本发明属于微生物菌剂
技术领域：
，具体涉及一种具有调节血脂功效的益生菌组合物，并进一步公开其制备方法，以及用于制备具有调节血脂功效制剂的用途。
背景技术：
：胆固醇水平普遍升高是造成国人冠心病发病和死亡迅速增加的主要原因。新近公布的亚太心血管队列研究显示，亚洲心血管疾病发病率增长迅速，而且今后将集中在青少年和城市人口中。预计2010年中国中年人患心脏病的概率将会与美国持平，中国将迎来脑卒中居高不下、心肌梗死快速上升的第二次心血管疾病高峰。据2013年的统计显示，我国约有2亿临界高胆固醇血症人群以及8800万高胆固醇血症患者。人体大约有70％的胆固醇来源于肝脏等组织的合成，30％来源于食物摄入。不良饮食习惯是导致胆固醇升高的主要原因之一，但是最主要的原因是体内脂质代谢异常，血脂水平与动脉粥样硬化性疾病密切相关，血脂异常是动脉粥样硬化发生、发展的必要条件，是心脑血管疾病发生的主要原因。近20年来，我国人群血脂水平大幅度升高，目前全国血脂异常者已达2亿人。这一变化严重威胁到人民的健康，应给予足够的重视。公众都应认识到控制血脂在心脑血管疾病防治中的重要作用，真正做到危险因素的综合管理，从肠道调节、饮食调节、运动管理等方面来预防和控制高胆固醇是有效的办法。技术实现要素：为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种具有调节血脂功效的益生菌组合物；本发明所要解决的第二个技术问题在于提供上述益生菌组合物用于制备具有调节血脂功效的药物和/或功能性食品的用途。为解决上述技术问题，本发明所述的一种具有调节血脂功效的益生菌组合物，包括如下质量含量的组分：具体的，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌lactobacillusplantarumlp98，其保藏编号为cgmccno.17243。具体的，所述嗜酸乳杆菌为嗜酸乳杆菌lactobacillusacidophilusla5y，其保藏编号为cgmccno.17242。具体的，所述嗜酸乳杆菌为鼠李糖乳杆菌lactobacillusrhamnosuslr2y，其保藏编号为cgmccno.18800。具体的，所述嗜酸乳杆菌为两歧双歧杆菌bifidobacteriumbifidumbmb9，其保藏编号为cgmccno.18799。优选的，所述益生菌组合物还包括戊糖乳杆菌、副干酪乳杆菌、长双歧杆菌、或其他两歧双歧杆菌中的至少一种。本发明还公开了一种制备所述具有调节血脂功效的益生菌组合物的方法，包括分别将所述植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌和两歧双歧杆菌进行活化及增殖的步骤，以及取选定含量的所述植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌和两歧双歧杆菌进行混合的步骤。优选的，所述具有调节血脂功效的益生菌组合物的制备方法中：所述活化步骤是以添加有鸡蛋清和椰子汁的mrs培养基进行活化培养；所述增殖步骤是以添加有鸡蛋清、椰子汁和香菇多糖的mrs培养基进行增殖培养。具体的，所述mrs培养基中，所述鸡蛋清的添加量为0.3-0.8wt％，所述椰子汁的添加量为1-3wt％，所述香菇多糖的添加量为1-2wt％。本发明还公开了所述益生菌组合物用于制备具有调节血脂功效的药物和/或功能性食品的用途。具体的，所述调节血脂主要指降低胆固醇或甘油三酯。本发明还公开了由所述益生菌组合物添加常规辅料，按照常规工艺制备的具有调节血脂功效的药物和/或功能性食品。具体的，所述的具有调节血脂功效的药物和/或功能性食品，所述益生菌组合物的含量不低于500亿/g。本发明的益生菌组合，以特别筛选的植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌和两歧双歧杆菌为有益成分，其中，菌株在体内可以分泌胆盐水解酶及细菌素，乳酸菌菌株可以利用胆盐水解酶降解结合态胆盐，转变成游离态胆盐，后者溶解度下降与胆固醇发生共沉淀，而且肠道对于游离态胆盐的溶解度和吸收度均比结合态差，可以通过粪便排出体外，其体外、体内可明显降低胆固醇及甘油三酯；而分泌的细菌素则有助于协调体内细菌环境对整个益生菌组合物的效果起到较好的辅助左右。体内及体外实验均显示，本发明所述益生菌组合物对模拟胃液和人工肠液环境抗性良好，且所述益生菌组合物能够有效降低胆固醇及甘油三酯，且对酸和胆汁都有良好的耐受性，可用于预防和改善高胆固醇及高甘油三酯症状。本发明方案进一步筛选了适宜本方案菌株活化的培养基配方，经活化剂增殖后的菌株，其性能得到进一步活化存进，体内及体外实验均显示，经本方案mrs活化培养基活化及增殖后制备的益生菌组合物，其体内、外降低胆固醇和甘油三酯的性能均有不同程度的提高。具体实施方式本发明下述实施例中：所述植物乳杆菌为植物乳杆菌lactobacillusplantarumlp98，其保藏编号为cgmccno.17243，保藏日期为2019年1月29日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述嗜酸乳杆菌为嗜酸乳杆菌lactobacillusacidophilusla5y，其保藏编号为cgmccno.17242，保藏日期为2019年1月29日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述鼠李糖乳杆菌为鼠李糖乳杆菌lactobacillusrhamnosuslr2y，其保藏编号为cgmccno.18800，保藏日期为2019年11月4日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述两歧双歧杆菌为两歧双歧杆菌bifidobacteriumbifidumbmb9，其保藏编号为cgmccno.18799，保藏日期为2019年11月4日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。保藏地址均为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。光学显微镜下，植物乳杆菌lp98(cgmccno.17243)、嗜酸乳杆菌la5y(cgmccno.17242)、鼠李糖乳杆菌lr2y(cgmccno.18800)、两歧双歧杆菌bmb9(cgmccno.18799)在mrs培养基中呈杆状。本发明下述实施例中，选用的mrs常规培养基成分包括：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、吐温801ml、乙酸钠5g、磷酸氢二钾(k2hpo4·3h2o)2g、硫酸镁(mgso4·7h2o)0.2g、硫酸锰(mnso4·h2o)0.05g，蒸馏水1l，ph6.5。本发明下述实施例中，选用的mrs活化培养基成分包括：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、吐温801g、乙酸钠5g、磷酸氢二钾(k2hpo4·3h2o)2g、硫酸镁(mgso4·7h2o)0.2g、硫酸锰(mnso4·h2o)0.05g、鸡蛋清5g、椰子汁20g，蒸馏水1l，ph6.5。本发明下述实施例中，选用的mrs增殖培养基成分包括：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、吐温801g、乙酸钠5g、磷酸氢二钾(k2hpo4·3h2o)2g、硫酸镁(mgso4·7h2o)0.2g、硫酸锰(mnso4·h2o)0.05g、鸡蛋清5g、椰子汁20g，香菇多糖15g，蒸馏水1l，ph6.5。实施例1本实施例所述具有调节血脂功效的益生菌组合物，包括如下组分：本实施例所述益生菌组合物的制备方法如下：分别将4℃保存的上述植物乳杆菌lp98、嗜酸乳杆菌la5y、鼠李糖乳杆菌lr2y、两歧双歧杆菌bmb9接种一环至上述mrs常规培养液(40ml/250ml)中，于37℃进行常规活化培养12h；随后分别将得到的种子活化液按照5％的接种量接种至mrs常规培养液进行增殖培养(80ml/500ml)48h，收集培养液离心弃上清，分别得到增殖后的各菌株，常温干燥，备用。分别按照上述选定的含量取上述干燥后的各菌株进行混合，即得所需益生菌组合物。实施例2本实施例所述具有调节血脂功效的益生菌组合物，包括如下组分：本实施例所述益生菌组合物的制备方法如下：分别将4℃保存的上述植物乳杆菌lp98、嗜酸乳杆菌la5y、鼠李糖乳杆菌lr2y、两歧双歧杆菌bmb9接种一环至上述mrs常规培养液(40ml/250ml)中，于37℃进行常规活化培养12h；随后分别将得到的种子活化液按照5％的接种量接种至mrs常规培养液进行增殖培养(80ml/500ml)48h，收集培养液离心弃上清，分别得到增殖后的各菌株，常温干燥，备用。分别按照上述选定的含量取上述干燥后的各菌株进行混合，即得所需益生菌组合物。实施例3本实施例所述具有调节血脂功效的益生菌组合物，包括如下组分：本实施例所述益生菌组合物的制备方法如下：分别将4℃保存的上述植物乳杆菌lp98、嗜酸乳杆菌la5y、鼠李糖乳杆菌lr2y、两歧双歧杆菌bmb9接种一环至上述mrs常规培养液(40ml/250ml)中，于37℃进行常规活化培养12h；随后分别将得到的种子活化液按照5％的接种量接种至mrs常规培养液进行增殖培养(80ml/500ml)48h，收集培养液离心弃上清，分别得到增殖后的各菌株，常温干燥，备用。分别按照上述选定的含量取上述干燥后的各菌株进行混合，即得所需益生菌组合物。实施例4本实施例所述具有调节血脂功效的益生菌组合物，包括如下组分：本实施例所述益生菌组合物的制备方法如下：分别将4℃保存的上述植物乳杆菌lp98、嗜酸乳杆菌la5y、鼠李糖乳杆菌lr2y、两歧双歧杆菌bmb9接种一环至上述mrs常规培养液(40ml/250ml)中，于37℃进行常规活化培养12h；随后分别将得到的种子活化液按照5％的接种量接种至mrs常规培养液进行增殖培养(80ml/500ml)48h，收集培养液离心弃上清，分别得到增殖后的各菌株，常温干燥，备用。分别按照上述选定的含量取上述干燥后的各菌株进行混合，即得所需益生菌组合物。实施例5本实施例所述具有调节血脂功效的益生菌组合物，包括如下组分：本实施例所述益生菌组合物的制备方法如下：分别将4℃保存的上述植物乳杆菌lp98、嗜酸乳杆菌la5y、鼠李糖乳杆菌lr2y、两歧双歧杆菌bmb9接种一环至上述mrs常规培养液(40ml/250ml)中，于37℃进行常规活化培养12h；随后分别将得到的种子活化液按照5％的接种量接种至mrs常规培养液进行增殖培养(80ml/500ml)48h，收集培养液离心弃上清，分别得到增殖后的各菌株，常温干燥，备用。分别按照上述选定的含量取上述干燥后的各菌株进行混合，即得所需益生菌组合物。实施例6本实施例所述具有调节血脂功效的益生菌组合物的组成成分和制备方法与实施例5相同，其区别仅在于，所述活化步骤采用的培养基为所述mrs活化培养液，增殖步骤依然采用mrs常规培养液。实施例7本实施例所述具有调节血脂功效的益生菌组合物的组成成分和制备方法与实施例5相同，其区别仅在于，所述增殖步骤采用的培养基为所述mrs增殖培养液，活化步骤依然采用mrs常规培养液。实施例8本实施例所述具有调节血脂功效的益生菌组合物的组成成分和制备方法与实施例5相同，其区别仅在于，所述活化和增殖步骤采用的培养基为所述mrs活化培养液。实施例9本实施例所述具有调节血脂功效的益生菌组合物同实施例5，其区别仅在于，各菌株选用常规的普通市售菌剂，而并非本申请特定筛选的菌株进行混合。实验例1、体外降低胆固醇功能试验配制含有胆固醇的mrs培养基(培养液mrso-chol)：由mrs液体培养基、巯基乙酸钠、胆盐和胆固醇组成，其中，巯基乙酸钠在培养液mrso-chol中的浓度为2g/l，胆盐在培养液mrso-chol中的浓度为0.3％，胆固醇终浓度为200mg/l。实验1组：将实施例5中菌剂转接入mrs常规培养液中进行活化，并将活化液按2％接种量接种于10ml培养液mrso-chol中；实验2组：实施例6中菌剂转接入mrs常规培养液中进行活化，并将活化液按2％接种量接种于10ml培养液mrso-chol中；实验3组：实施例7中菌剂转接入mrs常规培养液中进行活化，并将活化液按2％接种量接种于10ml培养液mrso-chol中；实验4组：实施例8中菌剂转接入mrs常规培养液中进行活化，并将活化液按2％接种量接种于10ml培养液mrso-chol中；实验5组：实施例8中菌剂转接入mrs活化培养液中进行活化，并将活化液按2％接种量接种于10ml培养液mrso-chol中；实验6组：实施例9中菌剂转接入mrs常规培养液中进行活化，并将活化液按2％接种量接种于10ml培养液mrso-chol中；对照组：10ml没有接种菌株的培养液mrso-chol。将这5组样品放置于37℃恒温培养箱培养24h后，取出摇匀，12000r/m离心10min，取上清液，用邻苯二甲醛显色剂测定上清中胆固醇降低率。所述邻苯二甲醛法详见中国专利cn101864375a。实验结果见下表1所示。表1各组体外胆固醇降解实验结果编号tc降解率/％实验1组70.56实验2组71.98实验3组73.05实验3组77.86实验4组81.34实验5组52.17对照组-可见，本发明所述益生菌组合物通过特定筛选的菌株的配合，其体外降胆固醇降低率高达70.56％，相比于现有技术一般常规种类的菌株组合物而言，其体外胆固醇降解率(52.17％)大幅提升；尤其是经过本申请方案添加鸡蛋清和椰子汁的mrs进行活化增殖后的益生菌组合物，其体外胆固醇降解率更是高达80％以上。可见，不仅本申请筛选菌株的体外降胆固醇性能相比于常规菌株更优，而经特别筛选的培养基活化后的益生菌组合物，其降解胆固醇的性能更优。2、体内动物实验(1)实验菌株的制备益生菌1组：将实施例5中菌剂转接入mrs常规培养液中进行活化，于37℃培养18h，得到活化菌液益生菌2组：将实施例6中菌剂转接入mrs常规培养液中进行活化，于37℃培养18h，得到活化菌液；益生菌3组：将实施例7中菌剂转接入mrs常规培养液中进行活化，于37℃培养18h，得到活化菌液；益生菌4组：将实施例8中菌剂转接入mrs常规培养液中进行活化，于37℃培养18h，得到活化菌液；益生菌5组：将实施例8中菌剂转接入mrs活化培养液中进行活化，于37℃培养18h，得到活化菌液；益生菌6组：将实施例9中菌剂转接入mrs常规培养液中进行活化，于37℃培养18h，得到活化菌液。分别将上述得到的活化菌液于12000r/m离心10min，用灭菌生理盐水洗涤后收集菌体。然后，加入0.85％生理盐水，调整菌数约1.0×109cfu/ml，然后将活菌按每日使用量分装于15ml离心管(服用剂量为每天2ml/只，每组10只，共6组，需灌胃28天)。(2)实验动物分组及饲养方式选取sprague-dawley系5周龄雄性大鼠，60只，自由饲喂至第28天，平均分为6组，每组10只：益生菌1组：灌胃活菌悬液，饲喂高脂饲料；益生菌2组：灌胃活菌悬液，饲喂高脂饲料；益生菌3组：灌胃活菌悬液，饲喂高脂饲料；益生菌4组：灌胃活菌溶液，饲喂高脂饲料；益生菌5组：灌胃活菌悬液，饲喂高脂饲料；益生菌6组：灌胃活菌溶液，饲喂高脂饲料；模型组：灌胃0.85％生理盐水，饲喂高脂饲料；匹伐他汀胶囊组：灌胃标准剂量匹伐他汀胶囊，饲喂高脂饲料。每天每只2ml灌胃，持续28天，然后停止灌胃，各组饲料、水不变持续28天。(3)样品采集与分析测试正式试验前、第28天以及时间段进行采血。采血方法为绝食一夜后，于大鼠股静脉采血，凝血后6000r/m离心10min分离血清，利用试剂盒(试剂盒名称：总胆固醇测定试剂盒，公司：浙江东瓯诊断产品有限公司)和变色酸显色法，标仪(公司：moleculardevices，型号：spectramax190)分别检测胆固醇及甘油三酯。喂食28天以后，检测各组实验小鼠血液中甘油三酯及胆固醇含量与喂食生理盐水的对照组小鼠相比，甘油三酯及胆固醇含量的降解率，并记录于下表2。表2体内降解效果可见，本发明所述益生菌组合物通过特定筛选的菌株的配合，其体内降解胆固醇和甘油三酯的效率相比于匹伐他汀胶囊组更优，相比于现有技术一般常规种类的菌株组合物而言，其体内降解胆固醇和甘油三酯的效率大幅提升；尤其是经过本申请方案添加鸡蛋清和椰子汁的mrs进行活化、增殖后的益生菌组合物，其体内降解胆固醇和甘油三酯的效率更是高达50％左右。可见，不仅本申请筛选菌株的体内降胆固醇和甘油三酯的性能相比于常规菌株更优，而经特别筛选的培养基活化后的益生菌组合物，其降解性能更优。可见，本发明所述益生菌组合物能够有效降低小鼠的高甘油三脂，高胆固醇症状。显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。当前第1页12