本发明涉及药物领域，具体而言，涉及一种特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂以及饲料。
背景技术
肠道病原体(病毒性及细菌性)所导致的猪腹泻是养猪业中面临的严谨问题，现有技术中，通常采用抗菌素进行防治，然而抗菌素滥用会导致微生物耐药性问题，继发抗菌素疗效逐渐下降。卵黄免疫球蛋白是禽类经特异性抗原刺激由b淋巴细胞产生并转移至卵黄的特异性抗体，近年来，已经作为抗菌素的替代品得到广泛使用。而现有技术中，对于猪病毒性疾病的卵黄免疫球蛋白的研究只是针对与单个特定病毒的灭杀，例如，猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒等。然而，猪肠道内微生物菌群复杂，很多腹泻并不是由单一病毒或细菌引起的，针对这类情况，现有技术中还没有提出有效的解决方案。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂，其可以针对猪肠道内常见五种致病菌进行特异性免疫，调节猪肠道内微生物菌群的平衡，对猪腹泻具有较好的防治作用。
本发明的另一目的在于提供一种特异性卵黄免疫球蛋白饲料，其对猪腹泻具有较好的防治作用，并可提高猪的采食量、饲料转化率及生长性能。
本发明的实施例是这样实现的：
一种特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂，其活性成分包括特异性卵黄免疫球蛋白复合抗体；
该特异性卵黄免疫球蛋白复合抗体是以猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪细小病毒、大肠杆菌这五种致病菌作为抗原制备的。
一种特异性卵黄免疫球蛋白饲料，其包括上述特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂。
本发明实施例的有益效果是：
本发明实施例提供了一种特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂以及饲料，其以猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪细小病毒、大肠杆菌这五种致病菌作为抗原制备而成。其不仅针对于猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒这两种发病率高、死亡率高的腹泻病毒具有较好的灭杀效果，还对于肠道内其它三种常见致病菌也具备较佳的灭杀效果。其可以较好地调节肠道内微生物菌群的平衡，对猪腹泻具有较好的防治作用，减少猪死亡率，在猪养殖业中具有较大的应用价值。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的一种特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂及其制备方法进行具体说明。
一种特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂，其活性成分包括特异性卵黄免疫球蛋白复合抗体；
该特异性卵黄免疫球蛋白复合抗体是以猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪细小病毒、大肠杆菌这五种致病菌作为抗原制备的。
肠道病原体(病毒性及细菌性)所导致的猪腹泻是养猪业中面临的严谨问题，现有技术中，通常采用抗菌素进行防治，然而抗菌素滥用会导致微生物耐药性问题，继发抗菌素疗效逐渐下降。卵黄免疫球蛋白是禽类经特异性抗原刺激由b淋巴细胞产生并转移至卵黄的特异性抗体，近年来，已经作为抗菌素的替代品得到广泛使用。而现有技术中，对于猪病毒性疾病的卵黄免疫球蛋白的研究只是针对与单个特定病毒的灭杀，例如，猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、轮状病毒等。然而，猪肠道内微生物菌群复杂，很多腹泻并不是由单一病毒或细菌引起的，针对这类情况，现有技术中还没有提出有效的解决方案。
为了抑制猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及其它三种致病菌的繁殖并将其杀灭，恢复猪肠道内环境，发明人研发了对这五种致病菌有特异性杀灭作用的卵黄免疫球蛋白复合抗体，并将其作为饲料添加剂使用。
进一步地，该卵黄免疫球蛋白复合抗体的制备方法包括：
s1.将经过灭活处理的猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪细小病毒、大肠杆菌混合均匀，制成复合抗原。
其中，按照重量份数计，复合抗原包括灭活后的猪流行性腹泻病毒25～30份、猪传染性胃肠炎病毒12～17份、猪轮状病毒20～25份、猪细小病毒18～23份、大肠杆菌23～28份。
优选地，按照重量份数计，复合抗原包括灭活后的猪流行性腹泻病毒26～28份、猪传染性胃肠炎病毒14～16份、猪轮状病毒22～24份、猪细小病毒20～23份、大肠杆菌23～25份。
可选地，在制备复合抗原时，需要先对五种致病菌进行培养，培养的具体方法包括：选取猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪细小病毒、大肠杆菌这五种致病菌分别用lb培养基在35～40℃下培养16～20h后，再接种至肉汤培养基中培养20～28h。
可选地，lb培养基包括0.7wt％～1.3wt％的胰蛋白胨、0.3wt％～0.7wt％的酵母提取物、0.8wt％～1.2wt％的氯化钠和1.2wt％～1.8wt％的琼脂。
可选地，肉汤培养基包括0.1wt％～0.5wt％的牛肉提取物、0.7wt％～1.3wt％的胰蛋白胨、0.3wt％～0.7wt％的氯化钠和1.2wt％～1.8wt％的琼脂。
接种到肉汤培养基后，在35～40℃环境下，于恒温双层振荡培养箱中培养20～28h，恒温双层振荡培养箱的转速控制在100～300rpm，培养完成后灭活待用。
进一步地，将经过灭活处理的猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪细小病毒、大肠杆菌混合均匀后，加入到0.05～0.2mol/l的pbs溶液中进行溶解，并加入等体积的弗氏佐剂，均匀搅拌制得乳状全菌复合抗原，将乳状全菌复合抗原在高速匀浆机中粉碎匀化，即可得到所需的复合抗原。
进一步地，该卵黄免疫球蛋白复合抗体的制备方法还包括：
s2.利用复合抗原对鸡进行强化免疫，得到免疫蛋。
进一步地，对鸡进行强化免疫是将复合抗原注射在20～22周大的鸡的胸肌和大腿处，每处分别注射0.5～1ml；然后每隔10天强化注射一次，共免疫四次；首次注射时所用的弗氏佐剂为弗氏不完全佐剂，第二次到第四次所采用的弗氏佐剂为完全弗氏佐剂，在最后一次注射后收集经过强化免疫的鸡所产的鸡蛋。
优选地，进行强化免疫的鸡为海兰褐鸡、京红鸡、伊莎白鸡和白来航蛋鸡中的任一种。
更为优选地，进行强化免疫的鸡通过如下方法选择：用猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪细小病毒、大肠杆菌这五种致病菌制备复合抗原，免疫母鸡，每次注射0.5～1ml抗原在第一次注射后，每隔二周再强化注射一次，共三次；于第一次注射后第7个月，把这些鸡所产的蛋标记后分别提取其中的igy，以elisa法检测所制得的igy的效价；再比较其效价，选出其中能制得igy溶液剂效价≥1:128的鸡只，再用这批鸡所产的蛋孵出鸡种，待其长大至20～22周，作为进行强化免疫的鸡。
进一步地，该卵黄免疫球蛋白复合抗体的制备方法还包括：
s3.对免疫蛋进行分离、提纯，得到特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂。
对免疫蛋进行提取、纯化的步骤包括：将免疫蛋的蛋黄与水混合，调节ph至4.0～6.0后冷却至-4～4℃，静置1～2天后固液分离，将所得液体浓缩后去除脂蛋白，超微膜过滤除菌，再经离子交换柱和凝胶交换柱进行纯化。
具体地，对免疫蛋进行提取、纯化的步骤可以是：将免疫蛋的蛋黄与水按照1:6的比例混合均匀，并调试ph至5.0；然后将其冷却至4℃，静置24小时；然后经高速离心分离机离心分离20min；将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩20倍，将质量浓度为14％的硫酸钠溶液加入浓缩后的浆料中，充分搅拌；再经高速离心机离心分离，取上清，去除脂蛋白；将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜进行过滤除菌；将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得粗提物干粉成品。
此外，特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂还可以加入酶制剂、益生素、中草药提取物、维生素、矿物元素等辅助成分与卵黄免疫球蛋白复合抗体配合使用。其中辅助成分的质量占特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂的0.5％～2％。
进一步地，本发明实施例还提供了一种特异性卵黄免疫球蛋白饲料，其包括上述特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂。
可选地，按照重量份数计，该特异性卵黄免疫球蛋白饲料包括：特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂0.1～0.5份、玉米65～70份、豆粕20～25份、麦麸5～10份以及鱼粉1～5份。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步地详细描述。
实施例1
本实施例提供一种特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂，其制备方法包括以下步骤：
s1.选取猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪细小病毒、大肠杆菌这五种致病菌，分别在38℃环境下用lb培养基在三气培养箱中培养18h；然后将上述菌种分离并分接种到肉汤培养基中，在38℃环境下在恒温双层振荡培养箱中培养23h，恒温振荡培养箱的转速为200rpm，然后灭活备用。
将经灭活处理后的五种致病菌按照猪流行性腹泻病毒25份、猪传染性胃肠炎病毒17份、猪轮状病毒20份、猪细小病毒23份、大肠杆菌23份混合匀制得菌株混合体。
将混合好的菌株混合体溶解在0.1mol/l的pbs溶液中制得菌株混合体溶液，菌株混合体溶液的浓度为1mg/ml，加入等体积的弗氏佐剂并搅拌均匀，制得乳状全菌复合抗原。将乳状全菌复合抗原放入高速匀浆机中，高速粉碎匀化，制得全菌和菌体成份的复合抗原。
s2.将上述制得的复合抗原注射在20周大的鸡的胸肌和大腿处，每处分别注射0.5ml；然后每隔10天强化注射一次，共免疫四次。首次注射时所用的弗氏佐剂为弗氏不完全佐剂，第二次到第四次所采用的弗氏佐剂为完全弗氏佐剂。在最后一次注射后收集经过强化免疫的鸡所产的鸡蛋。
s3.将免疫蛋的蛋黄与水按照1:6的比例混合均匀，并调试ph至5.0；然后将其冷却至4℃，静置24h；经高速离心分离机离心分离20min；将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩20倍，将质量浓度为14％的硫酸钠溶液加入浓缩后的浆料中，充分搅拌；再经高速离心机离心分离，取上清，去除脂蛋白；将离心分离后的上清加入到超滤机，过超微膜进行过滤除菌；将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得粗提物干粉成品。将粗提物干粉成品经离子交换柱和凝胶交换柱进行纯化。
实施例2
本实施例提供一种特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂，其制备方法如下：
s1.选取猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪细小病毒、大肠杆菌这五种致病菌，分别在37℃环境下用lb培养基在三气培养箱中培养20h；然后将上述菌种分离并分接种到肉汤培养基中，在37℃环境下在恒温双层振荡培养箱中培养28h，恒温振荡培养箱的转速为300rpm，然后灭活备用。
将经灭活处理后的五种致病菌按照猪流行性腹泻病毒30份、猪传染性胃肠炎病毒12份、猪轮状病毒25份、猪细小病毒18份、大肠杆菌28份混合匀制得菌株混合体。
将混合好的菌株混合体溶解在0.2mol/l的pbs溶液中制得菌株混合体溶液，菌株混合体溶液的浓度为1mg/ml，加入等体积的弗氏佐剂并搅拌均匀，制得乳状全菌复合抗原。将乳状全菌复合抗原放入高速匀浆机中，高速粉碎匀化，制得全菌和菌体成份的复合抗原。
s2.将上述制得的复合抗原注射在20周大的鸡的胸肌和大腿处，每处分别注射1ml；然后每隔10天强化注射一次，共免疫四次。首次注射时所用的弗氏佐剂为弗氏不完全佐剂，第二次到第四次所采用的弗氏佐剂为完全弗氏佐剂。在最后一次注射后收集经过强化免疫的鸡所产的鸡蛋。
s3.将免疫蛋的蛋黄与水按照1:6的比例混合均匀，并调试ph至4.0；然后将其冷却至4℃，静置24h；经高速离心分离机离心分离20min；将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩20倍，将质量浓度为14％的硫酸钠溶液加入浓缩后的浆料中，充分搅拌；再经高速离心机离心分离，取上清，去除脂蛋白；将离心分离后的上清加入到超滤机，过超微膜进行过滤除菌；将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得粗提物干粉成品。将粗提物干粉成品经离子交换柱和凝胶交换柱进行纯化。
实施例3
本实施例提供一种特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂，其制备方法如实施例1所示，其区别在于，本实施例中，复合抗原由猪流行性腹泻病毒26份、猪传染性胃肠炎病毒16份、猪轮状病毒22份、猪细小病毒23份、大肠杆菌23份混合制备得到。
实施例4
本实施例提供一种特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂，其制备方法如实施例1所示，其区别在于，本实施例中，复合抗原由猪流行性腹泻病毒30份、猪传染性胃肠炎病毒14份、猪轮状病毒23份、猪细小病毒21份、大肠杆菌24份混合制备得到。
实施例5
本实施例提供一种特异性卵黄免疫球蛋白饲料，其由下列原料干燥、粉碎后混合制的，其原料包括：实施例1所提供的特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂5g、玉米650g、豆粕200g、麦麸100g以及鱼粉10g。
实施例6
本实施例提供一种特异性卵黄免疫球蛋白饲料，其由下列原料干燥、粉碎后混合制的，其原料包括：实施例2所提供的特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂1g、玉米700g、豆粕250g、麦麸50g以及鱼粉50g。
对比例1
本对比例提供一种特异性卵黄抗体饲料添加剂，其制备方法参照
实施例1，其区别在于，本对比例的特异性卵黄抗体饲料添加剂的活性成分包括猪流行性腹泻病毒卵黄免疫球蛋白；
该猪流行性腹泻病毒卵黄免疫球蛋白是以猪流行性腹泻病毒作为单一抗原制备的。
同时，本对比例还提供了一种特异性卵黄抗体饲料，其包括：上述特异性卵黄抗体饲料添加剂5g、玉米650g、豆粕200g、麦麸100g以及鱼粉10g。
对比例2
本对比例提供一种特异性卵黄抗体饲料添加剂，其制备方法参照
实施例1，其区别在于，本对比例的特异性卵黄抗体饲料添加剂的活性成分包括猪传染性胃肠炎病毒卵黄免疫球蛋白；
该猪传染性胃肠炎病毒卵黄免疫球蛋白是以猪传染性胃肠炎病毒作为单一抗原制备的。
同时，本对比例还提供了一种特异性卵黄抗体饲料，其包括：上述特异性卵黄抗体饲料添加剂5g、玉米650g、豆粕200g、麦麸100g以及鱼粉10g。
对比例3
本对比例提供了一种特异性卵黄抗体饲料，其包括：对比例1所提供的特异性卵黄抗体饲料添加剂5g、对比例2所提供的特异性卵黄抗体饲料添加剂5g、玉米650g、豆粕200g、麦麸100g以及鱼粉10g。
试验例
选取125头有腹泻症状的病猪，分成5组，5组病猪分别采用实施例5～6以及对比例1～3的饲料进行正常喂食，由开始喂食后的次日为第1天，记录每天病猪治愈情况，计算治愈率，结果如表1所示。
表1病猪治愈率测试结果
由表1可以看出，采用本申请实施例5～6所提供的特异性卵黄免疫球蛋白饲料对于病猪的治愈效果较佳，到第4天的时候，基本可以完全治愈。而对比1～3所提供的特异性卵黄抗体饲料则治愈效果较差，不仅起效慢，到了第3天才开始见效，其治愈效果也较差，到了第5天也才52％～72％的治愈率。充分说明了，猪腹泻极为可能是由多种病毒或细菌共同造成的，进行单一病毒或细菌的治疗效果较差。
综上所述，本发明实施例提供了一种特异性卵黄免疫球蛋白饲料添加剂以及饲料，其以猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪细小病毒、大肠杆菌这五种致病菌作为抗原制备而成。其不仅针对于猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒这两种发病率高、死亡率高的腹泻病毒具有较好的灭杀效果，还对于肠道内其它三种常见致病菌也具备较佳的灭杀效果。其可以较好地调节肠道内微生物菌群的平衡，对猪腹泻具有较好的防治作用，减少猪死亡率，在猪养殖业中具有较大的应用价值。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。