一种虾塘调水用益生菌菌制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种虾塘调水用益生菌菌制剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002]快速发展的水产业集约化生产在提高经济效益的同时也带来新的问题。在集约化高密度养殖模式下，养殖水体自身污染非常严重，许多学者的研宄表明，在养殖过程中饵料利用率较低，养殖过程中大量的残饵、生物代谢物、动植物尸体等有机物积累于养殖池底，这些有机物在嫌气细菌的作用下会腐败分解产生大量对水产养殖动物有毒的物质，导致养殖水体的理化环境和生态环境严重恶化。另一方面，人类生活污水、各种工业废水、农业废水等的超量排放，污染了养殖用水水源，造成养殖水质下降，养殖环境恶化。
[0003]病原微生物种类增多和传播速度加快，养殖生物病害发生日趋严重，给水产养殖业造成严重损失。据不完全统计，全国每年发生中等程度以上的养殖病害面积占养殖总面积的20%以上，年损失产量超过146多万吨。随着水产养殖规模的不断扩大，集约化养殖程度的不断提高，水产养殖池的富营养化程度越来越高。有机物的大量投放使残饵、鱼虾的排泄物等富营养因子共存于一个水体，加上池塘自净与调节能力的降低养殖水体中化学需氧量(COD)、生物耗氧量(B0D)，氨氮、硝酸盐与亚硝酸盐、硫化物等。指标严重超标，池塘水质恶化，鱼虾病害频频发生有机物污染、氨氮、亚硝态氮积累是池塘养殖水体恶化，鱼虾病害发生和品质下降的主要诱因。
[0004]利用水体有益微生物实施生物修复是目前研宄与开发的热点，益生菌群调水具有无毒、无害、绿色、环保的优点，是未来养殖业发展的必然趋势。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题是:提供一种虾塘调水用益生菌菌制剂及其制备方法。
[0006]本发明解决该技术问题所采用的技术方案是:微生态益生菌菌制剂主要是由枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、布氏乳杆菌组成的混合菌群其中各类菌的重量百分比为:植物乳杆菌30-50%，沼泽红假单胞菌10-30%，植物乳杆菌20-40%，布氏乳杆菌 20-40%。
[0007]虾塘调水用益生菌菌制剂的制备方法包括下述步骤:
[0008]I)活化菌种，分别摇瓶培养:枯草芽孢杆菌，沼泽红假单胞菌用LB培养基，PH7-7.5，100-130°C高压灭菌20-40分钟，在30_38°C培养12-20小时。植物乳杆菌、布氏乳杆菌用MRS培养基，pH6-7，100-130°C高压灭菌20-40分钟，在25_35°C培养15-25小时；
[0009]2)枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、布氏乳杆菌的一级液体扩大培养(50L 罐);接种量 10% -20% ；
[0010]3)枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、布氏乳杆菌的二级液体扩大培养(500L 罐);接种量 10% -20%:
[0011]4)以稻糠为载体分别固体扩大培养并固定化于稻糠上；
[0012]5)将固定化的枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、布氏乳杆菌在30-40’C干燥、粉碎；
[0013]6)将枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、布氏乳杆菌按以下配比混合:植物乳杆菌30-50 %，沼泽红假单胞菌10-30 %，植物乳杆菌20-40 %，布氏乳杆菌20-40 %。
[0014]本发明的有益效果:
[0015]I)将益生菌固定化于稻糠上，使每克菌制剂的有效活菌数(CFU)可高达1000亿个。由于稻糠呈网状结构，具有较大的比表面积，所以能在单位体积内附着吸附更多的菌体。
[0016]2)以每亩虾池每天200克使用量，沿池边泼洒，两天后可明显降低池中氨氮、亚硝酸盐的浓度。
[0017]3)每周使用一次，可有效防治池中蓝藻的爆发。
【具体实施方式】
[0018]实施例1
[0019]按下列步骤进行菌制剂的制备:
[0020]I)将4°C保存的各菌种斜面活化，分别摇瓶培养(500ml-2L)。枯草芽孢杆菌沼泽红假单胞菌用LB培养基培养，具体配方如下:胰蛋白胨10克，酵母抽提物10克，氯化钠5克，蒸馏水lOOOmL，pH7.3，121°C灭菌20分钟。35°C培养15小时。植物乳杆菌、布氏乳杆菌用MRS酪蛋白胨10.0克，牛肉浸取物10.0克，酵母提取液5.0克，葡萄糖5.0克，乙酸钠5.0克，柠檬酸二胺2.0克，吐温-801.0克，磷酸氢二钾2.0克，七水硫酸镁0.2克，七水硫酸锰0.05克，碳酸钙20.0克，蒸馏水1.0升，pH6.8，121°C灭菌20分钟。30°C培养22小时。
[0021]2) 一级液体扩大培养枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、布氏乳杆菌分别单独扩大培养，培养基和培养条件同上(50L罐)，接种量20%。
[0022]3) 二级液体分别扩大培养(500L罐)，接种量20%。
[0023]4)以稻糠为载体分别固体扩大培养并固定化于稻糠上。
[0024]5)将四类扩大培养的菌粉在40°C干燥、粉碎。
[0025]6)各类菌粉按以下比例配比:植物乳杆菌400克，枯草芽孢杆菌300克，布氏乳杆菌200克，沼泽红假单胞菌100克，混合，检验合格后，密封于聚乙烯袋内，室温保存。
【主权项】
1.一种虾塘调水用益生菌菌制剂，主要是由枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、布氏乳杆菌组成的混合菌群，其中各类菌的重量百分比为:植物乳杆菌30-50%，沼泽红假单胞菌10-30 %，植物乳杆菌20-40 %，布氏乳杆菌20-40 %。
2.一种虾塘调水用益生菌菌制剂的制备方法，包括下述步骤: 活化保存的各斜面菌种，分别摇瓶培养，枯草芽孢杆菌，沼泽红假单胞菌用LB培养基，PH7-7.5，100-130°C高压灭菌20-40分钟，在30_38°C培养12-20小时。植物乳杆菌、布氏乳杆菌用MRS培养基，pH6-7，100-130°C高压灭菌20-40分钟，在25_35°C培养15-25小时；枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、布氏乳杆菌的一级液体扩大培养(50L罐)；接种量10%-20% ;枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、布氏乳杆菌的二级液体扩大培养(500L罐)；接种量10% -20%;以稻糠为载体分别固体扩大培养并固定化于稻糠上； 将枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、布氏乳杆菌分别在30-40°C干燥、粉碎； 将枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、布氏乳杆菌按以下配比混合:植物乳杆菌30-50%，沼泽红假单胞菌10-30%，植物乳杆菌20-40%，布氏乳杆菌20-40 %。
【专利摘要】本发明公开了一种虾塘调水益生菌菌制剂及其制备方法。该菌制剂主要是由枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、布氏乳杆菌组成的混合菌群，其中各类菌的重量百分比为:植物乳杆菌30-50％，沼泽红假单胞菌10-30％，植物乳杆菌20-40％，布氏乳杆菌20-40％。微生态益生菌菌制剂的制备方法包括下述步骤:活化菌种、一级液体扩大培养、二级液体扩大培养、固定化于稻糠上:干燥、粉碎:将枯草芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、布氏乳杆菌按以下配比混合:植物乳杆菌30-50％，沼泽红假单胞菌10-30％，植物乳杆菌20-40％，布氏乳杆菌20-40％。本发明的菌制剂在虾塘中成为优势菌群，可有效降低虾塘中氨氮、亚硝酸盐，同时具有预防蓝藻泛滥的作用。
【IPC分类】C12R1-01, C02F3-34, C12N1-20, C12R1-25, C12R1-125, C12R1-225
【公开号】CN104877945
【申请号】CN201510334342
【发明人】李琳, 曲荟芬
【申请人】格特生物制药（天津）有限公司
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年6月13日