一种调节免疫功能的虫草速溶冲剂、片剂和虫草酒的制作方法

本发明涉及虫草保健食品，尤其是以虫草n6-(2-羟乙基)腺苷为功能成分的虫草冲剂、虫草片和虫草酒。

背景技术：

虫草包含冬虫夏草、蛹虫草、蝉花虫草等均属子囊菌纲、麦角科、虫草属，主要分布于青海、西藏、四川、云南和浙江等地，为我国特有的传统名贵中药材，其强壮滋补功能与人参、鹿茸并驾齐驱。以冬虫夏草为代表的名贵滋补药材具有改善睡眠、抗肿瘤、抗疲劳、调节免疫等功效。近年来，蛹虫草、蝉花虫草中因含有甘露醇、虫草多糖、虫草素、麦角甾醇、核苷类物质等多种生物活性成分，具有冬虫夏草近似的功能，逐渐成为其替代品，同样具有对抗神经衰弱、镇静、改善睡眠、调节免疫等功效。

n6-(2-羟乙基)腺苷(hea)，据报道存在于蝉花虫草、粉被虫草及蛹虫草中，是第一个生物来源的钙离子拮抗剂，具有很强的抗紫外辐射、抗血小板凝结和镇痛等效用，经柴一秋等证明hea具有镇痛、抗惊厥、改善睡眠和保肾等功效。

目前市场上虫草产品质量参差不齐，主要产品为天然虫草、人工栽培虫草的菌丝体、子实体及加工产品，以n6-(2-羟乙基)腺苷为功能成分开发调节免疫的虫草功能食品，不仅具有创新性，还具有质量可控性强、易吸收利用，能够满足人们对口感、产品价格及携带便利等多方面需求，应具有极高的开发价值。

技术实现要素：

本发明是针对n6-(2-羟乙基)腺苷的应用现状，旨在提供以n6-(2-羟乙基)腺苷为功能性成分的食品，该产品相对于市场已有的虫草保健制品功能明确，更便于携带，服用方便。

为了达到上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

一种调节免疫功能的虫草速溶冲剂，其特征在于，所述虫草速溶冲剂以n6-(2-羟乙基)腺苷为功能性成分，虫草速溶冲剂的制备方法如下：

1.1将虫草、红枣和枸杞干燥至含水量低于5％，按重量份配比：虫草10-60份、红枣10-40份、枸杞10-30份，将虫草、红枣和枸杞粉碎过筛，加入10-30倍的纯水浸泡2h，得原料混合液；所述虫草为天然或人工培养的冬虫夏草、蝉花虫草、蛹虫草及其子实体、菌丝、孢子和培养剩余培养基中的一种或多种；

1.2对原料混合液进行超声提取：25℃提取2次，每次35分钟，固液分离后，取上清浓缩，干燥得到含虫草功能性成分n6-(2-羟乙基)腺苷的虫草提取物；

1.3将步骤1.2所得的虫草提取物与三氯蔗糖放入混匀机混匀，三氯蔗糖的加入量为10-30份，过筛，剔除过大颗粒和粉末，高压灭菌后定量包装。

进一步地，步骤1.1中各原料的配比为虫草20份、红枣20份、枸杞30份。

本发明的虫草速溶冲剂，以虫草10-60份、红枣10-40份、枸杞10-30份、三氯蔗糖10-30份为原料，对原料虫草、红枣和枸杞进行超微粉碎、浸泡、超声提取、浓缩、干燥后，制得含虫草功能性成分n6-(2-羟乙基)腺苷的提取物，再将提取物与三氯蔗糖混合，制得高含量功能性成分的虫草速溶冲剂。

本发明中所指的份数均为重量份。

本发明还提供一种调节免疫功能的虫草片剂，其特征在于，所述虫草片剂以n6-(2-羟乙基)腺苷为功能性成分，虫草片剂的制备方法如下：

1.1将虫草、红枣和枸杞干燥至含水量低于5％，按重量份配比：虫草10-60份、红枣10-40份、枸杞10-30份，将虫草、红枣和枸杞粉碎过筛，加入10-30倍的纯水浸泡2h，得原料混合液；所述虫草为天然或人工培养的冬虫夏草、蝉花虫草、蛹虫草及其子实体、菌丝、孢子和培养剩余培养基中的一种或多种；

1.2对原料混合液进行超声提取：25℃提取2次，每次35分钟，固液分离后，取上清浓缩，干燥得到含虫草功能性成分n6-(2-羟乙基)腺苷的虫草提取物；

1.3向步骤1.2所得的虫草提取物中加入微晶纤维素、三氯蔗糖和柠檬酸，混合均匀后制成湿粒；其中虫草提取物62-88份、微晶纤维素1-5份、三氯蔗糖10-30份、柠檬酸1-3份；

1.4将步骤1.3所得湿粒在65℃下干燥至水分含量为2～3％，过20目筛网整粒，在干燥颗粒中加入0.5-2份的硬脂酸镁作润滑剂，混匀后经压片机压片得到含有虫草功能性提取物的虫草片剂；

1.5高压灭菌后质检、包装。

步骤1.1中各原料的配比为虫草20份、红枣20份、枸杞30份。

本发明的虫草片剂，以虫草10-60份、红枣10-40份、枸杞10-30份、三氯蔗糖10-30份、微晶纤维素1-5份、三氯蔗糖10-30份、柠檬酸1-3份、硬脂酸镁0.5-2份为原料，对原料虫草、红枣、枸杞进行超微粉碎、浸泡、浓缩、提取、干燥后，得到含虫草功能性成分n6-(2-羟乙基)腺苷的提取物，再将提取物与三氯蔗糖、微晶纤维素、三氯蔗糖份、柠檬酸混合，辅以硬脂酸镁，制得高含量功能性成分的虫草片剂。

本发明第三个目的是提供一种调节免疫功能的虫草酒，其特征在于，所述虫草酒以n6-(2-羟乙基)腺苷为功能性成分，虫草酒的制备方法如下：

1.1将虫草、红枣和枸杞干燥至含水量低于5％，按重量份配比：虫草10-60份、红枣10-40份、枸杞10-30份，将虫草、红枣和枸杞粉碎过筛，加入10-30倍的纯水浸泡2h，得原料混合液；所述虫草为天然或人工培养的冬虫夏草、蝉花虫草、蛹虫草及其子实体、菌丝、孢子和培养剩余培养基中的一种或多种；

1.2对原料混合液进行超声提取：25℃提取2次，每次35分钟，固液分离后，取上清浓缩，干燥得到含虫草功能性成分n6-(2-羟乙基)腺苷的虫草提取物；

1.3以步骤1.2所得的虫草提取物为原料与饮用酒按以下比例调配：

饮用酒93-98重量份

虫草提取物2-7重量份

1.4在容器中混合均匀；

1.5容器封口，并在室温下静置12个月以上；

1.6经双重过滤得澄清滤液即为虫草酒。

进一步地，步骤1.1中原料的配比为虫草20份、红枣20份、枸杞30份。

虫草提取物与饮用酒的配比为：饮用酒为95～97.5份，虫草提取物2.5～5份。

所述的饮用酒选自42-65度的白酒或12-28度的黄酒。更为优选地，所述的饮用酒选自48-52度的白酒或22-28度的黄酒。

本发明的虫草酒，以虫草10-60份、红枣10-40份、枸杞10-30份原料，对原料虫草、红枣、枸杞进行超微粉碎、浸泡、浓缩、提取、干燥后，得到含虫草功能性成分n6-(2-羟乙基)腺苷的提取物，再将提取物与饮用酒调配，制得高含量功能性成分的虫草酒。

本发明的具有调节免疫功能的食品还可为虫草糖果、虫草调味品、虫草口香糖、虫草奶片等；保健品还可为汤剂或颗粒剂，或以作为中间产品的浸膏形式存在。在优选的诸多实施方式中，本发明的食品被制备为速溶冲剂。与现有技术相比，本发明具有以下优势：

(1)本发明利用天然的或人工培养的冬虫夏草、蝉花虫草、蛹虫草及其子实体、菌丝、孢子和培养剩余培养基中的一种或多种，以n6-(2-羟乙基)腺苷为功效成分，充分利用虫草资源，生产工艺简单，易于推广。

(2)采用的虫草提取工艺，n6-(2-羟乙基)腺苷提取率高，工艺简单。

(3)原料配比科学，保健效果极佳。

(4)另外，本发明使用三氯蔗糖作为甜味剂。这种甜味剂无能量、甜味纯正、高度安全。是目前最优秀的功能性甜味剂之一。不仅可用于肥胖者、还可供糖尿病人、心血管病人及老年人使用。解决了糖尿病人等保健品单一、营养品匮乏的问题。

附图说明

图1是虫草n6-(2-羟乙基)腺苷为功能性成分的虫草速溶冲剂的工艺技术流程示意图。

图2是虫草n6-(2-羟乙基)腺苷为功能性成分的虫草片剂的工艺技术流程示意图。

图3是虫草n6-(2-羟乙基)腺苷为功能性成分的虫草酒的工艺技术流程示意图。

图4是虫草n⁶-(2-羟乙基)腺苷检测标准曲线图。

图5是虫草n⁶-(2-羟乙基)腺苷标样的hplc示意图。

图6是虫草n6二羟乙基腺苷为功能性成分的速溶冲剂中的腺苷含量示意图。

图7是虫草功能性成分n6-(2-羟乙基)腺苷对淋巴细胞增殖的影响示意图。

具体实施方式

本发明的以虫草n6-(2-羟乙基)腺苷为功能性成分的功能食品的具体实施方式并非穷举，本领域技术人员不经过创造性劳动的任何变换均属于本发明权利保护的范围。

实施例1：虫草n6-(2-羟乙基)腺苷为功能性成分的速溶冲剂

图1所示是虫草n6-(2-羟乙基)腺苷为功能性成分的速溶冲剂的工艺技术流程示意图。

1.将虫草子实体和/或菌丝体经优选后干燥至含水量不高于5％，按重量份配比：虫草20份、红枣20份、枸杞30份，对配料后的原料用超微粉碎机进行初粉碎，以纯水为溶媒，固液比为1：20，浸泡2h后25℃超声提取，提取2次，每次35分钟，固液分离；上清液浓缩得到含虫草功能性成分的提取物。

2.加入20份三氯蔗糖入混合机内混合30分钟，用超微粉碎机进行粉碎，用20目筛网进行筛分，取筛下物，对筛上物即粗粉继续用超微粉碎机进行粉碎；制成颗粒，除去大颗粒和粉末，烘干、灭菌后用包装机定量分装成每袋2g即得到虫草功能性速溶冲剂。

检测虫草n6-(2-羟乙基)腺苷为功能性成分的速溶冲剂的腺苷含量为6.39ug/ml。

实施例2：虫草n6-(2-羟乙基)腺苷为功能性成分的虫草片剂

图2所示是虫草n6-(2-羟乙基)腺苷为功能性成分的虫草片剂的工艺技术流程示意图。

1.将虫草子实体和/或菌丝体经优选后干燥至含水量不高于5％，按重量份配比：虫草20份、红枣20份、枸杞30份，对配料后的原料用超微粉碎机进行初粉碎，以纯水为溶媒，固液比为1：10-1：30，浸泡2h后25℃超声提取，提取2次，每次35分钟，固液分离；上清液浓缩后得到虫草功能性提取物。

2.取上步所得的含虫草功能性成分提取物85份，加入微晶纤维素3份、柠檬酸2份、三氯蔗糖15份，混合均匀后，缓慢加入50％乙醇润湿剂制成湿粒。

3.将上步所得湿粒在65℃下干燥水分至2～3％后，过20目筛网整粒，在干燥颗粒中加入硬脂酸镁1份作润滑剂，混匀后经压片机压片得到含有虫草功能性提取物的虫草片剂。

4.高压灭菌后定量分装成每粒1g即得到虫草片剂。

实施例3：虫草n6-(2-羟乙基)腺苷为功能性成分的虫草酒

图3所示是虫草n6-(2-羟乙基)腺苷为功能性成分的虫草酒的工艺技术流程示意图。

1.将虫草子实体和/或菌丝体经优选后干燥至含水量不高于5％，按重量份配比：虫草20份、红枣20份、枸杞30份，对配料后的原料用超微粉碎机进行初粉碎，以纯水为溶媒，固液比为1：10-1：30，浸泡2h后25℃超声提取，提取2次，每次35分钟，固液分离；上清液浓缩后得到虫草功能性提取物。

2.将虫草提取物与饮用酒按重量比为：饮用酒为95～97.5份，虫草提取物2.5～5份的比例在容器中混合均匀，饮用酒选自市售的大麦酒浓度为48-52度或甜酒浓度为22-28度为佳。

3.容器封口，并在室温下静置12个月及以上。

4.采用滤纸抽提过滤，抽滤过程重复2次获得澄清滤液即为虫草酒。

实施例4：虫草n6-(2-羟乙基)腺苷为功能性成分的速溶冲剂在调节免疫中的应用

1材料与方法

1.1材料

取实施例1的虫草速溶冲剂，棕黄色粉末，规格2g/袋。推荐用量为每人每日2次，每次一袋，成人体重按60kg计算，折合剂量为33.33mg/kg.bw。3.1.2实验动物

择健康雄性icr小鼠，18～22g；购自温州医学院动物实验中心。实验前动物适应环境至少5d。室温保持在25℃，自由进食和进水。动物质量合格证编号：scxk(浙)2010-0044。

2.方法

2.1实验分组小鼠随机分为5组：除对照组、模型组外另设受实验动物为人体推荐剂量的5、10、20倍作为虫草速溶冲剂低(166.65mg/kg)、中(333.3mg/kg)、高剂量(666.6mg/kg)浓度组组，每组10只。正常对照组和模型组每日灌胃0.9％氯化钠注射液，受实验组按组给予等体积速溶冲剂，每日1次，连续15天。自给药第2天起，除对照组外，每只小鼠腹腔注射环磷酰胺50mg/kg，连续7d制备免疫功能低下的小鼠。

2.2指标测定

测定免疫器官质量：于末次给药次日，处死小鼠后，称取胸腺和脾脏，计算小鼠胸腺指数和脾脏指数。用巨噬细胞吞噬中性红法测定举噬细胞吞噬指数。用srbc免疫法测定血清溶血素水平。结果采用统计软件spss.16.0进行结果分析。

3.结果

3.1虫草速溶冲剂对小鼠胸腺和脾脏的影响见表1.由表1可见，与对照组比较，模型组的胸腺和脾脏指数显著降低(p<0.05)，虫草速溶冲剂可以提高免疫低下小鼠的胸腺和脾脏指数，与模型组比有统计学差异(p<0.05)。

表1.虫草速溶冲剂对小鼠胸腺和脾脏的影响

与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01；与对照组比较#p<0.05。

3.2虫草速溶冲剂对小鼠巨噬细胞吞噬指数和血清溶血素的影响见表2。由表2可见：与对照组比较，模型组的巨噬细胞吞噬指数和血清溶血素显著降低(p<0.05)，虫草速溶冲剂可以提高免疫低下小鼠的巨噬细胞吞噬指数和血清溶血素，中浓度和高浓度与模型组比有统计学差异(p<0.05)。

表2.虫草速溶冲剂对小鼠巨噬细胞吞噬指数和血清溶血素的影响

与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01；与对照组比较#p<0.05。

实施例5.hplc检测虫草速溶冲剂中n6-(2-羟乙基)腺苷的含量

1.色谱条件

色谱柱：thermoc18色谱柱c18柱，4.6mm×150mm，5μm；流动相为甲醇：0.01mol/l磷酸二氢钾溶液＝13：87；流速1.0ml；检测波长257nm；温度25℃；进样量，20μl

2.色谱结果

2.1n⁶-(2-羟乙基)腺苷检测标准曲线

按照上述色谱条件检测，n⁶-(2-羟乙基)腺苷色谱峰型对称，保留时间充分。回归方程为y＝51.668x-104.7，r＝0.9993。标准曲线见图4，显示n⁶-(2-羟乙基)腺苷在20～125μg范围内，峰面积与进样量呈现良好的线性关系。n6二羟乙基腺苷标样的hplc示意图见图5。

2.2虫草n6二羟乙基腺苷为功能性成分的冲剂的腺苷含量

虫草速溶冲剂腺苷含量检测结果为6.39ug/ml。如图6所示。

实施例6：虫草功能性成分n6-(2-羟乙基)腺苷对淋巴细胞增殖的影响

实验方法：淋巴细胞前期分离处理：

抗凝采血后行常规分离，测淋巴细胞悬液浓度为：1*106/ml，每小格10个左右，每个小孔加入50ul淋巴细胞悬液，加入用无血清1640配置的不同浓度的药物多糖50ul，每个重复6孔，2-10列为不同浓度的多糖，11为细胞悬液对照，周边用1640封上，培养47小时，期间观察细胞活性和生长状况。

结果：通过比较，当n6-(2-羟乙基)腺苷终浓度为500ug/ml时od值显著低于细胞对照，说明该浓度可能抑制淋巴细胞的增殖；当n6-(2-羟乙基)腺苷终浓度为250、125、62.5ug/ml时，od值不显著高于或低于细胞对照，当浓度为15.6、7.8、3.9、1.9ug/ml时，od值显著高于细胞对照，说明n6-(2-羟乙基)腺苷终浓度为1.9-31.2时，可以显著促进淋巴细胞增殖，对免疫具有提高作用。图7是虫草功能性成分n6-(2-羟乙基)腺苷对淋巴细胞增殖的影响示意图。