一种海参糖肽螯合钙的加工方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及水产加工技术领域，具体涉及一种海参糖肽螯合钙的加工方法。
【背景技术】
[0002]钙是人体必需矿质元素之一，也是含量最多的元素，具有多种重要的生理功能。钙离子是神经传导递质，具有调节肌肉紧张度的作用，同时对骨骼健康意义重大。当前，由于生活方式的转变，钙缺乏逐渐成为全球性的健康问题，尤其是老人、儿童、孕妇等特殊人群钙缺乏现象普遍存在。有效进行补钙，对提高人们的身体素质和生活质量具有非常重要的意义。
[0003]海参是传统的名贵滋补佳品，具有“海中人参”的美誉。相关研究证明，海参是一种高蛋白、低脂肪、无胆固醇的营养品，其含有的海参胶原蛋白可以促进机体细胞的再生和受损后的修复，还可提高人体的免疫功能，具有消除疲劳的作用。
[0004]现代生物研究表明，人体摄入的蛋白质食物在经消化道酶作用后，主要以低聚肽的形式吸收。将海参胶原蛋白水解成海参肽的形式，有利于提高消化吸收，更好的发挥其保健功效。
[0005]多肽螯合钙是一种新型钙肽双补产品，一方面有利于提高钙的吸收率，另一方面又能够发挥多肽的保健功能，近年来逐渐成为研究的热点。
[0006]中国发明专利CN 102871121 B公布了一种海洋骨胶原肽钙螯合物的制备方法，包括先采用碱性蛋白酶后加入木瓜蛋白酶进行总共3.5-5h酶解及高温灭酶后制成骨胶原肽，再加入外源性氯化钙或氢氧化钙，经用无水乙醇进行沉淀，得海洋骨胶原肽钙螯合物。
[0007]中国发明专利CN 102309008 B提供了一种胶原多肽螯合钙的制备方法，采用动物皮明胶为原料，先加入复合蛋白酶酶解l_6h后灭活，再加入风味蛋白酶酶解l_4h的方法法，制备得到胶原多肽，然后直接将其同氯化钙、氢氧化钙等离子钙，在10-50°C，pH值为5-8条件下进行螯合反应制备胶原多肽螯合钙。以上2个专利未对胶原肽进行分离纯化，螯合效果因此受到一定影响。
[0008]中国发明专利CN 103045706 B公布了一种连续生产鱼鳞胶原肽螯合钙盐和鱼鳞胶原肽的方法，包括加入氢氧化钠预处理鱼鳞，采用酸性蛋白酶解3-6h后高温灭酶得到鱼鳞胶原多肽和钙溶液混合液，经截留后再次酶解截留液3-6h及高温灭酶，常温下自然螯合4-24h制备鱼鳞胶原肽螯合钙盐溶液，经乙醇分离得螯合钙盐和胶原肽溶液。其工艺在处理过程中加入了氢氧化钠，存在一定食用安全隐患。
[0009]中国发明专利CN 104000191 A公布了一种新型螯合钙，通过将L-天门冬氨酸、海藻糖、维生素C37、三氯蔗糖及无水氯化钙搅拌混合制取溶液，经过200目和800目筛后在温度80度、pH值为8的条件下经过70min螯合，再经干燥搅合、筛取、灭菌制成。其公布的是一种氨基酸螯合钙的加工工艺，未涉及多肽螯合钙的加工。
[0010]海参口器，俗称“海参牙”，是海参在食用前发制加工环节产生的下脚料，通常作为废物丢弃。而实际上，海参口器中含有大量的生物钙，而且相比于自然环境中的其他钙源，其结构更为松散，利于加工释放钙离子，是良好的生物钙源。同时，口器包含一定数量的触腕，在加工去除时也会随之牵扯下一定量的海参体壁，积少成多后也成为制备海参肽的重要蛋白源。本发明以海参口器作为加工原材料，重复利用各种先进的加工方法，同时得到海参小肽、海参糖肽螯合钙、海参肽螯合钙、海参糖肽、海参中肽共5种高品质产品，对于海参单品的综合利用及高值化具有重要作用。由于海参体壁含有大量类I型海洋胶原蛋白，结构与陆生动物胶原存在差异，故需要采用特定的酶解工艺制备胶原多肽。另外，螯合钙的制备得率与分子量大小、纯度、浓度等都有直接关系，故需要对其进行参数设定。
【发明内容】
[0011]本发明的目的是综合现有技术的以上各种因素，公开一种海参糖肽螯合钙的加工方法，包含如下步骤:
A.原料处理:海参口器经清洗后，蒸煮，浸泡，然后进行打浆，均质；
B.生物酶解:选择多种蛋白酶进行复合分段酶解；
C.离心分离:酶解液经连续离心分离后，得到海参糖肽溶液和海参钙沉淀；
D.过滤浓缩分级:酶解液经超滤膜截留分级浓缩后，小肽滤过液采用纳滤脱盐；
E.有机酸解制备海参钙；
G.螯合反应:利用微波辅助促进海参钙与海参多糖多肽的螯合；
H.反应完成后，经离心分离后对沉淀和上清液分别干燥。经过以上工艺，可以同时得到海参小肽、海参糖肽螯合钙、海参肽螯合钙、海参糖肽、海参中肽共5种具有不同特定生物功能的产品，使得材料得到充分利用。
[0012]进一步地，步骤A的具体条件是:原料蒸煮10-30min，需置于4°C纯净水中浸泡24-36h，以物料与水比例为1:2-4的比例加入纯净水进行打浆，均质。
[0013]进一步地，步骤B的具体条件是:生物酶解时先从包括木瓜蛋白酶、复合蛋白酶在内的中性蛋白酶中选择1-2种，以0.5-2%的比例，先后或同时加入，在50-70°C下酶解2_3小时，然后再以0.5-1%的风味蛋白酶或碱性蛋白酶，在40-60°C继续酶解0.5-lh。
[0014]进一步地，步骤D的具体条件是:采用不同截留分子量超滤膜包对酶解液进行分级浓缩，经10-30KDa膜包截留浓缩后得到海参多糖多肽混合液，使多糖浓度达到2-20mg/mL，纯度大于60% ;经650-1000Da膜包截留浓缩后得到浓度为30-100mg/mL的海参中肽浓缩液，备用；经超滤后的小肽滤过液采用纳滤脱盐后，浓缩，冻干，得到小肽冻干粉产品。
[0015]进一步地，步骤E的具体条件是:利用包括柠檬酸、苹果酸、乙酸、酒石酸在内的可食用型有机酸与海参钙沉淀按照10-20:1的比例进行微波辅助酸解。微波功率100-200W，酸解温度50-70°C，时间l_4h ;酸解结束后，经减压浓缩使Ca2+浓度为5-20mg/mL。
[0016]进一步地，步骤G的具体条件是:螯合反应需将浓缩液与海参钙酸解液按照1:1(V/V)的比例混合，利用微波辅助螯合，其中，海参中肽浓缩液中加入NaHC03S NaCO 3调节pH至7-8后再进行反应；微波功率50-150W，反应温度40_60°C，反应时间10_20min。
[0017]进一步地，步骤Η的螯合反应完成后，反应液需经减压浓缩至原体积的1/3-1/5，再加入乙醇至溶液中乙醇度达到50-70%，4°C静置过夜；再经离心分离后，得到海参糖肽螯合钙沉淀、海参肽螯合钙沉淀、海参糖肽溶液及海参肽溶液。螯合钙沉淀经冷冻干燥后得到成品，同时，上清液去除乙醇后采用冷冻干燥或喷雾干燥得到海参糖肽和海参肽成品。
[0018]经以上工艺加工后，可以同时得到海参小肽、海参糖肽螯合钙、海参肽螯合钙、海参糖肽、海参中肽共5种具有不同特定生物功能的产品，使得材料得到充分利用，加工过程绿色安全。其中，海参糖肽螯合钙螯合率大于60%，比较适合中老年人补钙增强免疫力的需求；海参肽螯合钙的螯合率大于40%，同时其中的中分子量海参易于吸收，适合轻度补钙的同时调节自身免疫力的需求。小分子海参肽具有较高的抗氧化功能，大分子海参糖肽具有抗肿瘤增强免疫力等功效，中分子海参肽易于吸收具有免疫调节功效，经过螯合反应添加钙后，同时具有了补充钙元素的功效。
【具体实施方式】
[0019]现举例对本发明做一个具体的说明。
[0020]实施例1:
海参口器经清洗后，蒸煮15min，置于4°C纯净水中浸泡24h，以物料与水比例为1: 4的比例加入纯净水进行打浆，均质。采用木