用于生成卵清蛋白的方法和组合物与流程

交叉引用

本申请要求提交于2014年11月11日的第62/078,385号美国临时申请的权益，其通过引用而并入本文。

发明背景

消费者对注重健康的快餐选择的需求的不断增长使得近年来对蛋清的需求呈现历史新高。最近快餐连锁店推出的“健康选择”菜单项目的成功(例如，麦当劳的“蛋清喜悦”早餐三明治)以及日益增长的对冠心病与过量胆固醇摄入之间联系的认识已使得消费者规避胆固醇丰富的蛋黄而倾向于蛋白质相对较多、碳水化合物较少的蛋清制品。这一趋势使得全球干燥蛋白库存处于历史低位，同时液体蛋清的成本在2013年上涨了80％。随着2014年7月的价格与去年同期相比翻了一倍，并且达到2012年的三倍，预计这一趋势将持续下去。价格的急剧上涨尤其影响了蛋清是关键成分的成品食物的制造商(例如，烘焙混合物的制造者)。

鸡蛋蛋白质生产的无鸡蛋替代品旨在为最终承担生产商努力降低成本以及满足日益增长的全球需求的压力的产蛋鸡的恶劣条件提供解决方案。除了越来越有健康意识的消费者基础之外，人们普遍认识到母鸡所经受的大规模工业孵化场实践的不人道的状况，关于它们复杂社会行为的能力的科学共识以及工厂养殖母鸡相对于散养产蛋鸡的明显压力的证据都支持该认识。这种对工业孵化场不人道的方面的厌恶可能会促使人们接受并最终倾向于无动物成分蛋清替代品，而非工厂养殖的鸡蛋。

无动物成分鸡蛋蛋白质生产的潜力不依赖于产蛋鸡的生产能力，并且不受由广泛的疾病暴发或原料的短缺或价格上涨造成的市场不确定性的影响。此外，正如世界各地最近爆发的禽类传播疾病所提示的，禽类向人类传播疾病的风险因依赖于频繁人类接触和密集母鸡群体的维护的养殖实践而加剧。采用无动物方法进行鸡蛋蛋白质生产可被视为针对未来禽类向人类传播疾病的风险的保护措施。

亟需使生产和价格分别与世界范围的鸡蛋库存和价格变动的不确定性脱钩的、替代的无鸡蛋卵清蛋白生产方法。这样的方法对于例如希望将蛋清选择纳入其菜单的快餐连锁店以及基于蛋清的食品混合物的制造商将会是有吸引力的选择。

技术实现要素：

在一方面，本公开内容提供了生产卵清蛋白组合物的方法，所述方法包括：重组地表达两种或更多种卵清蛋白；以及混合所述两种或更多种卵清蛋白。在一些实施方案中，所述卵清蛋白可选自卵白蛋白、卵转铁蛋白(ovotransferrin)、卵类黏蛋白、g162mf167a卵类黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、溶菌酶、卵抑制剂(ovoinhibitor)、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白(ovostatin)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、抗生物素蛋白、卵白蛋白相关蛋白x、卵白蛋白相关蛋白y，以及它们的任意组合；诸如选自卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白、g162mf167a卵类黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、溶菌酶、卵抑制剂、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、抗生物素蛋白、卵白蛋白相关蛋白x、卵白蛋白相关蛋白y，以及它们的任意组合。在任一前述实施方案中，所述重组地表达所述两种或更多种卵清蛋白可在一个或多个宿主细胞中进行。在任一前述实施方案中，所述方法可进一步包括从所述一个或多个宿主细胞分泌所述两种或更多种卵清蛋白。在任一前述实施方案中，所述重组地表达所述两种或更多种卵清蛋白可采用无细胞蛋白质合成进行。在任一前述实施方案中，所述方法可进一步包括向所述卵清蛋白组合物中添加食品添加剂。在任一前述实施方案中，所述方法可进一步包括对所述卵清蛋白组合物进行脱糖、稳定化或从中去除葡萄糖。在任一前述实施方案中，所述方法可进一步包括对所述卵清蛋白组合物进行巴氏灭菌或超巴氏灭菌。在任一前述实施方案中，所述方法可进一步包括干燥所述卵清蛋白组合物。在任一前述实施方案中，所述方法可进一步包括酶促地、化学地或机械地消化所述两种或更多种卵清蛋白中的一种或多种。

在一方面，本公开内容提供了包含一种或多种重组卵清蛋白或其片段的经加工的可消费产品。在一些实施方案中，所述一种或多种卵清蛋白可选自卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白、g162mf167a卵类黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、溶菌酶、卵抑制剂、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、抗生物素蛋白、卵白蛋白相关蛋白x、卵白蛋白相关蛋白y，以及它们的任意组合；诸如选自卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白、g162mf167a卵类黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、溶菌酶、卵抑制剂、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、抗生物素蛋白、卵白蛋白相关蛋白x、卵白蛋白相关蛋白y，以及它们的任意组合。在任一前述实施方案中，所述经加工的可消费产品可包含两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种、五种或更多种或者六种或更多种卵清蛋白，或它们的片段。在任一前述实施方案中，所述经加工的可消费产品可缺少一种或多种、两种或更多种、三种或更多种、五种或更多种、十种或更多种或者二十种或更多种卵清蛋白。在任一前述实施方案中，所述经加工的可消费产品可缺少卵类黏蛋白。在任一前述实施方案中，所述经加工的可消费产品可缺少一种或多种、两种或更多种、三种或更多种、五种或更多种、十种或更多种或者二十种或更多种卵黄蛋白。在任一前述实施方案中，所述经加工的可消费产品可选自食物产品、饮料产品、膳食补充剂、食品添加剂、药物产品、卫生产品及它们的任意组合，诸如选自食物产品和饮料产品。

在一方面，本公开内容提供了生产可消费产品的方法，所述方法包括：重组地表达一种或多种卵清蛋白；以及将所述一种或多种卵清蛋白与一种或多种成分混合以产生可消费产品。在一些实施方案中，所述一种或多种成分可包括食品添加剂。在任一前述实施方案中，所述一种或多种成分可包括卵清蛋白。在任一前述实施方案中，所述一种或多种成分可包括重组卵清蛋白。在任一前述实施方案中，所述一种或多种成分可以不包括卵清蛋白。在任一前述实施方案中，所述一种或多种卵清蛋白可包括两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种或者五种或更多种卵清蛋白。

在一方面，本公开内容提供了用于生产卵清蛋白或其片段的方法，所述方法包括：在宿主细胞中重组地表达所述卵清蛋白或其片段，其中所述宿主细胞可包含编码所述卵清蛋白或其片段的多核苷酸，并且其中所述卵清蛋白可选自卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂，以及它们的任意组合，诸如选自卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂，以及它们的任意组合。在一些实施方案中，所述方法可进一步包括从所述宿主细胞分泌所述卵清蛋白或其片段。在任一前述实施方案中，所述方法可进一步包括纯化所述卵清蛋白或其片段。在任一前述实施方案中，所述方法可进一步包括在所述宿主细胞中重组地表达第二卵清蛋白或其片段。在任一前述实施方案中，所述片段可包括所述卵清蛋白的至少10％、20％、30％、40％或50％。

在一方面，本公开内容提供了用于生产两种或更多种卵清蛋白或其片段的方法，所述方法包括在宿主细胞中重组地表达所述两种或更多种卵清蛋白或其片段。在一些实施方案中，所述宿主细胞可包含编码所述两种或更多种卵清蛋白或其片段的一种或多种多核苷酸。在任一前述实施方案中，所述方法可进一步包括从所述宿主细胞分泌所述两种或更多种卵清蛋白或其片段。在任一前述实施方案中，所述方法可进一步包括纯化所述两种或更多种卵清蛋白或其片段。在任一前述实施方案中，所述两种或更多种卵清蛋白可选自卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白、g162mf167a卵类黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、溶菌酶、卵抑制剂、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、抗生物素蛋白、卵白蛋白相关蛋白x、卵白蛋白相关蛋白y，以及它们的任意组合；诸如选自卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白、g162mf167a卵类黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、溶菌酶、卵抑制剂、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、抗生物素蛋白、卵白蛋白相关蛋白x、卵白蛋白相关蛋白y，以及它们的任意组合。

在一方面，本公开内容提供了分离的重组卵清蛋白，其选自卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂，以及它们的任意组合，诸如选自卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂，以及它们的任意组合。在一些实施方案中，所述分离的重组卵清蛋白可具有与蛋清中的卵清蛋白不同的糖基化、乙酰化或磷酸化模式。在任一前述实施方案中，所述分离的重组卵清蛋白可具有与蛋清中的卵清蛋白不同的解链温度，如相对于蛋清中的卵清蛋白更高或更低的解链温度。在任一前述实施方案中，所述分离的重组卵清蛋白可包含相对于蛋清中的卵清蛋白的一个或多个氨基酸插入、缺失或置换。在任一前述实施方案中，所述分离的重组卵清蛋白可选自seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13，以及它们的任意组合。

在一方面，本公开内容提供了包含色氨酸的分离的突变卵类黏蛋白。在一些实施方案中，可重组地表达所述分离的突变卵类黏蛋白。在任一前述实施方案中，所述分离的突变卵类黏蛋白可为完整的蛋白质。在任一前述实施方案中，所述分离的突变卵类黏蛋白在与seqidno:3最佳比对时可包含相对于seqidno:3的一个或多个、两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个或者六个或更多个氨基酸插入或置换。在任一前述实施方案中，所述分离的突变卵类黏蛋白可包含一个或多个氨基酸置换，其中所述氨基酸置换可包括一个或多个、两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个或者六个或更多个酪氨酸至色氨酸的置换。在任一前述实施方案中，所述分离的突变卵类黏蛋白在与seqidno:3最佳比对时可包含相对于seqidno:3的至多四个、至多五个、至多六个或至多十个氨基酸插入或置换。在任一前述实施方案中，所述分离的突变卵类黏蛋白可包含一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或者四个或更多个色氨酸残基。在任一前述实施方案中，所述分离的突变卵类黏蛋白可在n末端或c末端包含一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或者四个或更多个色氨酸残基。在任一前述实施方案中，所述分离的突变卵类黏蛋白在与seqidno:3最佳比对时相对于seqidno:3可包含在位置162处的甲硫氨酸和在位置167位置处的丙氨酸。在任一前述实施方案中，所述分离的突变卵类黏蛋白可具有相对于野生型卵类黏蛋白降低的变应原性。在任一前述实施方案中，所述分离的突变卵类黏蛋白可具有相对于野生型卵类黏蛋白增强的消化性。

在一方面，本公开内容提供了一种卵清蛋白组合物，其包含本文所述的分离的重组卵清蛋白或分离的突变卵类黏蛋白；以及一种或多种卵清蛋白。在一些实施方案中，可重组地表达所述一种或多种卵清蛋白。

在一方面，本公开内容提供了包含两种或更多种重组卵清蛋白的卵清蛋白组合物。

在一些实施方案中，对于本文所述的卵清蛋白组合物，所述两种或更多种重组卵清蛋白可选自卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白、g162mf167a卵类黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、溶菌酶、卵抑制剂、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、抗生物素蛋白、卵白蛋白相关蛋白x、卵白蛋白相关蛋白y，以及它们的任意组合；诸如选自卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白、g162mf167a卵类黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、溶菌酶、卵抑制剂、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、抗生物素蛋白、卵白蛋白相关蛋白x、卵白蛋白相关蛋白y，以及它们的任意组合。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可包含卵白蛋白。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可包含本文所述的分离的重组卵清蛋白。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可包含本文所述的分离的突变卵类黏蛋白。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白可具有来源于单个物种的序列。在任一前述实施方案中，所述物种可为家鸡(gallusgallusdomesticus)。在任一前述实施方案中，所述物种可以不是家鸡。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白可具有来源于超过一个物种的序列。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白可具有来源于禽类的序列，所述禽类选自家禽、飞禽、水禽、猎禽、鸡、鹌鹑、火鸡、鸭、鸵鸟、鹅、鸥、珍珠鸡、雉鸡、鸸鹋及它们的任意组合。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可包含三种或更多种、四种或更多种或者五种或更多种卵清蛋白。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可包含至多5种、至多10种、至多15种或至多20种卵清蛋白。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可进一步包含水。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可具有至多95％的水百分比。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可具有80％至95％的水百分比。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可包含按干重计至少90％的蛋白质。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可进一步包含食品添加剂。在任一前述实施方案中，所述食品添加剂可选自甜味剂、盐、碳水化合物及其任意组合。

在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可不含胆固醇。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可包含按干重计少于5％的脂肪。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可不含脂肪、饱和脂肪或反式脂肪。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可不含葡萄糖。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可不含一种或多种卵清蛋白，如卵类黏蛋白或黄素蛋白。在任一前述实施方案中，所述一种或多种卵清蛋白可选自tenp、簇蛋白、ch21、vmo-1、卵黄原蛋白、透明带c蛋白、bc型卵转铁蛋白、卵抑制剂前体、卵类黏蛋白前体、簇蛋白前体、hep21蛋白前体、卵糖蛋白前体、细胞外脂肪酸结合蛋白、细胞外脂肪酸结合蛋白前体、前列腺素d2syntmayhavee脑前体、标志物蛋白、卵黄原蛋白-1、卵黄原蛋白-2、卵黄原蛋白-2前体、卵黄原蛋白-3、核黄素结合蛋白、血红素结合蛋白、血清白蛋白前体、载脂蛋白d、卵分泌球蛋白(ovosecretoglobulin)、hep21、谷胱甘肽过氧化物酶3、脂质运载蛋白型前列腺素dsyntmayhavee/软骨发生相关脂质运载蛋白、脱辅基脂蛋白(apovitellenin)-1、dickkopf-相关蛋白3、鸡防御素-11(vmo-ii，β-防卫素-11)、血清白蛋白(α-卵黄蛋白)、鸡精子碱性蛋白(gallin)、分泌胰蛋白酶抑制剂、淋巴细胞抗原86、肌动蛋白、igμ链c区、巯基氧化酶1、组蛋白h4、血管生成素样蛋白3、泛蛋白、禽蛋壳基质蛋白质(ovocalyxin)-32、聚免疫球蛋白受体、肽基-脯氨酰-顺/反异构酶b、氨肽酶ey、多效营养因子(pleiotrophin)、中期因子(midkine)、肾素/肾素原受体、timp-2、timp-3、组蛋白h2b变体、igλ链、famc3蛋白、α-烯醇化酶、60s酸性核糖体蛋白p1、腱生蛋白/生腱蛋白、cepu-1、含硒蛋白质、延长因子1-α1、附睾分泌蛋白、e1、14-3-3蛋白ζ(ζ)、嗅介蛋白样蛋白3、谷胱甘肽s-转移酶2、β-2-微球蛋白、rgd-cap、载脂蛋白b、高尔基体蛋白1、cochlin、蛋白酶体亚单位α型-7、载脂蛋白a-i、真核起始因子4a-ii、aspic/软骨酸性蛋白1、磷酸丙糖异构酶、蛋白酶体亚单位α型、igλ链c-区、前胶原-赖氨酸2-氧代戊二酸5-双加氧酶1、adp-核糖基化因子5、钙调蛋白、蛋白质二硫键异构酶、膜联蛋白i、延长因子2、过氧化物还原酶-1、hsp70、蛋白质二硫键异构酶a3、钙网蛋白、40s核糖体蛋白sa/层粘连蛋白受体1、α-辅肌动蛋白-4、肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体、维生素d-结合蛋白、脑信号蛋白-3c、内质蛋白、过氧化氢酶、肝α-淀粉酶、过渡性eratp酶、钙粘蛋白-1、血管紧张素转换酶、骨形态发生蛋白1、鸟嘌呤核苷酸结合蛋白亚基β2-样1、组氨酸氨裂解酶、膜联蛋白a2、β-连环蛋白、rab-gdp解离抑制物、核纤层蛋白-a、ovocleidin-116、氨肽酶、hsp90-α、缺氧上调蛋白1、热休克同源蛋白hsp90β、atp柠檬酸合酶、肌球蛋白-9，以及它们的组合。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可缺少两种或更多种、三种或更多种、五种或更多种、十种或更多种或者二十种或更多种卵清蛋白。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物不是鸡蛋、蛋清或蛋黄。

在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可进一步包含一种或多种卵清蛋白，该一种或多种卵清蛋白选自tenp、簇蛋白、ch21、vmo-1、卵黄原蛋白、透明带c蛋白、bc型卵转铁蛋白、卵抑制剂前体、卵类黏蛋白前体、簇蛋白前体、hep21蛋白前体、卵糖蛋白前体、细胞外脂肪酸结合蛋白、细胞外脂肪酸结合蛋白前体、前列腺素d2syntmayhavee脑前体、标志物蛋白、卵黄原蛋白-1、卵黄原蛋白-2、卵黄原蛋白-2前体、卵黄原蛋白-3、核黄素结合蛋白、血红素结合蛋白、血清白蛋白前体、载脂蛋白d、卵分泌球蛋白、hep21、谷胱甘肽过氧化物酶3、脂质运载蛋白型前列腺素d合酶/软骨发生相关脂质运载蛋白、脱辅基脂蛋白-1、dickkopf-相关蛋白3、鸡防御素-11(vmo-ii，β-防卫素-11)、血清白蛋白(α-卵黄蛋白)、鸡精子碱性蛋白、分泌胰蛋白酶抑制剂、淋巴细胞抗原86、肌动蛋白、igμ链c区、巯基氧化酶1、组蛋白h4、血管生成素样蛋白3、泛蛋白、禽蛋壳基质蛋白质-32、聚免疫球蛋白受体、肽基-脯氨酰-顺/反异构酶b、氨肽酶ey、多效营养因子、中期因子、肾素/肾素原受体、timp-2、timp-3、组蛋白h2b变体、igλ链、famc3蛋白、α-烯醇化酶、60s酸性核糖体蛋白p1、腱生蛋白/生腱蛋白、cepu-1、含硒蛋白质、延长因子1-α1、附睾分泌蛋白、e1、14-3-3蛋白ζ(ζ)、嗅介蛋白样蛋白3、谷胱甘肽s-转移酶2、β-2-微球蛋白、rgd-cap、载脂蛋白b、高尔基体蛋白1、cochlin、蛋白酶体亚单位α型-7、载脂蛋白a-i、真核起始因子4a-ii、aspic/软骨酸性蛋白1、磷酸丙糖异构酶、蛋白酶体亚单位α型、igλ链c-区、前胶原-赖氨酸2-氧代戊二酸5-双加氧酶1、adp-核糖基化因子5、钙调蛋白、蛋白质二硫键异构酶、膜联蛋白i、延长因子2、过氧化物还原酶-1、hsp70、蛋白质二硫键异构酶a3、钙网蛋白、40s核糖体蛋白sa/层粘连蛋白受体1、α-辅肌动蛋白-4、肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体、维生素d-结合蛋白、脑信号蛋白-3c、内质蛋白、过氧化氢酶、肝α-淀粉酶、过渡性eratp酶、钙粘蛋白-1、血管紧张素转换酶、骨形态发生蛋白1、鸟嘌呤核苷酸结合蛋白亚基β2-样1、组氨酸氨裂解酶、膜联蛋白a2、β-连环蛋白、rab-gdp解离抑制物、核纤层蛋白-a、ovocleidin-116、氨肽酶、hsp90-α、缺氧上调蛋白1、热休克同源蛋白hsp90β、atp柠檬酸合酶，以及肌球蛋白-9，以及它们的组合。

在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可具有6至10范围内的ph。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可具有10mm至60mm，如30mm至60mm范围内的泡沫高度。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可具有至少30mm的泡沫高度。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物的泡沫高度可大于蛋清的泡沫高度。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物在搅打后30分钟时可具有至多10mm或至多5mm的泡沫渗出(seep)。在任一前述实施方案中，在搅打后30分钟时，所述卵清蛋白组合物的泡沫渗出可小于蛋清的泡沫渗出。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可具有30g至100g，如40g至100g范围内的泡沫强度。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物的泡沫强度可大于蛋清的泡沫强度。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可具有100g至1500g、500g至1500g或700g至1500g范围内的凝胶强度。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物的凝胶强度可大于蛋清的凝胶强度。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可具有至少一个月、至少两个月、至少三个月或至少六个月的保质期。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可具有相对于蛋清降低的变应原性。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可为液体。在任一前述实施方案中，所述卵清蛋白组合物可为固体或粉末。在任一前述实施方案中，可以冷冻所述卵清蛋白组合物。

在一方面，本公开内容提供了编码本文所述的分离的重组卵清蛋白或分离的突变卵类黏蛋白的多核苷酸。在一些实施方案中，所述多核苷酸可以是密码子优化的。在任一前述实施方案中，所述多核苷酸可为dna或rna。在任一前述实施方案中，所述多核苷酸可进一步编码信号肽。在任一前述实施方案中，所述信号肽可在所述卵清蛋白或多肽的n-末端。在任一前述实施方案中，所述信号肽可选自酸性磷酸酶、白蛋白、碱性细胞外蛋白酶、α-交配因子、淀粉酶、β-酪蛋白、碳水化合物结合模块家族21-淀粉结合结构域、羧肽酶y、纤维二糖水解酶i、二肽基蛋白酶、葡糖淀粉酶、热休克蛋白、疏水蛋白、菊粉酶、转化酶、杀伤蛋白或杀伤毒素、富亮氨酸的人工信号肽cly-l8、溶菌酶、植物凝集素、麦芽糖结合蛋白、p因子、巴斯德毕赤酵母(pichiapastoris)dse、巴斯德毕赤酵母exg、巴斯德毕赤酵母pir1、巴斯德毕赤酵母scw、pir4，以及它们的任意组合。在任一前述实施方案中，所述信号肽可选自seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、seqidno:30、seqidno:31、seqidno:32、seqidno:33、seqidno:34、seqidno:35、seqidno:36、seqidno:37、seqidno:38、seqidno:39、seqidno:40、seqidno:41、seqidno:42、seqidno:43、seqidno:44、seqidno:45、seqidno:46、seqidno:47、seqidno:48、seqidno:49、seqidno:50、seqidno:51、seqidno:52、seqidno:53、seqidno:54、seqidno:55、seqidno:56、seqidno:57、seqidno:58、seqidno:59、seqidno:60、seqidno:61、seqidno:62、seqidno:63、seqidno:64、seqidno:65、seqidno:66、seqidno:67、seqidno:68、seqidno:69、seqidno:70、seqidno:71，以及它们的任意组合。在任一前述实施方案中，所述信号肽的长度可为至多100个氨基酸。在任一前述实施方案中，所述多核苷酸可进一步编码信号肽酶切割或识别位点。在任一前述实施方案中，所述信号肽酶可选自kex2、krp1、肠激酶(ekt)、凝血酶、因子xa(fxa)、烟草蚀纹病毒(tev)、3cprescission，以及它们的任意组合。

在一方面，本公开内容提供了包含本文所述的多核苷酸的表达载体。在一些实施方案中，所述表达载体可进一步包含启动子。在任一前述实施方案中，所述启动子可为组成型启动子、诱导型启动子或杂合启动子。在任一前述实施方案中，所述启动子可选自acu-5、adh1+、醇脱氢酶(adh1、adh2、adh4)、ahsb4m、ainv、alca、α-淀粉酶、交替氧化酶(aod)、醇氧化酶(aox1)、醇氧化酶2(aox2)、axdh、b2、camv、纤维二糖水解酶i(cbh1)、ccg-1、cdna1、细胞丝多肽(cfp)、cpc-2、ctr4+、cup1、二羟基丙酮合酶(das)、烯醇化酶(eno、eno1)、甲醛脱氢酶(fld1)、fmd、甲醛脱氢酶(fmdh)、g1、g6、gaa、gal1、gal2、gal3、gal4、gal5、gal6、gal7、gal8、gal9、gal10、gcw14、gdha、gla-1、α-葡糖淀粉酶(glaa)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gpda、gap、gapdh)、磷酸甘油酸变位酶(gpm1)、甘油激酶(gut1)、hsp82、invl+、异柠檬酸裂合酶(icl1)、乙酰羟酸异构体还原酶(ilv5)、kar2、kex2、β-半乳糖苷酶(lac4)、leu2、melo、met3、甲醇氧化酶(mox)、nmt1、nsp、pcbc、pet9、过氧化物酶体生成蛋白8(pex8)、磷酸甘油酸激酶(pgk、pgk1)、pho1、pho5、pho89、磷脂酰肌醇合酶(pis1)、pyk1、丙酮酸激酶(pki1)、rps7、山梨醇脱氢酶(sdh)、3-磷酸丝氨酸氨基转移酶(ser1)、ssa4、sv40、tef、翻译延伸因子1α(tef1)、thi11、高丝氨酸激酶(thr1)、tpi、tps1、磷酸丙糖异构酶(tpi1)、xrp2、ypt1，以及它们的任意组合。在任一前述实施方案中，所述表达载体可进一步包含营养缺陷型标志物。在任一前述实施方案中，所述营养缺陷型标志物可选自ade1、arg4、his4、ura3、met2及其任意组合。在任一前述实施方案中，所述表达载体可进一步包含选择性标记。在任一前述实施方案中，所述选择性标记可为抗性基因。在任一前述实施方案中，所述抗性基因可赋予对吉欧霉素(zeocin)、氨苄西林、杀稻瘟素、卡那霉素、nurseothricin、氯霉素、四环素、三氯生、更昔洛韦及其任意组合的抗性。在任一前述实施方案中，所述表达载体可包含质粒。

在一方面，本公开内容提供了经转化以表达一种或多种异源卵清蛋白的宿主细胞，其中所述宿主细胞不选自大肠杆菌(escherichiacoli)、巴斯德毕赤酵母、水稻、黑曲霉(aspergillusniger)、米曲霉(aspergillusoryzae)、产黄头孢霉(acremoniumchrysogenum)、酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)、昆虫、小鼠、玉米、pseudozyma、烟草、斑马鱼，以及它们的任意组合。

在一方面，本公开内容提供了经转化以表达一种或多种异源卵清蛋白的宿主细胞，其中所述一种或多种卵清蛋白不选自卵白蛋白、卵转铁蛋白、溶菌酶、卵固蛋白、卵类黏蛋白、卵抑制剂、抗生物素蛋白，以及它们的组合。

在一方面，本公开内容提供了包含本文所述的多核苷酸的宿主细胞。

在一方面，本公开内容提供了包含本文所述的表达载体的宿主细胞。在一些实施方案中，所述表达载体可以是基因组整合的。在任一前述实施方案中，所述宿主细胞可包含该表达载体的多个拷贝。

在任一前述实施方案中，所述宿主细胞可选自细菌、真菌、植物、昆虫、哺乳动物及其任意组合。在任一前述实施方案中，所述真菌可为酵母或丝状真菌。在任一前述实施方案中，所述酵母可选自arxulaspp.、arxulaadeninivorans、克鲁维酵母属的种(kluyveromycesspp.)、乳酸克鲁维酵母(kluyveromyceslactis)、毕赤酵母属的种(pichiaspp.)、安格斯毕赤酵母(pichiaangusta)、巴斯德毕赤酵母、酵母属的种(saccharomycesspp.)、酿酒酵母、裂殖酵母属的种(schizosaccharomycesspp.)、粟酒裂殖酵母(schizosaccharomycespombe)、耶氏酵母属的种(yarrowiaspp.)，以及它们的任意组合。在任一前述实施方案中，所述真菌可选自蘑菇属的种(agaricusspp.)、二孢蘑菇(agaricusbisporus)、曲霉属的种(aspergillusspp.)、泡盛曲霉(aspergillusawamori)、烟曲霉(aspergillusfumigatus)、构巢曲霉(aspergillusnidulans)、黑曲霉(aspergillusniger)、米曲霉(aspergillusoryzae)、刺盘孢属的种(colletotrichumspp.)、盘长孢状刺盘孢(colletotrichumgloeosporiodes)、内座壳属的种(endothiaspp.)、寄生内座壳(endothiaparasitica)、镰孢属的种(fusariumspp.)、禾本科镰孢(fusariumgraminearum)、腐皮镰孢(fusariumsolani)、毛霉属的种(mucorspp.)、米黑毛霉(mucormiehei)、微小毛霉(mucorpusillus)、毁丝霉属的种(myceliophthoraspp.)、嗜热毁丝霉(myceliophthorathermophila)、脉孢菌属的种(neurosporaspp.)、粗糙脉孢菌(neurosporacrassa)、青霉属的种(penicilliumspp.)、沙门柏干酪青霉(penicilliumcamemberti)、变灰青霉(penicilliumcanescens)、产黄青霉(penicilliumchrysogenum)、埃默森青霉(踝节菌)(penicillium(talaromyces)emersonii)、绳状青霉(penicilliumfuniculosum)、产紫青霉(penicilliumpurpurogenum)、娄地青霉(penicilliumroqueforti)、侧耳属的种(pleurotusspp.)、糙皮侧耳(pleurotusostreatus)、根毛霉属的种(rhizomucorspp.)、米黑根毛霉(rhizomucormiehei)、微小根毛霉(rhizomucorpusillus)、根霉属的种(rhizopusspp.)、少根根霉(rhizopusarrhizus)、少孢根霉(rhizopusoligosporus)、米根霉(rhizopusoryzae)、木霉属的种(trichodermaspp.)、深绿木霉(trichodermaaltroviride)、里氏木霉(trichodermareesei)、绿木霉(trichodermavireus)，以及它们的任意组合。在任一前述实施方案中，所述宿主细胞可选自米曲霉、枯草杆菌(bacillussubtilis)、大肠杆菌、嗜热毁丝霉、粗糙脉孢菌、巴斯德毕赤酵母以及它们的任意组合。在任一前述实施方案中，所述宿主细胞可被美国食品与药品管理局批准为通常认为是安全的。在任一前述实施方案中，所述宿主细胞可以是营养缺陷型的。

在一方面，本公开内容提供了包含本文所述的宿主细胞的细胞培养物。

在一方面，本公开内容提供了用于制备可消费产品的方法，所述方法包括用本文所述的分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物替换一部分基于鸡蛋的成分。

在一方面，本公开内容提供了用于制备可消费产品的方法，所述方法包括添加本文所述的分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物。

在一方面，本公开内容提供了使用重组卵清蛋白作为加工助剂来制备经加工的可消费产品的方法。在一些实施方案中，所述方法可进一步包括去除所述重组卵清蛋白。

在一方面，本公开内容提供了使用本文所述的分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物作为加工助剂来制备经加工的可消费产品的方法。在一些实施方案中，所述方法可进一步包括去除所述分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物。

在任一前述实施方案中，所述加工助剂充当乳化剂、结合剂、膨松剂、增稠剂、保湿剂、粘合剂、褐变剂、澄清剂、胶凝剂、结晶控制剂、湿润剂、嫩化剂、充气剂、结构改善剂、凝结剂、涂层剂、着色剂、光泽剂、调味剂、冷冻剂、隔离剂、口感改善剂、ph缓冲剂、保质期延长剂、防腐剂、抗微生物剂(例如，抗细菌剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗寄生虫剂)、食品腐败抑制剂、苹果乳酸发酵抑制剂、质地改进剂、鸡蛋替代物，或它们的任意组合。

在一方面，本公开内容提供了包含本文所述的分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物的可消费产品。在一些实施方案中，所述可消费产品可选自食物产品、饮料产品、药物产品、卫生产品，以及它们的任意组合。

在一方面，本公开内容提供了使用重组卵清蛋白作为乳化剂、结合剂、膨松剂、增稠剂、保湿剂、粘合剂、褐变剂、澄清剂、胶凝剂、结晶控制剂、湿润剂、嫩化剂、充气剂、结构改善剂、凝结剂、涂层剂、着色剂、光泽剂、调味剂、冷冻剂、隔离剂、口感改善剂、ph缓冲剂、保质期延长剂、防腐剂、抗微生物剂(例如，抗细菌剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗寄生虫剂)、食品腐败抑制剂、苹果乳酸发酵抑制剂、质地改进剂、鸡蛋替代物或它们的任意组合的方法。

在一方面，本公开内容提供了使用本文所述的分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物作为乳化剂、结合剂、膨松剂、增稠剂、保湿剂、粘合剂、褐变剂、澄清剂、胶凝剂、结晶控制剂、湿润剂、嫩化剂、充气剂、结构改善剂、凝结剂、涂层剂、着色剂、光泽剂、调味剂、冷冻剂、隔离剂、口感改善剂、ph缓冲剂、保质期延长剂、防腐剂、抗微生物剂(例如，抗细菌剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗寄生虫剂)、食品腐败抑制剂、苹果乳酸发酵抑制剂、质地改进剂、鸡蛋替代物或它们的任意组合的方法。

在一方面，本公开内容提供了用于诊断食物变态反应的方法，所述方法包括向受试者引入本文所述的分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物。在一些实施方案中，可采用皮肤点刺试验、血液检查或口服食物激发进行引入。

在一方面，本公开内容提供了用于治疗食物变态反应的方法，所述方法包括用本文所述的分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物替换蛋清变应原，或通过食用本文所述的分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物来提高受试者对蛋清变应原的耐受性。

在一方面，本公开内容提供了用于抑制酒中的苹果乳酸发酵的方法，所述方法包括向酒提供蛋清溶菌酶。在一些实施方案中，可重组地表达所述蛋清溶菌酶。

援引并入

本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用而并入本文，其程度如同特别地和单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请均通过引用而并入。

附图说明

本发明的新特征在随附的权利要求中具体阐述。通过参考以下对在其中利用到本发明原理的说明性实施方案加以阐述的详细描述和附图，将会获得对本发明的特征和优点的更好理解，附图中：

图1为卵白蛋白的氨基酸序列(seqidno:1)。

图2为卵转铁蛋白的氨基酸序列(seqidno:2)。

图3为卵类黏蛋白的氨基酸序列(seqidno:3)。

图4为g162mf167a卵类黏蛋白的氨基酸序列(seqidno:4)。

图5为卵球蛋白g2的氨基酸序列(seqidno:5)。

图6为卵球蛋白g3的氨基酸序列(seqidno:6)。

图7为α-卵黏蛋白的氨基酸序列(seqidno:7)。

图8为β-卵黏蛋白的部分氨基酸序列(seqidno:8)。

图9为溶菌酶的氨基酸序列(seqidno:9)。

图10为卵抑制剂的氨基酸序列(seqidno:10)。

图11为卵固蛋白的氨基酸序列(seqidno:11)。

图12为卵白蛋白相关蛋白x的氨基酸序列(seqidno:12)。

图13为卵白蛋白相关蛋白y的氨基酸序列(seqidno:13)。

图14示出了根据实施例的卵球蛋白表达载体的示意图。

图15示出了根据实施例的溶菌酶表达载体的示意图。

图16示出了根据实施例的具有蛋白梯的重组卵白蛋白的凝胶图像。

图17示出了根据实施例的具有蛋白梯的重组卵类黏蛋白的凝胶图像。

图18示出了根据实施例的卵清蛋白组合物和蛋清的泡沫强度的示意图。

具体实施方式

术语“约”或“大约”指在由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受的误差范围内，该可接受的误差范围将部分地取决于该值是如何测量或确定的，例如，测量系统的极限。例如，根据本领域的实践，“约”可指在1或超过1的标准偏差内。或者，“约”可指给定值的至多20％、至多15％、至多10％、至多5％或至多1％的范围。或者，特别就生物系统或过程而言，该术语可指数值的数量级，优选在其5倍以内，更优选在其2倍以内。本申请和权利要求书中描述特定值时，除非另有说明，否则应假定术语“约”是指在该特定值的可接受的误差范围内。

术语“多核苷酸”、“核苷酸”、“核苷酸序列”、“核酸”和“寡核苷酸”可互换使用。它们是指任何长度的核苷酸(包括脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸)的聚合形式，或其类似物。多核苷酸可具有任何三维结构，并且可执行任何已知或未知的功能。以下是多核苷酸的非限制性实例：基因或基因片段的编码区或非编码区、从连锁分析定义的基因座(多个基团座)、外显子、内含子、信使rna(mrna)、转移rna(trna)、核糖体rna(rrna)、短干扰rna(sirna)、短发夹rna(shrna)、微rna(mirna)、核酶、cdna、重组多核苷酸、支链多核苷酸、质粒、表达载体、任意序列的分离的dna、任意序列的分离的rna、核酸探针以及引物。多核苷酸可包含一个或多个修饰的核苷酸，如甲基化核苷酸和核苷酸类似物。如果存在对核苷酸结构的修饰，则其可在聚合物组装之前或之后赋予。核苷酸序列可被非核苷酸组分中断。多核苷酸可在聚合后进一步修饰，如通过与可检测标记缀合。

“表达”是指多核苷酸从dna模板转录(如转录成mrna或其他rna转录物)的过程，和/或所转录的mrna随后被翻译成肽、多肽或蛋白质的过程。转录物和编码的多肽可统称为“基因产物”。如果多核苷酸来源于基因组dna，则表达可包括在真核细胞中mrna的剪接。

术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用以指代任何长度的氨基酸聚合物。聚合物可以是直链或支链的，可包含修饰的氨基酸，并且可被非氨基酸中断。该术语还包括已通过例如二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作(如与可检测标记缀合)修饰的氨基酸聚合物。

如本文所用的，术语“氨基酸”包括天然氨基酸和/或非天然氨基酸或合成氨基酸，包括甘氨酸、半胱氨酸，以及d或l光学异构体，以及氨基酸类似物和拟肽。在一些实施方案中，氨基酸是蛋白原性的、天然的、标准的、非标准的、非规范的、必需的、非必需的或非天然的氨基酸。在一些实施方案中，氨基酸具有带正电荷的侧链、带负电荷的侧链、极性不带电荷的侧链、非极性侧链、疏水侧链、亲水侧链、脂族侧链、芳族侧链、环状侧链、非环状侧链、碱性侧链或酸性侧链。在一些实施方案中，氨基酸具有亲核或亲电侧链。

“对照”是指出于比较目的而用于实验的替代受试者或样品。在一些实施方案中，对照包含来自鸡蛋的蛋清。

术语“确定”、“测量”、“评价”、“评估”、“测定”和“分析”能够在本文中可互换使用以指代任何形式的测量，并且包括确定元素是否存在(例如，检测)。这些术语可包括定量和/或定性的确定。评估可以是相对的或绝对的。“检测……的存在”可包括确定存在的物质的量并且/或者确定它是否存在。

“互补性”是指核酸通过传统的watson-crick或其他非传统类型与另一种核酸序列形成氢键的能力。互补性百分比表示核酸分子中可与第二核酸序列形成氢键(例如，watson-crick碱基配对)的残基百分比(例如，10个中有5个、6个、7个、8个、9个、10个分别为50％、60％、70％、80％、90％和100％的互补性)。“完美互补的”是指核酸序列的所有连续残基将会与第二核酸序列中的相同数目的连续残基形成氢键。如本文所用的，“基本上互补的”是指在8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50个或更多个核苷酸的区域内至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的互补程度，或者指两个核酸在严格条件下杂交。

可通过任何合适的比对算法来测量序列同一性(如出于评估互补性百分比的目的)，该比对算法包括但不限于needleman-wunsch算法(参见，例如，可在www.ebi.ac.uk/tools/psa/emboss_needle/nucleotide.html处获得的任选地具有默认设置的embossneedle比对器)、blast算法(参见，例如，可在blast.ncbi.nlm.nih.gov/blast.cgi处获得的任选地具有默认设置的blast算法工具)以及smith-waterman算法(参见，例如，可在www.ebi.ac.uk/tools/psa/emboss_water/nucleotide.html处获得的任选地具有默认设置的embosswater比对器)。可采用选定算法的包括默认参数在内的任何适宜参数来评估最佳比对。

通常，“序列同一性”是指两个多核苷酸或多肽序列分别的确切核苷酸与核苷酸对应关系或氨基酸与氨基酸对应关系。通常，用于确定序列同一性的技术包括确定多核苷酸的核苷酸序列和/或确定由其编码的氨基酸序列，并将这些序列与第二核苷酸或氨基酸序列进行比较。两个或更多个序列(多核苷酸或氨基酸)的比较可通过确定其“同一性百分比”来进行。相对于可为较长分子(例如，多核苷酸或多肽)内的一个序列的参考序列(例如，核酸或氨基酸序列)的同一性百分比可计算为两个最佳比对序列之间准确匹配的数目除以参考序列的长度乘以100。同一性百分还可通过例如使用先进的blast计算机程序比较序列信息来确定，包括可从国立卫生研究院(nationalinstitutesofhealth)获得的2.2.9版。blast程序基于karlin和altschul,proc.natl.acad.sci.usa87:2264-2268(1990)的比对方法，并在altschul,等人,j.mol.biol.215:403-410(1990)；karlin和altschul,proc.natl.acad.sci.usa90:5873-5877(1993)；以及altschul等人,nucleicacidsres.25:3389-3402(1997)中讨论。简言之，blast程序将同一性定义为相同比对符号(例如，核苷酸或氨基酸)的数目除以两个序列中较短序列的符号的总数。可将该程序用于确定在被比较的序列的总长度上的同一性百分比。提供默认参数以优化通过例如blastp程序进行的短查询序列搜索。如通过wootton和federhen,computersandchemistry17:149-163(1993)的seg程序确定的，该程序还允许将seg过滤器用于屏蔽查询序列的区段。期望的序列同一性程度的范围为约80％至100％，以及之间的整数数值。通常，公开的序列与要求保护的序列之间的同一性百分比为至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％。通常，准确匹配表示在参考序列的长度上100％的同一性。

术语“有效量”或“治疗有效量”是指足以实现如下文限定的预期应用(包括但不限于疾病治疗)的本文所述化合物的量。治疗有效量可根据预期治疗应用(体内)或所治疗的受试者和疾病状况，例如，受试者的体重和年龄、疾病状况的严重性、给药方式等而变化，这可由本领域普通技术人员容易地确定。该术语还适用于将会诱导靶细胞中的特定响应例如血小板粘附和/或细胞迁移减少的剂量。具体剂量将根据所选的特定化合物、待遵循的给药方案、是否与其他化合物联合施用、施用的时间选择、所施用至的组织以及携带其的物理递送系统而变化。

术语“哺乳动物”包括人，以及家养动物如实验室动物和家庭宠物(例如，猫、狗、猪、牛、绵羊、山羊、马、兔)和非家养动物如野生动物等。哺乳动物包括但不限于鼠、猿、人、农场动物、运动动物、驯养动物和宠物。体内获得或体外培养的生物实体的组织、细胞及其后代也包括在内。

术语“禽类”包括驯养的鸟类和非驯养的鸟类，如野生鸟类等。禽类包括但不限于家禽、飞禽、水禽、猎禽、平胸鸟(例如，不能飞的鸟)、鸡(家鸡)、鹌鹑、火鸡、鸭、鸵鸟(非洲鸵鸟(struthiocamelus))、索马里鸵鸟(struthiomolybdophanes)、鹅、鸥、珍珠鸡、雉鸡、鸸鹋(dromaiusnovaehollandiae)、美洲鸵鸟(rheaamericana)、达尔文鶆(美洲小鸵(rheapennata))以及几维鸟。体内获得或体外培养的生物实体的组织、细胞及其后代也包括在内。禽可以产蛋。

术语“体内”是指在受试者体内发生的事件。

术语“体外”是指在受试者身体之外发生的事件。例如，体外测定包括在受试者体外进行的任何测定。体外测定包括其中采用活细胞或死亡细胞的基于细胞的测定。体外测定还包括其中未使用完整细胞的无细胞测定。

在某些实施方案中，本文公开的蛋白质或化合物是同位素标记的。同位素标记的蛋白质或化合物(例如，同位素体)的一个或多个原子可被具有不同原子质量或质量数的原子所取代。可掺入所公开的化合物中的同位素的非限制性实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，分别如²h、³h、¹¹c、¹³c、¹⁴c、¹³n、¹⁵n、¹⁵o、¹⁷o、¹⁸o、³¹p、³²p、³⁵s、¹⁸f、³⁶cl、¹²³i以及¹²⁵i。某些同位素标记的化合物，例如，掺入稳定同位素的那些化合物在质谱研究中是有用的。例如，稳定同位素蛋白质可用作基于质谱的测定中的参考标准。某些同位素标记的化合物，例如，掺入放射性同位素的那些化合物在药物和/或基底组织分布研究中是有用的。鉴于放射性同位素氚(³h)和碳-14(¹⁴c)易于掺入并且检测手段完备，它们对于这种目的是特别有用的。这些放射性标记的化合物可通过表征例如作用部位或作用模式，或对药理学重要的作用位点的结合亲和力而用于辅助确定或测量该化合物的有效性。用更重的同位素如氘(²h)取代可由于更高的代谢稳定性而提供某些优点，例如，延长的体内半衰期或降低的剂量要求，并因此在一些情况下是优选的。用正电子发射同位素如¹¹c、¹⁸f、¹⁵o和¹³n取代在用于检查底物受体占有率的正电子发射断层扫描(pet)研究中可以是有用的。同位素标记的化合物通常可通过本领域已知的常规技术制备，或采用合适的同位素标记的试剂代替未标记的试剂，通过与本所述的那些类似的工艺来制备。

“任选的”和“任选地”是指随后所述的事件或情况可能发生或可能不发生，并且该描述包括该事件或情况发生的情形和其未发生的情形。例如，“任选取代的芳基”是指该芳基基团可能被取代或可能未被取代，并且该描述同时包括取代的芳基基团和未被取代的芳基基团。

如本文所用的，术语“可消费产品”是指这样的产品，其包含分离的重组卵清蛋白或卵清蛋白组合物及其他成分并且可被消费(例如，通过吃、嚼、喝、尝、咽或吞)。作为非限制性实例，可消费产品包括食物产品、饮料产品、膳食补充剂、食品添加剂、药物产品以及卫生产品。食物产品包括但不限于烘焙商品(例如，蛋糕、松饼、饼干、面包、百吉饼、糕点、甜甜圈)、炒鸡蛋、煎蛋卷、乳蛋饼、意大利面、面条、可丽饼、华夫饼、面团、面糊、饼干面团、肉饼、肉丸、汉堡包、动物饲料、水果、蔬菜、豆腐(tofu)、豆腐(beancurd)、奶酪、海鲜、肉类、冰淇淋、蛋黄酱、乳蛋糕、布丁、蛋奶酥、乳液、泡沫、蛋白糖霜、糖霜、糖果、棉花糖、杏仁糖、汤、调味品、酱料、香味料、乳制品以及调味剂。饮料产品包括但不限于软饮料、调味水、果汁、运动饮料、能量饮料、冰沙、混合饮料、酒精饮料(例如，葡萄酒、清酒、啤酒、烈酒)、鸡尾酒、利口酒、碳酸饮料、含咖啡因的饮料、咖啡、可可、茶、蛋酒以及乳制品饮料。膳食补充剂包括复合维生素、全食品补充剂、饮食补充剂、草药补充剂、蛋白质混合物、质量增加剂、即食蛋白质、蛋白质棒、蛋白质奶昔、蛋白粉、蛋白剂(proteinshot)、蛋白质分离物、能量棒、能量凝胶、能量咀嚼物、能量配方、耐力配方、能量补充剂、营养补充剂、运动营养补充剂、婴儿配方(例如，粉剂或液体)以及膳食替代品。药物产品包括但不限于止咳糖浆、胶囊和片剂。卫生产品包括但不限于化妆品、护肤品、美容产品、洗发剂、护发素、乳液、乳膏、洗脸剂、牙膏、口香糖和漱口水。

用于形成经加工的可消费产品的可消费产品加工可包括但不限于冷冻、猝冷、加热、烘焙、烧烤、烤、煮沸、热烫、包装、罐装、漂白、富集、干燥、压榨、研磨、混合、预煮、烹饪、打样、卤制、切块、切片、切丁、压碎、撕碎、切碎、摇晃、去核、旋转、滚动、榨汁、滤干、过滤、揉捏、搅拌、打浆、搅打、磨碎、填充、剥皮、去籽、烟熏、固化、腌制、防腐、腌渍、发酵、均化、巴氏灭菌、灭菌、稳定、共混、捣糊、强化、精炼、氢化、老化、延长保质期或添加酶。

如本文所用的，术语“溶剂”是指这样的液体，其可与组合物或组合物的一种或多种组分如蛋白质混合，或用于将之溶解。溶剂的非限制性实例包括水、乙醇或异丙醇。溶剂可以是适于饮用的。溶剂可为水。水的非限制性实例包括纯净水、蒸馏水、二次蒸馏水、去离子水、蒸馏去离子水、饮用水、井水、自来水、泉水、瓶装水、碳酸水、矿泉水、调味水，或它们的任意组合。溶剂可为两种或更多种不同溶剂的组合。

无动物成分蛋清生产系统的概述

本文提供了用于通过在宿主细胞(例如，酵母)中重组表达来生产蛋清的蛋白质组分的方法，以及/或者用于从体外培养的输卵管细胞的分泌物中纯化卵清蛋白的方法。纯化的蛋白质可采用既定的方法(例如，喷雾干燥)储存，包装为粉末产品，或作为在稠度、味道、功能性质和/或外观上类似于动物来源蛋清的卵清蛋白组合物以重建的形式销售。由于可独立调整各种成分的不存在或丰度，因此可实现卵清蛋白组合物的蛋白质成分的不同配方。在一个实施方案中，蛋清中可引起儿童即时食物超敏反应的主要食物变应原——卵类黏蛋白可避免在成品配方中使用，或经遗传修饰和/或糖基化以产生变应原性降低的蛋清产品。

禽蛋是烹饪中常见的食物来源和通用成分。蛋通常含有蛋壳、膜、蛋清和蛋黄。蛋清或白蛋白含有约10％蛋白质、88％水，以及1-2％碳水化合物、矿物质和脂质。卵清蛋白可包括但不限于卵白蛋白(约54％)、卵转铁蛋白或伴清蛋白(约12％)、卵类黏蛋白(约11％)、卵球蛋白g2(约4％)、卵球蛋白g3(约4％)、卵黏蛋白(约3.5％)、溶菌酶(约3.4％)、卵抑制剂(约1.5％)、卵糖蛋白(约1.0％)、黄素蛋白或卵黄素蛋白(约0.8％)、卵巨球蛋白(约0.5％)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂(约0.05％)、抗生物素蛋白(约0.05％)、卵固蛋白、卵白蛋白相关蛋白x、卵白蛋白相关蛋白y、tenp、簇蛋白、ch21、vmo-1、卵黄原蛋白、透明带c蛋白、bc型卵转铁蛋白、卵抑制剂前体、卵类黏蛋白前体、簇蛋白前体、hep21蛋白前体、卵糖蛋白前体、细胞外脂肪酸结合蛋白、细胞外脂肪酸结合蛋白前体、前列腺素d2合酶脑前体、标志物蛋白、卵黄原蛋白-1、卵黄原蛋白-2、卵黄原蛋白-2前体、卵黄原蛋白-3、核黄素结合蛋白、血红素结合蛋白、血清白蛋白前体、载脂蛋白d、卵分泌球蛋白、hep21、谷胱甘肽过氧化物酶3、脂质运载蛋白型前列腺素d合酶/软骨发生相关脂质运载蛋白、脱辅基脂蛋白-1、dickkopf-相关蛋白3、鸡防御素-11(vmo-ii，β-防卫素-11)、血清白蛋白(α-卵黄蛋白)、鸡精子碱性蛋白、分泌胰蛋白酶抑制剂、淋巴细胞抗原86、肌动蛋白、igμ链c区、巯基氧化酶1、组蛋白h4、血管生成素样蛋白3、泛蛋白、禽蛋壳基质蛋白质-32、聚免疫球蛋白受体、肽基-脯氨酰-顺/反异构酶b、氨肽酶ey、多效营养因子、中期因子、肾素/肾素原受体、timp-2、timp-3、组蛋白h2b变体、igλ链、famc3蛋白、α-烯醇化酶、60s酸性核糖体蛋白p1、腱生蛋白/生腱蛋白、cepu-1、含硒蛋白质、延长因子1-α1、附睾分泌蛋白、e1、14-3-3蛋白ζ(ζ)、嗅介蛋白样蛋白3、谷胱甘肽s-转移酶2、β-2-微球蛋白、rgd-cap、载脂蛋白b、高尔基体蛋白1、cochlin、蛋白酶体亚单位α型-7、载脂蛋白a-i、真核起始因子4a-ii、aspic/软骨酸性蛋白1、磷酸丙糖异构酶、蛋白酶体亚单位α型、igλ链c-区、前胶原-赖氨酸2-氧代戊二酸5-双加氧酶1、adp-核糖基化因子5、钙调蛋白、蛋白质二硫键异构酶、膜联蛋白i、延长因子2、过氧化物还原酶-1、hsp70、蛋白质二硫键异构酶a3、钙网蛋白、40s核糖体蛋白sa/层粘连蛋白受体1、α-辅肌动蛋白-4、肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体、维生素d-结合蛋白、脑信号蛋白-3c、内质蛋白、过氧化氢酶、肝α-淀粉酶、过渡性eratp酶、钙粘蛋白-1、血管紧张素转换酶、骨形态发生蛋白1、鸟嘌呤核苷酸结合蛋白亚基β2-样1、组氨酸氨裂解酶、膜联蛋白a2、β-连环蛋白、rab-gdp解离抑制物、核纤层蛋白-a、ovocleidin-116、氨肽酶、hsp90-α、缺氧上调蛋白1、热休克同源蛋白hsp90β、atp柠檬酸合酶以及肌球蛋白-9。

在一方面，本公开内容提供了生产卵清蛋白组合物的方法，所述方法包括：重组地表达两种或更多种卵清蛋白；以及混合所述两种或更多种卵清蛋白。在一些情况中，该卵清蛋白选自卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白、g162mf167a卵类黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、溶菌酶、卵抑制剂、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、抗生物素蛋白、卵白蛋白相关蛋白x、卵白蛋白相关蛋白y，以及它们的任意组合，诸如选自卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白、g162mf167a卵类黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、溶菌酶、卵抑制剂、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、抗生物素蛋白、卵白蛋白相关蛋白x、卵白蛋白相关蛋白y，以及它们的任意组合。所述重组地表达两种或更多种卵清蛋白可在一个或多个宿主细胞中进行。该方法可进一步包括从一个或多个宿主细胞分泌两种或更多种卵清蛋白。所述重组地表达两种或更多种卵清蛋白可采用无细胞蛋白质合成进行。该方法可进一步包括向卵清蛋白组合物添加食品添加剂。该方法可进一步包括对卵清蛋白组合物进行脱糖、稳定化或从中去除葡萄糖。该方法可进一步包括对卵清蛋白组合物巴氏灭菌或超巴氏灭菌。该方法可进一步包括干燥卵清蛋白组合物。该方法可进一步包括酶促地、化学地或机械地消化两种或更多种卵清蛋白中的一种或多种。对卵清蛋白中的一种或多种的处理可改善组合物的功能性质，例如，提供增强的发泡性或溶解性。

在一方面，本公开内容提供了包含一种或多种重组卵清蛋白或其片段的经加工的可消费产品。在一些情况中，该一种或多种卵清蛋白选自卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白、g162mf167a卵类黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、溶菌酶、卵抑制剂、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、抗生物素蛋白、卵白蛋白相关蛋白x、卵白蛋白相关蛋白y，以及它们的任意组合，诸如选自卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白、g162mf167a卵类黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、溶菌酶、卵抑制剂、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、抗生物素蛋白、卵白蛋白相关蛋白x、卵白蛋白相关蛋白y，以及它们的任意组合。在一些情况下，该经加工的可消费产品包含两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种、五种或更多种或者六种或更多种卵清蛋白，或它们的片段。在一些情况下，该经加工的可消费产品缺少一种或多种、两种或更多种、三种或更多种、五种或更多种、十种或更多种、二十种或更多种或者五十种或更多种卵清蛋白。该经加工的可消费产品可缺少卵类黏蛋白。在一些情况下，该经加工的可消费产品可缺少一种或多种、两种或更多种、三种或更多种、五种或更多种、十种或更多种或者二十种或更多种卵黄蛋白。在一些情况下，该经加工的可消费产品选自食物产品、饮料产品、膳食补充剂、食品添加剂、药物产品、卫生产品及它们的任意组合，诸如选自食物产品、饮料产品，以及它们的任意组合。

在一方面，本公开内容提供了生产可消费产品的方法，所述方法包括：重组地表达一种或多种卵清蛋白；以及将所述一种或多种卵清蛋白与一种或多种成分混合以产生可消费产品。在一些情况下，该一种或多种成分包括食品添加剂、卵清蛋白或重组卵清蛋白。在一些情况下，该一种或多种成分不包括卵清蛋白。在一些情况下，该一种或多种卵清蛋白可包括两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种或者五种或更多种卵清蛋白。

在一方面，本公开内容提供了用于生产卵清蛋白或其片段的方法，所述方法包括：在宿主细胞中重组地表达所述卵清蛋白或其片段，其中所述宿主细胞包含编码所述卵清蛋白或其片段的多核苷酸，并且其中所述卵清蛋白选自卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂，以及它们的任意组合，诸如选自卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂，以及它们的任意组合。该方法可进一步包括从宿主细胞分泌卵清蛋白或其片段。该方法可进一步包括纯化该卵清蛋白或其片段。该方法可进一步包括在宿主细胞中重组地表达第二卵清蛋白或其片段。在一些情况下，该片段可包括卵清蛋白的至少10％、20％、30％、40％或50％。

在一些情况下，蛋白质的片段的长度可约为或至少为10、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900或2000个氨基酸。在一些情况下，蛋白质的片段的长度可至多为10、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900或2000个氨基酸。

在一些情况下，蛋白质的片段可为该蛋白质的约或至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在一些情况下，蛋白质的片段可为该蛋白质的至多1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。

在一些情况下，蛋白质的片段可约为或至少为10、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000kda。在一些情况下，蛋白质的片段可至多为10、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000kda。

在一方面，本公开内容提供了用于生产两种或更多种卵清蛋白或其片段的方法，所述方法包括在宿主细胞中重组地表达所述两种或更多种卵清蛋白或其片段。该宿主细胞可包含编码所述两种或更多种卵清蛋白或其片段的一种或多种多核苷酸。该方法可进一步包括从宿主细胞分泌所述两种或更多种卵清蛋白或其片段。该方法可进一步包括纯化所述两种或更多种卵清蛋白或其片段。在一些情况中，该两种或更多种卵清蛋白选自卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白、g162mf167a卵类黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、溶菌酶、卵抑制剂、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、抗生物素蛋白、卵白蛋白相关蛋白x、卵白蛋白相关蛋白y，以及它们的任意组合，诸如选自卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白、g162mf167a卵类黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、溶菌酶、卵抑制剂、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、抗生物素蛋白、卵白蛋白相关蛋白x、卵白蛋白相关蛋白y，以及它们的任意组合。

在一方面，本公开内容提供了分离的重组卵清蛋白，其选自卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂，以及它们的任意组合，诸如选自卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂，以及它们的任意组合。该分离的重组卵清蛋白可具有与蛋清中的卵清蛋白不同的糖基化、乙酰化或磷酸化模式。该分离的重组卵清蛋白可具有与蛋清中的卵清蛋白不同的解链温度，如相对于蛋清中的卵清蛋白更高或更低的解链温度。在一些情况下，该分离的重组卵清蛋白具有约为或至少为65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94或95℃的解链温度。在一些情况下，该分离的重组卵清蛋白具有至多65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94或95℃的解链温度。在一些情况下，该分离的重组卵清蛋白可包含相对于蛋清中的卵清蛋白的一个或多个氨基酸插入、缺失或置换。在一些情况下，相对于蛋清中的卵清蛋白，分离的重组卵清蛋白可具有约或至少0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900或1000个氨基酸插入、缺失和/或置换。在一些情况下，相对于蛋清中的卵清蛋白，分离的重组卵清蛋白可具有至多0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900或1000个氨基酸插入、缺失和/或置换。在一些情况下，该分离的重组卵清蛋白选自seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13，以及它们的任意组合。

在一方面，本公开内容提供了包含色氨酸的分离的突变卵类黏蛋白。可重组地表达该分离的突变卵类黏蛋白。该分离的突变卵类黏蛋白可为完整的蛋白质。在一些情况下，该分离的突变卵类黏蛋白在与seqidno:3最佳比对时包含相对于seqidno:3的一个或多个、两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个或者六个或更多个氨基酸插入或置换。在一些情况下，该分离的突变卵类黏蛋白包含一个或多个氨基酸置换，其中该氨基酸置换包括一个或多个、两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个或者六个或更多个酪氨酸至色氨酸的置换(例如，最佳比对时在相对于seqidno:3或seqidno:4的位置37、46、73、102、141或161处)。在一些情况下，该分离的突变卵类黏蛋白在与seqidno:3最佳比对时包含相对于seqidno:3的至多四个、至多五个、至多六个或至多十个氨基酸插入或置换。在一些情况下，该分离的突变卵类黏蛋白包含一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或者四个或更多个色氨酸残基。在一些情况下，该分离的突变卵类黏蛋白在n-末端或c-末端包含一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或者四个或更多个色氨酸残基。该分离的突变卵类黏蛋白在与seqidno:3最佳比对时相对于seqidno:3可包含在位置162处的甲硫氨酸和在位置167位置处的丙氨酸。

该分离的突变卵类黏蛋白可具有相对于野生型卵类黏蛋白降低的变应原性。在一些情况下，分离的突变卵类黏蛋白具有相对于野生型卵类黏蛋白为约或至少0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的变应原性。在一些情况下，分离的突变卵类黏蛋白具有相对于野生型卵类黏蛋白至多0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的变应原性。在一些情况下，可采用皮肤点刺试验、血液检查或口服食物激发来测量降低的变应原性。

所述分离的突变卵类黏蛋白可具有相对于野生型卵类黏蛋白增强的消化性。在一些情况下，分离的突变卵类黏蛋白具有相对于野生型卵类黏蛋白为约或至少100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的消化性。在一些情况下，分离的突变卵类黏蛋白具有相对于野生型卵类黏蛋白至多100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的消化性。在一些情况下，增强的消化性可作为蛋白质代谢的速率或通过蛋白酶或酸体内或体外降解或消化的速率而测量。

分离的突变卵类黏蛋白可具有与野生型卵类黏蛋白不同的糖基化、乙酰化或磷酸化模式。分离的突变卵类黏蛋白可具有与野生型卵类黏蛋白不同的解链温度。分离的突变卵类黏蛋白可相对于野生型卵类黏蛋白包含一个或多个氨基酸插入、缺失或置换。在一些情况下，分离的突变卵类黏蛋白可相对于野生型卵类黏蛋白具有约或至少0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、40、50、60、70、80、90或100个氨基酸插入、缺失和/或置换。在一些情况下，分离的突变卵类黏蛋白可相对于野生型卵类黏蛋白具有至多0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、40、50、60、70、80、90或100个氨基酸插入、缺失和/或置换。

在一方面，本公开内容提供了一种卵清蛋白组合物，其包含本文所述的分离的重组卵清蛋白或分离的突变卵类黏蛋白；以及一种或多种卵清蛋白。可重组地表达所述一种或多种卵清蛋白。

在一方面，本公开内容提供了包含两种或更多种重组卵清蛋白的卵清蛋白组合物。在一些情况中，该两种或更多种重组卵清蛋白选自卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白、g162mf167a卵类黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、溶菌酶、卵抑制剂、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、抗生物素蛋白、卵白蛋白相关蛋白x、卵白蛋白相关蛋白y，以及它们的任意组合，诸如选自卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白、g162mf167a卵类黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、溶菌酶、卵抑制剂、卵糖蛋白、黄素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、抗生物素蛋白、卵白蛋白相关蛋白x、卵白蛋白相关蛋白y，以及它们的任意组合。该卵清蛋白组合物可包含卵白蛋白。该卵清蛋白组合物可包含本文所述的分离的重组卵清蛋白。该卵清蛋白组合物可包含本文所述的分离的突变卵类黏蛋白。

该卵清蛋白可具有来源于单个物种如家鸡的序列。在一些情况下，所述单个物种不是家鸡。该卵清蛋白可具有来源于超过一个物种的序列。在一些情况下，该卵清蛋白具有来源于禽类的序列，所述禽类选自家禽、飞禽、水禽、猎禽、鸡、鹌鹑、火鸡、鸭、鸵鸟、鹅、鸥、珍珠鸡、雉鸡、鸸鹋及它们的任意组合。在一些情况下，该卵清蛋白组合物包含三种或更多种、四种或更多种或者五种或更多种卵清蛋白。在一些情况下，该卵清蛋白组合物包含至多5种、至多10种、至多15种或至多20种卵清蛋白。卵清蛋白组合物可包含本文公开的分离的突变卵类黏蛋白。

在一些情况下，重组卵清蛋白可包含相对于蛋清中的卵清蛋白的一个或多个氨基酸插入、缺失或置换。在一些情况下，相对于蛋清中的卵清蛋白，重组卵清蛋白可具有约或至少0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900或1000个氨基酸插入、缺失和/或置换。在一些情况下，相对于蛋清中的卵清蛋白，重组卵清蛋白可具有至多0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900或1000个氨基酸插入、缺失和/或置换。例如，在与seqidno:9最佳比对时，重组溶菌酶可具有相对于seqidno:9在位置62处的氨基酸置换(例如，用酪氨酸替换色氨酸)。

该卵清蛋白组合物可进一步包含水。在一些情况下，该卵清蛋白组合物具有至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％百分比的水。在一些情况下，该卵清蛋白组合物具有80％至95％百分比的水。在一些情况下，该卵清蛋白组合物包含按干重计至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％的蛋白质。该卵清蛋白组合物可进一步包含食品添加剂。在一些情况下，该食品添加剂选自甜味剂、盐、碳水化合物及其任意组合。

该卵清蛋白组合物可不含胆固醇。在一些情况下，该卵清蛋白组合物包含按干重计少于10％、5％、4％、3％、2％、1％或0.5％的脂肪。该卵清蛋白组合物可不含脂肪、饱和脂肪或反式脂肪。该卵清蛋白组合物可不含葡萄糖。该卵清蛋白组合物可缺少一种或多种卵清蛋白，如卵类黏蛋白或黄素蛋白。例如，卵类黏蛋白是一种蛋清变应原，而其不存在于卵清蛋白组合物中可降低该卵清蛋白组合物的变应原性。作为另一实例，黄素蛋白可为蛋清提供黄色色调，而其不存在于卵清蛋白组合物中可使该卵清蛋白组合物变白，或在用该卵清蛋白组合物制备的产品如蛋白糖霜中产生相对于天然蛋清更亮的白色。在一些情况下，该卵清蛋白组合物缺少两种或更多种、三种或更多种、五种或更多种、十种或更多种、二十种或更多种或者五十种或更多种卵清蛋白。在一些情况下，该卵清蛋白组合物不是蛋、蛋清或蛋黄。

在一些情况下，该卵清蛋白组合物是酸性的、中性的或碱性的。在一些情况下，ph约为或至少为6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10。在一些情况下，ph至高为6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10。在一些情况下，该卵清蛋白组合物可具有6至10的ph。

卵清蛋白组合物的泡沫高度可大于蛋清的泡沫高度。在一些情况下，该卵清蛋白组合物具有10mm至60mm，如30mm至60mm范围内的泡沫高度。在一些情况下，卵清蛋白组合物的泡沫高度约为或至少为1、5、10、15、20、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、50、55或60mm。在一些情况下，卵清蛋白组合物的泡沫高度至多为1、5、10、15、20、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、50、55或60mm。在一些情况下，卵清蛋白组合物具有相对于蛋清约或至少0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的泡沫高度。在一些情况下，卵清蛋白组合物具有相对于蛋清至多0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的泡沫高度。

卵清蛋白组合物的泡沫渗出可小于蛋清的泡沫渗出(例如，在搅打后30分钟时)。在一些情况下，卵清蛋白组合物可具有至多10mm或至多5mm的泡沫渗出(例如，在搅打后30分钟时)。在一些情况下，卵清蛋白组合物的泡沫渗出约为或至少为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或30mm。在一些情况下，卵清蛋白组合物的泡沫渗出至多为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或30mm。在一些情况下，在搅打后1min、5min、10min、15min、20min、30min、40min、50min、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、15h、20h、24h、25h、30h或超过30h时测量泡沫渗出。在一些情况下，卵清蛋白组合物具有相对于蛋清约或至少0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的泡沫渗出。在一些情况下，卵清蛋白组合物具有相对于蛋清至多0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的泡沫渗出。

卵清蛋白组合物的泡沫强度可大于蛋清的泡沫强度。在一些情况下，卵清蛋白组合物可具有30g至100g，如40g至100g范围内的泡沫强度。在一些情况下，卵清蛋白组合物具有约为或至少为5、10、20、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、90、100、110、120、130、140、150或200g的泡沫强度。在一些情况下，卵清蛋白组合物具有至多为5、10、20、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、90、100、110、120、130、140、150或200g的泡沫强度。在一些情况下，卵清蛋白组合物具有相对于蛋清约或至少0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的泡沫强度。在一些情况下，卵清蛋白组合物具有相对于蛋清至多0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的泡沫强度。

卵清蛋白组合物的凝胶强度可大于蛋清的凝胶强度。在一些情况下，卵清蛋白组合物可具有100g至1500g、500g至1500g或700g至1500g范围内的凝胶强度。在一些情况下，卵清蛋白组合物的凝胶强度约为或至少为10、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450或1500g。在一些情况下，卵清蛋白组合物的凝胶强度至多为10、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450或1500g。在一些情况下，卵清蛋白组合物具有相对于蛋清约或至少0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的凝胶强度。在一些情况下，卵清蛋白组合物具有相对于蛋清至多0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的凝胶强度。

在一些情况下，卵清蛋白组合物可具有至少一个月、至少两个月、至少三个月或至少六个月的保质期。

卵清蛋白组合物可具有相对于蛋清降低的变应原性。例如，可通过一种或多种卵清蛋白(例如，卵类黏蛋白、卵白蛋白、卵转铁蛋白、溶菌酶)的去除，或卵清蛋白内一个或多个变应原性位点或结构域的去除或突变(例如，一种或多种氨基酸插入、缺失和/或置换)来实现降低的变应原性。在一些情况下，卵清蛋白组合物具有相对于蛋清约或至少0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的变应原性。在一些情况下，卵清蛋白组合物具有相对于蛋清至多0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的变应原性。在一些情况下，可采用皮肤点刺试验、血液检查或口服食物激发来测量降低的变应原性。

可将卵清蛋白组合物配制为液体、固体或粉末。可将卵清蛋白组合物冷藏或冷冻。

在一方面，本公开内容提供了编码本文所述的分离的重组卵清蛋白或分离的突变卵类黏蛋白的多核苷酸。多核苷酸可以是密码子优化的。多核苷酸可为dna或rna。

可采用化学合成、分子克隆或重组方法、dna或基因组装方法、人工基因合成、pcr或它们的任意组合来获得本文所述的多核苷酸。化学多核苷酸合成的方法是本领域公知的，因此不需要在本文中详细描述。本领域技术人员可使用本文提供的序列和商用dna合成仪来生产所需的dna序列。如本文进一步讨论的，对于采用重组方法制备多核苷酸，可将包含所需序列的多核苷酸插入至合适的克隆载体或表达载体中，进而可将该克隆载体或表达载体引入至合适的宿主细胞中以供复制及扩增。可通过本领域已知的任何手段将多核苷酸插入至宿主细胞中。可通过例如经由直接吸收、内吞作用、转染、f-交配、peg-介导的原生质体融合、根癌土壤杆菌介导的转化、生物枪转化、化学转化或电穿孔而引入外源多核苷酸来转化细胞。外源多核苷酸一旦引入后可作为非整合的表达载体(如质粒)保持在细胞内，或可整合至宿主细胞基因组中。可通过本领域已知的方法来从宿主细胞中分离如此扩增的多核苷酸。或者，核酸扩增方法(例如，pcr)允许dna序列的复制。

通过在合适的表达载体中使用分离的dna并将该表达载体插入合适的宿主细胞中而获得rna。当细胞复制并将该dna转录成rna时，可随后采用本领域技术人员已知的方法分离该rna。或者，可通过转录该分离的dna，例如，通过使用rna聚合酶的体外转录反应来获得rna。或者，可采用化学合成来获得rna。

可根据标准技术来构建合适的克隆载体，或可从本领域中可用的许多克隆载体中选择合适的克隆载体。尽管所选的克隆载体可根据意欲使用的宿主细胞而变化，但有用的克隆载体将通常具有自我复制的能力，可拥有针对特定限制性核酸内切酶的单个靶标，并且/或者可携带可用于选择含有该表达载体的克隆的标志物的基因。合适的实例包括质粒和细菌病毒，例如，puc18、puc19、bluescript(例如，pbssk+)及其衍生物、mp18、mp19、pbr322、pmb9、cole1、pcr1、rp4、噬菌体dna，以及穿梭载体如psa3和pat28。这些以及许多其他克隆载体可从商业供应商如biorad、strategene和invitrogen获得。

本文所述的多核苷酸可进一步编码信号肽。信号肽也被称为信号序列、靶向信号、定位信号、定位序列、分泌信号、转运肽、前导序列或前导肽，其可支持蛋白质或多核苷酸的分泌。来自宿主细胞的重组或异源表达的蛋白质的细胞外分泌可有利于蛋白质纯化。例如，从细胞培养物上清液回收重组蛋白可能优于将宿主细胞裂解而释放包括宿主细胞的细胞内蛋白质在内的复杂的蛋白质混合物。分泌可减少异源蛋白质的细胞内过表达可能对宿主细胞造成的有害影响，如毒性或生长速率减缓。相比于在宿主细胞中的细胞内表达时用于储存合成蛋白质的有限体积，分泌可使蛋白质产量提高。蛋白质的分泌生产可有利于翻译后修饰或加工(例如，蛋白质折叠、二硫键形成、糖基化)。

分泌的蛋白质可最初被表达为具有n-末端信号肽的前体。信号肽可含有1-5个残基的带正电荷的n-末端(n区)、6-16个氨基酸的中央疏水核心(h区)，以及为信号肽酶的识别位点的3-7个氨基酸的极性区(c区)。信号肽可位于注定分泌至细胞外的前蛋白的n-末端。在一些情况下，例如，对于鸡卵白蛋白和人纤溶酶原激活剂，信号肽在内部。信号肽的长度可为15至50个氨基酸。

信号肽可引导所表达的前体前蛋白跨过内质网的膜。例如，在易位期间或易位完成不久之后，可通过信号肽酶从该蛋白质的其余部分上切下信号肽。蛋白质可被运送至高尔基体并分泌，除非其携带停留在细胞内区室中的信号。

信号肽可位于卵清蛋白或突变卵类黏蛋白的n-末端。

信号肽可来源于蛋白质的前体(例如，前原肽、前蛋白)。信号肽可来源于蛋白质的前体，包括但不限于酸性磷酸酶(例如，巴斯德毕赤酵母pho1)、白蛋白(例如，鸡白蛋白)、碱性细胞外蛋白酶(例如，解脂耶氏酵母xrp2)、α-交配因子(α-mf，matα)(例如，酿酒酵母α-交配因子)、淀粉酶(例如，α-淀粉酶、米根霉、粟酒裂殖酵母推定的淀粉酶spcc63.02c(amy1))、β-酪蛋白(例如，牛β-酪蛋白)、碳水化合物结合模块家族21(cbm21)-淀粉结合结构域、羧肽酶y(例如，粟酒裂殖酵母cpy1)、纤维二糖水解酶i(例如，里氏木霉cbh1)、二肽基蛋白酶(例如，粟酒裂殖酵母推定的二肽基蛋白酶spbc1711.12(dpp1))、葡糖淀粉酶(例如，泡盛曲霉葡糖淀粉酶)、热休克蛋白(例如，细菌hsp70)、疏水蛋白(例如，里氏木霉hbfi，里氏木霉hbfii)、菊粉酶、转化酶(例如，酿酒酵母suc2)、杀伤蛋白或杀伤毒素(例如，128kdapgkl杀伤蛋白、k1杀伤毒素的α-亚基(例如，乳酸克鲁维酵母的k1杀伤毒素的α-亚基)、k1毒素kilm1、k28前原毒素、pichiaacaciae)、富亮氨酸的人工信号肽cly-l8、溶菌酶(例如，鸡cly)、植物凝集素(pha-e)(例如，菜豆(phaseolusvulgaris)植物凝集素)、麦芽糖结合蛋白(mbp)(例如，大肠杆菌麦芽糖结合蛋白)、p因子(例如，粟酒裂殖酵母p3)、巴斯德毕赤酵母dse、巴斯德毕赤酵母exg、巴斯德毕赤酵母pir1、巴斯德毕赤酵母scw和细胞壁蛋白pir4(具有内部重复的蛋白质)。信号肽可包含表1中的序列。在一些情况下，信号肽可选自seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、seqidno:30、seqidno:31、seqidno:32、seqidno:33、seqidno:34、seqidno:35、seqidno:36、seqidno:37、seqidno:38、seqidno:39、seqidno:40、seqidno:41、seqidno:42、seqidno:43、seqidno:44、seqidno:45、seqidno:46、seqidno:47、seqidno:48、seqidno:49、seqidno:50、seqidno:51、seqidno:52、seqidno:53、seqidno:54、seqidno:55、seqidno:56、seqidno:57、seqidno:58、seqidno:59、seqidno:60、seqidno:61、seqidno:62、seqidno:63、seqidno:64、seqidno:65、seqidno:66、seqidno:67、seqidno:68、seqidno:69、seqidno:70、seqidno:71，以及它们的任意组合。

在一些情况下，信号肽的长度可约为或至少为5、10、15、20、25、30、50或100个氨基酸。在一些情况下，信号肽的长度可至多为5、10、15、20、25、30、50或100个氨基酸。在一些情况下，信号肽的长度可为5至50个氨基酸或5-30个氨基酸。

可采用例如密码子优化、定向进化、间隔区插入和/或缺失诱变修饰信号肽，或使其包含一个或多个氨基酸插入、缺失和/或置换。

多核苷酸可进一步编码信号肽切割或识别位点。信号肽酶包括但不限于kex2、krp1、肠激酶(ekt)、凝血酶、因子xa(fxa)、烟草蚀纹病毒(tev)，以及3cprescission。

表1：示例性信号肽的序列

在一方面，本公开内容提供了包含任意本文所述的多核苷酸的表达载体。多核苷酸可位于表达载体中。表达载体可为构建体，其能够在宿主细胞中递送并优选地表达一种或多种感兴趣的基因或序列。表达载体的实例包括但不限于病毒载体(例如，腺病毒、腺相关病毒和逆转录病毒)、裸dna或rna表达载体、质粒、粘粒、噬菌体载体、与阳离子缩合剂相关的dna或rna表达载体、封装在脂质体内的dna或rna表达载体，以及某些真核细胞，如生产细胞。表达载体可允许方便高效的复制、克隆和/或选择。相应地，表达载体可额外包含允许其在宿主细胞中复制的核酸序列如复制起点、一种或多种治疗性基因和/或选择性标记基因，以及本领域已知的其他遗传元件，如引导转录、翻译和/或所编码蛋白质的分泌的调节元件。表达载体组件通常可包括但不限于以下的一种或多种：信号序列；复制起点；一种或多种标志物基因；以及合适的转录控制元件(如启动子、增强子和终止子)。对于表达(例如，翻译)，通常还需要一个或多个翻译控制元件，如核糖体结合位点、翻译起始位点、内部核糖体进入位点和终止密码子。该表达载体可用于转导、转化或感染细胞，从而使细胞表达除该细胞天然的核酸和/或蛋白质之外的核酸和/或蛋白质。该表达载体任选地包含用于帮助实现核酸进入细胞的物质，如病毒颗粒、脂质体、蛋白质包衣等。对于蛋白质表达，通过标准分子生物技术的许多类型的合适表达载体是本领域已知的。这类表达载体选自常规载体类型，包括昆虫，例如，杆状病毒表达系统，或酵母、真菌、细菌或病毒表达系统。许多类型在本领域中已知的其他合适的表达载体也可用于此目的。用于获得克隆和表达载体的方法是公知的(参见，例如，green和sambrook,molecularcloning:alaboratorymanual,第四版,coldspringharborlaboratorypress,newyork(2012))。

表达载体可进一步包含启动子。启动子包括但不限于组成型启动子、诱导型启动子和杂合启动子。启动子包括但不限于acu-5、adh1+、醇脱氢酶(adh1、adh2、adh4)、ahsb4m、ainv、alca、α-淀粉酶、交替氧化酶(aod)、醇氧化酶(aox1)、醇氧化酶2(aox2)、axdh、b2、camv、纤维二糖水解酶i(cbh1)、ccg-1、cdna1、细胞丝多肽(cfp)、cpc-2、ctr4+、cup1、二羟基丙酮合酶(das)、烯醇化酶(eno、eno1)、甲醛脱氢酶(fld1)、fmd、甲醛脱氢酶(fmdh)、g1、g6、gaa、gal1、gal2、gal3、gal4、gal5、gal6、gal7、gal8、gal9、gal10、gcw14、gdha、gla-1、α-葡糖淀粉酶(glaa)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gpda、gap、gapdh)、磷酸甘油酸变位酶(gpm1)、甘油激酶(gut1)、hsp82、invl+、异柠檬酸裂合酶(icl1)、乙酰羟酸异构体还原酶(ilv5)、kar2、kex2、β-半乳糖苷酶(lac4)、leu2、melo、met3、甲醇氧化酶(mox)、nmt1、nsp、pcbc、pet9、过氧化物酶体生成蛋白8(pex8)、磷酸甘油酸激酶(pgk、pgk1)、pho1、pho5、pho89、磷脂酰肌醇合酶(pis1)、pyk1、丙酮酸激酶(pki1)、rps7、山梨醇脱氢酶(sdh)、3-磷酸丝氨酸氨基转移酶(ser1)、ssa4、sv40、tef、翻译延伸因子1α(tef1)、thi11、高丝氨酸激酶(thr1)、tpi、tps1、磷酸丙糖异构酶(tpi1)、xrp2以及ypt1。

表达载体可进一步包含营养缺陷型标志物(例如，ade1、arg4、his4、ura3、met2)。表达载体可进一步包括选择性标记(例如，抗性基因)。在一些情况下，抗性基因可赋予对吉欧霉素、氨苄西林、杀稻瘟素、卡那霉素、nurseothricin、氯霉素、四环素、三氯生以及更昔洛韦的抗性。表达载体可包含质粒。

在一方面，本公开内容提供了经转化以表达一种或多种异源卵清蛋白的宿主细胞，其中所述宿主细胞不选自大肠杆菌、巴斯德毕赤酵母、水稻、黑曲霉、米曲霉、产黄头孢霉、酿酒酵母、昆虫、小鼠、玉米、pseudozyma、烟草、斑马鱼，以及它们的任意组合。

在一方面，本公开内容提供了经转化以表达一种或多种异源卵清蛋白的宿主细胞，其中所述一种或多种卵清蛋白不选自卵白蛋白、卵转铁蛋白、溶菌酶、卵固蛋白、卵类黏蛋白、卵抑制剂、抗生物素蛋白，以及它们的组合。

在一方面，本公开内容提供了包含本文所述的多核苷酸或表达载体的宿主细胞。能够表达异源dna的任何宿主细胞均可用于分离蛋白质或编码蛋白质的多核苷酸的目的。合适的宿主细胞包括但不限于哺乳动物(例如，人如hek或hela；小鼠如3t3或来源于swiss、balb/c或nih小鼠的细胞；仓鼠如cho；猴如cos)宿主细胞、细菌(例如，大肠杆菌、枯草杆菌、假单胞菌、链霉菌)宿主细胞、真菌宿主细胞(例如，酿酒酵母、栗酒裂殖酵母、乳酸克鲁维酵母)，或昆虫(例如，黑腹果蝇、highfive、草地贪夜蛾sf9)宿主细胞。可通过例如常规手段如电穿孔用至少一种本公开内容的表达载体转染宿主细胞。可通过任意一些合适的手段将含有感兴趣多核苷酸的表达载体引入宿主细胞中，该手段包括电穿孔、化学转化、采用氯化钙、氯化铷、磷酸钙、deae-葡聚糖或其他物质的转染；微粒轰击；脂转染；peg介导的原生质体融合；根癌土壤杆菌介导的转化；生物枪转化；以及感染(例如，当载体是传染原如痘苗病毒时)。引入表达载体或多核苷酸的选择将常常取决于宿主细胞的特征。然后可在允许蛋白质表达的条件下培养转染或转化的宿主细胞。在一些实施方案中，从宿主细胞中纯化蛋白质。

表达载体可以是基因组整合的。宿主细胞可包含多个拷贝的表达载体。在一些情况下，宿主细胞可选自细菌、真菌、植物、昆虫、哺乳动物及它们的任意组合。在一些情况下，真菌可为酵母或丝状真菌。酵母包括但不限于arxulaspp.、arxulaadeninivorans、克鲁维酵母属的种、乳酸克鲁维酵母、毕赤酵母属的种、安格斯毕赤酵母、巴斯德毕赤酵母、酵母属的种、酿酒酵母、裂殖酵母属的种、粟酒裂殖酵母、耶氏酵母属的种以及解脂耶氏酵母。真菌包括但不限于蘑菇属的种、二孢蘑菇、曲霉属的种、泡盛曲霉、烟曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、刺盘孢属的种、盘长孢状刺盘孢、内座壳属的种、寄生内座壳、镰孢属的种、禾本科镰孢、腐皮镰孢、毛霉属的种、米黑毛霉、微小毛霉、毁丝霉属、嗜热毁丝霉、脉孢菌属、粗糙脉孢菌、青霉属的种、沙门柏干酪青霉、变灰青霉、产黄青霉、埃莫森青霉(踝节菌)、绳状青霉、产紫青霉、娄地青霉、侧耳属、糙皮侧耳、根毛霉属常、米黑根毛霉、微小根毛霉、根霉属常、少根根霉、少孢根霉、米根霉、木霉属常、深绿木霉、里氏木霉以及绿木霉。在一些情况下，宿主细胞可选自米曲霉、枯草杆菌、大肠杆菌、嗜热毁丝霉、粗糙脉孢菌、巴斯德毕赤酵母以及它们的任意组合。宿主细胞可被美国食品与药品管理局批准为通常认为是安全的。宿主细胞可以是营养缺陷型的。例如，可通过将宿主细胞的糖基化途径人源化或工程化成更加类似于另一生物体(例如，鸟或鸡)而对该宿主细胞进行糖工程化。

在一方面，本公开内容提供了包含本文所述的宿主细胞的细胞培养物。

在一些实施方案中，采用体外或无细胞蛋白质合成，例如，采用包含细胞提取物(如大肠杆菌细胞提取物、兔网织红细胞提取物、小麦胚芽细胞提取物或昆虫细胞提取物)的无细胞翻译系统来产生多肽或蛋白质。可通过本领域技术人员已知的合适方法从细胞、细胞提取物、培养基中回收、分离和/或任选地纯化所表达的蛋白质。例如，在细胞裂解后将蛋白质以可溶的形式分离，或采用已知技术，例如，在盐酸胍中将其提取。可采用多种常规方法的任一种来进一步纯化蛋白质，该常规方法包括但不限于：采用hplc、fplc等的液相色谱法如正相或反相液相色谱法；亲和色谱法如通过无机配体或单克隆抗体的亲和色谱法；尺寸排阻色谱法；固定金属螯合色谱法；凝胶电泳；等等。本领域技术人员可选择最合适的分离和纯化技术。仍有其他合适的宿主细胞，以及用于转染、培养、扩增、筛选、生产和纯化的方法是本领域已知的。

在一方面，本公开内容提供了用于制备可消费产品的方法，所述方法包括用本文所述的分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物替换一部分基于鸡蛋的成分。

在一方面，本公开内容提供了用于制备可消费产品的方法，所述方法包括添加本文所述的分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物。

在一方面，本公开内容提供了使用重组卵清蛋白作为加工助剂来制备经加工的可消费产品的方法。在一些情况下，所述方法进一步包括去除重组卵清蛋白。经加工的可消费产品中的重组卵清蛋白可以被消耗或可以未被消耗。经加工的可消费产品可含有痕量的重组卵清蛋白。在一些情况下，经加工的可消费产品不含有重组卵清蛋白。

在一方面，本公开内容提供了使用本文所述的分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物作为加工助剂来制备经加工的可消费产品的方法。在一些情况下，所述方法进一步包括去除分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物。在一些情况下，加工助剂充当乳化剂、结合剂、膨松剂、增稠剂、保湿剂、粘合剂、褐变剂、澄清剂、胶凝剂、结晶控制剂、湿润剂、嫩化剂、充气剂、结构改善剂、凝结剂、涂层剂、着色剂、光泽剂、调味剂、冷冻剂、隔离剂、口感改善剂、ph缓冲剂、保质期延长剂、防腐剂、抗微生物剂(例如，抗细菌剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗寄生虫剂)、食品腐败抑制剂、苹果乳酸发酵抑制剂、质地改进剂、鸡蛋替代物，或它们的任意组合。

在一方面，本公开内容提供了包含本文所述的分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物的可消费产品。可消费产品包括但不限于食物产品、饮料产品、药物产品以及卫生产品。

在一方面，本公开内容提供了使用重组卵清蛋白作为乳化剂、结合剂、膨松剂、增稠剂、保湿剂、粘合剂、褐变剂、澄清剂、胶凝剂、结晶控制剂、湿润剂、嫩化剂、充气剂、结构改善剂、凝结剂、涂层剂、着色剂、光泽剂、调味剂、冷冻剂、隔离剂、口感改善剂、ph缓冲剂、保质期延长剂、防腐剂、抗微生物剂(例如，抗细菌剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗寄生虫剂)、食品腐败抑制剂、苹果乳酸发酵抑制剂、质地改进剂、鸡蛋替代物或它们的任意组合的方法。

在一方面，本公开内容提供了使用本文所述的分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物作为乳化剂、结合剂、膨松剂、增稠剂、保湿剂、粘合剂、褐变剂、澄清剂、胶凝剂、结晶控制剂、湿润剂、嫩化剂、充气剂、结构改善剂、凝结剂、涂层剂、着色剂、光泽剂、调味剂、冷冻剂、隔离剂、口感改善剂、ph缓冲剂、保质期延长剂、防腐剂、抗微生物剂(例如，抗细菌剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗寄生虫剂)、食品腐败抑制剂、苹果乳酸发酵抑制剂、质地改进剂、鸡蛋替代物或它们的任意组合的方法。

在一方面，本公开内容提供了用于诊断食物变态反应的方法，所述方法包括向受试者引入本文所述的分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物。在一些情况下，采用皮肤点刺试验、血液检查或口服食物激发进行引入。

在一方面，本公开内容提供了用于治疗食物变态反应的方法，所述方法包括用本文所述的分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物替换蛋清变应原，或通过食用本文所述的分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物来提高受试者对蛋清变应原的耐受性。

在一方面，本公开内容提供了用于抑制可消费产品(例如，酒)中的苹果乳酸发酵的方法，所述方法包括向该可消费产品提供蛋清溶菌酶。可重组地表达蛋清溶菌酶。

在一方面，本公开内容提供了使用溶菌酶(例如，蛋清溶菌酶)作为例如食品、动物饲料、水果、蔬菜、药物、豆腐、豆腐、奶酪、海鲜、肉、酒、清酒或啤酒(例如，非巴氏灭菌的啤酒)中的抗微生物剂、抗病毒剂、防腐剂或其任意组合的方法。在一方面，本公开内容提供了使用溶菌酶(例如，蛋清溶菌酶)来抑制食品腐败生物体的生长、抑制late-blowing(例如，奶酪中)、增长保质期、帮助消化性、治疗胃肠道疾病、改善食品安全性、加强免疫系统、替换或减少护肤品中的亚硫酸盐以治愈或预防痤疮或褥疮、用于光学状况、用于牙科状况、用于口腔状况、治疗头痛、治疗感冒、治疗喉部感染或其组合的方法。可重组地表达溶菌酶。

在一方面，本公开内容提供了如下使用卵白蛋白(例如，蛋清卵白蛋白)的方法：用作用于免疫或生物化学研究的参考蛋白；用作研究蛋白质的组成、物理性质和/或结构的标准；用作阻断剂(例如，在免疫组织化学或western印迹中)；用于检测抗血红蛋白单克隆抗体(例如，在酶联免疫吸附测定(elisa)中)；用作分子量测定(例如，通过sds-page或尺寸排阻色谱法)的蛋白质标准；用于细胞培养系统或诊断学以稳定将会以其他方式丧失其功能完整性的酶和激素；用作蛋白质载体或稳定剂；或它们的任意组合。可重组地表达卵白蛋白。

在一方面，本公开内容提供了如下使用卵转铁蛋白(例如，蛋清卵转铁蛋白)的方法：用作铁结合蛋白(例如，以使得细菌培养基中的铁在营养上对有害微生物如痢疾志贺氏菌(schigelladysenteriae)不可用)；用作用于细胞成熟的培养基成分；用于为细胞提供铁；用于除去培养基的毒素(例如，通过结合金属离子，如锌、铁和铝)；用作防腐剂；用作抗病毒剂、抗生素或抗微生物剂；用作乳铁蛋白替代物；或它们的任意组合。可重组地表达卵转铁蛋白。

在一方面，本公开内容提供了如下使用抗生物素蛋白(例如，蛋清抗生物素蛋白)的方法：用作生物素结合剂；用于免疫测定；用于组织化学法；用于细胞化学法；用于生物素纯化；用于染色体可视化；用于蛋白质纯化；用于亲和色谱法；用于亲和细胞化学法；用于研究细胞表面分子相互作用；用于免疫测定中的信号放大；用于诊断学；用于药物递送、靶向或中和；用于基因作图；用于抗生物素蛋白缀合的探针(例如，酶、抗原、抗体、凝集素、激素、核酸、细胞、亚细胞细胞器)；或它们的任意组合。可重组地表达抗生物素蛋白。

在一方面，本公开内容提供了使用分离的重组卵清蛋白、分离的突变卵类黏蛋白或卵清蛋白组合物作为蛋白质补充物的方法。在一方面，本公开内容提供了使用一种或多种卵清蛋白作为蛋白质补充物的方法。在一些情况下，将蛋白质补充物配制为固体(例如，粉末)、液体、凝胶、奶昔或蛋白质棒。

例如，可处理卵清蛋白组合物以去除葡萄糖、保存颜色或稳定组合物以供更长时间的储存。为了较长的储存稳定性，可将葡萄糖从组合物中去除。可将组合物澄清、过滤、脱糖(例如，稳定化，无葡萄糖化)、喷雾干燥并且/或者巴氏灭菌。巴氏灭菌可发生在温度维持在至少130°f(54℃)的“热室”中，持续至少七至十天。在更高温度下的巴氏灭菌可提高凝胶强度。如果组合物的含湿量保持在约6％，则可消除沙门氏菌。当在低湿度水平的热室中储存时，可提高搅打能力。巴氏灭菌可使用高温短时(htst)巴氏灭菌设备进行。喷雾干燥可在巴氏灭菌前后进行。可将组合物进行超巴氏灭菌。可将组合物在-10°至-40°f(-23.3°至-40℃)下澄清、过滤、巴氏灭菌、均化和/或冷冻。组合物可为液体、冷藏的液体、冷冻的液体，或是干燥的。

可将本文的蛋白质和组合物添加至一种或多种食品添加剂，或与一种或多种食品添加剂混合。食品添加剂可增加组合物的体积和/或质量。食品添加剂可改善功能性能和/或物理特征。例如，食品添加剂可防止由冷冻-解冻循环中脂蛋白的脂质部分造成的凝胶化或粘度增加。可添加抗结块剂以制成自由流动的组合物。可添加碳水化合物以增加对干燥期间的热损伤的耐受性(例如，更少的蛋白质变性)并改善干燥组合物的稳定性和流动性。可向干燥组合物添加搅打添加剂(例如，在干燥之前，以按液体重量计小于0.1％的水平)，以改善搅打能力和充气性质。食品添加剂包括但不限于食品着色剂、ph调节剂、天然调味剂、人造调味剂、风味增强剂、批号标记物、食品酸、填料、抗结块剂(例如，硅铝酸钠)、防绿化(antigreening)剂(例如，柠檬酸)、食品稳定剂、泡沫稳定剂或结合剂、抗氧化剂、酸度调节剂、填充剂、保色剂、搅打剂(例如，酯型搅打剂、柠檬酸三乙酯、月桂基硫酸钠)、乳化剂(例如，卵磷脂)、湿润剂、增稠剂、药物赋形剂、固体稀释剂、盐、营养物、甜味剂、上光剂、防腐剂、维生素、膳食元素、碳水化合物、多元醇、树胶、淀粉、面粉、油以及麸皮。

食品着色剂包括但不限于fd&c黄#5、fd&cc黄#6、fd&c红#40、fd&c红#3、fd&c蓝1号、fd&c蓝2号、fd&c绿3号、类胡萝卜素(例如，藏红花，β-胡萝卜素)、胭脂树红、甜菜苷、蝶豆花、焦糖着色剂、叶绿素、接骨木果汁、番茄红素、洋红、香兰(pandan)、辣椒粉、姜黄、类姜黄素、喹啉黄、偶氮玉红(carmoisine)、胭脂红4r、专利蓝v以及绿色s(greens)。

ph调节剂包括但不限于tris缓冲液、磷酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾、柠檬酸、柠檬酸钠、碳酸氢钠和盐酸。

泡沫稳定剂或结合剂包括但不限于κ角叉菜胶、ι角叉菜胶、λ角叉菜胶、柠檬酸三乙酯、黄原胶、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素和聚丙烯酰胺。

盐包括但不限于酸性盐、碱金属盐、有机盐、无机盐、磷酸盐、氯化物盐、氯化钠、氯化钾、氯化镁、高氯酸镁、氯化钙、氯化铵、氯化铁和氯化锌。

营养物包括但不限于大量营养物、微量营养物、必需营养物、非必需营养物、膳食纤维、氨基酸、必需脂肪酸、ω-3脂肪酸和共轭亚油酸。

甜味剂包括但不限于糖替代物、人造甜味剂、乙酰舒泛钾盐、糖精(advantame)、阿力甜、阿司帕坦、环己烷氨基磺酸钠、甘素(dulcin)、甜素(glucin)、新橙皮苷二氢查耳酮、纽甜、p-4000、糖精(saccharin)、阿司帕坦-乙酰舒泛盐、三氯蔗糖、植物甜蛋白(brazzein)、仙茅甜蛋白、甘草甜素、甘油、菊粉、罗汉果苷、马槟榔甜蛋白、麦芽低聚糖、甘露糖醇、神奇蛋白、莫纳甜、莫内林、欧亚水龙骨甜素、潘塔亭、甜菊、三叶苷以及索默坦蛋白质。

碳水化合物包括但不限于糖、蔗糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖、甘露糖、阿洛酮糖、塔格糖、木糖、阿拉伯糖、高果糖玉米糖浆、高麦芽糖玉米糖浆、玉米糖浆(例如，无葡萄糖玉米糖浆)、单糖、二糖以及多糖(例如，聚右旋糖、麦芽糖糊精)。

多元醇包括但不限于木糖醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇、山梨糖醇、苏糖醇、阿拉伯糖醇、氢化淀粉水解物、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、甘露糖醇和半乳糖醇(卫矛醇(dulcitol))。

树胶包括但不限于阿拉伯胶、结冷胶、瓜尔胶、刺槐豆胶、阿拉伯树胶、纤维素胶和黄原胶。

维生素包括但不限于烟酸、核黄素、泛酸、硫胺素、叶酸、维生素a、维生素b6、维生素b12、维生素d、维生素e、叶黄素、玉米黄质、胆碱、肌醇以及生物素。

膳食元素包括但不限于钙、铁、镁、磷、钾、钠、锌、铜、锰、硒、氯、碘、硫、钴、钼和溴。

一种制备组合物的方法可包括干燥和/或浓缩。在一些情况下，干燥形成干燥、脱水、浓缩并且/或者固体的组合物。干燥方法的一些非限制性实例包括热干燥、蒸发(例如，通过真空或空气)、蒸馏、沸腾、在烘箱中加热、真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥、冻干，以及它们的任意组合。干燥的机制可影响组合物的水合和分子结构，以产生不同的物理性质。可将组合物干燥直到该组合物包含按重量计约或至少约0.001％、0.005％、0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％或超过95％的溶剂(例如，水)。可将组合物干燥直到该组合物包含按重量计至多约0.001％、0.005％、0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％或95％的溶剂(例如，水)。例如，可经由任何标准干燥方法(例如，在60℃的烘箱中12-80小时，使用工业鼓风机，等等)来干燥组合物，以去除溶剂，从而形成干燥或固体的组合物。在另一实例中，可将组合物浓缩(例如，从80％水至20％水)。

一种制备组合物的方法可包括稀释和/或水合。在一些情况下，该稀释可包括添加溶剂。可将组合物稀释直到该组合物包含按重量计约或至少约0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5或99.9％的水。可将组合物稀释直到该组合物包含按重量计至多约0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％的水。例如，可将组合物稀释(例如，从20％水至80％水)。在另一实例中，可将干燥组合物水化(例如，从干燥固体至80％水)。

实施例

实施例1：宿主细胞中卵清蛋白的重组表达

将含有编码卵清蛋白的基因序列的dna质粒或dna寡核苷酸与在侧翼限制性序列位点处切割该基因序列的限制酶一起温育。通过琼脂糖凝胶电泳和凝胶提取方法来分离该基因序列。将纯化的基因序列与dna连接酶、(如需要)dna核苷酸，以及在限制性位点处切割从而留下与所分离的基因序列的那些末端互补的末端的表达质粒一起温育，以连接该表达质粒中启动子(其可给予在宿主细胞中的组成型表达，例如，甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子，或给予依赖于宿主细胞系生长的培养基中物质的存在的诱导表达)下游的基因。

例如，含有卵白蛋白的基因序列、在5'→3'方面上两侧分别有ecori和sacii限制性位点的质粒可通过ecori和sacii限制酶切下、在琼脂糖凝胶上分离，并连接至通过ecori和sacii切下的pgapz表达载体中。

采用标准方法(例如，电穿孔)将连接反应转化至感受态细胞系(例如，dh5α细胞系)中并平板接种在含有抗生素(例如，吉欧霉素)的琼脂平板上，以选择已经被表达载体转化的感受态细胞的菌落。在将平板于可手动选择的适合菌落生长的温度下温育一段时间(例如，在37℃下持续16小时)后，选取单个菌落。通过标准分子生物学方法(例如，硅胶膜或柱、苯酚氯仿提取)分离并纯化来自成功转化株的表达载体。

采用标准分子生物学方法(例如，电感受态宿主细胞的电穿孔，或在聚乙二醇或二甲基亚砜的存在下宿主细胞的转化)将表达载体转化至宿主细胞(例如，巴斯德毕赤酵母)中。通过将转化反应的溶液涂布在平板接种的培养基(例如，琼脂平板)上来选择宿主细胞通过该表达载体的成功转化株，其中该培养基适合于宿主细胞的生长并含有选择剂(例如，与该表达载体上所携带的抗性基因对应的抗生素)。将该平板接种的培养基在适当温度下温育适当的时间直到宿主细胞的单个菌落可以从该平板分离(例如，30℃下持续一周)。将所得的克隆各自分离并单独平板接种在新鲜的选择平板上，并再次温育。利用来自这些平板的单个菌落接种含有适合宿主细胞的生长培养基、具有如初始轮次中所用的同一选择剂的单个培养器皿。在适当的时间(例如，在摇瓶中30℃下过夜)后，可通过由该基因序列编码的蛋白质的存在，相对于以来自阴性对照平板(如通过标准分子生物学方法(例如，western印迹法)确定的)的菌落接种的对照器皿来确定每个培养器皿中宿主细胞被表达载体的成功转化。来自与表现出蛋白质表达的培养器皿对应的选择平板的菌落可用于接种含有适合宿主细胞生长的培养基的器皿，以促进宿主细胞的生长以及蛋白质向培养基中的分泌。或者，可储存来自与表现出蛋白质表达的培养器皿对应的选择平板的菌落以供后续使用(例如，在-80℃下于dmso溶液中)。

实施例2：宿主细胞的选择以及重组蛋白与天然蛋白质的比较

可合成编码蛋清的蛋白质组分的dna序列并将其克隆至表达载体中以供在宿主细胞(例如，酵母，丝状真菌)中表达。

例如，酵母菌株巴斯德毕赤酵母由于其在重组表达和蛋白质分泌中，特别是对于具有二硫键的蛋白质的效率而可以是适用于重组载体的宿主物质。使巴斯德毕赤酵母在含甘油的bmgy培养基中生长两天并切换至含甲醇的bmmy培养基以诱导重组蛋白质产生，并在30℃下伴随振荡的烧瓶中生长两天至一周。

可通过例如蛋白质构象、活性、乙酰化模式、磷酸化模式、糖基化模式、凝胶化性质或其他功能特性，将重组蛋白质与天然蛋白质相比较。

应优化上述方案以便可以增加蛋白质产量/(l培养物)/天，从而实现最佳输出能力和生产成本。

实施例3：重组蛋白质的纯化

可从转化细胞系的培养物获得纯化的重组蛋白。可通过合适大小的发酵器皿和培养时间来获得期望的蛋白质产量(例如，按克计)。可从培养物上清液中纯化所分泌的重组蛋白(例如，通过在离心机中离心出培养基)。例如，通过离心从培养物上清液去除宿主细胞。然后通过中空纤维渗滤纯化该上清液中的蛋白质。在第二实例中，可通过温和盐萃取然后离心来纯化蛋白质。

备选的器皿设计可允许培养基的连续循环，以及在单独的器皿中过滤，从而在不中断细胞生长的情况下收集蛋白质分泌物(例如，中空纤维生物反应器)。

可将纯化的重组蛋白通过适合于加热时胶凝的适当ph的水性缓冲液透析以获得湿的卵清蛋白组合物，或通过适合于下游冻干(例如，喷雾干燥)的适当ph的水性缓冲液透析以获得粉末状卵清蛋白组合物。

通过考马斯染色的4-20％十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)来表征所纯化的重组蛋白，如图16和图17中的实例所示。

实施例4：纯化的重组蛋白组合至卵清蛋白组合物中

对于即将被包含在卵清蛋白组合物的最终制剂中的每种卵清蛋白成分，可单独地进行转化细胞系中重组载体的构建及其蛋白质产物的纯化。可期望组合和量的组合物中的这些纯化蛋白质添加至一个体积中，以实现每种蛋白质的特定最终浓度。例如，一种制剂可包含以与其在动物衍生的蛋清中的对应浓度相匹配的最终浓度添加在一起的成分重组蛋白。

可将卵清蛋白组合物作为湿的卵清蛋白组合物储存和冷藏。或者，可首先将卵清蛋白组合物加热以诱导胶凝(在足以诱导大多数不稳定成分蛋白变性的温度下)，然后作为冷藏产物储存或冻干以获得粉末状卵清蛋白组合物。或者，可将蛋白蛋白以冻干的形式组合形成卵清蛋白组合物并然后溶解在溶液中。该溶液中盐和食品添加剂的浓度和组分可根据制剂而变化。

可将不同量的蛋白质组分以匹配于在动物衍生的蛋清中发现的那些的比例混合在一起，并喷雾干燥以作为可通过添加水而重建的干燥卵清蛋白包装。或者，可使鸡蛋蛋白混合物经历加热，并可随后将该物质的凝胶作为冷藏的现成蛋清包装。可改变诸如蛋白质混合物组成、ph、水百分比、加热速率等因素以产生在稠度和适口性方面的变化。

实施例5：从鸡蛋中分离蛋清

通过将未破碎的鸡蛋置于外面至少30分钟而使鸡蛋达到室温(例如，25℃)。将蛋清与蛋黄分离。

实施例6：搅打的蛋清或卵清蛋白组合物的发泡和泡沫稳定性

将蛋清或卵清蛋白组合物(10ml)添加至50mlpyrex烧杯。将该烧杯放置在dremel旋转工具工作站架上，该工作站架安装有具有0.5英寸钢刷附件的dremel3000变速旋转工具。调整该架，使得当dremel下降进入烧杯时，该刷子几乎不接触烧杯的底部并且完全浸没在该蛋清中。从该浸没的起始位置，将dremel工具打开至速度设置3。该钢刷搅打鸡蛋1分钟。1分钟后，关闭dremel工具，抬起附件，并移开烧杯。

采用至少0.5mm精度的卡尺，以液体泡沫界面至泡沫空气界面的距离测量泡沫高度。如果没有液体可见，则将泡沫高度测量为烧杯底与泡沫空气界面顶部的距离。

为测量渗出和/或泡沫稳定性，在关掉dremel工具后10分钟采用卡尺以烧杯底与液体泡沫界面的距离测量液体的量。在关掉dremel工具后30分钟再次测量液体的量。

搅打的蛋清的泡沫高度约为30mm。

搅打的卵清蛋白组合物的泡沫高度可约为36.25mm。

搅打的蛋清的泡沫渗出在10min后约为2.5mm，在30min后约为8mm。

搅打的卵清蛋白组合物的泡沫渗出可在10min后约为0mm，在30min后约为0.5mm。

实施例7：搅打的蛋清或卵清蛋白组合物的泡沫强度和质地分析

用至少40mm的搅打的蛋清泡沫或搅打的卵清蛋白组合物泡沫填充重结晶盘。采用在brookfieldct3质地分析仪上的brookfieldta-mp探针设置3g的触发值以及20mm的变形。将零高度设置为在蛋清泡沫或卵清蛋白组合物的表面上小于5mm处。在搅打蛋清或卵清蛋白组合物后立即在正常设置下进行至少一式三份的测试。在搅打后的30分钟内测试搅打的蛋清或搅打的卵清蛋白组合物以将由于渗流造成的误差降至最低。在测试中选择先前未测试的不同的泡沫表面区域，使得来自先前测试的任何塌陷的泡沫气泡不会在后续测试中引入误差。对于误差测量，考虑触发值之前的初始噪声。还记录了每个样品进行的3次运行之间的峰值负载。

搅打的蛋清的泡沫强度约为38g，例如如图18所示。

搅打的卵清蛋白组合物的泡沫强度约为62g，例如如图18所示。

实施例8：经烹饪的蛋清或卵清蛋白组合物的凝胶强度

将蛋清或卵清蛋白组合物(10ml)添加至50ml锥形falcon管。将该管在95℃下的水浴中煮沸9分钟。取出该管并使其冷却至室温。将该管放置在brookfieldct3质地分析仪上的管支架上，并将brookfieldta-10探针降低至经烹饪的蛋清或卵清蛋白组合物的表面上方约2mm处。该分析仪以3g的触发值和2mm的变形运行。经烹饪的蛋清或卵清蛋白组合物的凝胶强度被测量为第一次运行时经2mm变形所观察到的峰值硬度。

经烹饪的蛋清的凝胶强度约为500至700g。

经烹饪的卵清蛋白组合物的凝胶强度约为150至500g。

实施例9：蛋清或卵清蛋白组合物的乳化能力和乳液稳定性

为评价乳化能力，将油逐渐添加至含有蛋清或卵清蛋白质组合物的溶液中。确定从水包油乳液转化为油包水乳液所需的油的量。

为评价乳液的稳定性，在将该乳液置于某些条件下后，确定从乳液中分离的油或水的量。

实施例10：带有蛋清或卵清蛋白组合物的天使蛋糕(angelfoodcake)

使蛋清或卵清蛋白组合物(30g)升至室温并放置在带有搅打附件的kitchenaid架混合器的混合碗中。在速度5下击打蛋清或卵清蛋白组合物直到形成软峰。缓慢添加精细砂糖(18g)。在速度8下击打该混合物直到形成硬峰。在单独的碗中，将糖(18g)和面粉(24g)一起筛分。在速度2下将糖和面粉混合物拌成混合物。将面糊舀入圆形天使蛋糕盘中，并在200°f的预热烘箱中烘烤30分钟。在将该盘从烘箱中取出后，将其立即倒置并冷却，然后将蛋糕从盘中取出。

虽然本文已经显示和描述了本发明的优选实施方案，但对于本领域中技术人员将显而易见的是，此类实施方案仅通过举例的方式提供。在不偏离本发明的情况下，本领域技术人员现将想到众多更改、改变和替换。应当理解，可采用本文所述的本发明实施方案的各种替代方案用于实践本发明。旨在由以下权利要求来限定本发明的范围，并且因此涵盖在这些权利要求的范围内的方法和结构及其等同项。