本发明属于水产配合饲料添加剂
技术领域：
，具体涉及一种防治克氏原螯虾褐斑病用中草药饲料添加剂及其制备方法与应用。
背景技术：
：近年来，克氏原螯虾procambarusclarkii在全国各地人工养殖方兴未艾。据统计，江苏、湖北很多县的养殖规模就已经达到数万亩。但随着人工养殖面积的迅速扩大，病害的发生也越来越频繁和严重。国内已相继报道了克氏原螯虾的一些疾病，这些疾病已经给克氏原螯虾养殖者带来了重大经济损失。克氏原螯虾褐斑病，又称细菌性甲壳病，主要表现为病虾体表甲壳有斑点状黑褐色溃疡，常卧于池边处于濒死状态。该病因虾体受伤和环境恶化，致病菌感染所致。传统上治疗和预防克氏原螯虾疾病主要依赖抗生素、化学药物等，但这些药物滥用造成的环境污染、药物残留、病菌的耐药性等问题已严重困扰克氏原螯虾的养殖，而提高机体免疫力是进行疾病防治的基础，因此加强对克氏原螯虾免疫机能的研究尤为重要。中草药具有补充营养，提高机体的特异性和非特异性免疫力的功能；同时还具有抗菌、抑制病毒等方面的作用。由于各种化学合成药物及激素在水产养殖上的应用使得水产动物产生了抗药性，且在水产动物体内的残留又影响人类的健康，而中草药添加剂则没有化学合成药物的弊端，同时兼有营养性和药物性的双重作用。因此中草药添加剂已日益成为替代化学合成药物和激素的新一代添加剂。已有一些报道关于大黄、淫羊藿、黄芪、板蓝根组合配方用于克氏原螯虾抗白斑综合征的报道，如cn103494038b公开了一种克氏原螯虾抗白斑综合征病毒中草药免疫增强剂及其制备方法和应用，主要由下列重量份的原料制成：大黄30-38份、淫羊藿28-35份，黄芪15-25份、板蓝根15-25份。但是该中药组分主要是对提高免疫力，特别是抗白斑综合征病毒有一定的疗效，该病主要有白斑综合征病毒所引起，而对细菌性疾病尚无显著作用。此外还有一些关于增强克氏原螯虾免疫力的报道，如cn103431244b一种提高克氏原螯虾幼虾免疫力的维生素饲料及添加剂，该报道主要以微生物配方为主，对克氏原螯虾褐斑病的也无显著效果。再如cn107996888a一种克氏原螯虾成虾新型抗病添加剂及制备方法，该报道主要以多糖类成分提高免疫力，提高产量，减少死亡率，但是对克氏原螯虾褐斑病的也无显著效果。目前有关甲壳类动物褐斑病的防治措施未见有关报道，有关中草药配方对克氏原螯虾褐斑病尚未见报道。cn201510110236.5公开了一种治疗肝气郁滞型黄褐斑的中药，属于中药
技术领域：
。下述原料药制成：炒柴胡，当归，赤芍，茯苓，生草，白鲜皮，荆芥，香附，红花，桃仁，青皮，珍珠母，薄荷，炒白术，制半夏，何首乌，决明子。本发明的中药制剂，专门针对肝气郁滞型黄褐斑病，内调理肝经，解郁散结，外用纯中药制剂热敷面部，标本兼顾，对于肝气郁滞型黄褐斑病具有明显的治疗效果，治愈率高，复发率低。技术实现要素：本发明的目的是针对由于水质恶化、水中细菌数量增加、克氏原螯虾甲壳有病变时，易发的褐斑病。具体表现为病虾出现褐色或黑色的斑块，斑块大小不一、形状各异，边缘清楚但不整齐，常单个或多个存在于包括附肢在内的甲壳表面的任何部位。如果连续观察，可以发现褐斑由很小的一点逐渐扩大，形成一较大的蚀斑块。由于细菌的破坏作用，褐斑(或黑斑)处可表现为中央凹陷的溃疡性病变。有时病变深达甲壳下组织，这种情况下病灶往往中央凹陷而边缘比较浅，多呈白色，本发明提供一种防治克氏原螯虾褐斑病用中草药饲料添加剂及其制备方法与应用，该添加剂可以提高克氏原螯虾的免疫能力，增强体质，减少克氏原螯虾褐斑病发生，有利于克氏原螯虾的健康生长。为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：一种防治克氏原螯虾褐斑病用中草药饲料添加剂，以重量份计包括以下组分：冬凌草6.0-12.0份、白鲜皮8.0-15.0份、赤芍7.0-14.0份、白头翁4.0-20.0份、马齿苋3.0-8.0份、野菊花3.0-10.0份、麦冬2.0-12.0份、玄参5.0-20.0份、食盐3.0-8.0份、载体10.0-30.0份。冬凌草又名冰凌草，为唇形科香茶属多年生草本或亚灌木，小灌木，冬凌草性味苦、甘、微寒。冬凌草有良好清热毒、活血止痛、抑菌、抗肿瘤作用，主治咽喉肿痛、扁桃体炎、感冒头痛、气管炎、慢性肝炎、关节风湿痛、蛇虫咬伤。白鲜皮，别名：白藓皮、八股牛、山牡丹、羊鲜草，为芸香科多年生草本植物白鲜和狭叶白鲜的根皮。具有清热燥湿，祛风解毒之功效。现代研究，白鲜皮的挥发油在体外有抗癌作用。但脾胃虚寒者慎用。赤芍，为毛茛科植物赤芍或川赤芍的干燥根。味苦，微寒。归肝经。有清热凉血，活血祛瘀的功效。用于热人营血，温毒发斑，吐血衄血，目赤肿痛，肝郁胁痛，经闭痛经，瘾瘕腹痛，跌扑损伤，痈肿疮疡。同时具有保肝保心降脂等功效。白头翁pulsatillachinensis(bunge)regel)，是毛茛科银莲花属多年生草本植物，长有根状茎，叶片呈卵形，花萼蓝紫色。别名有奈何草、粉乳草、白头草、老姑草等。常用于治疗痔疮等出血症状。治热毒血痢，温疟寒热，鼻衄，血痔。马齿苋portulacaoleraceal.，为一年生草本植物。全草供药用，有清热利湿、解毒消肿、消炎、止渴、利尿作用；种子明目；还可作兽药和农药；嫩茎叶可作蔬菜，味酸，也是很好的饲料原料。野菊花，dendranthemaindicum，为菊科多年生草本植物，野菊花头状花序的外形与菊花相似，野生于山坡草地、田边、路旁等野生地带。以色黄无梗、完整、苦辛、花未全开者为佳。野菊花性微寒，具疏散风热、消肿解毒。能治疗疔疮痈肿、咽喉肿痛、风火赤眼、头痛眩晕等病证。麦冬为ophiopogonjaponicus(linn.f.)ker-gawl.百合科沿阶草属多年生常绿草本植物的干燥块根。功能主治为：养阴生津，润肺止咳：用于肺胃阴虚之津少口渴、干咳咯血；心阴不足之心悸易惊及热病后期热伤津液等证。玄参scrophularianingpoensishemsl.为玄参科草本植物，味甘、苦、咸，性微寒，有清热凉血，滋阴降火，解毒散结的功效。主治温热病热和营血；身热；烦渴；舌绛；发斑；骨蒸劳嗽；虚烦不寤；津伤便秘；目涩昏花；咽喉喉肿痛；瘰疬痰核；痈疽疮毒。玄参为咸寒之品，质润多液，功能滋阴降火、解毒、利咽。配鲜生地、丹皮、赤芍等，则清热凉血；配大生地、麦冬等，则滋阴增液。由此可见，玄参也是重要的滋补品。进一步地，所述载体为麸皮、小麦粉、米糠或沸石粉中一种或几种混合而成。上述防治克氏原螯虾褐斑病中草药饲料添加剂的制备方法，具体是将各组分烘干或晒干后投入混合机中，充分混合后送入超微粉碎机中进行粉碎，将粉碎后的物料过400-600目筛网，得到防治克氏原螯虾褐斑病的中草药饲料添加剂。进一步地，混合机的混合速度为20-30rpm。进一步地，超微粉碎机的粉碎速度为300-500rpm。上述中草药饲料添加剂在制备预防或治疗克氏原螯虾褐斑病的饲料中的应用。进一步地，所述中草药饲料添加剂在克氏原螯虾饲料中的添加量为2-4kg/t。与现有技术相比，本发明的优点在于：1、冬凌草、白鲜皮、赤芍、白头翁、马齿苋、野菊花、麦冬、玄参均为清热解毒类中药材，具有清热解毒、利湿、收敛止血的作用，可用于抗菌，痢疾，抗寒应激及杀害有害菌，降低克氏原螯虾褐斑病的发生。2、赤芍具有保肝保心降脂等作用，可用于中草药鱼粉褐斑病过程中护肝保心等作用，同时在饲料脂肪含量过高实现降脂保肝等功效。3、麦冬、玄参不仅具有清热解毒之功效，还有较强的滋补功效，可增强克氏原螯虾的体质，预防疾病的发生。4.马齿苋嫩茎叶可作蔬菜，味酸，也是很好的饲料原料，其干燥体也可作为饲料原料，在有效预防或治疗克氏原螯虾褐斑病的同时，有效的降低饲料成本。5、上述药材均具有提高免疫力的作用，特别是克氏原螯虾这一类不具有先天免疫功能的动物而言，通过摄食提高其免疫力会达到事半功倍的效果。6、本发明的添加剂添加了食盐并且具有一定的诱食作用，增加适口性，有利于降低克氏原螯虾的饵料系数，提高其成活率。7、本发明的添加剂能够提高克氏原螯虾的免疫与抗氧化能力，提高应激，增强抗病能力，适用本饲料预混料添加剂的饲料不需要添加抗生物药物，所生产的克氏原螯虾产品为无公害绿色环保食品。8、冬凌草、白头翁、马齿苋、麦冬和玄参作为用于预防或治疗褐斑病的新组分，配伍后，不仅可以提高虾体的自身免疫力，还能有助于改善已经患有褐斑病的虾的虾壳恢复至正常。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明。实施例1配制20kg防治克氏原螯虾褐斑病用中草药饲料添加剂，所述添加剂的组成如下：冬凌草2.0kg、白鲜皮2.2kg、赤芍2.0kg、白头翁2.0kg、马齿苋1.4kg、野菊花1.2kg、麦冬1.6kg、玄参1.6kg、食盐1.0kg、载体5.0kg。所选载体为麸皮、小麦粉或米糠。取上述组分投入混合机中，25r/min充分混合后，在超微粉碎机中粉碎，粉碎速度为：450r/min；将粉碎后的物料过500目筛网，即得产品防治克氏原螯虾褐斑病中草药饲料添加剂。将上述防治克氏原螯虾褐斑病用中草药饲料添加剂添加至克氏原螯虾专用饲料，每吨饲料中添加2.0kg添加剂。江苏盐城市江苏正源创辉农业科技发展有限公司的克氏原螯虾养殖六口池塘，六口养殖池塘的面积为5亩，池塘水深为1.米左右。2018年当年放养克氏原螯虾，6月左右虾体大小平均为5.7g。实验前对六口清塘用生石灰120公斤/亩清塘消毒。后将克氏原螯虾苗种用蛋氨酸碘消毒后，进行试验。其中三口5亩虾塘为对照塘口，使用常规克氏原螯虾商品配合饲料，另三口虾塘为试验塘，使用按上述添加剂的克氏原螯虾专用饲料(饲料由盐城恒兴饲料有限公司)。养殖过程中加强全程管理，根据天气情况，日投喂1次，日投饵量为虾体重的2％左右，并根据吃食情况，做适量的调整。两个月，采集样品分析。实验结果显示，本添加剂组克氏原螯虾褐斑病病发病率为1.02％，对照组的褐斑病发病率为4.25％(p＜0.05)。实施例2配制20kg防治克氏原螯虾褐斑病用中草药饲料添加剂，所述添加剂的组成如下：冬凌草1.6kg、白鲜皮2.4kg、赤芍1.8kg、白头翁3.0kg、马齿苋1.2kg、野菊花1.0kg、麦冬1.8kg、玄参2.0kg、食盐1.2kg、载体4.0kg。所述载体为麸皮、小麦粉和沸石粉混合而成。取上述组分投入混合机中，28r/min充分混合后，在超微粉碎机中粉碎，粉碎速度为：300r/min；将粉碎后的物料过600目筛网，产品防治克氏原螯虾褐斑病中草药饲料添加剂。将上述防治克氏原螯虾褐斑病中草药饲料添加剂。添加至克氏原螯虾专用饲料，每吨饲料中添加3.0kg添加剂。江苏盐城阜宁某养殖场的克氏原螯虾成虾养殖6口池塘，6口养殖池塘的面积为10亩，池塘水深为1米左右。2018年当年放养克氏原螯虾苗种，6月左右虾体大小平均为5.8g。实验前对清塘用生石灰150公斤/亩清塘消毒。后将克氏原螯虾虾种用蛋氨酸碘消毒后进行试验。随机抽取三口10亩池塘为对照塘口，使用常规克氏原螯虾商品配合饲料，另三口池塘为试验塘，使用按上述配方的克氏原螯虾饲料添加饲料添加剂。养殖过程中加强全程管理，根据天气情况，日投喂1次，日投饵量为虾体重的2％左右，并根据吃食情况，做适量的调整。两个月后，采集样品分析。本添加剂组克氏原螯虾褐斑病病发病率为0.71％，对照组的褐斑病发病率为3.12％(p＜0.05)。实施例3配制20kg防治克氏原螯虾褐斑病用中草药饲料添加剂，所述添加剂的组成如下：冬凌草1.8kg、白鲜皮2.0kg、赤芍2.4kg、白头翁2.4kg、马齿苋1.0kg、野菊花1.6kg、麦冬2.0kg、玄参3.0kg、食盐0.8kg、载体3.0kg。所述载体为米糠。取上述组分投入混合机中，20r/min充分混合后，在超微粉碎机中粉碎，粉碎速度为：450r/min；将粉碎后的物料过500目筛网，产品防治克氏原螯虾褐斑病中草药饲料添加剂。将上述防治克氏原螯虾褐斑病中草药饲料添加剂。添加至克氏原螯虾专用饲料，每吨饲料中添加4.0kg添加剂。江苏淮安市盱眙小河农业发展有限公司的克氏原螯虾养殖6口池塘，6口养殖池塘的面积为2亩，池塘水深为1.0米左右。2018年当年放养克氏原螯虾苗种，6月左右虾体大小平均为5.8g。实验前清塘用生石灰150公斤/亩清塘消毒。后将克氏原螯虾苗种用蛋氨酸碘消毒后进行试验。随机抽取三口2亩池塘为对照塘口，使用常规克氏原螯虾商品配合饲料，另三口池塘为试验塘，使用常规饲料添加该中草药饲料。养殖过程中加强全程管理，根据天气情况，日投喂1次，日投饵量为虾体重的2％左右，并根据吃食情况，做适量的调整。两个月后，采集样品分析。实验结果如表1所示，本添加剂组克氏原螯虾褐斑病病发病率为0.82％，对照组的褐斑病发病率为3.51％(p＜0.05)。表1中草药饲料添加剂对克氏原螯虾生长和褐斑病发病率的影响指标对照组中草药组发病率3.51％±0.22a0.82±0.02％b初始体重(g)5.8±0.415.8±0.52实验末体重(g)19.23±1.85b22.36±1.58a增重率2.32±0.19b2.86±0.25a注：同行不同小写字母表示差异显著(p＜0.05)实验结束后，分别取对照组和中草药饲料添加剂组克氏原螯虾血液置于-20℃冰箱中保存。用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒测定，详细结果见表2。表2中草药饲料添加剂对克氏原螯虾血液抗氧化酶活力的影响指标对照组中草药组超氧化物歧化酶/(u·mg-1)sod428.33±18.24b520.31±20.692一氧化氮(μmol·l-1)no40.56±4.21b67.36±4.212白蛋白(g·l-1)alb16.15±1.22b32.45±1.622溶菌酶/(ug/ml)l2m90.92±5.34b133.66±8.752碱性磷酸酶(u/l)akp7.12±0.41b10.42+1.352酸性磷酸酶(u/l)(acp)8.24±1.32b13.12±1.552总蛋白/(g/l)tp78.25±4.31b110.82±6.592注：同行不同小写字母表示差异显著(p＜0.05)虾体中最主要的抗氧化指标包括sod，其基本功能是清除超氧化物自由基如超氧阴离子(o2-)和过氧化氢(h2o2)。上述结果表明，中草药组显著增强了克氏原螯虾的抗氧化性。血液中一氧化氮起着信使分子的作用。当内皮要向肌肉发出放松指令以促进血液流通时，它就会产生一些一氧化氮分子，这些分子很小，能很容易地穿过细胞膜。血管周围的平滑肌细胞接收信号后舒张，使血管扩张。白蛋白和总蛋白的升高表明试验组的免疫活性在不断提高。酸性磷酸酶和碱性磷酸酶是甲壳动物体内吞噬溶酶体的重要组成部分，在血细胞进行吞噬和包囊反应中会伴随着酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的释放。试验组中acp和akp活力有明显增加，表明试验组中草药对克氏原螯虾具有免疫增强作用。对比例1将冬凌草、白头翁、马齿苋、麦冬和玄参去掉，其余同实施例2。配制20kg防治克氏原螯虾褐斑病用中草药饲料添加剂，所述添加剂的组成如下：白鲜皮2.4kg、赤芍1.8kg、野菊花1.0kg、食盐1.2kg、载体13.6kg。所述载体为麸皮、小麦粉和沸石粉混合而成。取上述组分投入混合机中，28r/min充分混合后，在超微粉碎机中粉碎，粉碎速度为：300r/min；将粉碎后的物料过600目筛网，产品防治克氏原螯虾褐斑病中草药饲料添加剂。将上述防治克氏原螯虾褐斑病中草药饲料添加剂。添加至克氏原螯虾专用饲料，每吨饲料中添加3.0kg添加剂。江苏盐城阜宁某养殖场的克氏原螯虾成虾养殖6口池塘，6口养殖池塘的面积为10亩，池塘水深为1米左右。2018年当年放养克氏原螯虾苗种，6月左右虾体大小平均为5.8g。实验前对清塘用生石灰150公斤/亩清塘消毒。后将克氏原螯虾虾种用蛋氨酸碘消毒后进行试验。使用常规克氏原螯虾商品配合饲料，使用按上述配方的克氏原螯虾饲料添加饲料添加剂。养殖过程中加强全程管理，根据天气情况，日投喂1次，日投饵量为虾体重的2％左右，并根据吃食情况，做适量的调整。两个月后，采集样品分析。本添加剂组克氏原螯虾褐斑病病发病率为1.34％，比实施例2的发病率提高了。选取对比例1中患有褐斑病的虾喂养实施例2的饲料。喂养方法参照实施例2，观察虾壳上的斑块，明显减少。以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本
技术领域：
的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。当前第1页12