促进脑生长和发育的包含岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的营养组合物。

在一个优选的实施方案中，包含fut2-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的营养组合物可用于促进下列情况中的任一种：婴儿的头围生长速率、婴儿的脑追赶性生长、婴儿的认知功能、婴儿的心理运动发育或其任何组合，优选地其中所述婴儿在0至4个月之间，更优选地在0至2个月之间，并且最优选地在0至1个月之间。

在另一个优选的实施方案中，包含fut2-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的营养组合物可用于向0至4个月之间的婴儿，优选地0至2个月之间的婴儿，并且更优选地0至1个月之间的婴儿提供营养。

在另一个实施方案中，根据第一方面的营养组合物可施用于婴儿或作为对母乳喂养的补充使用，优选地其中通过在喂食婴儿之前将所述营养组合物加入母乳中，将营养组合物施用于婴儿。或者，优选的是，将营养组合物例如作为独立配制物与母乳喂养同时或交替地施用于婴儿。

优选地，根据第一方面的营养组合物包含0.1至0.6g/l组合物，优选地0.11g/l至0.55g/l、0.15g/l至0.5g/l、0.2g/l至0.45g/l、0.25g/l至0.4g/l或0.3g/l至0.35g/l组合物的量的乳糖-n-新四糖(lnnt)。

进一步优选地，根据第一方面的营养组合物包含0.8g/l至8.0g/l组合物，优选地1.0g/l至6.0g/l、1.2g/l至5.0g/l、1.4g/l至4.0g/l、1.8g/l至3.0g/l或2.0g/l至2.2g/l组合物的量的依赖性低聚糖。

另一个优选的实施方案涉及根据本发明第一方面的营养组合物，其中fut2-依赖性低聚糖选自2'岩藻糖基乳糖(2’fl)、二岩藻糖基乳糖(difl)和乳糖-n-岩藻五糖i(lnfpi)。最优选地，fut2-依赖性低聚糖是2'岩藻糖基乳糖(2’fl)。

在另一个优选的实施方案中，根据第一方面的营养组合物是婴儿配方食品、早产儿配方食品、人乳强化剂、1段婴儿配方食品、较大婴儿配方食品、婴孩食物配方食品、婴儿谷物配方食品、成长乳、用于临床营养的医疗食物产品或补充剂，并且优选地，所述组合物是早产儿配方食品、人乳强化剂或补充剂。

在本发明第一方面的另一个优选实施方案中，婴儿早产或具有低出生体重或经历宫内生长迟缓或由于营养不良和/或疾病而遭受生长迟缓。

在本发明第一方面的又一个优选实施方案中，婴儿由表达低fut2活性的母亲诞下，其中所述低fut2活性的特征在于这些母亲的母乳中的2’岩藻糖基乳糖浓度小于0.2g/l。

在第二方面，本发明涉及使用包含岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的营养组合物来喂食0至4个月之间、优选地0至2个月之间、最优选地0至1个月之间的婴儿。

一个优选的实施方案涉及根据第二方面的用途，其中所述营养组合物以0.1g/l至0.6g/l组合物，优选地以0.11g/l至0.55g/l、0.15g/l至0.5g/l、0.2g/l至0.45g/l、0.25g/l至0.4g/l或0.3g/l至0.35g/l组合物的量包含乳糖-n-新四糖(lnnt)。

另一个优选的实施方案涉及根据第二方面的用途，其中所述营养组合物以0.8g/l至8.0g/l组合物，优选地以1.0g/l至6.0g/l、1.2g/l至5.0g/l、1.4g/l至4.0g/l、1.8g/l至3.0g/l或2.0g/l至2.2g/l组合物的量包含岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖。

另一个优选的实施方案涉及根据本发明第二方面的用途，其中岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖选自2'-岩藻糖基乳糖(2’fl)、二岩藻糖基乳糖(difl)和乳糖-n-岩藻五糖i(lnfpi)。最优选地，岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖是2'岩藻糖基乳糖(2’fl)。

在根据第二方面的用途的另一个优选实施方案中，营养组合物是婴儿配方食品、早产儿配方食品、人乳强化剂、1段婴儿配方食品、较大婴儿配方食品、婴孩食物配方食品、婴儿谷物配方食品、成长乳、用于临床营养的医疗食物产品或补充剂，并且优选地，所述组合物是早产儿配方食品、人乳强化剂或补充剂。

在第二方面的另一个优选实施方案中，营养组合物可作为对母乳喂养的补充使用。优选地，通过在喂食婴儿之前将所述营养组合物加入母乳中，向婴儿施用营养组合物。或者，优选的是，将营养组合物例如作为独立配制物与母乳喂养同时或交替地施用于婴儿。

在根据第二方面的用途的另一个优选实施方案中，婴儿早产或具有低出生体重或经历宫内生长迟缓或由于营养不良和/或疾病而遭受生长迟缓。

在本发明第二方面的另一个优选实施方案中，婴儿由表达低fut2活性的母亲诞下，其中所述低fut2活性的特征在于这些母亲的母乳中的2’岩藻糖基乳糖浓度小于0.2g/l。

在第三方面，本发明涉及使用包含岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的营养组合物来促进下列情况中的任一种：婴儿的脑生长和发育、婴儿的头围生长速率、婴儿的脑追赶性生长、婴儿的认知功能、婴儿的心理运动发育或其任何组合，优选地其中所述婴儿在0至4个月之间，更优选地在0至2个月之间，并且最优选地在0至1个月之间。

一个优选的实施方案涉及根据第三方面的用途，其中所述营养组合物以0.1g/l至0.6g/l组合物，优选地以0.11g/l至0.55g/l、0.15g/l至0.5g/l、0.2g/l至0.45g/l、0.25g/l至0.4g/l或0.3g/l至0.35g/l组合物的量包含乳糖-n-新四糖(lnnt)。

另一个优选的实施方案涉及根据第三方面的用途，其中所述营养组合物以0.8g/l至8.0g/l组合物，优选地以1.0g/l至6.0g/l、1.2g/l至5.0g/l、1.4g/l至4.0g/l、1.8g/l至3.0g/l或2.0g/l至2.2g/l组合物的量包含岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖。

另一个优选的实施方案涉及根据本发明第三方面的用途，其中岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖选自2'-岩藻糖基乳糖(2’fl)、二岩藻糖基乳糖(difl)和乳糖-n-岩藻五糖i(lnfpi)。最优选地，岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖是2'岩藻糖基乳糖(2’fl)。

在根据第三方面的用途的另一个优选实施方案中，营养组合物是婴儿配方食品、早产儿配方食品、人乳强化剂、1段婴儿配方食品、较大婴儿配方食品、婴孩食物配方食品、婴儿谷物配方食品、成长乳、用于临床营养的医疗食物产品或补充剂，并且优选地，所述组合物是早产儿配方食品、人乳强化剂或补充剂。

在第三方面的另一个优选实施方案中，营养组合物可作为对母乳喂养的补充使用。优选地，通过在喂食婴儿之前将所述营养组合物加入母乳中，将营养组合物施用于婴儿。或者，优选的是，将营养组合物例如作为独立配制物与母乳喂养同时或交替地施用于婴儿。

在根据第三方面的用途的另一个优选实施方案中，婴儿早产或具有低出生体重或经历宫内生长迟缓或由于营养不良和/或疾病而遭受生长迟缓。

在本发明第三方面的又一个优选实施方案中，婴儿由表达低fut2活性的母亲诞下，其中所述低fut2活性的特征在于这些母亲的母乳中的2’岩藻糖基乳糖浓度小于0.2g/l。

在第四方面，本发明涉及一种婴儿营养套盒，该套盒包含：用于0至1个月之间的婴儿的至少一种营养组合物a，和用于1个月以上至2个月的婴儿的至少一种营养组合物b，其中营养组合物a和b中的每一种包含岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的组合，并且其中所述营养组合物a和b就存在于其中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量而言彼此不同。

优选地，所述套盒还包含用于2个月以上至4个月的婴儿的至少一种营养组合物c，更优选地其中至少一种营养组合物c包含岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的组合，并且甚至更优选地其中营养组合物a、b和c就其中存在的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量而言彼此不同。

在根据第四方面的套盒的优选实施方案中，根据婴儿的年龄选择每种营养组合物中存在的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量。

在所述套盒的另一个优选实施方案中，存在于至少一种营养组合物a中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量超过存在于至少一种营养组合物b中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量。还优选的是，存在于至少一种营养组合物b中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量超过存在于至少一种营养组合物c中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量。

在所述套盒的另一个优选的实施方案中，岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖选自2'岩藻糖基乳糖(2’fl)、二岩藻糖基乳糖(difl)和乳糖-n-岩藻五糖i(lnfpi)。更优选地，岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖是2'岩藻糖基乳糖(2’fl)。

在所述套盒的另一个优选的实施方案中，岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖以0.8g/l至8.0g/l组合物，优选地以1.0g/l至6.0g/l、1.2g/l至5.0g/l、1.4g/l至4.0g/l、1.8g/l至3.0g/l或2.0g/l至2.2g/l组合物的量存在于营养组合物中。还优选的是，乳糖-n-新四糖(lnnt)以0.1g/l至0.6g/l组合物，优选地以0.11g/l至0.55g/l、0.15g/l至0.5g/l、0.2g/l至0.45g/l、0.25g/l至0.4g/l或0.3g/l至0.35g/l组合物的量存在于营养组合物中。

特别优选的是，岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖以1.8g/l至8.0g/l组合物，优选地以2.0g/l至6.0g/l，并且更优选地以2.2g/l至5.0g/l组合物的量存在于至少一种营养组合物a中。进一步优选的是，岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖以1.2g/l至4.0g/l组合物，优选地以1.4g/l至3.0g/l，并且更优选地以1.8g/l至2.2g/l组合物的量存在于至少一种营养组合物b中。进一步优选的是，岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖以0.8g/l至2.2g/l组合物，优选地以1.0g/l至2.0g/l，更优选地以1.4g/l至1.8g/l组合物的量存在于至少一种营养组合物c中。

还特别优选的是，乳糖-n-新四糖(lnnt)以0.15g/l至0.6g/l组合物，优选地以0.2g/l至0.55g/l，更优选地以0.25g/l至0.5g/l组合物的量存在于至少一种营养组合物a中。进一步优选的是，乳糖-n-新四糖(lnnt)以0.11g/l至0.55g/l组合物，优选地以0.15g/l至0.35g/l，更优选地以0.2g/l至0.3g/l组合物的量存在于至少一种营养组合物b中。进一步优选的是，乳糖-n-新四糖(lnnt)以0.1g/l至0.5g/l组合物，优选地以0.11g/l至0.25g/l，更优选地以0.15g/l至0.2g/l组合物的量存在于至少一种营养组合物c中。

本发明的另一个实施方案涉及根据第四方面的婴儿营养套盒，该套盒用于促进下列情况中的任一种：婴儿的脑生长和发育、婴儿的头围生长速率、婴儿的脑追赶性生长、婴儿的认知功能、婴儿的心理运动发育或其任何组合，其中至少一种营养组合物a用于0至1个月之间的婴儿，并且至少一种营养组合物b用于1个月以上至2个月的婴儿，并且任选地，至少一种营养组合物c用于2个月以上至4个月的婴儿。

本发明的另一个实施方案涉及根据第四方面的用于向婴儿提供营养的婴儿营养套盒，其中至少一种营养组合物a用于0至1个月之间的婴儿，至少一种营养组合物b用于1个月以上至2个月的婴儿，并且任选地，至少一种营养组合物c用于2个月以上至4个月的婴儿。

在第五方面，本发明涉及使用根据第四方面的婴儿营养套盒来促进下列情况中的任一种：婴儿的脑生长和发育、婴儿的头围生长速率、婴儿的脑追赶性生长、婴儿的认知功能、婴儿的心理运动发育或其任何组合，其中至少一种营养组合物a用于0至1个月之间的婴儿，并且至少一种营养组合物b用于1个月以上至2个月的婴儿，并且任选地，至少一种营养组合物c用于2个月以上至4个月的婴儿。

在第六方面，本发明涉及根据第四方面的婴儿营养套盒用于向婴儿提供营养的用途，其中至少一种营养组合物a用于0至1个月之间的婴儿，并且至少一种营养组合物b用于1个月以上至2个月的婴儿，并且任选地，至少一种营养组合物c用于2个月以上至4个月的婴儿。

在下文中描述本发明的其他方面和实施方案。

附图说明

图1a描绘了在产后(pp)第30、60和120天在具有高(实心圆)和低(空心圆)岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性乳低聚糖(os)的乳中的2'岩藻糖基乳糖(2’fl)水平。*指示在特定日期pp通过t-检验得出的显著差异。

图1b描绘了在产后(pp)第30、60和120天在具有高(实心圆)和低(空心圆)岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性乳低聚糖(os)的乳中的乳糖-n-新四糖(lnnt)水平。*指示在特定日期pp通过t-检验得出的显著差异。

图2描绘了在摄入具有低(空心圆)或高(实心圆)岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性乳低聚糖(os)的母乳的婴儿在产后(pp)第30、60和120天的头围生长速率。灰色条表示平均值，*表示通过方差分析得到的统计学显著性。

图3a描绘了在产后(pp)第30、60和120天在具有高(实心圆)和低(空心圆)岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性乳低聚糖(os)的乳中的6'唾液酸乳糖(6’sl)水平。*指示在特定日期pp通过t-检验得出的显著差异。

图3b描绘了在产后(pp)第30、60和120天在具有高(实心圆)和低(空心圆)岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性乳低聚糖(os)的乳中的3'唾液酸乳糖(3’sl)水平。*指示在特定日期pp通过t-检验得出的显著差异。

具体实施方式

本发明人惊奇地发现，岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的特定组合在产后特别早期时的婴儿营养的使用在促进这些婴儿的头围生长速率、脑生长和发育、脑追赶性生长、认知功能和心理运动发育方面是高效的。

因此，本发明提供了用于促进0至4个月之间婴儿的脑生长和发育的包含岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的营养组合物。

婴儿

在本发明的上下文中，术语“婴儿”是指年龄未满12个月的儿童。优选地，本发明的营养组合物用于0至4个月之间的婴儿，更优选地0至2个月之间的婴儿，并且最优选地0至1个月之间的婴儿。

表述“在0至1个月之间”、“从出生起至1个月之间”、“从出生起至1个月”、“至产后1个月”、“从出生起至30天之间”、“从出生起至30天”、“产后0至30天之间”和“至产后30天”可互换使用。

相应地，表述“在0至2个月之间”、“从出生起至2个月之间”、“从出生起至2个月”、“至产后2个月”、“从出生起至60天之间”、“从出生起至60天”、“产后0至60天之间”和“至产后60天“可互换使用。

同样相应地，表述“在0至4个月之间”、“从出生起至4个月之间”、“从出生起至4个月”、“至产后4个月”、“从出生起至120天之间”、“从出生起至120天”、“产后0至120天之间”和“至产后120天”可互换使用。

术语“早产儿”(或“早产婴儿”)是指胎龄不足37周出生的婴儿。

术语“低出生体重婴儿”或“lbw”是指活胎产重量小于2,500g的婴儿。

人乳低聚糖

本发明人惊奇地发现，从显示出岩藻糖基转移酶2基因(fut2)的强表达的母亲摄入母乳的婴儿在出生后特别早期时显示出更高的头围生长速率。头围生长速率是所提出的脑追赶性生长和发育的代表。

母亲的岩藻糖基转移酶2基因(fut2)的遗传多态性控制母乳中低聚糖的2'岩藻糖基化。岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性乳低聚糖的原型是2'-岩藻糖基乳糖(2’fl)。其他岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性乳低聚糖是二岩藻糖基乳糖(difl)和乳糖-n-岩藻五糖i(lnfpi)。发现一些基因型几乎不表达任何2'岩藻糖基乳糖(2’fl)，而其他基因型表达约2g/l最多至5g/l的2'fl。

在本发明的上下文中，“高岩藻糖基转移酶2(fut2)表达”、“高fut2活性”、“岩藻糖基转移酶2基因(fut2)的强表达”或“高岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性乳低聚糖”是指母乳中2'岩藻糖基乳糖的浓度高于0.2g/l。

此外，在本文的上下文中，“低岩藻糖基转移酶2(fut2)表达”、“低fut2活性”或“低岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性乳低聚糖”是指母乳中的2'-岩藻糖基乳糖的浓度为0.2g/l或小于0.2g/l。

本发明人还发现岩藻糖基转移酶2基因(fut2)的强表达与乳中乳糖-n-新四糖(lnnt)的水平升高一致。具体地讲，在具有低水平的fut2依赖性乳低聚糖的乳中发现了较低水平的乳糖-n-新四糖(lnnt)，而在具有高水平的fut2依赖性乳低聚糖的乳中发现了高水平的乳糖-n-新四糖(lnnt)。

因此，提供岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的本发明的营养组合物有利地模拟来自母体的母乳组成，所述母体表现出岩藻糖基转移酶2基因(fut2)的强表达/高fut2活性。因此，本发明的组合物特别适于促进婴儿(特别是早产或具有低出生体重或经历宫内生长迟缓或由于营养不良和/或疾病而遭受生长迟缓的婴儿)的头围生长速率、脑生长和发育、脑追赶性生长、认知功能和心理运动发育。

本发明的营养组合物还特别适用于由具有低fut2活性的母亲诞下的婴儿。本发明人惊奇地发现，与在来自具有高fut2活性的母亲的母乳中发现的lnnt水平相比，fut2-缺陷型母亲的母乳不仅包含低水平的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖，而且还包含较低水平的乳糖-n-新四糖(lnnt)。

不希望受理论束缚，据信本营养组合物对婴儿的脑生长和发育、认知功能和心理运动发育的影响是基于岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的协同作用。具体地讲，据信源自岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖的l-岩藻糖长期作用于脑，对记忆巩固有增强作用(特别是在睡眠期间)，而同时岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和lnnt影响双歧杆菌及其代谢，其反过来会影响脑生长和发育。

优选地，岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖选自2'岩藻糖基乳糖(2’fl)、二岩藻糖基乳糖(difl)和乳糖-n-岩藻五糖i(lnfpi)，优选地为2'岩藻糖基乳糖(2’fl)。

2'岩藻糖基乳糖(“2'fl”或“2fl”)、二岩藻糖基乳糖(“difl”)和乳糖-n-岩藻五糖i(“lnfpi”)属于中性低聚糖组。术语“中性低聚糖”是指不带电荷的低聚糖。

可采用层析技术或过滤技术从天然来源(例如动物乳汁)中分离出指定的岩藻糖基化低聚糖。或者，也可利用特殊的岩藻糖基转移酶和/或岩藻糖苷酶，采用生物技术手段制得岩藻糖基化低聚糖，其中生物技术手段包括基于酶(重组酶或天然酶)的发酵技术、或微生物发酵技术。在采用生物技术手段的情况下，微生物可表达其天然酶和底物，或者可被工程改造成能够产生相应的底物和酶。可使用单一微生物培养物和/或混合培养物。可以最初具有任意聚合度(dp)的受体底物为起始物，逐步聚合(从dp＝1开始)形成岩藻糖基化低聚糖。或者，可以乳糖和游离岩藻糖为原料，化学合成岩藻糖基化低聚糖。岩藻糖基化低聚糖也可从(例如)日本协和发酵工业株式会社(kyowa,hakko,kogyo)购得。

优选地，岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖可以以0.8g/l至8.0g/l组合物的量用于本发明的营养组合物中。岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖也可以以1.0g/l至6.0g/l、1.2g/l至5.0g/l、1.4g/l至4.0g/l、1.8g/l至3.0g/l或2.0g/l至2.2g/l组合物的量使用。

在优选的实施方案中，岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖是2'岩藻糖基乳糖(2’fl)。2'fl可以以0.8g/l至8.0g/l、1.0g/l至6.0g/l、1.2g/l至5.0g/l、1.4g/l至4.0g/l、1.8g/l至3.0g/l或2.0g/l至2.2g/l组合物的量使用。特别优选的是，2'fl以1.0g/l至5.0g/l组合物的量用于本发明的营养组合物中。

乳糖-n-新四糖(lnnt)是n-乙酰化低聚糖。表述“n-乙酰化”低聚糖是指具有至少一个携带n-乙酰基残基的己糖的低聚糖。

乳糖-n-新四糖(lnnt)可通过使用糖基水解酶和/或糖基转移酶将糖单元从供体部分酶促转移至受体部分来合成，如例如在美国专利no.5,288,637和wo96/10086中所述。或者，lnnt可以通过将游离的或与低聚糖(例如，乳果糖)结合的酮-己糖(例如，果糖)化学转化成n-乙酰己糖胺或包含n-乙酰己糖胺的低聚糖来制备，如wrodnigg,t.m.；stutz,a.e.(1999)angew.chem.int.ed.38:827-828(wrodnigg,t.m.、stutz,a.e.，1999年，《应用化学国际版》(德国)，第38卷，第827-828页)中所述。然后可将用这种方式制得的n-乙酰氨基乳糖苷转移到作为受体部分的乳糖。

优选地，乳糖-n-新四糖(lnnt)可以以0.1g/l至0.6g/l组合物，优选地以0.11g/l至0.55g/l、0.15g/l至0.5g/l、0.2g/l至0.45g/l、0.25g/l至0.4g/l或0.3g/l至0.35g/l组合物的量用于本发明的营养组合物中。

在特别优选的实施方案中，乳糖-n-新四糖(lnnt)可用于本发明的营养组合物中的量为组合物的约0.5g/l，并且2'岩藻糖基乳糖(2’fl)用于本发明的营养组合物中的量为组合物的约1g/l。

根据本发明的营养组合物的低聚糖组合可以是组合物中低聚糖的唯一来源。

本发明的营养组合物的用途

本文所述的营养组合物可用于促进婴儿的头围生长速率、脑生长、脑追赶性生长、脑发育、认知功能和心理运动发育中的任一种。

本发明人惊奇地发现，本发明的营养组合物对婴儿的脑生长和发育的影响在婴儿出生后特别早期时，即产后0至4个月的时期内，更特别地在产后0至2个月的时期内，并且最特别地在产后0至1个月的时期内最强。

因此，本发明的营养组合物通常可以在婴儿出生后0至4个月、婴儿出生后0至2个月、或婴儿出生后0至1个月内使用。优选地，营养组合物可以在婴儿出生后0至1个月的时期内使用。

在此期间，本发明的营养组合物通常可用于喂食婴儿或向婴儿提供营养。

本发明的营养组合物可特别用于早产或具有低出生体重(lbw)或经历宫内生长迟缓(iugr)或由于疾病和/或营养不良而遭受生长迟缓的婴儿。优选地，本发明的组合物用于早产儿。

在所有上述应用和用途中，本发明的营养组合物可用作母乳的完全替代品，或者作为在泌乳期间的母乳喂养的补充。

在其中本发明营养组合物作为对母乳喂养的补充使用的实施方案中，可以在喂食婴儿之前用本发明的营养组合物补充母乳。因此，母乳可以天然来源于婴儿的母亲、与本发明的营养组合物混合并通过奶瓶喂给婴儿。

或者，本发明的营养组合物可与母乳喂养同时或交替地使用。在这种情况下，本发明的营养组合物作为独立配制物使用。这样的独立配制物可以是全餐替代品，例如全营养配方食品，或者它可以是补充剂。当本发明的营养组合物与母乳喂养同时施用于婴儿时，所述组合物优选地为可在母乳喂养之前或之后施用于婴儿的补充剂，例如每天1至12次、2至10次、3至8次或4至6次。

当将本发明的营养组合物与母乳喂养交替地施用给婴儿时，所述组合物优选地为全餐替代品，更优选地为代替母乳喂养施用给婴儿的全营养婴儿配方食品，例如每天1至12次、2至10次、3至8次或4至6次。

本发明的营养组合物还可以在完全母乳喂养期后和离乳期间以交替或并行的方式施用给婴儿，直到泌乳期结束。优选地，喂食本营养组合物的频率增加，而在离乳期间直到泌乳期结束，母乳喂养的频率降低。

通过在喂食婴儿之前将所述组合物直接添加到母乳中或者通过将所述组合物作为独立配制物施用对母乳喂养进行补充来实现在母乳喂养/泌乳期间向婴儿补充本发明的组合物，这特别有利于由表达低或不表达岩藻糖基转移酶2(fut2)的母亲诞下的婴儿，并因此在其母乳中提供低水平的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和/或低水平的乳糖-n-新四糖lnnt。

本营养组合物可优选地添加到母乳中或者与母乳喂养同时或交替地施用于婴儿，该营养组合物的量足以模拟在具有高fut2活性的母亲的母乳中岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的天然水平。在本发明的上下文中，“高fut2活性”是指母乳中2'岩藻糖基乳糖的浓度高于0.2g/l。例如，在具有高fut2活性的母亲的母乳中岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖的所述天然水平高于0.2g/l且高达约8g/l，所述低聚糖包括2'岩藻糖基乳糖(2’fl)、二岩藻糖基乳糖(difl)和乳糖-n-岩藻五糖i(lnfpi)。具有高fut2活性的母亲的母乳中2-岩藻糖基乳糖(2’fl)的天然水平高达约5g/l。

已发现具有高fut2活性的母亲的母乳中乳糖-n-新四糖(lnnt)的天然水平高达约0.6g/l。

营养组合物

如本文所用，表述“组合物”和“营养组合物”旨在指用于本发明的营养组合物。

在本上下文中，营养组合物可以是向个体提供营养益处并且可以由人或动物安全食用的任何种类的组合物。所述营养组合物可以是固体、半固体或液体形式，并且可包含一种或多种常量营养素、微量营养素、食品添加剂、水等。例如，营养组合物可包含以下常量营养素：蛋白质源、脂质源、碳水化合物源以及它们的任何组合。此外，营养组合物可包含以下微量营养素：维生素、矿物质、纤维、植物化学物质、抗氧化剂、益生元、益生菌以及它们的任何组合。该组合物还可包含食品添加剂，例如稳定剂(以固体形式提供时)或乳化剂(以液体形式提供时)。

营养组合物通常含有蛋白质源。蛋白质的量可为1.6g/100kcal至3g/100kcal，诸如低于2.0g/100kcal，例如在1.8g/100kcal至2g/100kcal之间，或者蛋白质的量低于1.8g/100kcal。

只要满足必需氨基酸含量的最低要求并确保有利生长，蛋白质的类型被认为对本发明无关紧要。因此，可使用基于乳清、酪蛋白以及它们的混合物的蛋白质源，也可使用基于大豆的蛋白质源。就所关注的乳清蛋白而言，蛋白质源可基于酸乳清或甜乳清或它们的混合物，并且可包含任何所需比例的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白。在一些有利的实施方案中，蛋白质源以乳清为主(即多于50％的蛋白质来自乳清蛋白，例如60％或70％)。

该蛋白质可为完整的或水解的，或为完整蛋白质和水解蛋白质的混合物。所谓术语“完整的”是指蛋白质的主要部分是完整的，即分子结构未发生改变，例如至少80％的蛋白质未发生改变，例如至少85％的蛋白质未发生改变，优选地，至少90％的蛋白质未发生改变，甚至更优选地，至少95％的蛋白质未发生改变，例如至少98％的蛋白质未发生改变。在一个具体实施方案中，100％的蛋白质未发生改变。

术语“水解的”是指在本发明的上下文中，蛋白质被水解或分解成它的组成氨基酸。

该蛋白质可以是完全水解或部分水解的。例如，对于被认为处于发生牛乳变应性风险的婴儿或幼儿而言，提供部分水解的蛋白质(水解程度在2％与20％之间)可能是可取的。如果需要水解的蛋白质，则可根据需要并且如本领域已知的那样进行水解过程。例如，可通过在一个或多个步骤中对乳清级分进行酶法水解来制备乳清蛋白水解物。如果用作原料的乳清级分基本上不含乳糖，则发现该蛋白质在水解过程中经受少得多的赖氨酸封闭。这使得能够将赖氨酸封闭的程度从约15重量％的总赖氨酸降至低于约10重量％的赖氨酸；例如约7重量％的赖氨酸，这大大地提高了蛋白质源的营养质量。

在本发明的一个实施方案中，至少70％的蛋白质被水解，优选地，至少80％的蛋白质被水解，例如至少85％的蛋白质被水解，甚至更优选地，至少90％的蛋白质被水解，例如至少95％的蛋白质被水解，尤其是至少98％的蛋白质被水解。在一个具体实施方案中，100％的蛋白质被水解。在一个具体的实施方案中，组合物的蛋白质是水解的、完全水解的或部分水解的。蛋白质的水解程度(dh)可在8和40之间、或在20和60之间、或在20和80之间，或大于10、20、40、60、80或90。

在一个具体实施方案中，营养组合物是低变应原性营养组合物。术语“低变应原组合物”是指不大可能引起变态反应的组合物。

营养组合物通常含有碳水化合物源。这在本发明的营养组合物为婴儿配方食品的情况下是特别优选的。在这种情况下，尽管碳水化合物的优选来源之一是乳糖，但可使用婴儿配方食品中常用的任何碳水化合物来源，例如乳糖、蔗糖、麦芽糖糊精、淀粉以及它们的混合物。

营养组合物通常含有脂质源。这在本发明的营养组合物为婴儿配方食品的情况下是特别相关的。在这种情况下，脂质源可以是适合用于婴儿配方食品中的任何脂质或脂肪。一些合适的脂肪源包括棕榈油、高油酸向日葵油和高油酸红花油。也可加入必需脂肪酸亚油酸和α-亚麻酸，以及少量包含大量预先形成的花生四烯酸和二十二碳六烯酸的油，例如鱼油或微生物油。脂肪源中n-6脂肪酸与n-3脂肪酸的比率可为约5:1至约15:1，例如约8:1至约10:1。

营养组合物还可包含据悉日常饮食中必不可少并且人体大量需求以满足营养需要的一切维生素和矿物质。已确定某些维生素和矿物质的最低需求量。矿物质、维生素和任选地存在于本发明组合物中的其他营养物质的示例包括维生素a、维生素b1、维生素b2、维生素b6、维生素b12、维生素e、维生素k、维生素c、维生素d、叶酸、肌醇、烟酸、生物素、泛酸、胆碱、钙、磷、碘、铁、镁、铜、锌、锰、氯、钾、钠、硒、铬、钼、牛磺酸和左旋肉碱。矿物质通常以盐的形式添加。特定矿物质和其他维生素的存在和量将根据适用人群而有所不同。

如果需要，营养组合物可含有乳化剂和稳定剂，例如大豆卵磷脂、柠檬酸单和双甘油酯等。

营养组合物可含有益生菌。术语“益生菌”是指对宿主的健康或良好状态具有有益效果的微生物细胞制剂或微生物细胞成分。(salminens,ouwehanda.bennoy.etal。“probiotics:howshouldtheybedefined”trendsfoodsci.technol.1999:10107-10(salminens、ouwehanda.、bennoy.等人，“为益生菌下定义的方法”，《食品科学与技术趋势》，1999年，第10卷，第107-110页))。微生物细胞一般为细菌或酵母。

最常用的益生菌微生物主要是以下属的细菌和酵母：乳酸杆菌属(lactobacillus)物种、链球菌属(streptococcus)物种、肠球菌属(enterococcus)物种、双歧杆菌属(bifidobacterium)物种和酵母属(saccharomyces)物种。在一些具体实施方案中，益生菌是益生菌菌株。在一些具体实施方案中，其具体为双歧杆菌和/或乳酸杆菌。

合适的益生细菌菌株包括得自芬兰瓦利奥公司(valiooy,finland)的商标为lgg的鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)atcc53103、新西兰blis科技有限公司(blistechnologieslimited,newzealand)以商品名ki2销售的鼠李糖乳杆菌cgmcc1.3724、类干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)cncmi-2116、约氏乳杆菌(lactobacillusjohnsonii)cncmi-1225、唾液链球菌(streptococcussalivarius)dsm13084、丹麦科汉森公司(christianhansencompany,denmark)以商标bb12特别销售的乳酸双歧杆菌(bifidobacteriumlactis)cncm1-3446、日本森永乳业株式会社(morinagamilkindustryco.ltd.,japan)以商标bb536销售的长双歧杆菌(bifidobacteriumlongum)atccbaa-999、丹尼斯克公司(danisco)以商标bb-03销售的短双岐杆菌(bifidobacteriumbreve)、森永(morinaga)以商标m-16v销售的短双岐杆菌、宝洁公司(procter&gambieco.)以商标bifantis销售的婴儿双歧杆菌(bifidobacteriuminfantis)，以及加拿大rosell生物研究所(institutrosell-lallemand)以商标r0070销售的短双岐杆菌。

营养组合物以干重计每g可包含10e3至10e12cfu的益生菌菌株，更优选地包含在10e7和10e12cfu之间、例如在10e8和10e10cfu之间的益生菌菌株。

在一个实施方案中，益生菌是活的。在另一个实施方案中，益生菌是非复制的或失活的。在一些其他实施方案中，可同时存在活的益生菌和失活的益生菌。

除此前提到的人乳低聚糖外，营养组合物还可包含至少一种不易消化的低聚糖(例如，益生元)。益生元的示例包括某些低聚糖，例如低聚果糖(fos)、低聚半乳糖(gos)和/或牛乳衍生低聚糖(bmo)。其含量通常在组合物重量的0.3％和10％之间。

通常，营养组合物可以呈营养产品，优选食品、营养补充剂、全餐、全营养配方食品、药物制剂、功能性食品、饮料产品以及它们的组合的形式。

优选地，本发明的营养组合物是婴儿配方食品、早产儿配方食品、人乳强化剂、1段婴儿配方食品、较大婴儿配方食品、婴孩食物配方食品、用于临床营养的医疗食物产品或补充剂。

在特别优选的实施方案中，营养组合物是早产儿配方食品、人乳强化剂或补充剂。

在本发明的上下文中，术语表述“婴儿配方食品”是指专用于婴儿在出生后头12个月期间的特定营养用途的营养产品，其满足所述婴儿的营养需求。应当了解，婴儿配方食品可以是人乳的完全或部分替代品，即，可以单独使用婴儿配方食品喂养婴儿，也可以将婴儿配方食品用作人乳的补充。有关婴儿配方食品的更多详细信息，请参见有关婴儿配方食品和较大婴儿配方食品的2006年12月22日公布的欧盟指令2006/141/ec和/或1991年5月14日公布的91/321/eec中的第1.2(c)条。表述“婴儿配方食品”包括“1段婴儿配方食品”(即，专用于婴儿在出生后头四个月期间的特定营养用途的食品)和“后续配方食品”(即，专用于超过四个月大的婴儿的特定营养用途并且构成此类人的逐渐多样化饮食中的主要液体成分的食品)。

术语“早产儿配方食品”是指用于早产儿的婴儿配方食品。

术语“人乳强化剂”是指用于增加喂给具有低出生体重的早产儿或婴儿的母乳中的卡路里、蛋白质、矿物质和维生素的补充剂。

术语“婴孩食物配方食品”是指专用于供给不满1岁婴儿营养的食品。

“补充剂”通常在住院期间使用和/或在出院后使用。补充剂可用于早产儿或儿童或成人。所述补充剂优选地是用于早产儿喂食的产品，例如早产儿配方食品、人乳强化剂或早产儿补充剂。所述补充剂可以是例如，散剂、片剂、胶囊剂、锭剂或液体形式。补充剂还可包含保护性亲水胶体(例如，胶类、蛋白质、改性淀粉)、粘合剂、成膜剂、包囊剂/材料、壁/壳材料、基质化合物、包衣、乳化剂、表面活性剂、增溶剂(油类、脂肪类、蜡类、卵磷脂类等)、吸附剂、载体、填充剂、共化合物、分散剂、润湿剂、加工助剂(溶剂)、流动剂、掩味剂、增重剂、胶凝剂和凝胶形成剂。补充剂还可包含常规的药物添加剂和佐剂、赋形剂和稀释剂，包括但不限于：水、任何来源的明胶、植物胶、木素磺酸盐、滑石、糖类、淀粉、阿拉伯树胶、植物油、聚亚烷基二醇、风味剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂、缓冲剂、润滑剂、着色剂、润湿剂、填充剂等。

在优选的实施方案中，可以将补充剂加入天然来源于婴儿母亲的母乳。用本发明的组合物补充天然母乳对于由表达低或不表达岩藻糖基转移酶2(fut2)并因此在其母乳中提供低水平的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和/或低水平的乳糖-n-新四糖lnnt的母亲诞下的婴儿特别有利。所述补充剂可优选地以足以模拟在具有高fut2活性的母亲的母乳中岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的天然水平的量加入到母乳中，如在乳中2'岩藻糖基乳糖水平高于0.2g/l。例如，在具有高fut2活性的母亲的母乳中岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖的所述天然水平高达约8g/l，其中在具有高fut2活性的母亲的母乳中2-岩藻糖基乳糖(2’fl)的天然水平高达约5g/l。在具有高fut2活性的母亲的母乳中乳糖-n-新四糖(lnnt)的天然水平高达约0.6g/l。

可将补充剂分别添加到婴儿可接受的产品(例如，可摄入的载体或承载物)中。此类载体或承载物的示例是药物组合物、食物组合物或宠物食物组合物。此类组合物的非限制性示例为牛奶、酸奶、凝乳、奶酪、发酵乳、乳基发酵产品、基于发酵谷物的产品、乳基粉、人乳、婴儿配方食品、早产儿配方食品、1段婴儿配方食品、较大婴儿配方食品、婴孩食物配方食品，用于临床营养的医疗食物产品、口服补充剂和管饲剂。此外，根据政府机构如usrda的建议，补充剂可含有适于肠内或肠胃外给药的有机或无机载体材料以及维生素、矿物质痕量元素和其他微量营养素。

在另一个优选的实施方案中，营养组合物是合成营养组合物(即不是母乳)。表述“合成营养组合物”是指采用化学和/或生物手段获得的合成混合物，该混合物的化学性质可能与哺乳动物乳汁中天然存在的混合物相同。

根据本发明的组合物还可以是用于儿童或成人的产品，例如酸奶或医疗食品，以及宠物食物产品。

制备本发明的营养组合物的方法

营养组合物可以本领域已知的任何合适的方式制备。例如，该营养组合物可通过将蛋白质源、碳水化合物源(不同于低聚糖组合)和脂肪源以合适的比例混合在一起而制备。如果使用乳化剂，则可在此时加入。此时可加入维生素和矿物质，但为了避免热降解，通常在稍晚一点的时候加入。可先将任何亲脂性维生素、乳化剂等溶解到脂肪源中，然后再混合。然后可混入水(优选经过反渗透的水)，形成液体混合物。合适的水温在约50℃至约80℃的范围内，有助于分散成分。可使用市售的液化剂来形成液体混合物。如果最终产物是液体形式，则在此阶段加入岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖。如果最终产物是粉末，可根据需要同样在此阶段加入岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖。然后，例如分两个阶段匀化液体混合物。

然后，可对液体混合物进行热处理以减少细菌载量，例如通过将液体混合物快速加热至约80℃和约150℃之间的范围内的温度并持续约5秒和约5分钟之间的时间。这可通过蒸汽注入、高压灭菌器或热交换器(例如，板式热交换器)来进行。

然后，可以例如通过快速冷却将液体混合物冷却至约60℃至约85℃之间的温度。然后再次例如分两个阶段均质化液体混合物，其中第一阶段的压力在约10mpa和约30mpa之间，第二阶段的压力在约2mpa和约10mpa之间。然后可进一步冷却均质化的混合物，以便添加任何热敏组分，如维生素和矿物质。此刻便于调节均质混合物的ph和固形物含量。将均质化的混合物转移至合适的干燥装置(例如喷雾干燥器或冷冻干燥器)，并将其转化成粉末。该粉末的含水量应小于约5重量％。岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖可以在该阶段通过干混或通过将它们混合成糖浆形式的晶体并喷雾干燥(或冷冻干燥)而加入。

如果优选液体组合物，可对该均质化的混合物进行杀菌，然后在无菌条件下将其装入合适的容器中，也可以先将其装入容器中，再进行灭菌。

在一个实施方案中，本发明的营养组合物可以是含量足以在婴儿中实现脑生长和发育的期望效果的补充剂。这种施用形式特别适用于早产或lbw或iugr婴儿。

包含在补充剂中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖的量将根据该补充剂的施用方式进行选择。

例如，乳糖-n-新四糖(lnnt)可以以0.1g/l至0.6g/l组合物，并且优选地以0.11g/l至0.55g/l、0.15g/l至0.5g/l、0.2g/l至0.45g/l、0.25g/l至0.4g/l或0.3g/l至0.35g/l组合物的量包含在本发明的营养组合物中。

fut2-依赖性低聚糖可以以0.8g/l至8.0g/l组合物，并且优选地以1.0g/l至6.0g/l、1.2g/l至5.0g/l、1.4g/l至4.0g/l、1.8g/l至3.0g/l或2.0g/l至2.2g/l组合物的量包含在本发明的营养组合物中。

婴儿营养套盒

本发明人还发现，在婴儿中对于岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖的需求随时间减少，如在婴儿出生后第30、60和120天时所测定的。

因此，本发明还涉及包含至少两种营养组合物的婴儿营养套盒，所述至少两种营养组合物在其中所包含的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖的量上彼此不同。优选地，所述套盒包含一组根据本发明的营养组合物。

例如，这样的套盒可包含用于0至1个月之间婴儿的至少一种第一营养组合物a，优选地其量足以喂食新生婴儿从其出生至1个月的时间。所述第一营养组合物a优选地包含岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的组合。

通常根据婴儿的年龄选择存在于至少一种营养组合物a中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量。

例如，岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖以1.8g/l至8.0g/l组合物，优选地以2.0g/l至6.0g/l，并且更优选地以2.2g/l至5.0g/l组合物的量包含在第一营养组合物a中。还优选的是，乳糖-n-新四糖(lnnt)以0.15g/l至0.6g/l组合物，优选地以0.2g/l至0.55g/l，更优选地以0.25g/l至0.5g/l组合物的量包含在第一营养组合物a中。

该套盒还可包含一种或多种用于1个月以上至2个月的婴儿的第二营养组合物b，优选地其量足以喂食婴儿从1个月至2个月的时间。所述第二营养组合物b优选地包含岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的组合。通常，营养组合物a和b在其中存在的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量上彼此不同，更通常地使得存在于至少一种营养组合物a中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量分别超过存在于至少一种营养组合物b中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量。

优选地，根据婴儿的年龄选择存在于至少一种营养组合物b中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量。

通常，岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖以1.2g/l至4.0g/l组合物，优选地以1.4g/l至3.0g/l，并且更优选地以1.8g/l至2.2g/l组合物的量包含在营养组合物b中。还优选的是，乳糖-n-新四糖(lnnt)以0.11g/l至0.55g/l组合物，优选地以0.15g/l至0.35g/l，并且更优选地以0.2g/l至0.3g/l组合物的量包含在营养组合物b中。

该套盒还可包含一种或多种用于2个月以上至4个月的婴儿的第三营养组合物b，优选地其量足以喂食婴儿从2个月至4个月的时间。此外，所述第三营养组合物b优选地包含岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的组合。通常，营养组合物a、b和c在其中存在的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量上彼此不同，更通常地使得存在于至少一种营养组合物a中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量超过存在于至少一种营养组合物b中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量，并且存在于至少一种营养组合物b中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量超过存在于至少一种营养组合物c中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量。优选地，根据婴儿的年龄选择存在于至少一种营养组合物c中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量。

通常，岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖以0.8g/l至2.2g/l组合物，优选地以1.0g/l至2.0g/l，更优选地以1.4g/l至1.8g/l组合物的量包含在营养组合物c中。还优选的是，乳糖-n-新四糖(lnnt)以0.1g/l至0.5g/l组合物，优选地以0.11g/l至0.25g/l，并且更优选地以0.15g/l至0.2g/l组合物的量包含在营养组合物c中。

在优选的实施方案中，本发明的婴儿营养套盒包含如上文所定义的第一营养组合物a和第二营养组合物b的组合。甚至更优选地，所述套盒还包含如上文所定义的第三营养组合物c。因此，婴儿营养套盒提供了按年龄定制的针对婴儿的营养组合物系统，其特别适合于满足这些在0至4个月之间的婴儿的不断发展的需求。

该套盒还可包含一种或多种用于4个月以上婴儿(例如用于4至5、6、7、8、9、10、11或12个月的婴儿)的第四营养组合物d，优选地其量足以喂食婴儿从4个月直到5、6、7、8、9、10、11或12个月的时间。

此外，所述第四营养组合物d优选地包含岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的组合。通常，营养组合物a、b、c和d在其中存在的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量上彼此不同，更通常地使得存在于至少一种营养组合物a中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量超过存在于至少一种营养组合物b中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量，并且存在于至少一种营养组合物b中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量超过存在于至少一种营养组合物c中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量，并且存在于至少一种营养组合物c中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量超过存在于至少一种营养组合物d中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量。优选地，根据婴儿的年龄选择存在于至少一种营养组合物d中的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的量。

通常，岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖以小于组合物的2.0g/l、优选小于组合物的1.8g/l、更优选小于组合物的1.4g/l、甚至更优选小于组合物的1.0g/l、并且最优选小于组合物的0.8g/l的量包含在营养组合物d中。同样优选的是，乳糖-n-新四糖(lnnt)以小于组合物的0.5g/l、优选小于组合物的0.25g/l、更优选小于组合物的0.2g/l、甚至更优选小于组合物的0.15g/l、并且最优选小于组合物的0.1g/l的量包含在营养组合物d中。

优选的是，套盒中的营养组合物所包含的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖选自2'岩藻糖基乳糖(2’fl)、二岩藻糖基乳糖(difl)和乳糖-n-岩藻五糖i(lnfpi)，优选地选自2'岩藻糖基乳糖(2’fl)。

任选地，套盒可包括任何其他营养组合物e、f等，所述任何其他营养组合物的量足以用于喂食四个月至6、7、8、9、10、11或12个月、优选5至12个月、6至11个月、7至10个月、8至9个月的婴儿。

通常，套盒中的各种营养组合物a、b、c、d等呈婴儿配方食品的形式，其中这些婴儿配方食品可以是人乳的完全或部分替代品。

套盒中的营养组合物可以包装在单次量单元中，优选其中每个单次量单元包含足量的营养组合物，以在用水重构时制成单次食用量。单次量单元可为胶囊、条状包装(泡罩包装)或小袋的形式。

若各种营养组合物为本发明所述婴儿营养套盒的一部分，则可将其包装到多个单次量单元中，并且以装有足量单次量单元的合装包的形式提供给消费者，以满足婴儿在一段时间(如一周或一个月)内的需求。

例如，套盒可包括一定量的包含足量营养组合物a的单次量单元，例如，1至60个、2至50个、3至40个、4至30个、5至20个、6至15个、7至12个、或8至10个包含足量营养组合物a的单次量单元。

另选地或除此之外，套盒可包括一定量的包含足量营养组合物b的单次量单元，例如，1至60个、2至50个、3至40个、4至30个、5至20个、6至15个、7至12个、或8至10个包含足量营养组合物b的单次量单元。

另选地或除此之外，套盒还可包括一定量的包含足量营养组合物c的单次量单元，例如，1至60个、2至50个、3至40个、4至30个、5至20个、6至15个、7至12个、或8至10个包含足量营养组合物c的单次量单元。

另选地或除此之外，套盒还可包括上述一定量的包含足量营养组合物d或e或f等的单次量单元。

本发明的婴儿营养套盒可以根据本发明的营养组合物使用。

因此，套盒可用于促进下列任一项：婴儿的头围生长速率、婴儿的脑生长和发育、婴儿的脑追赶性生长、婴儿的认知功能、婴儿的心理运动发育、或它们的任何组合。

此外，本发明的婴儿营养套盒可用于向婴儿提供营养或用于喂食婴儿。

优选地，所述至少一种营养组合物a用于0至1个月之间的婴儿，所述至少一种营养组合物b用于1个月以上至2个月的婴儿，所述至少一种营养组合物c用于2个月以上至4个月的婴儿，并且所述至少一种营养组合物d用于4个月以上的婴儿，例如4个月至6、7、8、9、10、11或12个月。

本发明的婴儿营养套盒的使用对于由具有低fut2活性的母亲诞下的婴儿特别有利，所述母亲在其母乳中提供低水平的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和/或低水平的乳糖-n-新四糖lnnt。

此外，本发明的套盒适于发育中婴儿(特别是早产或具有低出生体重或经历宫内生长迟缓或由于营养不良和/或疾病而遭受生长迟缓的婴儿)的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖需求。对于这些婴儿，本发明的套盒“在适当的时间”提供“适当浓度”的岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖。

有利的是，使低聚糖剂量适于给定年龄婴儿的需求的这种适应性避免了低聚糖过量，从而降低了与那些配料相关联的副作用(诸如胃肠症状)的风险。此外，所述低聚糖剂量随时间的适应性实现了这些化合物在整个婴儿期的最佳供应，从而在婴儿出生后头一年期间刺激婴儿、特别是早产儿或极低胎龄新生儿的脑生长和发育。

本文通过以下非限制性实施例进一步说明本发明。

实施例

实施例1：包含fut2-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖的营养组合物

包含岩藻糖基转移酶2(fut2)-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的营养组合物在下表1中给出：

表1

*脂肪混合物遵循aha：饱和脂肪<7％e+多不饱和脂肪酸<10％ela/ala5.0

**tfa

实施例2：包含fut2依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖的营养组合物

包含岩藻糖基转移酶2(fut2)依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖(lnnt)的按年龄定制的营养组合物在下表2中给出：

表2

*脂肪混合物遵循aha：饱和脂肪<7％e+多不饱和脂肪酸<10％ela/ala5.0

**tfa

***营养组合物a用于0至1个月之间的婴儿，营养组合物b用于0至2个月之间的婴儿，营养组合物c用于0至4个月之间的婴儿，并且营养组合物d用于4个月以上至12个月的婴儿。

实施例3：营养组合物套盒

该套盒包括如实施例2中所述的营养组合物a、b、c和d中的每一种，呈包装在单次量单元中的婴儿配方食品的形式，所述单次量单元诸如小袋、条状包装、泡罩包装或胶囊。

实施例4：对具有低和高fut2活性的健康母亲的母乳中fut2依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖的正常范围的临床试验

研究设计

进行开放、单中心、单组研究，其中包括50名受试者(母亲)并且持续4个月。仅包括健康志愿者。

所有受试者均符合以下所有入选标准：1.胎龄在37周至不超过42周之间，2.婴儿在出生后与v1之间入选，3.母亲不小于18岁且不大于40岁，4.母亲的孕前bmi在18.5-29之间。5.母亲愿意在产后头4个月进行母乳喂养。

表示下列一个或多个标准的受试者被排除参与研究：1.妊娠期糖尿病，2.hta>140/90，3.母亲是吸烟者且母乳喂养，4.预期不能符合研究程序的受试者。5.目前正在参与另一项临床试验，或者已经在本研究开始之前的最后12周内参与了另一项临床试验。

低聚糖样品制备和分析

对完全代表成熟乳的全母乳的10ml样品进行一式两份的低聚糖(2'岩藻糖基乳糖和乳糖-n-新四糖)分析，并且在婴儿出生后(产后)第30、60和120天进行，所述成熟乳对应于整个哺乳过程。

如下所述重复进行低聚糖分析。

样品制备

简而言之，将1ml充分混合的全母乳以1700×g离心20分钟。将约0.1ml脱脂乳上清液用水稀释10倍，并将0.01ml如此稀释的上清液作为样品进行分析。

分析

通过高效离子交换色谱仪(hpaec；美国加利福尼亚州的赛默公司旗下的戴安公司(thermo,dionex,ca))分析样品，该色谱仪装配有用于分离的carbopacpa1柱(美国加利福尼亚州的赛默公司旗下的戴安公司(thermo,dionex,ca))和用于检测碳水化合物的脉冲电流检测器(pad)。基于与真实标准的保留时间比较和样品(例如，岩藻糖苷酶、半乳糖苷酶)的酶促水解进行低聚糖鉴定。使用纯低聚糖的外标标准曲线进行低聚糖定量。

统计方法

数据收集点是婴儿出生后第30、60和120天。计算在母乳中测得的2’岩藻糖基乳糖(2’fl)和乳糖-n-新四糖含量的平均值和标准偏差，所述母乳被分组成具有(i)低fut2活性(≤0.2g/l2’fl)和(ii)高fut2活性(>0.2g/l2’fl)的样品。通过t检验评估两组之间2'fl和lnnt含量的统计学差异。

结果

研究结果示于图1a和图1b中。相应的数据汇总于表3中。

从图1a可以看出，来自显示出高fut2活性(如在乳中高于0.2g/l的2'岩藻糖基乳糖含量中所见)的母亲的母乳中的fut2-依赖性低聚糖的浓度随时间从约2.2g/l降低至约1.8g/l至约1.4g/l，这些数据分别在婴儿出生后第30、60和120天测定。被检测到具有小于0.2g/l的极低2'fl的乳样品被分组到低fut2活性组中。这些样品表明，如在婴儿出生后第30、60和120天测得，2'fl的平均含量从约0.03g/l降低至约0.01g/l。

从图1b可以看出，如在婴儿出生后第30、60和120天测得，来自具有高和低fut2活性的母亲的母乳中的乳糖-n-新四糖的浓度随时间推移而降低。此外，可以看出，来自具有高fut2活性的母亲的母乳中乳糖-n-新四糖的浓度在每个时间点(即，产后第30、60和120天)显著高于来自具有低fut2活性的母亲的母乳中的乳糖-n-新四糖浓度。

结论

这些结果表明了母乳中低fut2活性、低fut2-依赖性低聚糖含量和低含量的乳糖-n-新四糖之间的相关性。数据还证实，与来自低fut2活性母亲的母乳中的相应水平相比，高fut2活性不仅会导致母乳中fut2-依赖性低聚糖含量增加，还会使得乳糖-n-新四糖含量增加。

实施例5：对接受来自具有低和高fut2活性的健康母亲的母乳的婴儿的头围生长速率的临床试验

对于接受来自具有低fut2活性(≤0.2g/l2’fl)和高fut2活性(>0.2g/l2’fl)的健康母亲的母乳的婴儿，在其出生后第30、60和120天，测定头围(hc)生长速率。

如实施例4所述进行研究。此外，在婴儿头部的特定位置处使用测量带测量hc，其中头部具有最大周长，所述最大周长正好位于眉毛和耳朵之上并且位于头部的后部周围，其自颈部明显地递增。

数据收集点是婴儿出生后第30、60和120天。对于每个婴儿，按照如下方式计算头围(hc)生长速率：

[(出生后第30、60或120天的hc)-(出生时的hc)]/出生后天数(30、60或120天)

计算hc生长速率的平均值和标准偏差，并使用anova评估具有低和高fut2活性的组之间的每个时间点的hc生长速率的统计学显著性。

结果

研究结果示于图2中。

与食用了显示出低fut2活性(如在乳中0.2g/l或更低的2’岩藻糖基乳糖含量中所见)的母亲的母乳的婴儿相比，从显示出高fut2活性(如在乳中高于0.2g/l的2’岩藻糖基乳糖含量中所见)的母亲接受母乳的婴儿在30日龄时显示出更高的头围生长速率。在60和120日龄时，高fut2活性组(>0.2g/l2’fl)和低fut2活性组(≤0.2g/l2’fl)之间的头围生长速率几乎相等。

从实施例3和4获得的数据汇总于下表3中。

表3

表3显示了在产后头120天内被分组为低fut2活性组(2’fl<0.2g/l)和高fut2活性组(2’fl>0.2g/l)的母乳中2'岩藻糖基乳糖(2’fl)和乳糖-n-新四糖(lnnt)的平均含量和标准偏差(std)，以及在相同时间点处食用了此母乳的婴儿(n＝50)的头围生长速率(hcgr)。通过lnnt的t检验和hcgr的anova进行统计学检验。

结论

头围生长速率是所提出的脑追赶性生长和发育的代表。因此，这些结果表明，母乳中的高fut2活性以及因此增加的fut2-依赖性低聚糖和乳糖-n-新四糖的含量对婴儿的脑追赶性生长和脑发育具有特别高的影响，特别是在婴儿出生后特别早期。

实施例6：对具有低和高fut2活性的健康母亲的母乳中6’唾液酸乳糖(6’sl)和3’唾液酸乳糖(3’sl)的正常范围的临床试验

在婴儿出生后第30、60和120天，测定具有低fut2活性(≤0.2g/l2’fl)和高fut2活性(>0.2g/l2’fl)的健康母亲的母乳中的6’唾液酸乳糖(6’sl)和3’唾液酸乳糖(3’sl)。

如实施例4所述进行研究。

具体地讲，对完全代表成熟乳的全母乳的10ml样品进行一式两份的6’唾液酸乳糖(6’sl)和3’唾液酸乳糖(3’sl)分析，并且在婴儿出生后(产后)第30、60和120天进行，所述成熟乳对应于整个哺乳过程。

计算在母乳中测得的6’唾液酸乳糖(6’sl)和3’唾液酸乳糖(3’sl)含量的平均值和标准偏差，所述母乳被分组成具有(i)低fut2活性(≤0.2g/l2’fl)和(ii)高fut2活性(>0.2g/l2’fl)的样品。通过t检验评估两组之间2'fl和lnnt含量的统计学差异。

结果

研究结果示于图3a和图3b中。

从这些图可以看出，在婴儿出生后第30、60和120天，在高fut2活性(>0.2g/l2’fl)组和低fut2活性(≤0.2g/l2’fl)组之间未发现6’唾液酸乳糖(6’sl)和3’唾液酸乳糖(3’sl)含量的显著性差异。

如在婴儿出生后第30、60和120天测得，来自具有高和低fut2活性的母亲的母乳中6’唾液酸乳糖(6’sl)和3’唾液酸乳糖(3’sl)的浓度随时间推移而相等地降低。

结论

这些结果表明，母乳中高fut2活性或高fut2-依赖性低聚糖含量与其他母乳低聚糖(例如6’唾液酸乳糖(6’sl)和3’唾液酸乳糖(3’sl))的浓度之间均没有相关性。

因此，已经详细描述了本发明及其优点，应当理解，详细描述并不旨在限制本发明的范围。