一种抗热应激胆汁酸组合物的制作方法

1.本发明涉及畜牧养殖领域，具体涉及一种抗热应激胆汁酸组合物。


背景技术：

2.高温环境是制约畜禽生产的一个重要因素，而全球温度升高和高密度集约化养殖伴随而来的畜禽热应激问题将演变得日趋严峻。热应激严重影响畜牧业发展，每年给全球养殖业带来巨大经济损失，尤其位处热带和亚热带地区的畜禽养殖业，夏季热应激事件愈加频繁，严重者会造成大部分养殖动物死亡，因此热应激被认为是畜禽生产中面临的突出问题。热应激对畜禽最直接的影响是降低其采食量，导致生产性能降低及机体免疫力降低，破坏氧化平衡，进而诱发代谢性、传染性疾病等，如果养殖设备落后外加管理不当可造成极其严重的伤亡。如何缓解畜禽热应激一直是困扰养殖行业的一个难题。
3.胆汁酸作为新型饲料添加剂，具有绿色、安全、高效、作用持续稳定等特点，近年来引起越来越多关注。胆汁酸作为一种乳化剂具有促进脂肪消化吸收，保肝护胆，调节肠道，提高机体免疫力，提高生产性能，降低料肉比和料蛋比等功能。近年来有学者发现胆汁酸有一定的抗热应激的作用，但这只局限于猪胆汁酸，且抗应激的临床效果十分有限，可见现有技术存在一定的局限性。是否其他动物源性胆汁酸在抗应激方面效果优于猪胆汁酸，或者复配其他功能性组分来进一步增加其效果有待进一步探究。因此，本领域亟需对胆汁酸品种及其复方进行深入研究与开发，以开发出一种高效的抗热应激用胆汁酸复方，从而为养殖业提供更好的功能性饲料添加剂产品。


技术实现要素：

4.本发明的主要目的就在于克服上述现有技术的不足，提供一种抗热应激组合物，其主要组分为胆汁酸、纳豆激酶和牛磺酸，上述原料均从动物胆汁或豆科植物中提取而来，且原材料来源丰富、价格低廉，均有商品化产品可提供，具有绿色、安全等产品优势，可以为养殖业提供更好的功能性饲料添加剂。
5.本发明的构思如下：
6.发明人首先发现羊胆汁本身具有清热解毒、抗炎抑菌、促进消化、抗氧化等功效。目前对于羊胆汁酸只限于其成分上的初步分析。其中，羊胆汁酸中游离型胆汁酸主要是胆酸(ca)、去氧胆酸(dca)，且含量高于其它动物源胆汁酸，具有保护肠道屏障和微生物平衡以及抗氧化损伤等作用，可以在一定程度上缓解热应激造成的负面影响；结合型胆汁酸主要是牛磺胆酸(tca)、牛磺去氧胆酸(tdca)，且tca具有解热镇痛、抗炎抑菌等功效，这都是牛磺酸与主要游离型胆汁酸结合的产物。牛磺酸本身具有广泛的生理作用，可以参与维持细胞钙离子稳定和调节渗透压，与羊胆汁酸结合可发挥抗氧化、抗炎、调节免疫等作用。可见，羊胆汁酸和牛磺酸的结合在抗畜禽热应激方面具有巨大的发展潜力。
7.纳豆激酶是一种枯草杆菌蛋白激酶，是在纳豆发酵过程中由纳豆枯草杆菌产生的一种丝氨酸蛋白酶。目前主要作为溶血栓药物应用于人类临床。血管内皮氧化损伤是血栓
形成的重要原因之一，自由基与活性氧具有很强的氧化性，是造成组织细胞损伤的元凶，纳豆激酶可以通过提高抗氧化水平从而减轻氧化损伤，减轻因应激导致的炎症反应造成的病理损伤，抑制血栓的形成，促进血液循环通畅，为缺氧和缺血的机体组织提供更多的氧气和能量。不仅如此，纳豆激酶还可使炎症反应代谢途径发生偏移，减少炎症反应的发生。纳豆激酶还可以通过抗炎、抗凋亡、抗氧化、抗凝等作用机制降低动脉内膜厚度。鉴于纳豆激酶的临床作用，为纳豆激酶在缓解热应激引起的炎症反应以及氧化损伤方面的应用提供了重要参考。本发明创新性将纳豆激酶与胆汁酸结合用于解决畜禽抗应激难题。
8.牛磺酸作为重要的生理活性物质，在生物体内参与一系列的生理学过程，如参与胆汁酸结合、调节渗透压、改善体内氧化应激状态、稳定细胞膜等。饲料中缺乏牛磺酸，机体会表现出生长不良等症状。不仅如此，几乎所有植物蛋白源都缺乏牛磺酸。因此，羊胆汁酸搭配纳豆激酶和牛磺酸，三者相辅相成，发挥更稳定、高效的作用。牛磺酸作为一种“条件性必需氨基酸”，适当补充有益于改善机体病理状态。但补充过多，可对机体肠道造成负担，反而不利于机体。因此需要验证合适的配比可达到适宜的保护效果。
9.在上述构思的支撑下，本技术的具体技术方案如下：
10.一种抗热应激组合物，其主要活性成分，按重量份计为：
11.胆汁酸4-8份、纳豆激酶1-3份、牛磺酸或麦芽糊精1-3份；
12.所述的胆汁酸选自羊胆汁酸或猪胆汁酸或鸡胆汁酸。
13.其中优选采用羊胆汁酸，猪胆汁酸或鸡胆汁酸的效果稍逊于羊胆汁酸，
14.因此优选的技术方案，其主要活性成分，按重量份计为：
15.羊胆汁酸4-8份、纳豆激酶(20000fu/g)1-3份、牛磺酸(99％纯度)1-3份；
16.更优选的组成为：
17.羊胆汁酸5-6份、纳豆激酶(20000fu/g)2份、牛磺酸(99％纯度)2份。
18.最佳的组成为：
19.羊胆汁酸6份、纳豆激酶(20000fu/g)2份、牛磺酸(99％纯度)2份。
20.除羊胆汁酸外，20000fu/g的纳豆激酶和99％纯度牛磺酸可以直接采用市场购买的商品化产品。
21.经过发明人的大量实验发现，采用上述来源和比例的组合物，羊胆汁酸可从屠宰场获得的新鲜羊胆汁中提取而来，且原材料来源丰富、价格低廉，工艺成熟。另外，市场上有商品化的牛磺酸纯品和高活性纳豆激酶供应，可以实现本发明的大规模生产，可作为一种新型的抗应激功能性饲料添加剂。
附图说明
22.图1为羊胆汁酸抗热应激药物配方对热应激小鼠抗氧化能力的影响，
23.其中对小鼠肝脏mda含量(a)、sod活力(b)以及空肠组织mda含量(c)、sod活力(d)进行检测；图中相同字母表示差异不显著(p》0.05)，不同字母表示差异显著(p《0.05)。
24.图2为羊胆汁酸抗热应激药物配方对热应激小鼠热休克蛋白表达量的影响，
25.其中qpcr方法检测各组小鼠肝脏hsp60(a)、hsp70(b)以及空肠组织hsp60(c)、hsp70(d)mrna表达量；图中相同字母表示差异不显著(p》0.05)，不同字母表示差异显著(p《0.05)。
26.图3为羊胆汁酸抗热应激药物配方对热应激小鼠炎症反应的影响，
27.其中qpcr方法检测各组小鼠肝脏il-1β(a)、il-10(b)以及空肠组织il-1β(c)、il-10(d)mrna表达量；图中相同字母表示差异不显著(p》0.05)，不同字母表示差异显著(p《0.05)。
28.图4为羊胆汁酸抗热应激药物配方对热应激小鼠免疫功能的影响，
29.其中对小鼠iga、igg含量进行检测；图中相同字母表示差异不显著(p》0.05)，不同字母表示差异显著(p《0.05)。
30.图5为不同动物来源胆汁酸配方对热应激小鼠抗氧化能力的影响，
31.其中对小鼠肝脏mda含量(a)、sod活力(b)以及空肠组织mda含量(c)、sod活力(d)进行检测；图中相同字母表示差异不显著(p》0.05)，不同字母表示差异显著(p《0.05)。
32.图6为不同动物来源胆汁配方对热应激小鼠热休克蛋白表达量的影响
33.其中qpcr方法检测各组小鼠肝脏hsp60(a)、hsp70(b)以及空肠组织hsp60(c)、hsp70(d)mrna表达量；图中相同字母表示差异不显著(p》0.05)，不同字母表示差异显著(p《0.05)。
34.图7为不同动物来源胆汁酸配方对热应激小鼠炎症反应的影响
35.其中qpcr方法检测各组小鼠肝脏il-1β(a)、il-10(b)以及空肠组织il-1β(c)、il-10(d)mrna表达量；图中相同字母表示差异不显著(p》0.05)，不同字母表示差异显著(p《0.05)。
36.图8为不同动物来源胆汁酸配方对热应激小鼠免疫功能的影响
37.其中对小鼠iga、igg含量进行检测；图中相同字母表示差异不显著(p》0.05)，不同字母表示差异显著(p《0.05)。
具体实施方式
38.下面对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定，下述采用的纳豆激酶、麦芽糊精、牛磺酸等均为市场上采购的商品，经检测质量合格，发明人在此不再赘述。
39.实施例1胆汁酸的提取
40.动物源胆汁酸提取方法包括以下步骤：
41.分别量取新鲜羊胆汁、猪胆汁、鸡胆汁各500ml，对胆汁进行过滤，加入相当于胆汁体积4倍量的95％乙醇溶液均匀搅拌，静置30min后，以2000rpm/min，4℃下离心10min。除去蛋白和部分色素，得到黄绿色的上清液；将所得上清液按体积的3倍量加入双氧水，90℃加热搅拌10min，使其充分溶解，除去色素。以2000rpm/min，4℃下离心10min，得到澄清的上清液；将所得上清液用旋转蒸发仪浓缩回收乙醇，旋转速为75rpm/min，温度控制在90℃以内，除去乙醇和胆汁中的部分水；将所得浓缩后的液体静置放凉后，用稀盐酸调节溶液ph值，ph值不低于3.0，充分搅拌至出现粘状的白色沉淀物，4℃冰箱过夜；再用少量的酸溶液洗沉淀物1-2次，再以95％乙醇加热溶解，并回收滤液乙醇，干燥后得到白色或淡黄色的粉末。
42.实施例2羊胆汁酸抗热应激组合物配方筛选
43.1.1实验动物及药物
44.balb/c小鼠，济南朋悦实验动物繁育有限公司提供。选取7周龄体重20
±
0.8g雄性小鼠60只，每笼10只，在同等条件下饲养。
45.羊胆汁酸抗热应激药物组方按重量份如下：
46.配方一：羊胆汁酸6份、纳豆激酶2份、牛磺酸2份
47.配方二：羊胆汁酸6份、纳豆激酶2份、麦芽糊精2份
48.配方三：羊胆汁酸6份、麦芽糊精2份、牛磺酸2份
49.配方四：羊胆汁酸6份、麦芽糊精4份
50.1.2试剂和仪器
51.丙二醛(mda)测试盒，超氧化物歧化酶(sod)测定试剂盒，南京建成生物工程研究所产品；rna提取试盒，康为世纪生物科技有限公司产品；小鼠免疫球蛋白a(iga)elisa kit,小鼠免疫球蛋白g(igg)elisa kit,上海朗顿生物科技有限公司；hiscriptiiq rt supermix，chamquniversal sybr qpcr master mix，南京诺为赞生物科技有限公司产品。
52.全自动样品快速研磨仪，上海净信科技公司产品；罗氏lightcycler96实时荧光定量pcr仪，瑞士罗氏公司产品；漩涡振荡器，北京天根生化科技有限公司产品；-80℃超低温冰箱，青岛海尔特种电器有限公司产品；hh-2型数字恒温水浴锅，国华公司。
53.1.3.实验设计及检测指标
54.将60只小鼠适应性饲养3d后，随机分为6组，每组10只。
55.实验分组：
[0056]ⅰ组：空白对照组。
[0057]ⅱ组：热应激对照组。
[0058]ⅲ组：热应激-配方一组。
[0059]ⅳ组：热应激-配方二组。
[0060]
ⅴ
组：热应激-配方三组。
[0061]ⅵ组：热应激-配方四组。
[0062]
动物模型建立：ⅰ组与ⅱ组饲喂基础日粮，其余各组饲喂基础日粮+所对应药物配方。连续饲喂7d，7d后除ⅰ组外，其余五组置于生化培养箱，在温度为36-38℃，相对湿度60％条件下处理2h；热应激后对各组小鼠立即脱颈处死，充分暴露腹腔，分离肝脏和空肠组织，pbs冲洗后，置于-80℃保存。
[0063]
1.3.1精神状态的观察
[0064]
观察各组小鼠热应激前后精神状态。
[0065]
1.3.2抗氧化指标的检测
[0066]
取-80℃冻存的肝脏、空肠组织，按1：9(g：ml)的体积比例加入预冷的生理盐水或pbs后进行研磨，研磨后在4℃，2500r/min条件下离心10min，取上清待测。用商品化试剂盒检测肝脏以及空肠组织中mda、sod含量/活力。
[0067]
1.3.3免疫指标的检测
[0068]
血清中免疫球蛋白a(iga)、免疫球蛋白(igg)含量的检测均采用酶联免疫吸附(elisa)试剂盒进行检测，检测方法参照上海朗顿生物科技有限公司小鼠iga、igg elisa kit试剂盒说明书进行检测。
[0069]
1.3.4热休克蛋白表达量的检测
[0070]
使用qrt-pcr方法检测肝组织以及空肠组织热休克蛋白60(hsp60)、热休克蛋白70(hsp70)mrna的表达水平。用trizon试剂提取肝组织以及空肠组织的总rna，具体操作参照ultrapure rna kit提取试剂盒。用微量紫外分光光度计对所提rna浓度以及质量进行测定，并将其稀释至统一浓度。采用hiscript qrt supermix for qpcr(+gdna wiper)试剂盒将提取的rna反转录得到cdna。引物序列
[1,2,3]
由北京擎科生物科技有限公司合成。采用sybr green法进行qpcr扩增，以β-actin作为内参基因，通过ct法(2-δδct
)计算目的基因mrna相对表达量。
[0071]
上述检测具体可参考下述三篇现有文献中记载的方式方法展开：
[0072]
[1]张琳琳,马强,房希碧,等.不同抗热应激添加剂对热应激小鼠精液品质的影响[j].青岛农业大学学报(自然科学版),2011,28(4):289-292；
[0073]
[2]赵珺.高温热应激环境对雄性小鼠生殖机能影响及其分子机理的研究[d].吉林:东北师范大学,2010；
[0074]
[3]赵丽珍.tim-3在小鼠急性肝损伤中的作用及干预机制的研究[d].山东:青岛大学,2020。
[0075]
1.3.5数据处理
[0076]
使用spss17.0软件分析各组数据差异性，采用单因素方差分析(one-way anova)检验组间差异显著性，用最小差异性(lsd)进行多重比较。图中相同字母表示差异不显著(p》0.05)，不同字母表示差异显著(p《0.05)。
[0077]
2.结果与分析
[0078]
2.1四种羊胆汁酸抗热应激药物配方对热应激小鼠精神状态的影响
[0079]
热应激开始之前，各组小鼠精神状态均良好，热应激对照组(ⅱ)小鼠表现出明显的烦躁不安，呼吸局促，眼球凸出，被毛潮湿，小鼠静卧不动；而热应激-配方一组(ⅲ)大多数小鼠仍有活跃跳动和采食行为；热应激-配方二组(ⅳ)与热应激-配方三组(
ⅴ
)有少数小鼠活跃跳动，偶尔采食；热应激-配方四组(ⅵ)多数小鼠静卧不动，反应能力较弱，较热应激对照ⅱ组略有改善。热应激结束时ⅱ组小鼠仍呼吸急促，静卧不动，饲喂配方一组的小鼠仍有活跃行为。表明配方一也就是本技术优选的组方可以改善小鼠的精神状态，其次是配方二与配方三，其中前者略优于后者，配方四作用微小。
[0080]
2.2四种羊胆汁酸抗热应激药物配方对热应激小鼠抗氧化能力的影响
[0081]
各组抗氧化指标的检测结果如图1所示：
[0082]
热应激组(ⅱ)与空白对照组(ⅰ)相比，肝脏以及空肠组织中mda含量显著升高，sod活性显著下降(p《0.05)，说明热应激引起了小鼠肝脏以及空肠组织氧化损伤。然而，给予药物配方的各组显示，与热应激对照组(ⅱ)相比，热应激-配方一组(ⅲ)、热应激-配方二组(ⅳ)和热应激-配方三组(
ⅴ
)对肝脏以及空肠组织中mda含量以及sod活力表现为差异显著(p《0.05)，而其它配方组作用效果显著低于热应激-配方一组(ⅲ)(p《0.05)，ⅳ组和
ⅴ
组相差不大但稍强于ⅵ组。结果表明配方一也就是本技术优选的组方对提高热应激小鼠抗氧化能力作用显著，其次是配方二与配方三，其中前者略优于后者，配方四作用较小。
[0083]
2.3四种羊胆汁酸抗热应激药物配方对热应激小鼠热休克蛋白表达量的影响
[0084]
各组热休克蛋白表达量如图2所示：
[0085]
与空白对照组(ⅰ)相比，热应激对照组(ⅱ)hsp60、hsp70表达量在肝脏以及空肠组
织中显著升高(p《0.05)。给予药物配方结果显示，与热应激组(ⅱ)相比，热应激-配方一组(ⅲ)、热应激-配方二组(ⅳ)和热应激-配方三组(
ⅴ
)对肝脏以及空肠组织中hsp60、hsp70表达量均表现为显著降低(p《0.05)，而热应激-配方四组(ⅵ)对其无显著影响(p》0.05)。热应激-配方一组(ⅲ)对降低热应激状态下hsp60、hsp70表达量的作用显著优于其它配方组(p《0.05)。ⅳ组和
ⅴ
组作用相差不大，ⅵ组作用效果较弱。相比而言，配方一也就是本技术优选的组方对于降低热休克蛋白表达量最为明显，其次是配方二与配方三，配方四作用效果最差。
[0086]
2.4四种羊胆汁酸抗热应激药物配方对热应激小鼠炎症反应的影响
[0087]
各组炎症因子表达量如图3所示：
[0088]
与空白对照组(ⅰ)相比，热应激对照组(ⅱ)肝脏以及空肠组织中促炎因子il-1βmrna表达量显著升高(p《0.05)，而抗炎因子il-10mrna表达量显著降低(p《0.05)，说明热应激引起了小鼠组织器官的炎症反应。给予药物配方组的结果显示，热应激-配方一组(ⅲ)和热应激-配方二组(ⅳ)可以显著的降低热应激状态下小鼠肝脏以及空肠组织中il-1βmrna的表达量，显著升高il-10mrna表达量(p《0.05)。热应激-配方一组(ⅲ)作用效果显著优于其他两个配方组。热应激-配方三组(
ⅴ
)和热应激-配方四组(ⅵ)作用较弱，但前者略优于后者。相比而言，配方一也就是本技术优选的组方对于缓解炎症反应最为明显，其次是配方二与配方三，配方四作用微小。
[0089]
2.5四种羊胆汁酸抗热应激药物配方对热应激小鼠免疫功能的影响
[0090]
各组体液免疫指标检测结果如图4所示：
[0091]
热应激对照组(ⅱ)中iga和igg含量显著低于空白对照组(ⅰ)(p《0.05)，说明热应激引起了小鼠免疫功能降低。给予药物配方组结果显示，热应激-配方一组(ⅲ)、热应激-配方二组(ⅳ)和热应激-配方三组(
ⅴ
)可显著增加热应激状态下iga和igg含量。且热应激-配方一组(ⅲ)效果明显优于其他配方组(p《0.05)，ⅵ组作用效果弱于ⅳ组和
ⅴ
组但强于ⅱ组。表明，配方一也就是本技术优选的组方对提高热应激小鼠免疫功能效果显著，其次是配方二与配方三，其中前者略优于后者，配方四作用效果相对较弱。
[0092]
实施例3不同来源胆汁配方抗应激效果筛选
[0093]
1.1实验动物及药物
[0094]
balb/c小鼠，济南朋悦实验动物繁育有限公司提供。选取7周龄体重20
±
0.8g雄性小鼠50只，每笼10只，在同等条件下饲养。
[0095]
不同来源胆汁配方抗应激药物组方按重量份如下：
[0096]
配方一：羊胆汁酸6份、纳豆激酶2份、牛磺酸2份
[0097]
配方二：猪胆汁酸6份、纳豆激酶2份、牛磺酸2份
[0098]
配方三：鸡胆汁酸6份、纳豆激酶2份、牛磺酸2份
[0099]
1.2试剂和仪器
[0100]
丙二醛(mda)测试盒，超氧化物歧化酶(sod)测定试剂盒，南京建成生物工程研究所产品；rna提取试盒，康为世纪生物科技有限公司产品；小鼠免疫球蛋白a(iga)elisa kit,小鼠免疫球蛋白g(igg)elisa kit,上海朗顿生物科技有限公司；hiscriptiiq rt supermix，
[0101]
chamquniversal sybr qpcr master mix，南京诺为赞生物科技有限公司产品。
[0102]
全自动样品快速研磨仪，上海净信科技公司产品；罗氏lightcycler96实时荧光定量pcr仪，瑞士罗氏公司产品；漩涡振荡器，北京天根生化科技有限公司产品；-80℃超低温冰箱，青岛海尔特种电器有限公司产品；hh-2型数字恒温水浴锅，国华公司。
[0103]
1.3.实验设计及检测指标
[0104]
将50只小鼠适应性饲养3d后，随机分为5组，每组10只。
[0105]
实验分组：
[0106]ⅰ组：空白对照组。
[0107]ⅱ组：热应激对照组。
[0108]ⅲ组：热应激-配方一组。
[0109]ⅳ组：热应激-配方二组。
[0110]
ⅴ
组：热应激-配方三组。
[0111]
动物模型建立：ⅰ组与ⅱ组饲喂基础日粮，其余各组饲喂基础日粮+所对应药物配方。连续饲喂7d，7d后除ⅰ组外，其余四组置于生化培养箱，在温度为36-38℃，相对湿度60％条件下处理2h。热应激后对各组小鼠立即脱颈处死，充分暴露腹腔，分离肝脏和空肠组织，pbs冲洗后，置于-80℃保存。
[0112]
3.2检测指标
[0113]
检测指标同实施例二1.3。
[0114]
3.3.数据处理
[0115]
使用spss17.0软件分析各组数据差异性，采用单因素方差分析(one-way anova)检验组间差异显著性，用最小差异性(lsd)进行多重比较。其中图中相同字母表示差异不显著(p》0.05)，不同字母表示差异显著(p《0.05)。
[0116]
2.结果与分析
[0117]
2.1不同来源胆汁配方对热应激小鼠精神状态的影响
[0118]
热应激开始之前，各组小鼠精神状态均良好，热应激期间对照ⅱ组小鼠表现出明显的烦躁不安，呼吸局促，眼球凸出，被毛潮湿，小鼠静卧不动；而热应激-配方一组(ⅲ)大多数小鼠仍有活跃跳动行为，明显的采食行为；热应激-配方二组(ⅳ)有少数小鼠活跃跳动，热应激-配方三组(
ⅴ
)多数小鼠静卧不动，反应能力弱；热应激结束时ⅱ组小鼠仍呼吸急促，静卧不动，饲喂配方一组的小鼠仍有活跃行为，ⅳ和
ⅴ
组活动能力优于ii组但明显弱于iii组。表明羊源胆汁酸的配方对于改善热应激小鼠的精神状态优于猪源胆汁酸以及鸡源胆汁酸的配方。
[0119]
2.2不同来源胆汁配方对热应激小鼠抗氧化能力的影响
[0120]
由图5可知，与空白对照组(ⅰ)相比，热应激对照组(ⅱ)肝脏以及空肠组织中mda含量以及sod活力差异显著(p《0.05)，提示热应激破坏了小鼠组织中氧化平衡。与热应激对照组(ⅱ)相比，热应激-配方一组(ⅲ)、热应激-配方二组(ⅳ)和热应激-配方三组(
ⅴ
)显著降低了肝脏与空肠组织中mda含量，显著提高了sod活力(p《0.05)，且ⅲ组作用效果强于ⅳ组(p《0.05)，
ⅴ
组稍弱于ⅳ组。上述结果表明羊源胆汁酸的配方对于提高热应激小鼠的抗氧化能力优于猪源胆汁酸和鸡源胆汁酸的配方。
[0121]
2.3不同来源胆汁配方对热应激小鼠热休克蛋白表达量的影响
[0122]
热应激的发生会引起热休克蛋白水平的升高。由图6可知，热应激对照组(ⅱ)肝脏
以及空肠组织中hsp60、hsp70的表达量显著地高于空白对照组(ⅰ)(p《0.05)。与热应激对照组(ⅱ)相比，对于降低hsp60以及hsp70在肝脏以及空肠组织中的表达量热应激-配方一组(ⅲ)和热应激-配方二组(ⅳ)表现为差异显著(p《0.05)，而热应激-配方三组(
ⅴ
)无统计学意义(p》0.05)。热应激-配方一组(ⅲ)对降低热休克蛋白表达量的效果明显优于热应激-配方二组(ⅳ)和热应激-配方三组(
ⅴ
)(p《0.05)，而ⅳ组又明显优于
ⅴ
组。可见羊源胆汁酸配方对于降低热应激小鼠体内热休克蛋白的表达作用明显优于猪源胆汁酸以及鸡源胆汁酸配方。
[0123]
2.4不同来源胆汁配方对热应激小鼠炎症反应的影响
[0124]
由图7可知，与空白对照组(ⅰ)相比，热应激对照组(ⅱ)肝脏以及空肠组织中促炎因子il-1βmrna表达量显著增加(p《0.05)，抗炎因子il-10mrna表达量显著降低(p《0.05)，表明热应激引起小鼠肝脏以及空肠组织的炎症反应。与热应激组(ⅱ)相比，对于改善炎症因子的表达水平，热应激-配方一组(ⅲ)、热应激-配方二组(ⅳ)和热应激-配方三组(
ⅴ
)结果显示差异显著(p《0.05)，但ⅲ组效果显著优于其它两个配方组(p《0.05)，ⅳ组优于
ⅴ
组。表明羊源胆汁酸配方对于缓解热应激小鼠炎症反应明显优于猪源胆汁酸以及鸡源胆汁酸配方。
[0125]
2.5不同来源胆汁配方对热应激小鼠免疫功能的影响
[0126]
由图8可知，热应激对照组(ⅱ)中iga和igg含量显著低于空白对照组(ⅰ)(p《0.05)。给予药物配方组结果显示，热应激-配方一组(ⅲ)、热应激-配方二组(ⅳ)和热应激-配方三组(
ⅴ
)可显著增加热应激状态下iga和igg含量(p《0.05)，但ⅲ组效果显著优于其它两个配方组(p《0.05)，ⅳ组优于
ⅴ
组。表明，羊源胆汁酸配方对于提高热应激小鼠免疫功能方面明显优于猪源胆汁酸以及鸡源胆汁酸配方。
[0127]
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。