一种降尿酸肽螯合钙及其制备方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于秋刀鱼的精深加工领域，具体涉及一种来源于秋刀鱼的降尿酸肽螯合 钙，及其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 尿酸是内源性嘌呤和饮食中嘌呤的代谢产物，主要由细胞代谢分解的核酸和其他 嘌呤类化合物经酶作用分解而来。人体中尿酸20%来源于富含嘌呤或核酸蛋白食物，属外 源性；而80%来源于内源性嘌呤代谢。人体每天产生的尿酸中有将近70%经过肾脏排泄， 一旦尿酸生成过量和/或排泄减少，将引起血尿酸水平的上升，当血尿酸持续上升时，则会 引起尿酸盐在软组织中的沉积，进而诱发高尿酸血症和痛风甚至累及生命。
[0003] 随着经济的发展，人们的生活水平极大地提高，人们的饮食结构和生活方式也随 之发生了改变，近年来高尿酸病的发病率呈明显上升的趋势，且易发于中老年人。虽然目前 已有一些具有明显降尿酸或抗痛风的药物，但都不同程度存在毒副作用，使得人们对健康 药物和保健食品的需求更加迫切。
[0004] 生物活性肽是指由氨基酸通过肽键连接起来的具有某些特殊生理活性的多肽物 质，其肽链长度不一，结构各不相同，导致其具有不同的生理活性，如降血压、降胆固醇、抗 血栓、抗癌、抗氧化等。经过科研工作者的不懈努力，越来越多的生物活性肽被不断发现。
[0005] 此外，高尿酸血症会引起通风症的发作，主要是由于当血液中尿酸浓度达到饱和 时，尿酸水平的继续增高会使得尿酸发生结晶，形成通风石并沉积在关节内的滑液中，不仅 使得滑液丧失润滑保护关节的作用，反而会像沙浆一样与关节摩擦、使病人疼痛难受形成 痛风，而且还会磨坏关节表面的钙质，使得关节的承重能力更差，变形更严重。在我国，高尿 酸患者常见于中老年人，他们本来就存在不同程度的缺钙，导致情况恶化。因此，在治疗或 预防高尿酸血症的同时，也应该重视钙的补充和吸收。
[0006] 秋刀鱼是一种海洋鱼，其长期在海洋特殊环境中生存，其内部必定存在某些独特 的生物活性物质，如果能够将这些生物活性物质释放出来，并且与钙质结合，用于治疗和 预防高尿酸症，既能达到降尿酸的效果，又可起到补钙的作用，将具有极大的经济和社会意 义。
【发明内容】
[0007] 本发明的首要目的在于提供一种降尿酸肽螯合钙的制备方法，该方法是采用生物 酶解技术将秋刀鱼内部的降尿酸活性片段释放出来，并将其与钙发生螯合反应。
[0008] 本发明的另一目的在于提供由上述方法制得的降尿酸肽螯合钙，该产品兼具降尿 酸和补钙作用。
[0009] 本发明的再一目的在于提供上述的降尿酸肽螯合钙的用途。
[0010] 本发明的目的通过下述技术方案实现：
[0011] 一种降尿酸肽螯合钙的制备方法，包括以下步骤：
[0012] (1)秋刀鱼预处理：秋刀鱼去头、去内脏，清洗干净，过绞肉机绞碎，加入秋刀鱼碎 肉质量3~5倍的水，在40~50°C下加热搅拌1~2小时，然后调节体系pH值至4. 2,继 续搅拌加热1~1. 5小时，离心分离，弃除上清液和上层油脂，取沉淀物；
[0013] (2)降尿酸肽的制备：往秋刀鱼沉淀物中加入其质量1~1. 5倍的水，调节体系pH 值至7. 0,然后加入蛋白酶，在50~55°C下保温水解6~9小时后，灭酶，离心，取上清液， 得到秋刀鱼降尿酸肽液；以秋刀鱼沉淀物的质量为计算基准，蛋白酶的总加入量占1. 5~ 3.0% ；
[0014] (3)秋刀鱼肽螯合钙的制备：将秋刀鱼降尿酸肽液的pH值调至7. 0~8. 5,按秋刀 鱼降尿酸肽液固形物质量30~50%加入氯化钙固体，在30~35°C下保温30~60min，然 后加入无水乙醇搅拌15~30min;此处，生成的螯合钙不溶于无水乙醇，加入无水乙醇可以 达到分离螯合钙的目的；将反应物离心，取沉淀物真空干燥，得到降尿酸肽螯合钙产品；
[0015] 所述的调节体系pH值是用0.1~0.5mol/L的NaOH溶液或HC1溶液调节；
[0016] 所述的离心是5000r/min离心15~20min ;
[0017] 步骤⑵所述的蛋白酶是商业用的碱性蛋白酶和风味蛋白酶，优选诺维信公司的 碱性蛋白酶（Alcalase 2. 4L)和风味蛋白酶（Flavourzyme 500MG);碱性蛋白酶的加入量 占秋刀鱼沉淀物质量的0. 6~0. 8%，风味蛋白酶的加入量占秋刀鱼沉淀物质量的1. 0~ 1. 5% ；
[0018] 步骤（3)中，无水乙醇质量为秋刀鱼降尿酸肽液质量的8~12倍。
[0019] 由上述方法制得的降尿酸肽螯合钙可用于制备具有降尿酸和/或补钙功效的药 物和保健品，在应用时，可以将其与具有降尿酸作用的中草药复配。
[0020] 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0021] (1)本发明首先通过现代生物酶解技术释放秋刀鱼蛋白中的活性片段，然后采用 湿法螯合制备蛋白肽螯合钙产品。从秋刀鱼蛋白中释放出来的生物活性肽段具有明显降尿 酸功效，同时，该蛋白肽具有良好的螯合钙质的作用，制备得到的降尿酸肽螯合钙产品不仅 具有显著的降尿酸作用，同时解决了对维持骨、肌肉功能至关重要的钙的正常吸收与利用 的损失问题，可成为一种优秀的兼备降尿酸和补充钙质的产品。
[0022] (2)本发明工艺操作简单、生产成本低、没有任何污染，所得降尿酸肽螯合钙产品 的降尿酸活性强，且钙的吸收率高。
【附图说明】
[0023] 图1是各实施例和对比例产品在不同pH值条件下的溶解性柱状图。
【具体实施方式】
[0024] 下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限 于此。
[0025] 以下各实施例中，各样品对黄嘌呤氧化酶抑制率的实验方法如下：
[0026] (1)溶液的配置
[0027] 0?2mol/L (pH 7. 5)磷酸缓冲液（PBS):准确称取 30. 0838g Na2HP04 ? 12H20 和 2. 4962g NaH2P04 ? 2H20,用去离子水溶解，定容至500ml。
[0028] 黄嘌呤溶液：准确称取6. 4mg黄嘌呤，先用1ml1M NaOH将其溶解，再加入100ml PBS，以1M HC1调节pH值至7. 5。
[0029] 黄嘌呤氧化酶：取120 y 1酶液，以PBS稀释至8ml。
[0030] 尿酸标曲：准确称取10mg尿酸，加入10ml水，再稀释至0. 1~0. 9mg/ml。
[0031] 醋酸胺-冰醋酸：准确称取醋酸胺3. 85g定容至1000ml，然后加入4ml冰醋酸。
[0032] (2)样品预处理：
[0033] 将样品稀释至40mg/ml，在96孔酶标板中依次加入50 y 1样品与50 y 1黄嘌呤，每 个样品做3个平行，37°C保温lOmin后加入150 y 1黄嘌呤氧化酶，37°C继续保温20min后 加入80 y 1 1M HC1终止反应，过0. 25 y m水性膜，待测。
[0034]色谱柱：ZorbaxEclipseXDB-C18 柱（5ym，4.6X 250mm,安捷伦），
[0035] 液相条件：洗脱液为10%甲醇+90%醋酸胺-冰醋酸溶液，进样体积为20yL，流 速lml/min，检测波长为290nm，运行时间10min〇
[0036] (3)计算公式
[0037]
【主权项】
1. 一种降尿酸肽螯合钙的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 秋刀鱼预处理：秋刀鱼去头、去内脏，清洗干净，过绞肉机绞碎，加入秋刀鱼碎肉质 量3~5倍的水，在40~50°C下加热搅拌1~2小时，然后调节体系pH值至4. 2,继续搅 拌加热1~1. 5小时，离心分离，弃除上清液和上层油脂，取沉淀物； (2) 降尿酸肽的制备：往秋刀鱼沉淀物中加入其质量11~1. 5倍的水，调节体系pH 值至7. 0,然后加入蛋白酶，在50~55°C下保温水解6~9小时后，灭酶，离心，取上清液， 得到秋刀鱼降尿酸肽液；以秋刀鱼沉淀物的质量为计算基准，蛋白酶的总加入量占1. 5~ 3. 0% ； (3) 秋刀鱼肽螯合钙的制备：将秋刀鱼降尿酸肽液的pH值调至7. 0~8. 5,按秋刀鱼降 尿酸肽液固形物质量30~50%加入氯化钙固体，在30~35°C下保温30~60min，然后加 入无水乙醇搅拌15~30min，离心，取沉淀物真空干燥，得到降尿酸肽螯合钙产品。
2. 根据权利要求1所述的降尿酸肽螯合钙的制备方法，其特征在于：步骤（2)所述的 蛋白酶为碱性蛋白酶和风味蛋白酶。
3. 根据权利要求2所述的降尿酸肽螯合钙的制备方法，其特征在于：碱性蛋白酶的 加入量占秋刀鱼沉淀物质量的〇. 6-0. 8%，风味蛋白酶的加入量占秋刀鱼沉淀物质量的 I. 0-1. 5%〇
4. 根据权利要求2所述的降尿酸肽螯合钙的制备方法，其特征在于：碱性蛋白酶是诺 维信公司的Alcalase 2. 4L，风味蛋白酶是诺维信公司的Flavourzyme500MG。
5. 根据权利要求1所述的降尿酸肽螯合钙的制备方法，其特征在于：步骤（3)中，无水 乙醇质量为秋刀鱼降尿酸肽液质量的8~12倍。
6. -种降尿酸肽螯合钙，其特征在于：是由权利要求1-5任一项所述的方法制备得到。
7. 权利要求6所述的降尿酸肽螯合钙在制备具有降尿酸和/或补钙功效的药物和保健 品中的应用。
8. 根据权利要求7所述的降尿酸肽螯合钙在制备具有降尿酸和/或补钙功效的药物和 保健品中的应用，其特征在于：将所述的降尿酸肽螯合钙与具有降尿酸作用的中草药复配。
【专利摘要】本发明公开了一种降尿酸肽螯合钙及其制备方法和用途，其制备方法包括以下步骤：将秋刀鱼绞碎，然后加热搅拌，再调节pH值至4.2，离心分离取沉淀，加入蛋白酶酶解，酶解产物离心后取上清，即秋刀鱼降尿酸肽液；加入氯化钙固体，然后加入无水乙醇搅拌，离心，取沉淀物真空干燥，得到降尿酸肽螯合钙产品。本发明通过现代生物酶解技术释放秋刀鱼蛋白中的活性片段，然后采用湿法螯合制备蛋白肽螯合钙产品。从秋刀鱼蛋白中释放出的生物活性肽段具有明显降尿酸功效，同时，该蛋白肽具有较好的螯合钙的作用，制备得到的降尿酸肽螯合钙产品不仅具有显著的降尿酸作用，同时解决了对维持骨、肌肉功能至关重要的钙的正常吸收与利用的损失问题。
【IPC分类】A23L1-305, A23L1-304, A23L1-327
【公开号】CN104664454
【申请号】CN201510095099
【发明人】苏国万, 赵谋明, 赵容钟, 赵强忠, 刘洋
【申请人】华南理工大学
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年3月3日