酪蛋白磷酸肽产品持钙能力的测定方法
【专利摘要】本发明涉及一种酪蛋白磷酸肽产品持钙能力的测定方法，属于食品添加剂及其检测方法领域。所述的酪蛋白磷酸肽产品持钙能力的测定方法,包括以下步骤：用Chelex-100除去CPP产品中的钙，再用去离子水配制成一定浓度CPP溶液，室温下搅拌10分钟后加入PH=8.0的5mL磷酸二氢钾和磷酸氢钾缓冲溶液并搅拌均匀，然后加入氯化钙溶液混合均匀，将此溶液在25℃下静置40分钟待沉淀充分产生，然后在2900rpm离心20分钟除去溶液中的沉淀，则上清液中含有与CPP络合的钙离子。用原子吸收光谱仪检测上清液中的钙含量，并换算出该浓度下的CPP所能结合的钙离子数量。本发明所述的测定方法具有简单快速、灵敏度高、重现性好、结果准确可靠等特点。因此，本发明所述的测定方法可用于酪蛋白磷酸肽产品应用中持钙能力的快速常规分析测定。
【专利说明】酪蛋白磷酸肽产品持钙能力的测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种酪蛋白磷酸肽产品持钙能力的测定方法，属于食品添加剂及其检测方法领域。
【背景技术】
[0002]酪蛋白磷酸肽(简称CPP)是牛奶酪蛋白经酶解、分离、纯化而制得的活性肽产品。研究发现CPP能与钙离子结合生成稳定的可溶性络合物，从而阻止或延缓钙离子在中性或弱碱性环境中形成沉淀。CPP结合钙能力的高低与其分子中氨基酸的组成、排序或磷酸基的分布等因素密切相关。其中CPP产品的氮/磷摩尔比(N/P)能较客观地反映CPP产品的纯度、磷酸基密度、结合钙能力等理化性质。一般来说，N/P值较低的CPP产品其纯度较高，结合钙的能力(即持钙能力)亦较高。但是，由于生产中各厂家所采用的原料，酶或酶系及生产条件均不相同，故商品CPP的纯度、N/P值等指标也不尽相同，这直接影响了 CPP产品的持钙能力。
[0003]对于CPP产品的持钙能力的测定，对CPP应用以及含CPP产品产生具有重要的意义。例如，要研制一种含CPP的钙片，每片重0.5g，含元素钙80mg。假设要求加入的CPP产品能够全部结合片剂中的钙，根据理论上需要加入107mg高持钙能力的CPP产品或413mg低持钙能力的CPP产品，若使用含钙量最高的碳酸钙为钙源，则提供SOmg元素钙需要碳酸钙200mg。在不添加任何辅料的情况下，碳酸钙和低持钙能力的CPP产品的量已达0.613g，超出了片重规格要求，因此在这种情况下选择产品(在生产中是难以满足配方设计要求的。而选用高持钙能力的CPP产品的产品则问题可迎刃而解，因为只需加入107mg产品’即可满足原功效成分配方的设计，且尚有0.193g空间用来添加和调整其它原辅料。
[0004]因此，建立一种简便、快速、准确测定酪蛋白磷酸肽产品持钙能力的方法很有必要。
【发明内容】
[0005]本发明旨在提供一种简便、快速、准确的酪蛋白磷酸肽产品持钙能力的测定方法。
[0006]本发明所述的酪蛋白磷酸肽产品持钙能力的测定方法，包括以下步骤:
用Chelex-1OO除去CPP产品中的钙，再用去离子水配制成一定浓度CPP溶液，室温下搅拌10分钟后加入PH=8.0的5mL磷酸二氢钾和磷酸氢钾缓冲溶液并搅拌均匀，然后加入氯化钙溶液混合均匀，将此溶液在25°C下静置40分钟待沉淀充分产生，然后在2900rpm离心20分钟除去溶液中的沉淀，则上清液中含有与CPP络合的钙离子。用原子吸收光谱仪检测上清液中的钙含量，并换算出该浓度下的CPP所能结合的钙离子数量。
[0007]优选的，本发明所述的CPP溶液的浓度为100mg/mL，用量为3.75mL。
[0008]更优选的，本发明所述的氯化钙溶液的浓度为100mg/mL，加入量为1.25mL。
[0009]本发明所述的测定方法是根据CPP在中性或弱碱性溶液中能与钙离子结合形成稳定的水溶性络合物，阻止或延缓溶液中的钙离子与磷酸根离子结合生成磷酸钙沉淀这一特性，CPP持钙能力的大小可以通过定量测定CPP结合特定溶液中钙离子的量来进行评价。
[0010]本发明所述的测定方法具有简单快速、灵敏度高、重现性好、结果准确可靠等特点。因此，本发明所述的测定方法可用于酪蛋白磷酸肽产品应用中持钙能力的快速常规分析测定。
【具体实施方式】
[0011]实施例一:
取市售高纯度CPP产品，用Chelex-ΙΟΟ除去CPP产品中的钙，再用去离子水配制成浓度为100mg/mL的CPP溶液，取3.75mL在室温下搅拌10分钟后加入PH=8.0的5mL磷酸二氢钾和磷酸氢钾缓冲溶液并搅拌均匀，然后加入1.25mL浓度为100mg/mL的氯化钙溶液混合均匀，将此溶液在25°C下静置40分钟待沉淀充分产生，然后在2900rpm离心20分钟除去溶液中的沉淀，则上清液中含有与CPP络合的钙离子。用原子吸收光谱仪检测上清液中的钙含量，并换算出该浓度下的CPP所能结合的钙离子数量。经测定，该CCP产品的持钙能力为 74.7mg/100mg。
[0012]实施例二:
取市售低纯度CPP产品，用Chelex-ΙΟΟ除去CPP产品中的钙，再用去离子水配制成浓度为100mg/mL的CPP溶液，取3.75mL在室温下搅拌10分钟后加入PH=8.0的5mL磷酸二氢钾和磷酸氢钾缓冲溶液并搅拌均匀，然后加入1.25mL浓度为100mg/mL的氯化钙溶液混合均匀，将此溶液在25°C下静置40分钟待沉淀充分产生，然后在2900rpm离心20分钟除去溶液中的沉淀，则上清液中含有与CPP络合的钙离子。用原子吸收光谱仪检测上清液中的钙含量，并换算出该浓度下的CPP所能结合的钙离子数量。经测定，该CCP产品的持钙能力为 19.4mg/100mgo
【权利要求】
1.酪蛋白磷酸肽产品持钙能力的测定方法，包括以下步骤: 用Chelex-1OO除去CPP产品中的钙，再用去离子水配制成一定浓度CPP溶液，室温下搅拌10分钟后加入PH=8.0的5mL磷酸二氢钾和磷酸氢钾缓冲溶液并搅拌均匀，然后加入氯化钙溶液混合均匀，将此溶液在25°C下静置40分钟待沉淀充分产生，然后在2900rpm离心20分钟除去溶液中的沉淀，则上清液中含有与CPP络合的钙离子；用原子吸收光谱仪检测上清液中的钙含量，并换算出该浓度下的CPP所能结合的钙离子数量。
2.如权利要求1所述的酪蛋白磷酸肽产品持钙能力的测定方法，其特征在于所述的CPP溶液的浓度为100mg/mL，用量为3.75mL。
3.如权利要求1或2所述的酪蛋白磷酸肽产品持钙能力的测定方法，其特征在于所述的氯化钙溶液的浓度为100mg/mL，加入量为1.25mL。
【文档编号】G01N21/31GK104297184SQ201410573848
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年10月24日 优先权日:2014年10月24日
【发明者】李勇, 刘文斌 申请人:西安莹朴生物科技股份有限公司