本发明属于发酵工程领域，具体涉及一种蛹虫草果蔬酵素的制备方法。
背景技术：
酵素又称为酶，是各种生物反应的催化剂，是一种具有特殊活性的蛋白质，它存在于各个生理反应系统及器官组织中，藉以催化及调控体内所有生化反应及新陈代谢的进行。人体内凡是细胞的代谢、新生、分解、消化、合成等，都依靠酵素来完成，更可决定我们的寿命的长与短，因此酵素又被称之为“生命之源”。酵素还具有「专一性」，每一种酵素只能催化一种生化反应进行，因此人体内的酵素种类高达数千种。酵素是益生菌作用于各种食材，将食材分解成的各种小分子易吸收物质，比如各种单糖，氨基酸，维生素，矿物质等易吸收的小分子物质。
酵素通常以果蔬为原材料，通过添加不同的益生菌，少则几个月，多则数年，过程工艺复杂，时间长，容易杂菌污染，产品质量难以控制。
蛹虫草又称北冬虫夏草，东北虫草等，与冬虫夏草同属药材。近年来在研究中发现，蛹虫草具有重要的医药价值，具有提高免疫功能，护肝清肺，止咳化痰，抗疲劳，抗缺氧，抗病毒等功效。蛹虫草人工栽培成功以来，人们对蛹虫草的栽培技术，药理和毒理等方面研究很广泛。研究表明蛹虫草与冬虫夏草具有极相似的作用，无毒副作用。可作为冬虫夏草的代用品。
现有蛹虫草果蔬酵素产品添加的蛹虫草多使用有机溶剂提取虫草素，提取工艺复杂且易造成化学污染，而且功能性成分含量低，效果不明显；另外，现有蛹虫草果蔬酵素产品多添加白砂糖或蔗糖作为碳源发酵，易引起血糖升高，不适合糖尿病人食用。
技术实现要素：
本发明的目的是克服上述不足之处提供一种稳定性好，口感酸甜适中，虫草多糖含量高且适合糖尿病人食用具有增强免疫力的作用的蛹虫草果蔬酵素的制备方法。而且该方法提取工艺简单，绿色环保。
本发明的目的是通过以下方式实现的：
一种蛹虫草果蔬酵素的制备方法，该方法包括以下步骤：
a)蛹虫草子实体粉碎，加入纯化水，蛹虫草与纯化水的重量比例为1:10～15，再加入几丁质酶，加酶量为1％～2％，温度为55～65℃，pH为5.5～6.5条件下，酶解4～6h，然后灭酶、过滤、浓缩得到蛹虫草浓缩物；
b)将多种果蔬洗净，消毒，切片，榨汁，加入麦芽糖醇和木糖醇得到果蔬汁；
c)将果蔬汁与蛹虫草浓缩物按3～5：1的重量比例混合得到蛹虫草果蔬汁，调pH4～6；
d)将复合益生菌粉接入蛹虫草果蔬汁中，37～42℃静置发酵4～6天，巴氏杀菌。
所述步骤a)是在反应釜中进行，酶解时需不断搅拌或间隔搅拌，酶解结束后，把反应釜温度上升至100℃以上进行灭酶，灭酶时间20～30min。
步骤a)所述的浓缩为真空浓缩，条件为真空度0.075～0.09MPa，温度为55～65℃，浓缩至密度为1～1.05，得到蛹虫草浓缩物。
步骤b)中，多种果蔬为等重量的猕猴桃、桑椹、蓝莓、葡萄、西红柿和芹菜。
步骤b)中，麦芽糖醇的用量为果蔬重量的8％～10％，木糖醇的用量为果蔬重量的8％～10％。
步骤b)中，优选麦芽糖醇的用量为果蔬总重量的10％，木糖醇的用量为果蔬总重量的10％。
步骤b)中所述的消毒是采用紫外消毒，消毒时间为25～35min；所述的切片是切成3～5mm厚度的薄片。
步骤b)中加入麦芽糖醇和木糖醇后，再用紫外消毒处理30min。
步骤d)中，所述的复合益生菌粉为青春双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和保加利亚乳杆菌；青春双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和保加利亚乳杆菌各按0.5～1％比例接入蛹虫草果蔬汁中，七者的总接种量为3.5～7％。
与现有技术比较本发明的有益效果：
(1)本品将蛹虫草与果蔬结合，有显著的增强免疫力的作用；
(2)通过添加几丁质酶使蛹虫草细胞壁破碎，使细胞内容物功效成分更容易释放，既能提高有效成分的含量，相对于水提醇沉又减少了工艺流程和有机溶剂的使用，提取工艺简单且减少化学污染。
(3)本发明方法制备的酵素能充分保留蛹虫草中丰富的虫草素，改善了容易杂菌污染的情况，能有效抑制杂菌的生长，不用添加防腐剂即可使产品保质期达18个月以上。
(4)本品以糖醇类物质替代传统的白砂糖或葡萄糖，既能促进益生菌的生长繁殖，加速发酵进程，4～6天即可结束发酵；且不会引起血糖升高，特别适合糖尿病人食用。
具体实施方式：
以下通过具体实施例进一步说明本发明。但实施例的具体细节仅用于解释本发明，不应理解为对本发明总的技术方案的限定。
实施例1
1、蛹虫草果蔬汁的制备
将蛹虫草子实体干货在高速粉碎机中进行粉碎得到蛹虫草子实体粉，在反应釜中加入纯化水，蛹虫草与纯化水的重量比例为1:10，加入几丁质酶，进行破壁处理，加酶量为1.5％，温度为55℃，pH为5.5，酶解5h，酶解时需不断搅拌或间隔搅拌，酶解结束后，需把反应釜温度上升至100℃以上，灭酶20min，然后进行离心过滤，滤液进行真空浓缩，条件为真空度0.075MPa，温度为60℃，浓缩至60℃密度为1.05，得到蛹虫草浓缩物。
水果和蔬菜：猕猴桃、桑椹、蓝莓、葡萄、西红柿和芹菜各1重量份，用纯化水洗净，沥干水分，紫外消毒约30min，切成3～5mm的薄片，用高速匀浆机捣碎，榨汁，加入果蔬重10％的麦芽糖醇，果蔬重10％的木糖醇，再用紫外消毒处理30min。
2、蛹虫草果蔬酵素的制备
果蔬汁与蛹虫草浓缩物按4:1重量比例混合得到蛹虫草果蔬汁，然后添加柠檬酸调pH至6.0。将七种益生菌粉为青春双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和保加利亚乳杆菌各按1％比例接入蛹虫草果蔬汁中，总接种量7％，37℃，静置发酵5天。
3、成品检测及灌装
经过发酵所得的蛹虫草果蔬酵素具有蛹虫草特有的香气，入口柔和润滑，酸甜适中。经过巴氏杀菌100℃，10min，冷却，灌装入瓶。
本实施例制备得到的蛹虫草果蔬酵素中，可溶性固形物达20.1％，虫草素含量可达0.23％，虫草多糖含量可达2.6％；该果蔬酵素常温下保质期18个月，果蔬酵素稳定均匀。
实施例2
1、蛹虫草果蔬汁的制备
将蛹虫草子实体干货在高速粉碎机中进行粉碎得到蛹虫草子实体粉，在反应釜中加入纯化水，蛹虫草与纯化水的重量比例为1:15，加入几丁质酶，加酶量为2％，温度为60℃，pH为6，酶解5h，酶解时需不断搅拌或间隔搅拌，酶解结束后，需把反应釜温度上升至100℃以上，灭酶30min，然后进行离心过滤，滤液进行真空浓缩，条件为真空度0.08MPa，温度为65℃，浓缩至密度为1.05，得到蛹虫草浓缩物。
水果和蔬菜：猕猴桃、桑椹、蓝莓、葡萄、西红柿和芹菜各1重量份，用纯化水洗净，沥干水分，紫外消毒约30min，切成3～5mm的薄片，用高速匀浆机捣碎，加入果蔬重8％的麦芽糖醇，果蔬重8％的木糖醇，再用紫外消毒处理30min。
2、蛹虫草果蔬酵素的制备
果蔬汁与蛹虫草浓缩物按4:1重量比例混合得到蛹虫草果蔬汁，然后添加柠檬酸调pH至6.0。将七种益生菌粉为青春双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和保加利亚乳杆菌各按0.8％比例接入蛹虫草果蔬汁中，总接种量5.6％，37℃，静置发酵5天。
3、成品检测及灌装
经过发酵所得的蛹虫草果蔬酵素具有蛹虫草特有的香气，入口柔和润滑，酸甜适中。经过巴氏杀菌100℃，10min，冷却，灌装入瓶，经检验合格后即为蛹虫草果蔬酵素。
本实施例制备得到的蛹虫草果蔬酵素中可溶性固形物达20.3％，虫草素含量可达0.35％，虫草多糖含量可达2.8％；该果蔬酵素常温下保质期18个月，果蔬酵素稳定均匀。
实施例3
1、蛹虫草果蔬汁的制备
将蛹虫草子实体干货在高速粉碎机中进行粉碎得到蛹虫草子实体粉，在反应釜中加入纯化水，蛹虫草与纯化水的重量比例为1:10，加入几丁质酶，加酶量为1％，温度为55℃，pH为6，酶解6h，酶解时需不断搅拌或间隔搅拌，酶解结束后，需把反应釜温度上升至100℃以上，灭酶25min，然后进行离心过滤，滤液进行真空浓缩，条件为真空度0.075MPa，温度为65℃，浓缩至密度为1.05，得到蛹虫草浓缩物。
水果和蔬菜：猕猴桃、桑椹、蓝莓、葡萄、西红柿和芹菜各1重量份，用纯化水洗净，沥干水分，紫外消毒约30min，切成3～5mm的薄片，用高速匀浆机捣碎，加入果蔬重9％的麦芽糖醇，果蔬重9％的木糖醇，再用紫外消毒处理30min。
2、蛹虫草果蔬发酵酵素的制备
果蔬汁与蛹虫草浓缩物按5:1重量比例混合得到蛹虫草果蔬汁，然后添加柠檬酸调pH至6.0。将七种益生菌粉为青春双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和保加利亚乳杆菌各按1％比例接入蛹虫草果蔬汁中，总接种量7％，37℃，静置发酵5天。
3、成品检测及灌装
经过发酵所得的蛹虫草果蔬酵素具有蛹虫草特有的香气，入口柔和润滑，酸甜适中。经过巴氏杀菌100℃，10min，冷却，灌装入瓶，经检验合格后即为蛹虫草果蔬酵素。
本实施例制备得到的蛹虫草果蔬酵素中可溶性固形物达20.2％，虫草素含量可达0.29％，虫草多糖含量可达2.5％；该果蔬酵素常温下保质期18个月，果蔬酵素稳定均匀。
下面通过具体实例对本发明作进一步说明：
小白鼠60只，雄雌各半，体重相近。随机分成3组，每组20只，Ⅰ组对照组；Ⅱ本发明实施例1蛹虫草果蔬酵素组，III蛹虫草浓缩物组(按照实施例1中所述步骤制备)，Ⅰ组分别每天喂养10mL普通饲料(配方：蚕蛹3％，血粉3％，黄豆13％，鱼粉5％，赖氨酸0.25％，蛋氨酸0.4％，磷酸二氢钾1％，混合维生素1％，其余为基础饲料)；Ⅱ组每天喂养10mL普通饲料，同时喂养10mL蛹虫草果蔬酵素1次/日，每次10mL(10ml/瓶)，喂养1个月。III组每天喂养10mL普通饲料，同时喂养10mL蛹虫草浓缩物1次/日，每次10mL，喂养1个月。
小鼠免疫器官指数的测定：实验结束后处死小鼠并进行称重，然后取出脾脏、胸腺分别称重，并计算脏器/体重的比值。
吞噬细胞功能测定：采用小鼠廓清实验测定。小鼠按10g/0.1mL尾静脉注入4倍稀释的印度墨汁，分别于3min、11min时从后眼眶取血30μL，加到3mL 0.1％Na2CO3溶液，摇匀，在640nm波长处测OD值，同时作空白对照，计算吞噬指数。
鸡红细胞(CRBC)试验：腹腔处注入5％的CRBC悬液0.5mL，lh后处死小鼠，然后，腹腔注入2mL生理盐水，轻柔小鼠腹部，取腹腔冲洗液制片，放入平皿37℃温育0.5h，然后用生理盐水冲洗、干燥，丙酮：甲醇溶液(1：1)固定5min，吉姆萨染液(4％)染3min，显微镜观察计数100个吞噬细胞中吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数量，并计算吞噬百分率。
具体实验结果数据见表1和表2：
表1蛹虫草果蔬酵素对小鼠免疫器官的影响
表2蛹虫草果蔬酵素对小鼠碳粒廓清指数及吞噬细胞吞噬功能的影响
由表1和表2可见，与对照组相比，蛹虫草果蔬酵素能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞对CRBC的吞噬，差异显著(P＜0.01)。表明蛹虫草果蔬酵素能增强小鼠的巨噬细胞和吞噬细胞的吞噬功能，同时与蛹虫草浓缩物组比较也有显著性差异(P＜0.05)。说明本发明蛹虫草果蔬酵素具有协同增效作用，具有显著的增强免疫力的作用。