本发明涉及微生物制剂技术领域，具体涉及一种调理情绪的益生菌组合物及其制备方法。
背景技术：
情绪是对一系列主观认知经验过程的通称，是多种感觉、思想和行为综合产生的心理和生理状态。最普遍通俗的情绪有喜、怒、哀、惊、恐、爱等，也有细腻微妙的情绪如嫉妒、惭愧、羞耻、自豪等。情绪常常和心情、性格、脾气、目的等因素互相作用，也受到荷尔蒙和神经递质的影响。无论正面还是负面的情绪，都会引发人们行动的动机，负面的情绪不仅是自身不健康的表现，而且会导致社会关系的不和谐等不良后果。
据统计13-20％的人一生中曾有过情绪异常为主症的亚健康感知。到2010年，在全世界排位前15名的疾病当中，有5种是精神疾病，其中情绪异常为主症的亚健康排在这五种精神疾病之首，其主要表现是心境和情感改变、思维和认知下降和精神运动活动迟滞、抑郁等方面的变化。
管控情绪是一个极其复杂的课题，情绪异常与下丘脑、胃肠道、内分泌、各种疾病、生存环境、社会地位、生存状态等有密切关系。在人们没有组织器官疾患的状态下，许多人表现为情绪异常，没有快乐、没有激情、易怒抑郁、易惊害怕、心理淡漠、饮食不香、缺乏状态、失眠易燥、思维混乱、性格孤僻…，目前市面上还没有明确调整情绪的产品，但这类人群极其庞大，而且一个人在不同阶段都有可能出现情绪异常问题。
综上所述，传统中没有有效的可改善人的情绪，调理人情绪的食品及药品，亟待研发一种可调理人的情绪的产品。
技术实现要素：
本发明实施例的目的在于提供一种调理情绪的益生菌组合物及其制备方法，用以解决现有物调理人情绪的产品的缺陷。
为实现上述目的，本发明实施例一种调理情绪的益生菌组合物，所述组合物包括瑞士乳杆菌菌粉体以及所述瑞士乳杆菌代谢物粉体。
优选的，所述瑞士乳杆菌保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为：cctccno：m2018300。
优选的，所述组合物还包括包含瑞士乳杆菌的菌粉载体，所述菌粉载体包括微晶纤维素、药用玉米淀粉、菊粉、硬脂酸镁；
其中，所述组合物的原料以质量份数计：瑞士乳杆菌菌粉体9-11份、瑞士乳杆菌代谢物粉体4-6份、微晶纤维素18-22份、药用玉米淀粉80-120份、菊粉8-12份、硬脂酸镁8-12份。
优选的，所述组合物包括以下质量份数的原料：瑞士乳杆菌菌粉体9-11份、瑞士乳杆菌代谢物粉体4-6份、微晶纤维素18-22份、药用玉米淀粉80-120份、菊粉8-12份、硬脂酸镁8-12份。
本发明实施例还提供一种制备所述的组合物的方法，其包括以下步骤：
将所述瑞士乳杆菌通过扩大菌种培养、一级种子培养、种子罐培养以及发酵培养获得瑞士乳杆菌发酵菌液；
将所述瑞士乳杆菌发酵菌液离心分别收集瑞士乳杆菌菌泥及离心后的发酵液，并将所述瑞士乳杆菌菌泥和离心后的发酵液分别冷冻干燥粉碎和浓缩干燥粉碎，获得瑞士乳杆菌菌粉体以及瑞士乳杆菌代谢物粉体；
将所述瑞士乳杆菌菌粉体以瑞士乳杆菌代谢物粉体与菌粉载体混合，得到所述组合物。
优选的，所述瑞士乳杆菌菌粉体的制备方法具体为：
将所述瑞士乳杆菌菌泥、无菌水、脱脂奶粉、低聚果糖、甘油、麦芽糊精以及低聚异麦芽糖混合得到瑞士乳杆菌悬菌液，将所述悬菌液冷冻干燥粉碎获得瑞士乳杆菌菌粉体。
优选的，所述悬菌液冷冻干燥在-35℃--30℃的条件下预冻2-5小时，-50℃--40℃真空冷冻干燥，粉碎成100目的乳杆菌菌粉。
优选的，所述瑞士乳杆菌代谢物粉体的制备方法具体为：
将所述离心后的发酵液先经过低温浓缩至水分含量最多为20％的发酵液浓缩膏，将所述发酵液浓缩膏与药用玉米淀粉以5：1-4：1混合，得到混合物，然后在温度55℃-60℃，干燥时间40-50小时，粉碎得到含水量至多为3％的瑞士乳杆菌代谢物粉体。
本发明实施例的上述方法制备的组合物，在制备具有下述至少一种功能的产品中的应用：1)调节情绪；2)改善焦虑；3)改善抑郁。
本发明实施例具有如下优点：
本发明实施例的一种调理情绪的益生菌组合物，可以很好的调理人的情绪，改善焦虑及抑郁。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
本发明的实施例提供通过作用于中枢神经系统来改善情绪和疼痛感觉、情绪稳定就能减轻工作、生活中的压力，从而保证了人们的身体健康的瑞士乳杆菌。本发明实施例首先获得了一株新的菌株瑞士乳杆菌菌株，该瑞士乳杆菌菌株分离自新鲜蜂蜜，复筛获得，经16sdna鉴定为瑞士乳杆菌+1(lactobacillushelveticus+1)，菌种序列如seqidno.所示，该瑞士乳杆菌保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2018年05月21日，保藏地址为：中国.武汉.武汉大学，其保藏编号为：cctccno：m2018300。
本发明实施例中所使用的设备：菌种培养箱、超净工作台、恒温培养箱、各种试管、三角瓶、种子罐、发酵罐、真空冷冻干燥机、三维搅拌机、低温粉碎机、真空包装机。
一、瑞士乳杆菌扩大菌种培养
瑞士乳杆菌菌种培养：取出保存在-80℃冰箱的菌种，并对菌种进行扩大培养，瑞士乳杆菌培养基的配制：葡萄糖22克、蛋白胨10克、牛肉浸粉6克、乙酸钠2克、吐温801ml、尿素0.5克、自来水1000毫升、ph值自然。将上述培基的原料加入到1000毫升水中，搅拌30min使之溶化，然后分装于18*180的试管中，每只试管装10毫升，胶塞牛皮纸封口，放医用消毒器中0.1-0.12兆帕灭菌25min，培养基灭菌完毕。
瑞士乳杆菌接种，在无菌条件下打开-80℃下保存冷冻管，室温融化后，然后再取以上灭好菌的培养基试管1支，将溶化好的-80保存菌液取1毫升加入试管中，用胶塞、牛皮纸封好管口，用手轻摇匀，放入恒温培养箱中37℃静置培养15小时即可，获得扩大菌种培养菌液。
二、瑞士乳杆菌一级种子培养
培养基配方：葡萄糖25克、蛋白胨10克、牛肉浸粉8克、玉米浆3克、乙酸钠2克、吐温801ml、自来水1000毫升、ph值自然。将上述原料加入到配方中的自来水中，开动搅拌机，搅拌20min，使全部溶化，此为一级种子培养液。将搅拌溶化好的一级种子培养液按用量加入到三角瓶中，然后用6层纱布外加一层牛皮纸扎好瓶口，放入医用消毒器中灭菌，灭菌前，首先打开消毒器上的排气阀门等有少量蒸汽排出时关闭，当消毒器上的压力达到0.05兆帕时，打开消毒器上的排气阀门排气6-8min，然后关闭排气阀门，继续加温，当消毒器中的蒸汽压力达到0.1-0.12兆帕时开始计时，灭菌时间为25min，完毕后离开热源，让其自然降温，当消毒器上的压力表归零时，打开消毒器，取出灭好菌的培养基放入超净工作台中自然降温，当温度降至37℃时，将以上培养好的一级种子培养液移接到灭好菌的三角瓶培养液中，接种量分别是1％，即一级种子培养液100毫升，接入扩大菌种菌液为1毫升，完毕后用原有纱布及牛皮纸将瓶口封好，用手稍加摇动使接入的菌种与培养液混合均匀，然后放恒温箱中在37℃的条件下培养15小时即可，此称为一级种子培养菌液。
三、瑞士乳杆菌种子罐培养
首先打开各进出管道及无菌空气管道的阀门，通入0.12-0.14兆帕的蒸汽，让蒸汽与管道阀门联通并有少量蒸汽排出，通气40min，让管道内的蒸汽压力保持0.12-0.14兆帕，保持40min，然后关闭各进出管道阀门，备用。
种子罐及发酵罐的空罐灭菌，关闭各个阀门，打开罐底部的排污阀及罐夹层的排污阀，打开直接蒸汽阀门向罐内通入0.12-0.14兆帕的蒸汽，当罐内达到121℃时开始计时，灭菌时间为40min，然后关闭罐底部排污阀及夹层排污阀，罐中温度自然降至37℃备用。
种子罐培养培养基配方中各个组分的重量百分比葡萄糖10％、蛋白胨2％、尿素0.5％、磷酸氢二钾0.2％、玉米浆2％、乙酸钠0.5％、吐温800.4％、聚葡萄糖2％、聚醚消泡剂0.1％、自来水82.3％、ph值自然。
首先将配方中所使用的自来水投入到已空罐灭菌的种子罐中，开动搅拌机，分别加入配方中所需的原料，然后在不停的搅拌中通入蒸汽加温。首先利用罐夹层蒸汽加热到95℃时，再改用直接蒸汽加热，当罐中温度达到121℃时保持30min即可达到灭菌的效果，然后关闭蒸汽，开始通过罐夹层的自来水冷却降温，当罐内温度达到37℃时备用，此称为种子培养基。然后将以上培养好的一级菌种培养液在无菌条件下接种到种子罐中去，接种量分别是罐内培养基的1％，即可100kg种子罐培养基分别接入一级种子培养菌液1kg即可。然后盖好罐上的接种帽开始搅拌培养，培养条件：温度37℃，ph值自然，搅拌转速80转/min，罐压0.05兆帕，培养时间22小时即可达到要求，如果罐压降低，可通入无菌空气保持罐压，罐压过高可用罐顶的放气阀调整，获得种子罐培养菌种。
四、瑞士乳杆菌发酵培养
发酵培养基配方中，各组分的重量百分比：葡萄糖10％、蛋白胨2％、聚葡萄糖1％、低聚异麦芽糖8％、乙酸钠2％、吐温800.2％、马铃薯淀粉2％、共轭亚油酸0.5％、无水氯化钙0.3％、硫酸镁0.5％、玉米浆2％、聚醚消泡剂0.1％、自来水71.4％、共100kg。首先，将配方中所使用的自来水投入到已空罐灭菌的发酵罐中去，开动搅拌机，向发酵罐中投入配方中所使用的原料，然后通入蒸汽加热，首先利用夹层蒸汽加热到95℃，然后再改用直接蒸汽加热，当罐中温度达到121℃时开始计时，保持30min即可达到灭菌效果，然后通过夹层的自来水冷却降温，当罐中的温度降到37℃时开始接入菌种，接种前首先提高种子罐的罐压力达到0.1兆帕，发酵罐的罐压保持0.05兆帕，然后打开接种管道阀门，将种子罐培养好的种子通过压差的方式输送到发酵罐中去，然后关闭接种管道阀门。
接种量是每100kg发酵罐中的培养基接入种子罐培养的菌种3kg，培养条件：发酵温度37℃，搅拌转速120转/min，发酵时间17小时即可，罐压保持0.05兆帕，ph值自然，如果罐压降低可通入无菌空气保持罐压，罐压过高可用罐顶的排气阀调整，获得发酵菌液。
五、瑞士乳杆菌菌泥的冷冻干燥
发酵液离心，收集湿菌泥，发酵完毕后将发酵菌液抽入到贮罐中，为了保证发酵液中菌体的完整性，选择离心转速。开动管式离心机，调整转速12000转/min，以每分钟进料15kg的进料速度进行离心，离心完毕后收集湿菌泥，将离心收集的湿菌泥进行冷冻干燥，离心后的发酵液可进行低温真空浓缩加入载体，真空干燥后复配成品用。
1、悬菌液的制备：取湿菌泥1000克，加入无菌蒸馏水3000毫升，脱脂奶粉300克，低聚果糖200克，98％的甘油100ml，麦芽糊精50克，低聚异麦芽糖300克。首先取配方中的水1500毫升加热至50℃-55℃，在搅拌下加入麦芽糊精，溶化后再加入配方中余下的水，然后再加入配方中其它的原料组分。充分搅拌30min(25℃-35℃的条件下搅拌)。即成为悬菌液，然后将该悬菌液放入30℃的恒温室或箱中恒温30min进行预冻。
冷冻干燥前的预冻，将恒温30min的悬菌液分装于冻干盘中，然后放入冷冻干燥机的预冻室内在零下30℃-35℃的条件下预冻3小时，冻结后进行抽真空干燥。
真空干燥，将预冻好的料盘放入真空干燥室开始抽真空干燥，干燥条件为:真空度为2-5帕，温度-45℃，干燥室温度28℃，干燥时间45小时。冻干完毕后收集冻干料用无菌粉碎机粉碎成细度为100目的菌粉密封包装备用，获得瑞士乳杆菌菌粉体。
2、离心发酵液的低温浓缩：浓缩条件，真空度0.06兆帕，温度55℃-65℃，浓缩至膏状，固形物含量80％，水分含量20％为止，然后加入药用玉米淀粉为载体，混匀后进行真空干燥。取浓缩膏1000克，加入药用玉米淀粉200克混匀放真空干燥箱中干燥，干燥条件：真空度0.06兆帕，温度55℃-60℃，干燥时间45小时，水分含量3％为合格，然后将其粉碎至100目的粉，密封包装备用，获得瑞士乳杆菌菌粉体。
本发明实施例调理情绪的益生菌组合物的复配：取100目的瑞士乳杆菌菌粉体5克、瑞士乳杆菌代谢物粉体3克、微晶纤维素10克、药用玉米淀粉20克、菊粉5克、硬脂酸镁5克，其中，微晶纤维素、药用玉米淀粉，菊粉、硬脂酸镁为菌粉载体。将以上各物料放入固体搅拌混合机中混合均匀，然后在无菌条件下分装入胶囊中，装瓶或压片即为本发明实施例的组合物成品。
实施例2
本发明实施例调理情绪的益生菌组合物成品的复配：取100目的瑞士乳杆菌菌粉体9克、瑞士乳杆菌代谢物粉体6克、微晶纤维素22克、药用玉米淀粉120克，菊粉12克、硬脂酸镁12克。
其中，瑞士乳杆菌菌粉体和瑞士乳杆菌代谢物粉体均为实施例1中方法中制备的瑞士乳杆菌菌粉体和瑞士乳杆菌代谢物粉体。
实施例3
本发明实施例调理情绪的益生菌组合物成品的复配：取100目的瑞士乳杆菌菌粉体9克、瑞士乳杆菌代谢物粉体4克、微晶纤维素22克、药用玉米淀粉120克，菊粉8克、硬脂酸镁8克。
其中，瑞士乳杆菌菌粉体和瑞士乳杆菌代谢物粉体均为实施例1中方法中制备的瑞士乳杆菌菌粉体和瑞士乳杆菌代谢物粉体。
实施例4
本发明实施例调理情绪的益生菌组合物成品的复配：取100目的瑞士乳杆菌菌粉体11克、瑞士乳杆菌代谢物粉体6克、微晶纤维素18克、药用玉米淀粉80克，菊粉8克、硬脂酸镁8克。
其中，瑞士乳杆菌菌粉体和瑞士乳杆菌代谢物粉体均为实施例1中方法中制备的瑞士乳杆菌菌粉体和瑞士乳杆菌代谢物粉体。
实施例5
本发明实施例具有减肥功能的益生菌组合物成品的复配：取100目的瑞士乳杆菌菌粉体11克、瑞士乳杆菌代谢物粉体6克、微晶纤维素18克、药用玉米淀粉80克，菊粉12克、硬脂酸镁12克。
其中，瑞士乳杆菌菌粉体和瑞士乳杆菌代谢物粉体均为实施例1中方法中制备的瑞士乳杆菌菌粉体和瑞士乳杆菌代谢物粉体。
实施例6
表1为实施例1至实施例5中的调理情绪的益生菌组合物对调节情绪、改善焦虑、抑郁应用效果
表1
由表1所示，男性组300人在服用3天开始统计效果，服用3天有不同年龄的78人感觉情绪有所缓解，心情郁闷、心烦气躁得到改善；服用9天，有168人心情得到舒缓，不再暴躁易怒，悲观厌世等；服用15天，有202人情绪改变明显，情绪稳定，心情舒畅：服用40天，有286人感觉心情愉悦，注意力集中，工作效率提高，其中有172人不同程度的焦虑、抑郁得到缓解。试验中共有14人服用此瑞士乳杆菌未能改善心情，缓解情绪。
女性组300人在服用3天开始统计效果，服用3天有不同年龄的86人感觉情绪有所缓解，心情郁闷、心烦气躁得到改善；服用9天，有182人心情得到舒缓，不再暴躁易怒，悲观厌世等；服用15天，有224人情绪改变明显，情绪稳定，心情舒畅。服用40天，有291人感觉心情愉悦，注意力集中，工作效率提高，其中有146人不同程度的焦虑、抑郁得到缓解。试验中共有9人服用此瑞士乳杆菌未能改善心情，缓解压力。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110>山东环亿生物科技有限公司
<120>一种调理情绪的益生菌组合物及其制备方法
<130>gg18158554a
<160>1
<170>siposequencelisting1.0
<210>1
<211>1436
<212>dna
<213>lactobacillushelveticus
<400>1
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