一种油脂脂质体及其制备方法与流程

本发明涉及脂质体制备
技术领域：
，更具体的说是涉及一种油脂脂质体及其制备方法。
背景技术：
：油脂是多种高级脂肪酸(如硬脂酸、软脂酸、油酸和亚油酸等)与甘油形成的酯，其含有多种生物活性物质，如omega-3(n-3)、omega-6(n-6)等多不饱和脂肪酸(pufa)。目前，广泛认为油脂在降低疾病风险(预防心血管疾病、高血压、糖尿病)和改善消费者健康(促进婴幼儿生长期间的脑部及眼部发育)方面具有重要的作用，因此在食品工业及医药工程领域具有很高的应用价值。但是，由于油脂在水基产品中的相容性差，易于发生降解和氧化反应，并且在光和微量金属的催化下容易发生异构化反应，产生不良风味和口感，降低生物利用度和产品质量，使得其在食品、药品和保健品中的广泛应用受到了极大的限制。而为了改善油脂的使用限制，可以将油脂制成脂质体，脂质体具有生物降解性、生物相容性和持续释放能力，在化妆品、药品和食品行业表现出良好的应用前景，又由于脂质体能够通过各类修饰处理而具有靶向性，可用作特殊活性分子如维生素、药物活性分子、酶类、特殊风味物质等的载体。但是，目前制备油脂脂质体多数使用的是大豆磷脂、蛋磷脂和合成磷脂(如dppc；棕榈酰-卵磷脂)等，却从未使用来自乳中的极性脂质制备油脂脂质体，而且采用大豆磷脂、蛋磷脂和合成磷脂制备得到的油脂脂质体综合使用性差，不能满足使用要求。因此，如何提供一种性能更加优异的油脂脂质体及其制备方法是本领域技术人员亟需解决的技术问题。技术实现要素：有鉴于此，本发明提供了一种油脂脂质体及其制备方法，使用来自乳中的极性脂质(脂肪球膜磷脂)与油脂相互配合，制备得到油脂脂质体，可以有效解决油脂在医药制剂或食品加工中传统工艺难以克服的问题，极大的提高了油脂的应用品质，并且实现乳极性脂质应用价值。为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种油脂脂质体，包括油脂以及包覆于油脂表面的脂肪球膜磷脂。优选的，所述油脂与所述脂肪球膜磷脂的质量比为(1～2)：(8～9)。上述优选技术方案的有益效果是：本发明采用脂肪球膜磷脂包裹油脂形成油脂脂质体，有效地将油脂包裹在一个密封的环境中，保护油脂不受不利条件的影响，从而有助于改善油脂的多方面性质(例如体积、色泽、气味等发生变化)，再利用脂质体在胃肠道的被消化吸收，从而实现控制油脂释放的效果，可以掩盖油脂不受欢迎的风味，并在食品加工和存储期间免受环境因素(例如温度、空气、光和湿度)的影响，极大的提高了油脂的应用效果。并且，脂肪球膜磷脂是乳中的极性脂质分子，不仅含有大豆磷脂中的磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇，而且还具有高水平的鞘磷脂，与聚合物材料相比毒性低，且具有乳化特性，能够抑制大肠癌、抑制胆固醇吸收等；并且有效提高了油脂脂质体的包封率，使得结构更加紧密，增加食用油的稳定性，保障油中各脂肪酸比例的平衡，提高了其应用价值。本发明还提供了一种如上述的油脂脂质体的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)按照所需准备油脂、脂肪球膜磷脂、有机溶剂、表面活性剂和pbs缓冲液，备用；(2)将油脂和脂肪球膜磷脂混合均匀得到混合物a，向混合物a中添加有机溶剂，振荡溶解，超声混合得到混合液；(3)除去混合液中的有机溶剂，得到混合物b；(4)将表面活性剂溶解于pbs缓冲液中，加入混合物b，旋转水合反应得到脂质体溶液；(5)将脂质体溶液进行水浴超声处理，得到预混粗制乳液；(6)将预混粗制乳液进行均质得到油脂脂质体。优选的，所述表面活性剂包括吐温-80，所述pbs缓冲液的ph＝7.0～7.4，所述pbs缓冲液的浓度0.005～0.01mol/l；所述有机溶剂包括无水乙醚或氯仿。优选的，所述有机溶剂包括无水乙醚。上述优选技术方案的有益效果是：本发明采用无水乙醚作为有机溶剂能够溶解油脂和脂肪球膜磷脂，促进油脂和脂肪球磷脂成膜；本发明采用pbs缓冲液起溶解保护作用，有利于盐平衡，可调整适宜的ph；优选的，步骤(1)中所述油脂、脂肪球膜磷脂的质量比为2：8。优选的，步骤(1)中所述油脂、脂肪球膜磷脂、无水乙醚、表面活性剂和pbs缓冲液按照质量体积比为(100～200)mg：(800～900)mg:(16.7～25)ml:(200～240)mg:20ml优选的，步骤(1)中所述油脂、脂肪球膜磷脂、无水乙醚、表面活性剂和pbs缓冲液按照质量体积比为200mg：800mg:(16.7～25)ml:240mg:20ml。优选的，步骤(2)中所述超声的功率为70～90w，超声温度为25℃，超声时间为30s～1min。优选的，步骤(3)中先在40～50℃条件下旋转蒸发直至旋转蒸发容器壁上形成淡黄色的脂质体薄膜，然后在60～80℃条件下干燥4～5h。优选的，步骤(4)中所述旋转水合反应温度控制在40～50℃、1.0×105pa压力条件下，反应时间40～60min，其中旋转水合是指在旋转蒸发器中水浴旋转。优选的，步骤(5)中所述超声功率为60～100w，时间为10～30min；所述水浴温度为25～30℃。上述优选技术方案的有益效果是：本发明通过水浴超声可以使薄膜分散法制得的脂质体粒径均匀，使形成的多层脂质体分散成单层脂质体。优选的，步骤(6)所述均质压力为80～100mpa；所述油脂脂质体充氮绝氧密封，于0～4℃条件下保存。经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种油脂脂质体及其制备方法，具有如下有益效果：(1)本发明采用脂肪球膜磷脂包裹油脂形成油脂脂质体，有效地将油脂包裹在一个密封的环境中，保护油脂不受不利条件的影响，从而有助于改善油脂的多方面性质；(2)本发明公开的制备方法利用超声处理可以促进乳化，使溶液更加均匀、稳定；并且，通过超声处理促进pbs水合脂质体的效果，提高包封率，也使油脂脂质体溶液更加均匀稳定。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1附图为本发明实施例1制备得到的油脂脂质体在不同温度下ph随时间的变化；图2附图为本发明实施例1制备得到的油脂脂质体在不同温度下电导率随时间的变化。具体实施方式下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明实施例还提供了一种如上述的油脂脂质体的制备方法，具体包括如下步骤：(1)按照所需准备油脂、脂肪球膜磷脂、有机溶剂、表面活性剂和pbs缓冲液，备用；表面活性剂包括吐温-80，pbs缓冲液的ph＝7.0～7.4，pbs缓冲液的浓度0.005～0.01mol/l；有机溶剂包括无水乙醚或氯仿；油脂、脂肪球膜磷脂的质量比为2：8；油脂、脂肪球膜磷脂、无水乙醚、表面活性剂和pbs缓冲液按照质量体积比为(100～200)mg：(800～900)mg:(16.7～25)ml:(200～240)mg:20ml；(2)将油脂和脂肪球膜磷脂混合均匀得到混合物a，向混合物a中添加有机溶剂，振荡溶解，超声混合得到混合液；超声的功率为70～90w，超声温度为25℃，超声时间为30s～1min(3)除去混合液中的有机溶剂，得到混合物b；具体是：先在40～50℃条件下旋转蒸发直至旋转蒸发容器壁上形成淡黄色的脂质体薄膜，然后在60～80℃条件下干燥4～5h。(4)将表面活性剂溶解于pbs缓冲液中，加入混合物b，旋转水合反应得到脂质体溶液；旋转水合反应温度控制在40～50℃、1.0×105pa压力条件下，反应时间40～60min，其中旋转水合是指在旋转蒸发器中水浴旋转。(5)将脂质体溶液进行水浴超声处理，得到预混粗制乳液；超声功率为60～100w，时间为10～30min；水浴温度为25～30℃；(6)将预混粗制乳液进行均质得到油脂脂质体；均质压力为80～100mpa；油脂脂质体充氮绝氧密封，于0～4℃条件下保存。为了进一步的优化技术方案，步骤(1)中所述油脂、脂肪球膜磷脂、无水乙醚、表面活性剂和pbs缓冲液按照质量体积比为200mg：800mg:(16.7～25)ml:240mg:20ml为了进一步的优化技术方案，有机溶剂包括无水乙醚。实施例1薄膜超声分散法制备油脂脂质体壁材称取脂肪球膜磷脂900mg与油脂100mg进行混合，加入20ml无水乙醚对混合物进行充分振荡溶解，超声1min使溶液混合均匀；使用旋转蒸发仪45℃下旋转蒸发除去混合液的有机溶剂，直至壁上形成淡黄色的脂质体薄膜，然后干燥箱中干燥4h，完全除去有机溶剂；加入现配置的含有240mg吐温80的ph＝7.4、0.005mol/l的pbs缓冲液20ml，45℃常压旋转水合45min进行洗膜，形成乳白色均匀的脂质体溶液；然后将油脂脂质体的混旋液在80w功率下水浴中超声20min，使得薄膜溶胀水合，最后，将预混粗制乳液用高压微射流均质机进行均质，压力100mpa，获得油脂脂质体，制得的油脂脂质体为均匀乳白色溶液。实施例2薄膜超声分散法制备油脂脂质体称取脂肪球膜磷脂800mg与油脂200mg进行混合，加入20ml无水乙醚对混合物进行充分振荡溶解，超声1min使溶液混合均匀；使用旋转蒸发仪45℃下旋转蒸发除去混合液的有机溶剂，直至壁上形成淡黄色的脂质体薄膜，然后干燥箱中干燥4h，完全除去有机溶剂；加入现配置的含有240mg吐温80的ph＝7.0、0.005mol/l的pbs缓冲液20ml，45℃常压旋转水合45min进行洗膜，形成乳白色均匀的脂质体溶液；然后将油脂脂质体的混旋液在70w功率下水浴中超声30min，使得薄膜溶胀水合，最后，将预混粗制乳液用高压微射流均质机进行均质，压力100mpa，获得油脂脂质体。制得的油脂脂质体为均匀乳白色溶液，包封率为87.95％；用激光散射粒度分析仪和zeta电位仪在25℃条件下测定脂质体粒径和电位，平均粒径为277.2nm，电位为-20.1mv。实施例3称取脂肪球膜磷脂800mg与油脂200mg进行混合，加入20ml无水乙醚对混合物进行充分振荡溶解，超声1min使溶液混合均匀；使用旋转蒸发仪45℃下旋转蒸发除去混合液的有机溶剂，直至壁上形成淡黄色的脂质体薄膜，然后干燥箱中干燥4h，完全除去有机溶剂；加入现配置的含有240mg吐温80的ph＝7.4、0.005mol/l的pbs缓冲液20ml，45℃常压旋转水合45min进行洗膜，形成乳白色均匀的脂质体溶液；然后将油脂脂质体的混旋液在80w功率下水浴中超声20min，使得薄膜溶胀水合，最后，将预混粗制乳液用高压微射流均质机进行均质，压力80mpa，获得油脂脂质体。制得的油脂脂质体为均匀乳白色溶液，包封率为87.65％；平均粒径为299.7nm，电位为-14.5mv。实施例4称取脂肪球膜磷脂800mg与油脂200mg进行混合，加入20ml无水乙醚对混合物进行充分振荡溶解，超声1min使溶液混合均匀；使用旋转蒸发仪45℃下旋转蒸发除去混合液的有机溶剂，直至壁上形成淡黄色的脂质体薄膜，然后干燥箱中干燥4h，完全除去有机溶剂；加入现配置的含有240mg吐温80的ph＝7.0、0.005mol/l的pbs缓冲液20ml，45℃常压旋转水合45min进行洗膜，形成乳白色均匀的脂质体溶液；然后将油脂脂质体的混旋液在80w功率下水浴中超声20min，使得薄膜溶胀水合，最后，将预混粗制乳液用高压微射流均质机进行均质，压力100mpa，获得油脂脂质体。制得的油脂脂质体为均匀乳白色溶液，包封率为85.64％；平均粒径为275.6nm，电位为-17.1mv。实施例5称取脂肪球膜磷脂800mg与油脂200mg进行混合，加入20ml无水乙醚对混合物进行充分振荡溶解，超声1min使溶液混合均匀；使用旋转蒸发仪45℃下旋转蒸发除去混合液的有机溶剂，直至壁上形成淡黄色的脂质体薄膜，然后干燥箱中干燥4h，完全除去有机溶剂；加入现配置的含有240mg吐温80的ph＝7.4、0.01mol/l的pbs缓冲液20ml，45℃常压旋转水合45min进行洗膜，形成乳白色均匀的脂质体溶液；然后将油脂脂质体的混旋液在80w功率下水浴中超声20min，使得薄膜溶胀水合，最后，将预混粗制乳液用高压微射流均质机进行均质，压力100mpa，获得油脂脂质体。制得的油脂脂质体为均匀乳白色溶液，包封率为84.89％；平均粒径为278.5nm，电位为-16.5mv。实施例6称取脂肪球膜磷脂800mg与油脂200mg进行混合，加入20ml无水乙醚对混合物进行充分振荡溶解，超声1min使溶液混合均匀；使用旋转蒸发仪45℃下旋转蒸发除去混合液的有机溶剂，直至壁上形成淡黄色的脂质体薄膜，然后干燥箱中干燥4h，完全除去有机溶剂；加入现配置的含有200mg吐温80的ph＝7.4、0.005mol/l的pbs缓冲液20ml，45℃常压旋转水合45min进行洗膜，形成乳白色均匀的脂质体溶液；然后将油脂脂质体的混旋液在80w功率下水浴中超声20min，使得薄膜溶胀水合，最后，将预混粗制乳液用高压微射流均质机进行均质，压力100mpa，获得油脂脂质体。制得的油脂脂质体为均匀乳白色溶液，包封率为84.66％；平均粒径为283.5nm，电位为-17.7mv。对上述实施例1～6制备得到的油脂脂质体进行性能检测(1)油脂脂质体包封率的测定分别取油脂脂质体和空白脂质体1ml至于25ml量瓶中，加入5ml乙醇进行破乳；以空白脂质体为空白液，在210nm处测定吸光值a；分别量取新制备的油脂脂质体及空白脂质体5ml装入透析袋中，扎好，放入烧杯中以磷酸缓冲溶液回流。于16h后，取透析液1ml，加入5ml乙醇进行破乳，以空白脂质体透析液为空白液，在210nm处测定波长a0；包封率＝a0/a×100％(2)用激光散射粒度分析仪和zeta电位仪在25℃条件下测定实施例1～3制备得到油脂脂质体的粒径和电位，结果如下表1所示。表1包封率平均粒径电位实施例186.54％256.6nm-16.6mv实施例287.95％277.2nm-20.1mv实施例387.65％299.7nm-14.5mv实施例485.64％275.6nm-17.1mv实施例584.89％278.5nm-16.5mv实施例584.66％283.5nm-17.7mv(2)油脂脂质体稳定性考察用ph计和电导率仪(dds-307a)在25℃对其ph和电导率进行测定。从图1～2的结果可知，在温度下，脂质体的ph值均随时间呈下降趋势，这可能是由于磷脂的水解产生了h+离子，从而使溶液ph值下降。同时，我们可以看出脂质体的电导率随时间的推移呈上升趋势，说明随着时间的推移，脂质体稳定性下降，磷脂水解产生大量的带电离子。且温度越高，电导率升高速度越快。综上所述，脂质体在4℃储藏具有较好的稳定性。对比例1～4将实施例1中油脂脂质体的混旋液超声功率分别替换为60w、70w、90w、100w，超声时间为20min，得到对比例1～4。测定对比例1～5制备得到的油脂脂质体的包封率与实施例1对比，结果如下表2所示。表2超声功率对脂质体包封率的影响超声功率(w)超声时间包封率(％)对比例16020min61.13对比例27020min82.72对比例39020min84.90对比例410020min73.75实施例18020min86.54％由表1可以看出随着超声功率的增加，包封率增大，但功率大于80w之后随之降低，原因可能是功率的适当增加有助于脂质体形成，但功率过大会导致部分脂质体的双层膜结构破裂，致内含的油脂外泻，致使包封率下降。对比例5～8将实施例1中油脂脂质体的混旋液超声时间分别替换为10min、30min、40min、50min，分对应对比例5～9。按照脂肪球膜磷脂与油脂比8：2，在80w功率条件下制备脂质体，包封率变化如表3所示。表3超声时间对脂质体包封率的影响超声时间(min)包封率(％)对比例51064.82实施例12086.54对比例63084.22对比例74082.45对比例85074.12由表2可以看出随着超声时间的增加，包封率呈现先增加后减少的趋势，超声目的是为了使薄膜分散法制得的脂质体粒径均匀和使形成的多层脂质体分散成单层脂质体。但过长时间的超声作用会使部分脂质体发生彻底的破坏。对比例9～11将实施例1脂肪球膜磷脂与油脂比例分别替换为7：3、6：4、5:5，探究脂肪球膜磷脂与油脂比例对脂质体包封率的影响，分别对应比例9～12。表3脂肪球膜磷脂与油脂比例对脂质体包封率的影响从表3中我们可以看出，脂肪球膜磷脂与油脂比例为9：1和8：2时，脂质体包封率较高，都在80％以上。此时脂肪球膜磷脂能最大程度包埋油脂。本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的装置而言，由于其与实施例公开的方法相对应，所以描述的比较简单，相关之处参见方法部分说明即可。对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。当前第1页1 2 3