专利名称：增加绝经后妇女和低等动物脂溶性维生素的肠道吸收的方法
技术领域：
本发明涉及一种通过口服L-肉毒碱和脂溶性维生素，在绝经后妇女或低等动物中增加脂溶性维生素肠道吸收、细胞内浓度、胆汁分泌、肝脏储存、和/或肝脏内浓度的方法。
背景技术：
L-肉毒碱在组织的能量提供中起着重要的作用，它调控长链脂肪酸进入线粒体基质及其后续的氧化。与其在代谢中的作用一致，L-肉毒碱已被认为可以有效地降低血清中胆固醇、甘油三酯和游离脂肪酸的浓度，并增加抗动脉粥样硬化的高密度脂蛋白(HDL)胆固醇的浓度。见Pola，P.等，“肉毒碱用于治疗异常脂蛋白血症患者”，Curr Ther Res 27208-16(1980)；Lacour，B.等，“肉毒碱改善血液透析患者的脂类异常”，Lancet 12763-4(1980)；Avogaro，P.，“L-肉毒碱对人类FFA和β-羟基-丁酸盐的急性效应”，Pharmacol ResCommun 13433-50(1981)；和Vacha，G.M.等，“L-肉毒碱在治疗血液透析患者高甘油三酯血症中的有效性低浓度的高密度脂蛋白甘油三酯的决定作用”，Am J Clin Nutr 38532-40(1983)。已有证据显示，L-肉毒碱及其酯通过参与对氧化损伤的膜磷脂的再酰化作用(修复)，增加红细胞膜的稳定性和完整性。见Arduini，A.等，“丙酰基-L-肉毒碱治疗对糖尿病大鼠红细胞膜磷脂脂肪酸翻转的作用”，Mol Cell Biochem15231-7(1995)；Arduini，A.等，“肉毒碱棕榈酰基转移酶和酰基辅酶A结合蛋白另两者参与人类红细胞膜上磷脂脂肪酸的翻转？”，Biochem J 325811-4(1997)；和Arduini，A.等，“在4℃储存的加成溶液悬浮的红细胞中添加L-肉毒碱，可以减少体外溶血并增加体内活性”，Trandfusion 37166-74(1997)。有趣的是，L-肉毒碱及其酯的这种作用是在线粒体缺失的红细胞中表现的。给老年大鼠补充L-肉毒碱已被认为可以逆转年龄相关的线粒体功能衰退，这种作用可与L-肉毒碱的膜稳定效应相联系。见Hagen，T.M.等，“喂食老年大鼠酰基-L-肉毒碱部分恢复线粒体功能和流动活性”，Proc Natl Acad Sci USA 959562-6(1998)。这一发现对伴随年龄显著增长的线粒体DNA氧化损伤有着特别的重要性，其导致细胞代谢和功能的损害。见Hagen，T.M.等，“老年大鼠肝细胞线粒体衰退胞膜潜在性衰退，异质性及氧化性增强”，Proc NatlAcad Sci USA 943064-9(1997)。
在发达国家，绝经后妇女占人口总数的15％以上。预计到2030年，绝经后妇女比例将增长至人口总数的23％。见Hill，K.，“更年期人口统计学”，Maturitas 23113-127(1996)。而且，许多流行病学研究也发现更年期雌激素缺乏影响晚年的原因特异性的发病率和死亡率。从营养学的观点，更年期是机体对营养的吸收，消化和代谢能力衰退的时期。因此，在更年期及更年期后，机体就会出现明显的特异性营养成份缺乏的症状。
已被证实，绝经后妇女基本上更易患冠心病、年龄相关的黄斑变性、骨质疏松症、癌症和阿尔茨海默病。见Hill，K.，“更年期人口统计学”，Maturitas 23113-127(1996)。虽然这一现象部分与衰老及机体功能和免疫系统的衰退有关，流行病学调查发现患某些冠脉疾病的危险性(或发病率)与绝经后妇女特异的营养不足或缺乏间存在显著的相关性。现有事实强烈地提示，包括脂溶性维生素，例如维生素A、D和E的机体营养状态受损是影响或导致这些疾病发生或发展的一个重要因子。例如，绝经后和卵巢切除术后妇女比育龄期妇女患冠心病的危险性明显升高。补充的维生素E已被证明通过延缓血清脂蛋白的氧化及抑制血管平滑肌细胞的增生，而显著地降低冠心病的危险性。见Chan，A.C.，“维生素E和动脉粥样硬化”，J Nutr 1281593-6(1998)；Motoyama，T.等，“服用维生素E改善心绞痛患者受损的血管内皮依赖的血管舒张”，J Am Coll Cardiol 321672-9(1998)；和Meydani，M.等，“长期饮食补充抗氧化剂的效应”，Ann NY Acad Sci854352-60(1998)。并且，绝经后妇女中普遍存在的维生素D缺乏已被证实与增高的骨质丢失和骨质疏松症发病风险有关。见WHO科学组，“二十世纪九十年代有关更年期的研究”，WHO技术报告，866系列，1996，WHO，瑞士日内瓦。并且，研究已证实绝经后妇女的年龄相关的黄斑变性发病率与维生素A前体(类胡罗卜素)和维生素E的摄入负相关。见Seddon，J.M.等“膳食摄入类胡罗卜素、维生素A、C和E，与老年年龄相关的黄斑变性。眼疾病病例一对照研究组”，JAMA2721413-20(1994)；West，S.等，“抗氧化剂或补充物是否在年龄相关的黄斑变性中起保护作用？”，Arch Opthalmol 112222-7(1994)；Vander Hagen，A.M.等，“游离自由基和抗氧化剂补充在年龄相关的黄斑变性中作用的综述”，J Am Optom Assoc 64871-8(1993)；和Golberg，J.等，“年龄相关的黄斑变性的相关因子。对首次国家健康及营养考核调查数据的分析”，Am J Epidemiol 128700-10(1998)。此外，现有事实提示氧化应激是阿尔茨海默病的重要病因，补充维生素E可以降低该病的危险性。见Sinclair，A.J.等，“阿尔茨海默病和血管性痴呆中变化的血浆抗氧化剂状态”，Int JGeriatr Psychiatry 13840-5(1998)；Morris，M.C.等，“补充维生素E及维生素C和Alzheimer症发病危险性”，Alzheimer Dis AssocDisord 12121-6(1998)；Subramaniam，R.等，“游离自由基抗氧化剂维生素E通过对淀粉样的β-肽(2 5-35)毒性的作用，而不是对hydroxynonenal毒性的作用，保护脑皮层突触膜”，Neurochem Res 231403-10(1998)。
狗的疾病相关的死因中，癌症已被证实占47％，其次是心脏疾病(12％)、肾脏疾病(7％)。猫的排名前列的疾病包括癌症(32％)、肾脏/尿道疾病(23％)、和心脏疾病(9％)。见1997年Morris动物基金动物健康调查。动物的这些疾病被认为与某些维生素的缺乏有关，特别是抗氧化类维生素、维生素E和维生素C，及维生素A。
因此，考虑到普遍地随着衰老而产生的营养吸收效率的降低和肠道吸收功能的退化，必须特别地增加绝经后妇女的脂溶性维生素的营养状态。并且考虑到普遍地随着衰老而产生的肠道吸收功能的退化，必须特别地增加低等动物的脂溶性维生素的营养状态。
发明概述申请人发现L-肉毒碱增加绝经后妇女脂溶性维生素，例如维生素A、D和E的肠道吸收。因此，L-肉毒碱增加绝经后妇女的抗氧化保护机制，并降低一些退化性疾病的危险性，例如冠心病、年龄相关的黄斑变性、骨质疏松症、癌症和Alzheimer’s症。
本发明提供了一种增加绝经后妇女脂溶性维生素的肠道吸收、细胞内浓度、胆汁分泌、肝脏储存和/或肝脏内浓度的方法。该方法包括使有需要的绝经后妇女口服一种脂溶性维生素和增加这种脂溶性维生素吸收的有效量的L-肉毒碱。
本发明也提供了一种在绝经后妇女中减少选自以下疾病的一种或更多疾病的危险性或防止其发生的方法，所述疾病为冠心病、年龄相关的黄斑变性、骨质疏松症、癌症和Alzheimer’s症。该方法包括使绝经后妇女口服一种脂溶性维生素和增加这种脂溶性维生素吸收的有效量的L-肉毒碱。
本发明提供了一种增加动物脂溶性维生素的肠道吸收的方法。该方法包括使动物口服一种脂溶性维生素和增加这种脂溶性维生素吸收的有效量的L-肉毒碱。
本发明也提供了一种在动物中减少选自以下疾病的一种或更多疾病的危险性或防止其发生的方法，所述疾病为冠心病、肾脏疾病、泌尿系统疾病和癌症。该方法包括使动物口服一种脂溶性维生素和增加这种脂溶性维生素吸收的有效量的L-肉毒碱。
附图简述
图1说明了8小时内每小时的α-生育酚(αTP)胆汁分泌。对照组表示为-CN(即无肉毒碱)。含肉毒碱组表示为+CN。所有的值都表达为平均值±标准差(SD)。每个时间点检测5只大鼠(即n＝5)。
图2说明了8小时内每小时的累积α-生育酚(αTP)胆汁分泌。对照组表示为-CN(即无肉毒碱)。含肉毒碱组表示为+CN。所有的值都表达为平均值±SD。每个时间点检测5只大鼠(即n＝5)。星号(*)表示显著性差异，p＜0.05。
图3说明了8小时内每小时的α-生育酚(αTP)淋巴吸收。对照组表示为SN。含肉毒碱组表示为CK。所有的值都表达为平均值±SD。每个时间点检测5只大鼠(即n＝5)。星号(*)表示显著性差异，p＜0.05。
图4说明了8小时内每小时的累积α-生育酚(αTP)淋巴吸收。对照组表示为SN。含肉毒碱组表示为CK。所有的值都表达为平均值±SD。每个时间点检测5只大鼠(即n＝5)。星号(*)表示显著性差异，p＜0.05。
发明详述本发明提供了一种增加绝经后妇女脂溶性维生素的肠道吸收，细胞内浓度、胆汁分泌、肝脏储存和肝脏内浓度的方法。该方法包括使有需要的绝经后妇女口服一种脂溶性维生素和增加这种脂溶性维生素吸收的有效量的L-肉毒碱。
与此类似，使一种低等动物，例如猫或狗口服一种脂溶性维生素和增加这种脂溶性维生素吸收的有效量的L-肉毒碱，也可以增加该动物脂溶性维生素的肠道吸收、细胞内浓度、胆汁分泌、肝脏储存和肝脏内浓度。
适当的L-肉毒碱包括，但并不仅限于L-肉毒碱；酰基-L-肉毒碱，例如乙酰基L-肉毒碱、丙酰基-L-肉毒碱、丁酰基-L-肉毒碱、戊酰基L-肉毒碱、和异戊酰基L-肉毒碱；其可药用的盐；和以上任意物质的任意组合。适当的可药用的L-肉毒碱的盐包括，但并不仅限于醋酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、溴化物、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、氯化物、二葡糖酸盐、十二磺酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖磷酸盐、甘油磷酸酯、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、碘化物、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、十一烷酸盐和L-肉毒碱的酸加成盐。优选L-肉毒碱具有低的吸水性。优选的L-肉毒碱盐包括，但并不仅限于L-肉毒碱L-酒石酸盐、L-肉毒碱酸延胡索酸盐、L-肉毒碱己二酸盐和L-肉毒碱柠檬酸镁盐。
对于绝经后妇女，有效增加脂溶性维生素吸收的量是使脂溶性维生素肠道吸收增多的L-肉毒碱的量。典型地，在绝经后妇女中，每天应服用约10mg至2g的L-肉毒碱或其可药用的盐，优选每日服用约250至750mg的L-肉毒碱或其可药用的盐。更优选的服用量是约400至600mg的L-肉毒碱或其可药用的盐。通常，一个绝经后妇女每进食1,000kcal的饮食可服用50至800mg，优选100至400mg的L-肉毒碱或其可药用的盐。此处使用的术语“饮食”对于绝经后妇女被定义为一个妇女每天消耗的食物量(卡路里)。
对于一种低等动物，例如哺乳动物，有效增加脂溶性维生素吸收的量是使脂溶性维生素肠道吸收增多的L-肉毒碱的量。低等动物的L-肉毒碱的服用量因动物的年龄或疾病状况不同而改变。一般低等动物的L-肉毒碱或其药用的盐服用量为约1至100mg/kg体重，优选量为约5至75mg/kg体重，更优选的量为约5至25mg/kg体重。一般低等动物的L-肉毒碱或其可药用盐的服用量也可为约25至5,000mg/kg饮食，优选量为约50至1,000mg/kg食物，更优选的量为约75至500mg/kg食物。此处使用的术语“饮食”对于非人(低等)动物被定义为这种动物每天消耗的食物量(重量)。
适当的脂溶性维生素包括，但并不仅限于维生素A、维生素D、维生素E(特指α-生育酚)；它们的前体，例如维生素E乙酸酯；含有1至约20个碳原子的酯，例如维生素A棕榈酸酯和维生素E乙酸酯；及其任意组合。依据本发明的一个实施方案，脂溶性维生素指维生素E。此处使用的术语“维生素E”包括α-，β-，δ-，和γ-生育酚及它们相应的酰基酯。一个绝经后妇女每天的特定脂溶性维生素的服用量是依据国家科学院颁布的U.S.RDA。典型地，绝经后妇女的每日维生素E服用量约为8至800mg。其优选的服用量约为8至400mg。
一种低等动物每天的特定脂溶性维生素的服用量是各种动物组织的推荐量。脂溶性维生素的服用量因动物的年龄，疾病状况及维生素补给量不同而变化。一般低等动物的维生素E服用量为约30至5,000国际单位(IU)/kg，优选量为约100至1,000IU/kg饮食。一般低等动物的维生素A服用量为约5,000至1,000,000IU/kg饮食，优选量为约10,000至500,000IU/kg饮食。一般低等动物的维生素D服用量约250至10,000IU/kg饮食，优选量为约500至3,000IU/kg饮食。
所指低等动物可是家养的宠物，例如猫或狗。优选的是切除卵巢或中性的动物，特别指切除卵巢或中性的猫或狗。
优选L-肉毒碱和脂溶性维生素同时服用，更优选地对于绝经后妇女或低等动物使用同样的剂量单位形式。L-肉毒碱和脂溶性维生素优选饭时或饭后服用。
同时服用雌激素，L-肉毒碱和脂溶性维生素，可以进一步增强绝经后妇女的抗氧化系统。雌激素的用量可以根据雌激素替代治疗中公知的方法确定。一般绝经后妇女应随L-肉毒碱和脂溶性维生素服用约300至600μg的雌激素。
由于L-肉毒碱和脂溶性维生素一起服用可以增强抗氧化防御机制，L-肉毒碱和脂溶性维生素也可被用于减少绝经后妇女患某些退化性疾病的危险性或防止其发生，例如冠心病、年龄相关的黄斑变性、骨质疏松症、癌症和Alzheimer’s症。本发明方法应是一种长期治疗，即持续数月、数年、或余生，以降低发生以上疾病的危险性。
服用L-肉毒碱也可减少低等动物患病危险性或防止某些退化性疾病的发生，例如冠心病、肾脏疾病、泌尿系统疾病和癌症。本发明方法应是一种长期治疗，即持续数月、数年、或余生，以降低以上疾病的危险性。
L-肉毒碱，脂溶性维生素和任选雌激素可以制成适于绝经后妇女的口服剂量单位形式，包括但并不仅限于胶囊、药片和颗粒，例如粉末和药囊。对于绝经后妇女，口服剂量单位形式应为液体或固体，优选为固体形式。剂量单位形式也可进一步包括添加剂，包括但并不仅限于pH调节剂、防腐剂、食用香料、味道-掩饰剂、香味剂、保湿剂、张力调节剂(tonicifier)、着色剂、表面活性剂、增塑剂、滑润剂、配量载体、增溶剂、赋形剂、稀释剂、崩解剂、或以上各种成份的任意组合。
L-肉毒碱和脂溶性维生素也可制成适于低等动物的口服剂量单位形式，包括但并不仅限于食物，例如动物食品、胶囊、药片和颗粒，例如粉末和药囊。动物可以通过食物、水、动物食品、药片或胶囊服用L-肉毒碱和脂溶性维生素。对于低等动物，口服剂量单位形式应为液体或固体形式。口服剂量单位也可进一步包括以上各种成份的任意组合。
优选实施方案的说明以下实施例非限制性地描述了本发明。所有部分和比例除非特别说明均按重量给出。
实施例1饮食肉毒碱增加卵巢切除大鼠的α-生育酚肝脏水平和胆道分泌实施本研究，以测定饮食肉毒碱对卵巢切除大鼠的α-生育酚肝脏浓度和胆道分泌的影响材料和方法
32只10周龄的体重为214±6g的雌性Sprague-Dawley大鼠(HarlanSprague Dawley，印第安纳波利斯，IN)被分别置于带有不锈钢网底的塑料笼中，笼子置于23℃恒温的无窗室中，室内有当照-黑暗循环控制，330pm至330am为光照期，330am至330pm为黑暗期。大鼠经1周适应新环境，可以自由进食去离子水并随意喂食Dyets公司(伯利恒，PA，USA)配制的富含锌的AIN-93G饲料(Reeves等，J Nutr1993；1231939-1951)，该饲料含7％大豆油为脂肪源。添加碳酸锌提供所需要的锌。大鼠第一周末平均体重为230±12g，在禁食16小时后，氟烷麻醉下行卵巢切除术。初次血样(0周)采集于5只随机挑选的大鼠。
术后复原一周后，大鼠依据体重分为两个实验组一组大鼠喂食富含锌的AIN-93G饲料，并添加去除α-生育酚的大豆油，产自新泽西里奇菲尔德Degussa公司的150ppm的SipernatTM50，即水合二氧化硅并补充150mg/kg的L-肉毒碱。对照组大鼠喂食与第一组同样的饲料，但以150ppm的α-D-葡萄糖代替150mg/kg的L-肉毒碱。两组大鼠的正常食物摄入量为约15g/天/只大鼠。每组随机挑选5只大鼠于第1、3、5、8周采集血样。
在第8周末，对两组中平均体重约340±15g的大鼠行胆道置管术。禁食16小时后，依前人的描述(Noh等，J Nutr Biochem 1999；10110-117)行胆总管置管术。简要地说，在氟烷麻醉下(2.01氧气/分钟含2.0％氟烷)行腹部正中切口后，PE-10管(Clay Adams，斯帕克斯，MD)被置入胆总管。一只聚硅酮导管(医用硅化管，Dow Corning，Midland，MI)插入胃底部。注入导管沿胆管外置通过右肋。置管后的大鼠被分别放在独立控制的笼中，使它们在控温30℃的温暖环境中复原至少20小时。术后立即通过十二指肠导管持续性用注射泵(935型哈佛器材，南内蒂克，MA)以3.0ml/h的量注入葡萄糖-磷酸缓冲液(PBS)(mmol/l单位277葡萄糖，6.75磷酸氢二钠，16.5磷酸二氢钠，115氯化钠，和5氯化钾；pH6.7)。
手术复原以后，大鼠被灌输脂肪乳液，每24mlPBS包括565μmol三油精(95％，Sigma化学公司，圣路易斯MO)，和396μmol牛磺胆酸钠。8小时内每小时收集胆汁至预称重的圆锥形的离心管，离心管内有30μg的n-丙基五倍子酸盐并置于装满冰的大口杯中。大鼠在胆汁收集后，以断脖法处死并解剖肝脏。样品在分析前被储存于-70℃。
脂肪用弗氏法(Folch等，J Biol Chem1957；226497-509)提取。依据Zaspel等(Anal.Biochem.1983；130146-150)描述的方法测定α-生育酚的含量。简要的说，把150μl胆汁和一定数量的α-生育酚醋酸盐(作为内部参照)移入一个玻璃管。在丙酮抽提，硫酸钠干燥及1,000xg离心后，上清液再经PTFE注射过滤器(0.45μm，Alltech联合公司，迪尔菲尔德，IL)过滤，氮气干燥后，重溶于一定体积的氯仿-甲醇(1∶3，v/v)溶液中。抽提物经配有C-18反相层析柱(Alltima C18，5μm，4.6×150mm，Alltech联合公司，迪尔菲尔德，IL)并含System Gold软件(Beckman器材公司，富勒敦，CA)的Beckman HPLC系统分离。脱气甲醇以2ml/min用于流动相。典型的保持时间是α-生育酚4.1分钟，α-生育酚醋酸盐5.3分钟。检测波长控制在292nm(166模式紫外-检测仪，Beckman器材)。α-生育酚标准曲线范围在47.6至190.5ng。
使用Excel 97(微软公司，1997)和PC SAS(SAS研究所，1996)进行统计分析。斯氏t-检验和单向ANOVA用于对比两组的平均值。当P＜0.05时，认为有显著性差异。
结果胆汁流量无差异(肉毒碱组为7.9±1.4ml/8小时，而对照组为8.9±1.8ml/8小时)。而肉毒碱组大鼠8小时内胆汁分泌的α-生育酚(53.1±9.3nmol)比对照组(41.7±7.3nmol)明显升高(P＜0.05)。图1和图2分别图解了α-生育酚的分泌速率和累积分泌量。肉毒碱组大鼠的肝脏α-生育酚浓度(129.6±19.5nmol/g)比对照组(100.7±20.2nmol/g)明显升高。同样的，饮食中添加肉毒碱的大鼠，每100mg总脂类中α-生育酚的浓度明显升高。肉毒碱组大鼠的肝脏α-生育酚/磷脂比例(4.8±0.6nmol/μmol)比对照组(3.3±0.4nmol/μmol)明显升高(P＝0.001)。这些发现证实饮食肉毒碱可以改善卵巢切除大鼠肝脏α-生育酚浓度。
实施例2饮食肉毒碱增加卵巢切除大鼠淋巴吸收α-生育酚的能力实施本研究，以测定服用肉毒碱对卵巢切除大鼠肠道吸收α-生育酚的影响材料和方法32只10周龄的体重为208±8g的雌性Sprague-Dawley大鼠(HarlanSprague Dawley，印第安纳波利斯，IN)按实施例1中描述的方法饲养和喂食。在第二周末，大鼠平均体重为240±9g，在禁食16小时后，氟烷麻醉下行卵巢切除术。初次血样采集(0周)于6只随机挑选的大鼠。
术后大鼠立即按实施例1中描述的分为两个实验组，即一组大鼠饲料中添加肉毒碱，另一组作为对照组。两组大鼠的正常食物摄入量为约15g/天/只大鼠。
在第五周末，两组中平均体重约340±15g的大鼠行淋巴管置管术。禁食16小时后，依前人的描述(Noh等，同上)行肠系膜淋巴管置管术。简要的说，在氟烷麻醉下(2.0升氧气/分，含2.0％氟烷)行腹部正中切口后，聚乙烯管(SV31管，Dural Plastics，奥本，澳大利亚)被置入肠系膜淋巴管，并以氰基丙烯酸酯胶(Krazy Glue，哥伦布OH)固定。一只聚硅酮导管(医用硅化管，Dow Corning，Midland，MI)插入胃底部。注入导管沿淋巴管外置通过右肋。置管后的大鼠被分别放在独立控制的笼中，使它们在控温30℃的温暖环境中复原至少20小时。术后立即通过十二指肠导管持续性用注射泵(935型哈佛器材，南内蒂克MA)以3.0ml/h的量注入葡萄糖-磷酸缓冲液(PBS)(mmol/l单位277葡萄糖，6.75磷酸氢二钠，16.5磷酸二氢钠，115氯化钠，和5氯化钾；pH6.7)。
手术复原以后，大鼠被灌输24mlPBS中包含1μCi[羧基-14C]-三油精(比活性112.0mCi/mmol，DuPont NEN，MA。波士顿)，565μmol三油精(95％，Sigma化学公司，圣路易斯，MO)，3.56μmolα-生育酚(all-racα-生育酚，97％，Aldrich化学公司，密尔沃基，WI)和396μmol牛磺胆酸钠的脂肪乳液。8小时内每小时收集淋巴液至预称重的圆锥形的离心管，离心管内有30μg的n-丙基没食子酸盐及4mgNa2EDTA并置于装满冰的烧杯中。大鼠在淋巴液收集后，以断颈椎法处死并收集肝脏。样品在分析前被储存于-70℃。
用Reheja等(J Lipid Res 1973；14695-697)介绍的比色法，从脂肪提取物中(Folch等，同上)检测组织的总磷脂。依据实施例1中Zaspel等(同上)描述的方法测定α-生育酚。依据实施例1中方法进行统计学分析。
结果淋巴流量无差异(肉毒碱组为22.6±4.2ml/8小时，而对照组为24.5±2.5ml/8小时)。而肉毒碱组大鼠8小时内α-生育酚的淋巴吸收(899±200nmol/8h)比对照组(587±92nmol/8h)明显升高(P＜0.05)。图3和图4分别图解了α-生育酚的每小时吸收速率和累积吸收。肉毒碱组大鼠的14C-三油精吸收(53.5±4.0％剂量)比对照组(47.6±5.0％剂量)略升高(P＜0.05)。肉毒碱组大鼠的淋巴α-生育酚/磷脂比例(4 6.9±8.8nmol/μmol)和淋巴α-生育酚/胆固醇比例(82.7±17.1nmol/μmol)与对照组(36.3±6.2nmol/μmol和60.8±6.0nmol/μmol)均有显著差异。这些发现首次证实服用肉毒碱可以增加α-生育酚的淋巴吸收。
以上涉及的所有专利、申请、论文、出版物，及检测方法在此引入作为参考。
根据以上的详细说明，本专利发明的许多变化形式将被本领域的技术人员理解。这些明显的变化都包括在所附权利要求的完整范围内。
权利要求
1.一种增加绝经后妇女的脂溶性维生素肠道吸收的方法，该方法包括使有需要的绝经后妇女口服一种脂溶性维生素和增加这种脂溶性维生素吸收的有效量的L-肉毒碱或其可药用的盐。
2.权利要求1中的方法，其中脂溶性维生素选自维生素A、维生素D、维生素E及其任意组合。
3.权利要求2中的方法，其中脂溶性维生素是维生素E。
4.一种增加绝经后妇女的脂溶性维生素肠道吸收的方法，该方法包括使有需要的绝经后妇女每天口服约10mg至2g的L-肉毒碱或其可药用的盐和约8至800mg的维生素E。
5.权利要求4中的方法，其中L-肉毒碱是L-肉毒碱L-酒石酸盐、L-肉毒碱延胡索酸盐、L-肉毒碱己二酸盐、或L-肉毒碱柠檬酸镁盐。
6.权利要求4中的方法，其中每天服用约250至750mg的L-肉毒碱
7.权利要求4中的方法，其中每天服用约8至400mg的维生素E。
8.权利要求4中的方法，进一步包括服用L-肉毒碱或其可药用的盐和维生素E时，同时服用雌激素。
9.一种增加绝经后妇女的脂溶性维生素胆汁分泌的方法，该方法包括使有需要的绝经后妇女口服一种脂溶性维生素和增加这种脂溶性维生素吸收的有效量的L-肉毒碱或其可药用的盐。
10.一种增加绝经后妇女肝脏脂溶性维生素浓度的方法，该方法包括使有需要的绝经后妇女口服一种脂溶性维生素和增加这种脂溶性维生素吸收的有效量的L-肉毒碱或其可药用的盐。
11.一种减少绝经后妇女患以下一种或多种疾病的危险性的方法，这些疾病选自冠心病、年龄相关的黄斑变性、骨质疏松症、癌症和Alzheimer’s症，该方法包括使绝经后妇女口服一种脂溶性维生素和增加这种脂溶性维生素吸收的有效量的L-肉毒碱或其可药用的盐类。
12.一种增加动物的脂溶性维生素肠道吸收的方法，该方法包括使动物口服一种脂溶性维生素和增加这种脂溶性维生素吸收的有效量的L-肉毒碱或其可药用的盐类。
13.权利要求12中的方法，其中给药量为每天每公斤体重约1至100mg的L-肉毒碱或其可药用的盐。
14.权利要求12中的方法，其中给药量为每天每公斤饮食约25至5,000mg的L-肉毒碱或其可药用的盐。
15.权利要求12中的方法，其中给药量为每天每公斤饮食约30至5,000IU维生素E。
16.权利要求12中的方法，其中给药量为每天每公斤饮食约5,000至1,000,000IU维生素A。
17.权利要求12中的方法，其中给药量为每天每公斤体重约250至10,000IU维生素D。
18.权利要求12中的方法，其中脂溶性维生素和L-肉毒碱或其可药用的盐类以统一剂量单位形式服用。
19.权利要求18中的方法，其中剂量单位形式是胶囊、药片、粉末或药囊。
20.权利要求12中的方法，其中动物为家养的宠物。
21.权利要求20中的方法，其中动物为狗或猫。
22.权利要求20中的方法，其中动物为卵巢切除术后或中性的动物。
23.一种减少动物患以下一种或多种疾病的危险性的方法，这些疾病选自心脏病、肾脏疾病、泌尿系统疾病、和癌症，该方法包括使有需要的动物口服一种脂溶性维生素和增加这种脂溶性维生素吸收的有效量的L-肉毒碱或其可药用的盐。
全文摘要
申请人发现L－肉毒碱增加绝经后妇女的肠道脂溶性维生素，例如维生素A、D和E的吸收。因此，L－肉毒碱增强绝经后妇女的抗氧化防御机制，并降低一些退化性疾病的危险性，例如冠心病、年龄相关的黄斑变性、骨质疏松症、癌症和Alzheimer’s症。本发明提供了一种在绝经后妇女中增加脂溶性维生素的肠道吸收、细胞内浓度、胆汁分泌、肝脏储存、和/或肝脏内浓度的方法。该方法包括使有需要的绝经后妇女口服一种脂溶性维生素和增加这种脂溶性维生素吸收的有效量的L－肉毒碱。本发明同时提供一种增加动物脂溶性维生素肠道吸收的方法。该方法包括使动物口服一种脂溶性维生素和增加这种脂溶性维生素吸收的有效量的L－肉毒碱。
文档编号A61P25/28GK1429110SQ01809296
公开日2003年7月9日 申请日期2001年3月6日 优先权日2000年3月10日
发明者K·L·格罗斯, K·欧文, S·I·科 申请人:希尔氏宠物营养品公司, 朗扎有限公司, 堪萨斯州立大学研究基金会