一种乳酸菌复合微生态制剂及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明主要涉及微生物和饲料添加剂技术领域，具体涉及一种乳酸菌复合微生态 制剂及其应用。
【背景技术】
[0002] 随着畜禽养殖业规模的扩大，抗生素由于具有降低畜禽发病及死淘率、提高生长 性能和经济效益的作用，在畜牧养殖中被广泛的应用。但是随着畜牧业的发展，人们逐渐意 识到由抗生素引发的抑制免疫器官生长发育、导致肠道菌群紊乱、畜禽产品药物残留等负 面影响严重危害了动物和人类的身体健康。因此，开发一种无污染、无残留的新型促生长剂 来取代抗生素已成为畜牧业发展的必然趋势。
[0003] 乳酸菌作为微生态饲料添加剂不仅具有安全、绿色、无污染、无残留等功能特性， 而且在畜禽肠道微生态平衡、生长性能、免疫机能等方面也具有不同程度的促进作用，是抗 生素理想的替代品之一。
【发明内容】
[0004] 针对开发一种安全、绿色、无污染、无残留的新型抗生素替代品，本发明提供了一 种乳酸菌复合微生态制剂及其应用，可以用于调节肉鸡肠道平衡，提高机体免疫力，进而促 进肉鸡生长。
[0005] 为实现上述发明目的，本发明通过下述技术方案予以实现： 本发明提供了一种乳酸菌复合微生态制剂，所述复合微生态制剂包括:菌含量不低于2 XlO8 CFU /g的鼠李糖乳酸杆菌、菌含量不低于IX IO8 CFU /g的唾液乳杆菌、菌含量不低 于2 X IO6 CFU /g的干酪乳杆菌、菌含量不低于2 X IO7 CFU /g的植物乳杆菌和载体。
[0006] 进一步的：所述鼠李糖乳酸杆菌选用保藏编号为CGMCC No. 11387的鼠李糖乳酸 杆菌W27。
[0007] 进一步的:所述唾液乳杆菌选用保藏编号为CGMCC No. 11386的唾液乳杆菌XJP2。 [0008]进一步的:所述载体为豆柏粉，含量不低于500mg/g，60目筛上物为0。
[0009]本发明还提供了所述的乳酸菌复合微生态制剂在制备用于肉鸡的饲料添加剂中 的应用。
[0010]进一步的:所述复合微生态制剂的添加量为按照全价配合饲料总质量的1%。_4%〇。
[0011] 进一步的:所述微生态制剂显著提高了肉鸡的生长性能，提高了日增重，降低了料 肉比。
[0012] 进一步的：所述微生态制剂显著提高了肉鸡的机体免疫力，提高了血液中IgG、 IgA、IgM 含量。
[0013] 与现有技术相比，本发明具有以下优点和技术效果： 1、本发明选用的鼠李糖乳酸杆菌、唾液乳杆菌是从健康肉鸡肠道中分离出来的益生菌 菌株，可肠道黏附定植，有效调节肠道菌群平衡，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心。乳酸菌可以促进营养物质吸收，调节肠道微生态平衡，进而提高机体免疫 力，降低疾病发生，促进动物生长，提高经济效益。
[0014] 2、鼠李糖乳酸杆菌、唾液乳杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌配合使用，一方面可竞 争性抑制肠道致病菌的繁殖，间接刺激机体产生非炎性免疫效应，提高机体免疫力，降低肉 鸡发病率及死亡率;另一方面乳酸菌可促进营养物质吸收，提高肉鸡生长性能。
[0015] 3、本发明的乳酸菌复合微生态制剂用于肉鸡养殖中，具有显著提高肉鸡血液中免 疫球蛋白IgG、IgM和IgA的含量，并显著提高其生长性能，降低料肉比的作用。
【具体实施方式】
[0016] 结合以下具体实例对本发明作进一步详细说明。
[0017] 实施例1、菌种的筛选 一、唾液乳杆菌XJP2的分离筛选 1、以健康肉鸡为样品，用无菌载玻片刮取盲肠黏膜于无菌水中，振荡混匀进行梯度稀 释，MRS培养基倾注培养筛选"溶钙圈"明显的菌落，多次纯化后得到单菌落，命名为XJP2，保 存。
[0018] 所述菌株XJP2在MRS平板的菌落生物学特性:革兰氏阳性、镜检为短杆状;菌落圆 形、光滑平整，边缘整齐，较湿润，乳白色。生理生化指标显示菌株XJP2不能还原硝酸盐，不 液化明胶，不产生吲哚和硫化氢，且接触酶试验阴性。
[0019] 2、唾液乳杆菌XJP2的16S rRNA序列测定 以所述菌株XJP2的DNA为模板，16S rRNA通用引物进行扩增，扩增片段进行序列测定； Blast比对显不该菌株序列与GenBank基因库中LactobaciIlus salivarius的16s rRNA序 列同源度最高，同源率为99%。通过DNAMAN6.0对Genbank中已有的乳杆菌属的16S rRNA序列 进行遗传进化分析，结果显示，菌株XJP2与LactobaciIlus salivarius同源性最高，判定该 菌株XJP2为唾液乳杆菌。
[0020] 将筛选到的菌株XJP2进行菌种保藏，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心(CGMCC);地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究 所;保藏日期:2015年9月16日；唾液乳杆菌Lactobaci Ilus sal ivarius的保藏编号为CGMCC No. 11386。
[0021] 二、鼠李糖乳酸杆菌Lactobacillus rhamnosus W27的筛选 1、鼠李糖乳酸杆菌Lactobacillus rhamnosus W27从健康鸡的盲肠食糜中分离得到： 用无菌载玻片刮取盲肠黏膜于无菌水中，振荡混匀进行梯度稀释，MRS培养基倾注培养筛选 "溶钙圈"明显的菌落，多次纯化后得到单菌落，命名为W27，保存。
[0022] 2、鼠李糖乳酸杆菌Lactobacillus rhamnosus W27的主要特性 菌体形态特征:革兰氏染色阳性，呈细长丝状杆菌。
[0023] 菌落形态特征:乳白色菌落，圆形隆起，边缘整齐。
[0024]生长特征：兼性厌氧菌生长，生长温度范围为26-73 °C (最适温度为38 °C )，生长pH 值范围为ρΗ5·6-8·7(最适ρΗ6·3)。
[0025]生长曲线：使用MRS液体培养基（蛋白胨2 g;酵母浸膏2 g;氯化钠 0.1 g;K2HP〇4 0.04 g;KH2P〇4〇.04 g;CaCl2.6H2〇 0.01 g;MgS〇4.7H20 0.01 g;NaHC03 2 g;吐温80 2 mL; 氯化血红素0.02 g;维生素 Kl 10 yL;半胱氨酸盐酸盐0.5 g;胆盐0.5 g;蒸馏水加至1000 mL)37°C条件下培养，结果表明，3 h-12 h为对数生长期，12 h进入平台期，细菌几乎停止生 长，活菌数量和凋亡细菌处于一个平衡时期。
[0026] 3、生化鉴定 根据《伯杰氏细菌鉴定手册》，做如下生化试验:经过氧化氢酶试验、硝酸盐试验检验均 为阴性，且不液化明胶，不产生11引噪和硫化氢，判定所筛选出的LactobaciIIus rhamnosus W27菌株属于乳酸菌(Lactobaci Ilus)属。
[0027] 4、16S rRNA基因测序 使用细菌通用引物(Lane，1991)扩增细菌16S rDNA基因全长序列，PCR反应参照宝生物 公司rTaq DNA聚合酶的使用说明书进行，PCR反应体系（50 uL)为：Buffer 5 uL;dNTP 4 uL;上下游引物各I uL;Taq酶0.25 uL;水37.75 uL;模板I uL。扩增细菌16S rRNA基因全 序列，扩增产物进行测序（Invitrogen，上海）。序列的同源性通过互联网与GenBank进行比 较（网址：http : //www.ncbi .nlm.nih · gov)，比较结果显示出所筛选出的LactobaciIlus rhamnosus W27菌株与鼠李糖乳酸杆菌相似度最高，说明其为鼠李糖乳酸杆菌。
[0028] 将筛选到的菌株W27进行菌种保藏，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中心(CGMCC);地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所； 保藏日期:2015年9月16日；鼠李糖乳酸杆菌LactobacilIus rhamnosus的保藏编号为CGMCC No. 11387。
[0029] 实施例2 本发明所述的乳酸菌复合微生态制剂包括：鼠李糖乳酸杆菌W27(LaCt〇bacillu S !?11已1]111〇8118)含量不低于2/1080?1]/^，唾液乳杆菌乂见2(1^(31：〇&&(3；[11118 8&1；[￥&1'；[118)含量 不低于IXio8 CFU /g，干酪乳杆菌含量不低于2X106 CFU /g，植物乳杆菌含量不低于2X IO7CFU /g，载体豆柏粉含量不低于500mg/g。
[0030] 本发明所述复合微生态制剂的添加量为按照全价配合饲料总质量的1%。-4%〇。
[0031] 将150只1日龄健康且体重差异不显著的罗斯308肉鸡随机分为3个处理组，I组 为对照组，饲料中不添加任何微生态添加剂；II组在饲料中添加乳酸菌复合微生态制剂； m组在饲料中添加仅含干酪乳杆菌和植物乳杆菌的复合微生态制剂，添加量与π组一致， 每个处理组设5个重复，每重复组10只鸡。
[0032]试验前对鸡舍、鸡笼及周边环境消毒处理，试验过程中保持恒定光照和机械通风， 试验采用笼养方式，鸡舍采用自动控温加热装置。试验肉鸡自由采食、自由饮水，试验周期 42天。
[0033] 试验开始后在每周末分别对每组鸡定时空腹称重，称重时回收余料，统计料用量； 计算整个试验周期内肉鸡的平均日增重、平均日采食量及料肉比。
[0034] 平均日采食量=(饲喂量-余料量)/饲喂天数 平均日增重(g)=总增重(g)/试验天数 料肉比=平均日采食量(g)/平均日增重(g) 试验于42日龄每个处理组均采用翅下静脉采血方式采集血液样本，使用一次性真空促 凝管，倾斜放置待血清洗出，测定其免疫球蛋白IgG、IgM和IgA含量。
[0035] 表1乳酸菌复合微生态制剂对肉鸡日增重、日采食、料肉比影响
注：问行上标小写字母小同表示差异显著（P〈〇.05)，同行上标字母相同则表示差异小 显著（Ρ>0·05) 从表1可以看出，在整个42天肉鸡养殖过程中，II组肉鸡的日增重显著高于I组和m 组，料肉比显著低于I组和m组;而日采食量三个组别无显著差异。说明本发明的乳酸菌复 合微生态制剂由于添加了鼠李糖乳酸杆菌(LactobaciIlus rhamnosus W27)和唾液乳杆菌 (Lactobacillus salivarius XJP2)可以更显著地提高肉鸡的生长性能。
[0036] 从表2可以看出，II组肉鸡血液中免疫球蛋白IgG、IgA含量均显著高于I组和ΙΠ 组，IgM含量与m组无显著差异，但显著高于I组。说明本发明的乳酸菌复合微生态制剂由 于添加了鼠李糖乳酸杆菌(LactobaciIlus rhamnosus W27)和唾液乳杆菌(LactobaciIlus salivarius XJP2)可以更显著地提高肉鸡机体免疫力。
[0037]以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实 施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施 例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或替 换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。
【主权项】
1. 一种乳酸菌复合微生态制剂，其特征在于:所述复合微生态制剂包括:菌含量不低于 2X10 8 CFU /g的鼠李糖乳酸杆菌、菌含量不低于1X108 CFU /g的唾液乳杆菌、菌含量不低 于2X106 CFU /g的干酪乳杆菌、菌含量不低于2X107 CFU /g的植物乳杆菌和载体。2. 根据权利要求1所述的乳酸菌复合微生态制剂，其特征在于:所述鼠李糖乳酸杆菌选 用保藏编号为CGMCC No. 11387的鼠李糖乳酸杆菌W27。3. 根据权利要求2所述的乳酸菌复合微生态制剂，其特征在于:所述唾液乳杆菌选用保 藏编号为CGMCC No. 11386的唾液乳杆菌XJP2。4. 根据权利要求1所述的乳酸菌复合微生态制剂，其特征在于:所述载体为豆柏粉，含 量不低于500mg/g，60目筛上物为0。5. 权利要求1-4任一项所述的乳酸菌复合微生态制剂在制备用于肉鸡的饲料添加剂中 的应用。6. 根据权利要求5所述的乳酸菌复合微生态制剂在制备用于肉鸡的饲料添加剂中的应 用，其特征在于:所述复合微生态制剂的添加量为按照全价配合饲料总质量的1%。-4% 〇。7. 根据权利要求5所述的乳酸菌复合微生态制剂在制备用于肉鸡的饲料添加剂中的应 用，其特征在于:所述微生态制剂显著提高了肉鸡的生长性能，提高了日增重，降低了料肉 比。8. 根据权利要求5所述的乳酸菌复合微生态制剂在制备用于肉鸡的饲料添加剂中的应 用，其特征在于:所述微生态制剂显著提高了肉鸡的机体免疫力，提高了血液中IgG、IgA、 IgM含量。
【专利摘要】本发明提供了一种乳酸菌复合微生态制剂及其应用，所述复合微生态制剂包括：鼠李糖乳酸杆菌含量不低于2×108 CFU /g，唾液乳杆菌含量不低于1×108 CFU /g，干酪乳杆菌含量不低于2×106 CFU /g，植物乳杆菌含量不低于2×107 CFU /g和载体。本发明涉及的乳酸菌复合微生态制剂可以显著提高肉鸡血液中免疫球蛋白IgG、IgM和IgA的含量，并显著提高其生长性能，降低了料肉比；具有安全性、无残留和无副作用等优点。CGMCC No. 1138620150916
【IPC分类】A23K50/75, A23K10/18
【公开号】CN105707507
【申请号】CN201610151886
【发明人】王晓伟, 赵世伟, 于刚, 王欣志, 赵志强, 王政
【申请人】青岛根源生物技术集团有限公司