本发明涉及饲料添加剂技术领域，具体涉及猪用杜仲叶发酵饲料的制备方法与应用。
背景技术：
在畜禽等动物的养殖过程中，常出现消化道、呼吸道等疾病，这严重地影响了畜禽等动物的生长，甚至会造成畜禽死亡，给广大养殖户造成很大的损失。目前饲料添加剂主要是激素类药物或者其他添加剂，如抗生素等，短期内看是解决了一些问题，但实际上导致肉品下降、导致人和动物机体免疫力下降、二次用药量增加、药物残留、双重和内源性感染、致敏作用等一系列问题，对健康构成威胁；在当前大豆紧缺，豆粕价位高涨，寻找替代蛋白原料，开发减少动物与人类争粮的新途径，迫在眉睫。
技术实现要素：
本发明的目的是一种猪用杜仲叶发酵饲料的制备方法与应用，简便易行，经发酵后的杜仲叶饲料，蛋白含量提高，纤维素含量降低，饲喂动物后，改善动物适口性，提高采食量，能降低动物腹泻率，有效预防疾病发生，减少养殖过程中抗生素的使用，为无抗养殖提供了一种切实可行的途径和方法，且提高饲料的利用率，提高了养殖效率，显著促进动物生长，提高动物产品品质，降低料肉比，降低了养殖成本。
本发明是通过以下技术方案予以实现的：
猪用杜仲叶发酵饲料的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)原料的采集和预处理：采集8—11月份的新鲜杜仲叶，除杂，烤干，粉碎，过40～60目筛得到杜仲叶粉；
(2)复合微生物态制剂的制备：选取枯草芽孢杆菌(简称为菌株a)、酵母菌(简称为为菌株b)、乳酸菌(简称为菌株c)分别进行液体发酵，制作液体发酵种子液。经扩大培养后，分别计数后调整浓度为1010cfu/ml，按体积比1:1:1进行混合，得到复合微生物态制剂；其中枯草芽孢杆菌(菌株a)采用lb培养基，摇瓶发酵培养条件为：发酵温度30-37℃，发酵时间18-36h，转速150-225r/min；酵母菌(菌株b)采用ypd培养基成分，摇瓶发酵培养条件为：发酵温度30-37℃，发酵时间18-36h，转速150-225r/min；乳酸菌(菌株c)采用mrs培养基摇瓶发酵培养条件为：发酵温度30-37℃，发酵时间18-36h，转速150-225r/min；
(3)袋装厌氧发酵：将步骤(1)制备的杜仲叶粉与麦麸和豆粕按质量比6-4:5-3:1混合，调整水分至35～45％，得到固态发酵基料，然后按质量比3～10％添加步骤(2)制备的复合微生物态制剂至上述固态发酵基料中，搅拌均匀后，装袋密封发酵，发酵5－7天，即获得杜仲叶发酵饲料。
本发明中枯草芽孢杆菌(菌株a)为：枯草芽孢杆菌pl83，在中国典型培养物保藏中心购买(武汉)，菌种保藏号为cctccno:m2013412。酵母菌(菌株b)为：产朊假丝酵母，在中国工业微生物保藏中心购买，菌种保藏号为ciccno:31430。乳酸菌(菌株c)为：植物乳酸杆菌，在中国工业微生物保藏中心购买，菌种保藏号为ciccno:21790。
所述含杜仲叶发酵饲料可用于饲料配制，和其它原料混合配制成动物使用全价饲料。
所述杜仲叶发酵饲料的应用，所述杜仲叶发酵饲料添加到全价配合饲料中，质量分数为1-10％。包括以下：
所述的杜仲叶发酵饲料与全价配合饲料直接按照1:99-10:90的质量比例混合，用于饲喂动物；或所述杜仲叶发酵饲料按照质量分数为1-10％与玉米等能量饲料(30-66％)、豆粕等蛋白质饲料(5-30％)、麦麸(5-30％)、预混合饲料(1-4％)等配制成全价饲料，用于动物养殖。
与现有技术相比，本发明具有以下效果：
1、发酵后的杜仲饲料，为天然自然发酵产品，不含任何人工化学合成制剂。
2、发酵后的杜仲叶与发酵前相比，蛋白质含量明显提高，纤维素得到有效降解，有利于动物消化吸收。
3、发酵后的杜仲叶与发酵前相比，叶片的粘连性减少，并且蓬松，提高了适口性。
4、发酵后用于动物饲喂后，能降低肠道疾病，减少抗生素使用，提高饲料的利用率，减少豆粕用量，降低养殖成本。
总之，本发明简便易行，得到的发酵饲料饲喂动物后，降低动物腹泻率，有效预防疾病发生，降低养殖过程中抗生素的使用，为无抗养殖提供了一种切实可行的途径和方法，且提高饲料的利用率，提高了养殖效率，显著促进动物生长，提高动物产品品质，降低料肉比，降低了养殖成本。
本发明的猪用杜仲叶发酵饲料，在使用过程具有无毒、无公害、无残留等优点，能增强免疫和抗病力、抗应激、促生长、改善肉质等功效，经济效益明显，是一种值得大力推广的饲料原料。
具体实施方式：
以下是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：猪用杜仲叶发酵饲料的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)杜仲叶原料的收集和预处理：
杜仲叶的采收：
杜仲叶采收于定植3～4年后的矮林杜仲。采收时间在8～11月，杜仲叶收集时应注意去除杂叶、泥土、石块、枯枝等，烤干，粉碎，过40～60目筛，得到杜仲叶粉，备用。
(2)复合微生物态制剂的制备：选取枯草芽孢杆菌(简称为菌株a)、酵母菌(简称为为菌株b)、乳酸菌(简称为菌株c)分别进行常规液体发酵，制作液体发酵种子液，经扩大培养分别计数后调整浓度为1010cfu/ml，按体积比1:1:1进行混合，得到复合微生物态制剂；
商品化或已公开报道的菌株或是按照常规方式筛选的具备所述功能的菌株均能完成本发明。菌株a培养参照参考文献：郝林华,孙丕喜,姜振波,陈靠山,&牛德庆.(2006).枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)液体发酵条件.上海交通大学学报:农业科学版,24(4),380-385；菌株b培养参照参考文献：陆文蔚,胡国平,王淑珍,&杨梦菲.(2010).产朊假丝酵母发酵培养基的优化研究.现代食品科技,26(9),965-966；菌株c培养参照参考文献：李市场,朱朝阳,&王敏.(2009).l-乳酸生产菌干酪乳杆菌6028液体发酵条件的研究.安徽农业科学,36(35),15394-15396)。
枯草芽孢杆菌(菌株a)发酵种子液的制备：
取2ml菌株a(活菌浓度为1010cfu/ml)，接种于100mllb培养基中进行摇瓶发酵培养，发酵温度为30～37℃，ph值为6.8-7.2，转速为150～225r/min，发酵时间为18～36h。lb培养基成分为：胰蛋白胨10g、酵母浸出物5g、氯化钠10g、蒸馏水1000ml，ph值为6.8-7.2。
摇瓶发酵结束后进行发酵罐扩大培养，取100ml摇瓶发酵种子液接种到10l发酵罐中，装液量5l，发酵温度为30～37℃，ph值为6.8-7.2，搅拌速度为200～225r/min，发酵24～36h得到发酵种子液。发酵罐中试培养基与摇瓶发酵培养基成分一致，发酵结束后将培养基置于4℃备用。
酵母菌(菌株b)发酵液的制备：
取2ml菌株b(活菌浓度为1010cfu/ml)，接种于100mlypd培养基中进行摇瓶发酵培养，发酵温度为30～37℃，ph值为6.8-7.2，转速为150-225r/min，发酵时间为18-36h。ypd培养基，其成分为：胰蛋白胨20g、酵母膏10g、葡萄糖20g、蒸馏水1000ml，ph值6.8-7.2。
摇瓶发酵结束后进行发酵罐扩大培养，取100ml摇瓶发酵种子液接种到10l发酵罐中，装液量5l，发酵温度为30～37℃，ph值为6.8～7.2，搅拌速度为200～225r/min，发酵24～36h。发酵罐中试培养基与摇瓶发酵培养基成分一致，发酵结束后将培养基置于4℃备用。
乳酸菌(菌株c)发酵液的制备：
取2ml菌株c(活菌浓度为1010cfu/ml)，接种于100mlmrs培养基中进行摇瓶发酵培养，发酵温度为30～37℃，ph值为6.0～7.0，转速为150～225r/min，发酵时间为18～36h。mrs培养基成分为：牛肉蛋白粉10g、鱼肉汁10g、酵母浸出汁粉5g、葡萄糖20g、醋酸钠5g、柠檬酸二铵2g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.28g、琼脂粉15g，加0.1g吐温80，用蒸溜水配制成1000ml，调节ph值为6.0～7.0。
摇瓶发酵结束后进行发酵罐扩大培养，取100ml摇瓶发酵种子液接种到10l发酵罐中，装液量5l，发酵温度为30～37℃，ph值为6.0～7.0，搅拌速度为200～225r/min，发酵24～36h。发酵罐中试培养基与摇瓶发酵培养基成分一致，发酵结束后将培养基置于4℃备用。
(3)袋装厌氧发酵：按照如下配方配固态发酵基料：步骤(1)制备的杜仲叶粉500kg、豆粕100kg、麦麸400kg、氯化铵6kg、尿素8kg、磷酸二氢钾4.8kg。首先将杜仲叶粉、豆粕和麦麸采用人工或混合机进行充分搅拌，混合均匀，再将氯化铵、尿素和磷酸二氢钾依次加入盛有适量水的容器中，充分溶解，均匀喷洒至杜仲叶粉、豆粕和麦麸的混合物，并调整水分至35％，获得一种固态发酵基料。将复合微生物态制剂按质量比3％喷洒至上述基料，充分混合，装袋密封发酵，发酵时间5天或7天，即获得杜仲叶发酵饲料。
实施例2：杜仲叶发酵前后蛋白质、纤维素含量的测定
采用凯氏定氮法测定蛋白质、采用蒽酮比色法测定纤维素，测定结果如表1。
表1杜仲叶发酵前后蛋白质与纤维素的含量
实施例3：猪用杜仲叶发酵饲料在育肥猪养殖中的应用
a、对照组饲料配制：根据表1配方配制饲料，按照玉米、豆粕、麦麸、鱼粉、预混料的顺序依次加入到混合机中，充分搅拌，混合5-10分钟。
b、试验组饲料配制：将本发明中制备的含杜仲叶中药发酵饲料按照a步中所配制全价料的5％(质量比)加入混合机中，充分搅拌，混合5-10分钟。
随机抽取体重基本一致(62.5±0.83)kg的60头杜×长×大三元杂交商品猪，随机组成对照组和试验组，每组30头，每组分3栏，每栏10头。对照组饲喂基础日粮，配方如表2。
表2基础饲粮组成与营养水平(风干基础)
※1)表中营养水平均为配方计算值。
2)预混料为每千克饲粮提供:cu25mg，i0.36mg，se0.27mg，fe99mg，mn28mg，zn91mg，co0.23mg，va6300iu，vd31500iu，ve32mg，vk32.5mg，vb11.8mg，vb25.6mg，vb62.4mg，vb1228μg。
试验组饲料为在对照组饲料配方基础上额外添加5％(质量比)含杜仲叶发酵饲料。经过60天饲养试验，试验组和对照组头数、增重、采食量、料肉比统计结果如表3。
表3试验组与对照组生产性能对比统计结果
结果表明，添加5％(质量比)含杜仲叶发酵饲料制备的复配猪饲料，能够提高育肥猪的生产性能、降低料肉比。
实施例4：猪用杜仲叶发酵饲料对改善断奶仔猪生长性能、抗氧化能力及免疫功能的影响
选用(28±2)日龄平均体重为(7.22±0.34)kg的“杜×长×大”断奶仔猪20头，随机分为2个组，每组10个重复，每个重复1头猪，单栏饲养。对照组饲喂基础饲粮，试验组在基础饲粮基础上额外添加6％(质量比)含杜仲叶的发酵饲料。分别经过28天饲养试验，试验组和对照组的腹泻率、抗氧化能力及免疫功能检测结果见表4。
表4试验组与对照组腹泻率、抗氧化能力及免疫球蛋白含量分析结果
以上实验结果表明，添加6％(质量比)含杜仲叶的发酵饲料制备的复配猪饲料，能够明显改善断奶仔猪的腹泻率，提高抗氧化能力，同时使免疫球蛋白g的含量得到明显增加。这表明该猪用杜仲叶发酵饲料能够有效的应用于断奶仔猪的饲养，并具备一定的替代抗生素的潜力。