专利名称：诸如雷帕霉素和吉西他滨或氟尿嘧淀的抗肿瘤联合的制作方法
技术领域：
本发明涉及抗肿瘤联合，特别是由一种mTOR抑制剂(例如，3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸雷帕霉素42-酯(CCI-779))和一种抗代谢抗肿瘤剂的联合在肿瘤治疗中的用途。
背景技术：
雷帕霉素是一种由吸湿链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)产生的大环三烯抗生素，它在体内或体外都具有抗真菌活性，特别是抗白色假丝酵母菌[C.Vezinaet al.，J.Antibiot.28，721(1975)；S.N.Sehgal et al.，J.Antibiot.28，727(1975)；H.A.Baker et al.，J.Antibiot.31，539(1978)；美国专利3929992；和美国专利3993749]。另外，单独的雷帕霉素(美国专利4885171)或雷帕霉素与溶血性链球菌制剂联合(美国专利4401653)已经显示出抗肿瘤活性。
在FASER 3，3411(1989)中披露了雷帕霉素的免疫抑制效应。其它大环分子如环孢素A和FK-506也显示出了作为免疫抑制剂是有效的，因此，在防止移植排斥方面是有用的[FASEB 3，3411(1989)；FASEB3，5256(1989)；R.Y.Calneet al.，Lancet 1183(1978)；和美国专利5,100,899]。R.Martel等人[Can.J.Physiol.Pharmacol.55，48(1977)]披露了雷帕霉素在为多发性硬化设计的实验性的过敏性脑脊髓炎模型和为风湿性关节炎设计的辅助性的关节炎模型中是有效的，可以有效地抑制IgE样抗体的形成。
雷帕霉素在防止或治疗系统性红斑狼疮[美国专利5078999]，肺炎[美国专利5080899]，胰岛素依赖型糖尿病[美国专利5321009]，皮肤病如牛皮癣[美国专利5286730]，肠道疾病[美国专利5286731]，血管损伤后的平滑肌细胞增生以及内膜增厚[美国专利5288711和5516781]，成人T细胞白血病/淋巴瘤[欧洲专利申请525960A1]，眼炎[美国专利5387589]，恶性癌[美国专利5206018]，心脏炎性疾病[美国专利5496832]，和贫血[美国专利5561138]等方面也是很有效的。
3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸雷帕霉素42-酯(CCI-779)是雷帕霉素的酯，它已经在体外和体内模型中对肿瘤生长表现出了显著的抑制效果。美国专利5362718披露了包括CCI-779的雷帕霉素羟基酯的制备和应用。
CCI-779显示出抑制细胞生长而非细胞毒素的特性，并且可以延迟肿瘤进展或肿瘤复发的时间。人们认为CCI-779具有与西罗莫司相似的作用机理。CCI-779与细胞质蛋白FKBP结合并形成一种复合物，该复合物可以抑制一种酶，即mTOR(哺乳动物的雷帕霉素目标物，也叫FKBP12-雷帕霉素相关蛋白质[FRAP])。对mTOR的激酶活性的抑制可以抑制许多信号传导通路，包括细胞因子刺激的细胞增殖，调节细胞周期G1阶段的几种关键蛋白质的mRNA的翻译，以及IL-2诱导的转录，从而导致抑制从G1到S的细胞周期的进行。CCI-779可以导致G1到S阶段的阻断的作用机理对抗癌药物来说是新的。
在体外，CCI-779表现出可以抑制一些组织学上不同的肿瘤细胞的生长。中枢神经系统(CNS)癌，白血病(T-细胞)，乳癌，前列腺癌，黑色素瘤系都是对CCI-779最敏感的。该化合物使细胞停止在细胞周期的G1阶段。
在裸鼠体内的研究表明，CCI-779具有对抗不同组织学类型的人类肿瘤异种移植物的活性。神经胶质瘤对CCI-779特别敏感，该化合物在裸鼠的同位神经胶质瘤模型中是有活性的。体外的成胶质细胞瘤细胞系的增长因子(源于血小板)诱导的刺激被CCI-779显著地抑制。在裸鼠体内研究的几种人类胰腺肿瘤和两个乳癌系之一的生长的也受到CCI-779的抑制。
发明概述本发明提供含有一种mTOR抑制剂和一种抗代谢抗肿瘤剂的联合作为抗肿瘤联合化疗的用途。特别的，这些联合对治疗肾癌；软组织癌；乳癌；肺神经内分泌肿瘤；子宫颈癌；子宫癌；头颈癌；神经胶质瘤；非小细胞肺癌；前列腺癌；胰腺癌；淋巴瘤；黑色素瘤；小细胞肺癌；卵巢癌；结肠癌；食道癌；胃癌；白血病；结肠直肠癌；或未知的原发癌症是有用的。本发明还提供用作抗肿瘤联合化疗的mTOR抑制剂和抗代谢抗肿瘤剂的联合，其中mTOR抑制剂和/或抗代谢抗肿瘤剂以低于治疗有效剂量使用。
本发明中所用的术语“治疗”表示通过向患有肿瘤疾病的哺乳动物提供有效剂量的一种mTOR抑制剂和一种抗代谢抗肿瘤剂的联合来治疗该哺乳动物，其目的是抑制该肿瘤在所述哺乳动物中的生长，根除肿瘤，或缓解其痛苦。
本发明中如“提供该联合”这样的表达中所用的术语“提供”，表示直接以该联合给药，或者以该联合中一种或两种组分的药物前体，衍生物或类似物给药，它们可在体内形成有效剂量的该联合。
mTOR是哺乳动物的雷帕霉素目标物，也叫FKBP12-雷帕霉素相关蛋白质[FRAP]。对mTOR的激酶活性的抑制可以抑制许多信号传导通路，包括细胞因子刺激的细胞增殖，调节细胞周期G1阶段的几种关键蛋白质的mRNA的翻译，以及导致抑制从G1到S的细胞周期的进行的IL-2诱导的转录。
mTOR调节涉及到特殊细胞周期调节蛋白质的翻译的至少两种蛋白质的活性(Burnett，P.E.，PNAS 951432(1998)和Isotani，S.，J.Biol.Chem.27433493(1999))。这些蛋白质之一p70s6激酶被mTOR在丝氨酸389和苏氨酸412位点上磷酸化。这种磷酸化可以在生长因子处理过的细胞中观察到，是通过用磷酸丝氨酸389残基的特异性抗体与这些细胞的全细胞抽提物的Western印迹法来观察的。
根据本发明，“mTOR抑制剂”表示一种化合物或配体，它们可以通过mTOR抑制p70s6激酶上丝氨酸389的磷酸化而阻断从G1到S的细胞周期的进行，从而抑制细胞的复制。
下面的标准药理学测试步骤可以用来确定一种化合物是否可以作为此处所定义的抑制剂。Western印迹法证明用雷帕霉素之类的mTOR抑制剂处理增长因素刺激过的细胞完全阻断丝氨酸389的磷酸化，这同样构成了对mTOR抑制剂的一种好的检验方法。因此，在有mTOR抑制剂存在时，培养中的生长因子(例如IGF1)刺激过的细胞的全细胞溶解产物不能在丙烯酰胺凝胶上显示出条带，而丙烯酰胺凝胶被p70s6激酶上的丝氨酸389的特异性抗体所标记。
材料NuPAGE LDS 样品缓冲液(Novex Cat#NP0007)NuPAGE LDS 样品还原剂(Novex Cat#NP0004)NuPAGE LDS 4-12％的Bis-Tris溶胶 (Novex Cat#NP0321)NuPAGE MOPS SDS 电泳缓冲液 (Novex Cat#NP0001)硝基纤维素 (Novex Cat#LC2001)NuPAGE LDS 转移缓冲液(Novex Cat#NP0006)Hyperfilm ECL(Amersham Cat#RPN3114H)ECL Western 印迹法检测试剂 (Amersham Cat#RPN2134)
第一抗体磷酸-p70 S6激酶(Thr389)(Cell Signaling Cat#9205)第二抗体山羊抗-兔IgG-HRP偶联物(Santa Cruz Cat#sc-2004)方法A.细胞溶解产物的制备细胞系在补充了10％胎牛血清和盘尼西林/treptomycin的优化的基础培养基中培养。为了磷酸化研究，在6孔板中对细胞进行亚培养。当细胞完全贴壁之后，被置于血清缺乏状态。用mTOR抑制剂处理2至16小时。在药物处理之后，用PBS(不含Mg++和Ca++离子的磷酸缓冲盐溶液)将细胞漂洗一次，然后每孔内用150-200μl的NuPAGE LDS样品缓冲液进行细胞溶解。溶解产物进行短时间的超声波处理，接着在14000rpm离心15分钟。细胞溶解产物在使用前储存于-80℃的条件下。
测试过程也可以按以下方式进行在细胞完全贴壁后，在生长培养基中将细胞孵育过夜。对于同一种mTOR抑制剂来说，两种条件下测得的结果应该是相同的。
B.Western印迹法分析1)每只试管中放入22.5μl的细胞溶解产物，再加入2.5μl的NuPAGE样品还原剂制备全蛋白质样品。将样品在70℃加热10分钟后，用NuPAGE凝胶和NuPAGE SDS缓冲液进行电泳。
2)用NuPAGE转移缓冲液将凝胶转移到硝基纤维素膜上。用封闭缓冲液(含0.1％的吐温以及5％的脱脂乳的Tris缓冲盐溶液)对该膜封闭1小时。用洗涤缓冲液(含0.1％的吐温的Tris缓冲盐溶液)对膜洗涤两遍。
3)印迹/膜用P-p70 S6K(T389)第一抗体(1∶100)在旋转平台中的封闭缓冲液中在4℃下孵育过夜。
4)印迹用洗涤缓冲液洗涤三遍，每次10分钟。再用封闭缓冲液中的第二抗体(1∶2000)在室温下孵育1小时。
5)第二抗体结合后，将印迹用洗涤缓冲液洗涤三遍，每次10分钟，再用Tris-缓冲盐溶液洗涤两遍，每次1分钟，接着进行化学发光(ECL)检测，最后暴露于化学发光的膜。
本发明中所用的术语“雷帕霉素”定义了一类含有基本的雷帕霉素核(见下图)的免疫抑制性化合物。本发明中的雷帕霉素包括可以被化学或生物修饰为雷帕霉素核的衍生物但仍旧保留免疫抑制特性的化合物。因此，术语“雷帕霉素”包括雷帕霉素的酯，醚，肟，腙和羟胺，以及雷帕霉素核上的官能团通过例如还原或氧化法被修饰的雷帕霉素。术语“雷帕霉素”还包括雷帕霉素r药学可接受的盐，它们能够由于含有酸性或碱性部分而形成这样的盐。
雷帕霉素优选的雷帕霉素的酯和醚是雷帕霉素核的42和/或31位的羟基的酯和醚，27位的羟基(化学还原27-酮得到的)的酯和醚，优选的肟、腙和羟胺是雷帕霉素核的42位的酮(氧化42-羟基得到的)以及27-酮的肟、腙和羟胺。
优选的雷帕霉素的42和/或31位的酯和醚在下列专利中披露，这些专利在此引入作为参考烷基酯(美国专利4316885)；氨烷基酯(美国专利4650803)；氟化酯(美国专利5100883)；酰胺酯(美国专利5118677)；氨基甲酸酯(美国专利5118678)；甲硅烷基酯(美国专利5120842)；氨酯(美国专利5130307)；乙缩醛(美国专利551413)；氨二酯(美国专利5162333)；磺酸和硫酸酯(美国专利5177203)；酯(美国专利5221670)；烷氧基酯(美国专利5233036)；O-芳基，-烷基，-烯基和-炔基酯(美国专利5258389)；碳酸酯(美国专利5260300)；芳羰基和烷氧基羰基氨基甲酸酯(美国专利5262423)；氨基甲酸酯(美国专利5302584)；羟基酯(美国专利5362718)；受阻酯(美国专利5385908)；杂环酯(美国专利5385909)；偕二取代酯(美国专利5385910)；氨基链烷酯(美国专利5389639)；磷酰基氨基甲酸酯(美国专利5391730)；氨基甲酸酯(美国专利5411967)；氨基甲酸酯(美国专利5434260)；脒基氨基甲酸酯(美国专利5463048)；氨基甲酸酯(美国专利5480988)；氨基甲酸酯(美国专利5480989)；氨基甲酸酯(美国专利5489680)；受阻N-氧化物酯(美国专利5491231)；生物素酯(美国专利5504091)；O-烷基酯(美国专利5665772)；以及雷帕霉素的PEG酯(美国专利5780462)。这些酯和醚的制备公开在上面所列的专利中。
优选的雷帕霉素的27-酯和醚在美国专利5256790中公开，这个专利在此作为参考文献引入。这些酯和醚的制备公开在上面所列的专利中。
优选的雷帕霉素的肟，腙和羟胺在美国专利5373014，5378836，5023264和5563145中公开，这些专利在此作为参考文献引入。这些肟，腙和羟胺的制备公开在上面所列的专利中。42-氧雷帕霉素的制备在5023263中公开，这个专利在此作为参考文献引入。
更优选的雷帕霉素包括雷帕霉素[美国专利3929992]，CCI-779[3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸雷帕霉素42-酯；美国专利5362718]，以及42-O-(2-羟基)乙基雷帕霉素[美国专利5665772]。
使用时，当雷帕霉素含有合适的碱性部分的时候，药学上可接受的雷帕霉素的盐可以由有机和无机酸形成，例如，乙酸，丙酸，乳酸，柠檬酸，酒石酸，琥珀酸，反丁烯二酸，马来酸，丙二酸，苦杏仁酸，苹果酸，邻苯二甲酸，盐酸，氢溴酸，磷酸，硝酸，硫酸，甲磺酸，萘磺酸，苯磺酸，甲苯磺酸，樟脑磺酸，以及其它类似的公知可接受的酸。当雷帕霉素含有合适的酸性部分的时候，药学上可接受的雷帕霉素的盐也可以由有机和无机碱形成，例如，碱金属盐(如钠，锂，或钾)，碱土金属盐，铵盐，包含1至6个碳原子的烷基铵盐或每个烷基上包含1至6个碳原子的二烷基铵盐，以及每个烷基上包含1至6个碳原子的三烷基铵盐。
在本发明的抗肿瘤联合中，优选的mTOR抑制剂是一种雷帕霉素，更优选的mTOR抑制剂是雷帕霉素，CCI-779，或42-O-(2-羟基)乙基雷帕霉素。
正如此处所述，在本发明的mTOR抑制剂加抗代谢剂联合中，CCI-779是一种代表性的mTOR抑制剂。
美国专利5,362,718中公开了CCI-779的制备，该专利在此被引入作参考文献。当CCI-779作为抗肿瘤剂使用时，按照日剂量给药方案(每日使用，连续五日，每2至3周重复一次)，预计初始的静脉输注剂量为0.1至100mg/m2；按照每周一次给药方案给药时，预计初始的静脉输注剂量为0.1至1000mg/m2。优选的给药途径是口服或静脉输注，更优选静脉输注。
本发明中所用的术语“抗代谢剂”表示一种物质，它在结构上类似于一种在生化途径中导致DNA或RNA的合成，从而被该途径中的宿主所利用的重要的自然中间代谢物，但是在作用上表现为抑制该途径的完成(例如，DNA或RNA的合成)。更特殊的是，抗代谢剂典型地是通过以下方式起作用的(1)与代谢物竞争在DNA或RNA的合成中起关键作用的酶的催化或调节位点的；或(2)取代通常掺入DNA或RNA的代谢物，从而产生不支持复制的DNA或RNA。抗代谢剂的主要种类有(1)叶酸的类似物，它们是二氢叶酸还原酶(DHFR)的抑制剂；(2)嘌呤的类似物，它们与天然的嘌呤(腺嘌呤或鸟嘌呤)类似，但是结构上不同，于是它们可以竞争性地或不可逆地抑制DNA或RNA的核加工；以及(3)嘧啶类似物，它们与天然的嘧啶(胞嘧啶，胸腺嘧啶和尿嘧啶)类似，但是结构上不同，于是它们可以竞争性地或不可逆地抑制DNA或RNA的核加工。
下面是本发明中抗代谢剂的代表性的例子。
5-氟尿嘧啶(5-FU；5-氟-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮)可以在商业上以局部用霜剂(FLUOROPLEX或者EFUDEX)，局部用溶液剂(FLUOROPLEX或者EFUDEX)，以及可注射的包含50mg/mL 5-氟尿嘧啶(ADRUCIL或者氟尿嘧啶)的形式得到。
Floxuradine(2’-脱氧-5-氟尿苷)可以在商业上以可注射的含有500mg/小瓶的Floxuradine(FUDR或者Floxuradine)的形式得到。
硫鸟嘌呤(2-氨基-1，7-二氢-6-H-嘌呤-6-硫酮)可以在商业上以40mg口服片剂(硫鸟嘌呤)的形式得到。
阿糖胞苷(4-氨基-1-β-D-阿糖呋喃基-2(1H)-嘧啶二酮)可以在商业上以可注射的包含10mg/mL阿糖胞苷(DEPOCYT)的脂质体或者以含有1mg-1g/小瓶或20mg/mL(阿糖胞苷或CYTOSAR-U)的注射液的形式得到。
氟达拉滨(9-H-嘌呤-6-胺，2-氟-9-(5-O-膦酰基-(β)-D-阿糖呋喃基)可以在商业上以含50mg/小瓶(FLUDARA)的注射液的形式得到。
6-巯基嘌呤(1，7-二氢-6H-嘌呤-6-硫酮)可以在商业上以50mg口服片剂(PURINETHOL)的形式得到。
甲氨蝶呤(MTX；N-[4-[[(2，4-二氨基-6-蝶啶)甲基]甲氨基]苯甲酰]-L-谷氨酸)可以在商业上以包含2.5-25mg/mL和20mg-1g/小瓶(甲氨蝶呤钠或FOLEX)的注射液和2.5mg口服片剂(甲氨蝶呤钠)的形式得到。
吉西他滨(2’-脱氧-2’，2’-二氟胞苷一盐酸盐((β)-异构体))，可以在商业上以包含200mg-1g/小瓶(GEMZAR)的注射液的形式得到。
卡培他滨(5’-脱氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]-胞苷)可以在商业上以150或500mg口服片剂(XELODA)的形式得到。
喷司他丁((R)-3-(2-脱氧-(β)-D-赤-戊呋喃基)-3，6，7，8-四-氢咪唑并[4，5-d][1，3]二氮杂-8-酚)，可以在商业上以包含10mg/小瓶(NIPENT)的注射液的形式得到。
三甲曲沙(2，4-二氨基-5-甲基-6-[(3，4，5-三甲氧基苯胺基)甲基]-喹唑啉 单-D葡糖醛酸)可以在商业上以包含25-200mg/小瓶(NEUTREXIN)的注射液的形式得到。
克拉屈滨(2-氯-6-氨基-9-(2-脱氧-(β)-D-赤-戊呋喃基)-嘌呤)可以在商业上以包含10mg/mL(LEUSTATIN)的注射液的形式得到。
下表简单概括了上面列出的抗代谢剂的一些推荐剂量。
本发明还包括一种mTOR抑制剂加抗代谢剂的使用，其中一种生化调节剂是化疗方案的一部分。术语“生化调节剂”作为抗代谢剂治疗的辅助药物为本领域技术人员所熟知和理解，它所起的作用是加强抗代谢剂的抗肿瘤效果，并抵消其副作用。典型地，在甲氨蝶呤和5-FU疗法中，使用亚叶酸和左旋亚叶酸盐(levofolinate)作为生化调节剂。
亚叶酸(5-甲酰基-5，6，7，8-四氢叶酸)可以在商业上以包含5-10mg/mL或50-350mg/小瓶(亚叶酸钙或WELLCOVORIN)的注射液和5-25mg口服片剂(亚叶酸钙)的形式得到。
左旋亚叶酸盐(5-甲酰基四氢叶酸的药理学上有活性的异构体)可以在商业上以包含25-75mg左旋亚叶酸盐(ISOVORIN)的注射液和2.5-7.5mg口服片剂(ISOVORIN)的形式得到。
本发明优选的mTOR抑制剂加抗代谢剂的联合包括CCI-779加吉西他滨；CCI-779加5-氟尿嘧啶；CCI-779加5-氟尿嘧啶加亚叶酸。优选用CCI-779加吉西他滨的联合治疗胰腺癌，CCI-779加5-氟尿嘧啶的联合(包括或不包括亚叶酸)治疗结肠直肠癌。
CCI-779加抗代谢剂的联合的抗肿瘤活性可以通过体外和体内的标准药理学测试步骤来确定，其中使用CCI-779加上吉西他滨的联合以及CCI-779加上5-氟尿嘧啶的联合作为本发明的代表性联合。下面简单描述一下所用的步骤以及所得的结果。
使用人类横纹肌肉瘤系Rh30和Rh1以及人类成胶质细胞瘤系SJ-GBM2，用CCI-779加抗代谢剂进行体外联合研究。使用人类成神经细胞瘤(NB1643)和人类结肠细胞系GC3进行体内研究。
确定研究的每种药物的量效曲线。细胞系Rh30，Rh1和SJ-G2分别以6×103，5×103和2.5×104个细胞/孔的浓度铺于6孔板中。经过24小时的孵育期后，对Rh30和Rh1加入10％的FBS+RPMI 1640，或者对SJ-G2加入15％的FBS+DME。暴露在含有药物的培养基中七天之后，先用低渗溶液，再用清洗剂处理细胞，释放出细胞核。用库尔特计数器对细胞核计数，将实验结果作图，每种药物的IC50值(抑制50％生长的药物浓度)通过外推法确定。由于不同试验的IC50值稍有差别，在交互作用研究中，使用涵盖了每种药物的IC50值的两个值。如果等效图是标准形状的，两种药物间交互作用最大的点出现在它们为1∶1的比例时。因此，CCI-779三个接近IC50的值中的每一个都与吉西他滨或者5-FU的三个接近IC50的值中的每一个以1∶1的比例进行混合。结果是每个实验中有9个以1∶1的比例混合的药物联合，加上CCI-779和其它药物的三个IC50浓度。这个方案通常导致含有一个IC50值的每种药物的至少一种联合。CCI-779和每种化疗药物的IC50浓度的1∶1的联合用于使用Berenbaum’s公式x/X50+y/Y50’＝1，＜1，＞1来计算加和作用，协同作用和拮抗作用。如果单独测定的CCI-779的三个浓度与其它化合物单独测定的三个IC值的任何一个值都不能匹配，那就检查所有的1∶1比例的联合，看它们的IC值是否落在这些单独测定的药物合适的IC值之间。如果是，就认为这种效应是加和作用。
由体外标准药理学测试步骤得到的结果显示任何情况下各种联合的生长抑制性都不低于50％，这表明这些联合至少是有加和作用性的，并且没有拮抗作用的迹象。
雌性CBA/CaJ小鼠(杰克逊实验室，Bar Harbor，ME)，4周龄，用胸腺切除手术使之丧失免疫力，3周后，用137Cs源进行全身照射(1200cGy)。照射6-8小时之内小鼠获得了3×106个有核骨髓细胞。将大约3mm2的肿瘤切片植入小鼠侧后肋的空腔使肿瘤开始生长。携带肿瘤的小鼠被随机放入7只开始治疗之前的小鼠组中。当肿瘤达到直径大约0.20-1cm时开始对每只携带肿瘤的小鼠给药。每7天用带计算机界面的数字Vernier测径器测量一次肿瘤的尺寸。假设肿瘤是球形的，用公式[(π/6)×d3]来计算肿瘤体积，其中d是平均直径。CCI-779按照如下的时间表给药两周内连续5天给药，每21天重复一次，连续3次。结果是CCI-779在第1-5天，第8-12天(第1周期)；第21-25天，第28-32天(第2周期)；第42-46天，第49-53天(第3周期)给药。每个研究的另外一种化疗药物给药的时间表如下吉西他滨仅在第1周期的第1，4，8日给药CCI-779和吉西他滨的联合用人类结肠细胞系(GC3)小鼠异种移植测试步骤进行评价。在此测试步骤中，CCI-779每日给药一次，连续5日，每21天连续进行两周，共三个周期，吉西他滨仅在第1个周期的第1，4，8日给药。由使用吉西他滨治疗的第一个周期来看，CCI-779的存在并未促使肿瘤的消退。然而，用CCI-779治疗的组延迟了达到最初治疗之前肿瘤体积的2-3倍的时间(相对于单独使用吉西他滨来说)，这表明使用该联合治疗至少产生了一种加和作用。
基于这些标准的药理测试步骤的结果，mTOR抑制剂加抗代谢剂化学治疗药物的联合作为抗肿瘤治疗方法来说是有用的。更特别的，这些联合在治疗肾癌；软组织肉瘤；乳癌；肺神经内分泌肿瘤；子宫颈癌；子宫癌；头颈癌；神经胶质瘤；非小细胞肺癌；前列腺癌；胰腺癌；淋巴瘤；黑色素瘤；小细胞肺癌；卵巢癌；结肠癌；食道癌；胃癌；白血病；结肠直肠癌；或未知的原发癌症中是有用的。由于这些联合含有至少两种活性的抗肿瘤剂，这些联合的应用也提供了一种或两种药物以低于治疗剂量使用的联合，因此，减少了单独使用化学治疗药物的毒性。
在化疗时，具有不同作用形式的多种药物典型地作为一种“鸡尾酒”化学疗法的一部分使用。据估计，本发明的联合将作为一种鸡尾酒化疗的一部分使用，根据要治疗的肿瘤的性质，在该疗法中可能包含一种或更多附加的抗肿瘤剂。例如，本发明也包括mTOR抑制剂/抗代谢剂联合与其它化疗药物协同使用，例如，烷化剂(如，顺铂，卡铂，streptazoin，美法仑，瘤可宁，卡氯芥，methclorethamine，洛莫司汀，bisulfan，塞替派，ifofamide，或环磷酰胺)；激素类药(如，雌莫司汀，他莫昔芬，托瑞米芬，阿那曲唑，或者来曲唑)；抗生素(如，普卡霉素，博来霉素，米托蒽醌，伊达比星，放线菌素D，丝裂霉素，多柔比星，或柔红霉素)；免疫调节剂(如，干扰素，IL-2，或BCG)；抗有丝分裂药(如，长春碱，长春新碱，替尼泊苷，或长春瑞滨)；拓扑异构酶抑制剂(如，托泊替康，伊立替康，依托泊苷)；以及其它药物(如，羟基脲，曲妥单抗，六甲蜜胺，retuximab，紫杉醇，多西他赛，L-门冬酰胺酶，或吉姆单抗奥佐米星)。
在本发明中使用时，该联合方案可以是同时给药或者交叉给药，即在化疗过程中，mTOR抑制剂与抗代谢剂不同时给药。两者给药的时间差可以是几分钟，几小时，几周或更长时间。因此，联合这个词并不一定意味着同时给药或者作为一剂药使用，也可以是其中的每一个组分在所需的治疗阶段中使用。各药物也可以用不同的途径给药。例如，mTOR抑制剂加抗代谢剂的联合中，mTOR抑制剂可以口服或者肠胃外给药，优选肠胃外给药，而抗代谢剂可以以肠胃外，口服或其它可接受的方式给药。对于CCI-779和吉西他滨的联合，优选吉西他滨肠胃外给药。对于CCI-779与5-FU和亚叶酸的联合，优选5-FU和亚叶酸肠胃外给药。这些联合可以每天，每周，甚至每月给药一次。作为一种典型的化疗方案，可以在几周之后重复进行一个化疗疗程，两种药物可以按照同样的时间表给药，或者可以根据病人的反应进行调整。
因此，本发明也提供了一种产品，这种产品包含一种mTOR抑制剂和一种抗代谢抗肿瘤剂，它作为一种联合制剂在治疗哺乳动物肿瘤中同时，分别或者依次使用。
作为典型的化学疗法，剂量方案由主治医师考虑多种因素进行密切控制，这些因素包括疾病的严重程度，对疾病的反应，与治疗有关的毒性反应，年龄，病人的健康状况，以及其它伴随的疾病或治疗。
根据有代表性的CCI-779加抗代谢剂的联合得到的结果，设计的初始mTOR抑制剂静脉输注剂量在大约0.1和100mg/m2之间，优选大约2.5和70mg/m2之间。另外，mTOR抑制剂优选典型地静脉输注给药30分钟，每周给药一次。抗代谢剂组分的初始剂量取决于所用的组分，最初根据医师对所选药物的经验而定。
根据CCI-779加抗代谢剂的联合得到的结果，对于mTOR抑制剂加吉西他滨联合，设计的初始mTOR抑制剂静脉输注剂量在大约0.1和100mg/m2之间，优选大约2.5和70mg/m2之间。初始吉西他滨静脉输注剂量在大约400和1500mg/m2之间，优选大约800和1000mg/m2之间。初始设计为在治疗周期的第1，8，21天病人接受30分钟的mTOR抑制剂静脉输注，紧接着或者在这之前进行30分钟的吉西他滨静脉输注。一到两个治疗周期之后，可以根据得到的结果和观察到的副作用加大或减少剂量。
根据得到的结果，当CCI-779与5-FU和亚叶酸联合使用时，设计的在mTOR抑制剂加5-FU的方案中，设计的初始mTOR抑制剂静脉输注剂量在大约0.1和100mg/m2之间，优选大约2.5和70mg/m2之间；初始亚叶酸静脉输注剂量在大约50和500mg/m2之间，优选大约200mg/m2之间；初始5-FU静脉输注剂量在大约500和7500mg/m2之间，优选大约1000-5000mg/m2之间；初始设计的联合按照如下的方案给药在每6周的治疗周期中，病人每周接受一次1小时的亚叶酸静脉输注，在使用每剂亚叶酸之后，紧接着用5-FU作24小时连续静脉输注。mTOR抑制剂在第1个周期的第8天开始给药，静脉输注30分钟，每周一次。每6周的治疗周期之后，停药一周，再开始下一个6周的治疗周期。在一个或几个治疗周期之后，可以根据得到的结果和观察到的副作用加大或减少剂量。
对于商业上可得到的抗代谢剂，可以使用已有的剂型，并可根据需要来将已有剂型分成几份来用。作为替代，在商业上无法得到的这些药物和抗代谢剂可以根据标准的药学实践来合成。包括本发明的活性化合物的口服形式可以是任何常规使用的口服形式，包括片剂，胶囊，口腔含化剂，药片，糖锭，以及悬浮液或溶液形式的口服液。胶囊可以包含活性化合物和惰性填料和/或稀释剂的混合物，所述填料和/或稀释剂例如，药学上可接受的淀粉(如，玉米，马铃薯或木薯淀粉)，糖，人造甜味剂，粉末状纤维素，如晶体和微晶纤维素，面粉，白明胶，树胶等。有用的片剂形式可以用常规压缩，湿法造粒，干法造粒等方法制造，并使用药学上可接受的稀释剂，黏合剂，润滑剂，崩解剂，表面改性剂(包括表面活性剂)，悬浮或稳定剂。这些包括但并不限于硬脂酸镁，硬脂酸，滑石，十二烷基硫酸钠，微晶纤维素，羧甲基纤维素钙，聚乙烯吡咯烷酮，白明胶，藻酸，阿拉伯树胶，黄原胶，柠檬酸钠，复合硅酸盐，碳酸钙，甘氨酸，糊精，蔗糖，山梨醇，磷酸二钙，硫酸钙，乳糖，高岭土，甘露醇，氯化钠，滑石，干淀粉以及粉末状的糖。优选的表面改性剂包括非离子和阴离子型表面改性剂。有代表性的表面改性剂的例子包括，但并不限于泊洛沙姆188，杀藻胺，硬脂酸钙，十六醇十八醇混合物，聚西托醇乳化蜡，山梨聚糖酯，胶态二氧化硅，磷酸盐，十二烷基硫酸钠，硅酸镁铝和三乙醇胺。这里的口服制剂可以利用标准的缓释或控释制剂来改变活性化合物的吸收。口服制剂还可以将活性组分放在水或者果汁里，如果需要的话，还可以包含合适的增溶剂或乳化剂。
在某些情况下，可能需要将化合物以气溶胶的形式直接用于气道。
这些化合物也可以经肠胃外或腹膜内给药。作为游离碱或者药理学上可接受的盐的这些活性化合物的溶液或悬浮液可以通过在水中与合适的表面活性剂例如羟基丙基纤维素混合而制得。分散体系也可以在油状的丙三醇，液体聚乙二醇及其混合物中制备。在通常的存储和使用条件下，这些制剂含有一种防腐剂来抑制微生物的生长。
适于注射用的药物形式包括无菌水溶液或者分散体系，以及用于临时制备无菌溶液或者分散体系的无菌粉末。在所有的情况下，存在的形式必须是无菌的，并且是流动的，直到易于注射的程度。它们在生产和储存的条件下必须是稳定的，而且必须在防止细菌和真菌等微生物的污染行为的条件下保存。载体可以是包括诸如水、乙醇、多羟基化合物(如甘油、丙烯醇和液态聚乙二醇)、它们合适的混合物以及植物油等的分散介质。
为了本发明的目的，经皮给药应理解为穿过身体表面和身体通道的内表面(包括上皮和粘膜组织)的所有给药方式。这些给药方式可以使用本发明的化合物，或其药学上可接受的盐的洗剂，霜剂，泡沫，贴剂，悬浮液，溶液以及栓剂(直肠和阴道)而进行。
经皮给药可以通过使用包含活性化合物和一种载体的经皮贴剂来实现，该载体对活性化合物是惰性的，对皮肤无毒，并且通过皮肤递送药物使之系统地吸收到血流中。载体可以采用下列几种形式的任一种。例如霜剂和药膏，糊剂，凝胶，以及包藏装置(occlusive device)。霜剂和药膏可以是粘稠的液体或半固体的水包油或油包水型乳状液。由可吸收的粉末分散在石油中或包含活性组分的亲水石油中形成的糊剂也可以是合适的。几种包藏装置可以用来将活性组分释放到血流中，例如，覆盖着一个包含活性组分(有或者没有载体)的储存装置的半透膜，或者包含活性组分的基质。其它的包藏装置见于文献中。
栓剂可以使用传统的材料来制造，包括可可油、加或不加可改变栓剂熔点的蜡，还有甘油。也可使用水溶性的栓基，例如，不同分子量的聚乙二醇。
权利要求
1.一种治疗有需要的哺乳动物肿瘤的方法，包括提供给所述哺乳动物有效量的含有一种mTOR抑制剂和一种抗代谢抗肿瘤剂的联合。
2.根据权利要求1所述的治疗肿瘤的方法，其中所述mTOR抑制剂和/或所述抗代谢剂是以低于治疗有效量提供的。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述mTOR抑制剂是以低于治疗有效量提供的。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其中所述抗代谢剂是以低于治疗有效量提供的。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述肿瘤是下述肿瘤中的一种肾癌；软组织肉瘤；乳癌；肺神经内分泌肿瘤；子宫颈癌；子宫癌；头颈癌；神经胶质瘤；非小细胞肺癌；前列腺癌；胰腺癌；淋巴瘤；黑色素瘤；小细胞肺癌；卵巢癌；结肠癌；食道癌；胃癌；白血病；结肠直肠癌；或未知的原发癌症。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述联合还包含一种生化调节剂。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述生化调节剂是亚叶酸或左旋亚叶酸盐。
8.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述抗代谢剂是吉西他滨。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述肿瘤是胰腺癌。
10.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述抗代谢剂是5-氟尿嘧啶。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述联合还包含一种生化调节剂。
12.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，包括提供给所述哺乳动物有效量的mTOR抑制剂、5-氟尿嘧啶和亚叶酸的联合。
13.根据权利要求10至12中任一项所述的方法，其中所述肿瘤是结肠直肠癌。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述mTOR抑制剂是一种雷帕霉素。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述雷帕霉素是雷帕霉素。
16.根据权利要求14所述的方法，其中所述雷帕霉素是42-O-(2-羟基)乙基雷帕霉素。
17.根据权利要求14所述的方法，其中所述雷帕霉素是3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸雷帕霉素42-酯。
18.一种含有有效剂量的mTOR抑制剂和抗代谢抗肿瘤剂的抗肿瘤联合。
19.根据权利要求18所述的联合，其中还包含一种生化调节剂。
20.根据权利要求19所述的联合，其中所述mTOR抑制剂是一种雷帕霉素。
21.根据权利要求19所述的联合，其中所述雷帕霉素是雷帕霉素。
22.根据权利要求19所述的联合，其中所述雷帕霉素是42-O-(2-羟基)乙基雷帕霉素。
23.根据权利要求19所述的联合，其中所述雷帕霉素是3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸雷帕霉素42-酯。
24.一种含有作为联合制剂的mTOR抑制剂和抗代谢抗肿瘤剂的产品，该联合制剂用于在哺乳动物肿瘤治疗中同时、分别或依次使用。
25.根据权利要求24所述的产品，其中还包含一种生化调节剂。
26.根据权利要求24或25所述的产品，其中所述肿瘤是下述肿瘤中的一种肾癌；软组织肉瘤；乳癌；肺神经内分泌肿瘤；子宫颈癌；子宫癌；头颈癌；神经胶质瘤；非小细胞肺癌；前列腺癌；胰腺癌；淋巴瘤；黑色素瘤；小细胞肺癌；卵巢癌；结肠癌；食道癌；胃癌；白血病；结肠直肠癌；或未知的原发癌症。
27.根据权利要求24至26中任一项所述的产品，其中所述mTOR抑制剂是一种雷帕霉素。
28.根据权利要求27所述的产品，其中所述雷帕霉素是雷帕霉素。
29.根据权利要求27所述的产品，其中所述雷帕霉素是42-O-(2-羟基)乙基雷帕霉素。
30.根据权利要求27所述的产品，其中所述雷帕霉素是3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸雷帕霉素42-酯。
31.根据权利要求24至30中任一项所述的产品，其中所述抗代谢剂是吉西他滨或5-氟尿嘧啶。
全文摘要
本发明涉及一种诸如雷帕霉素的mTOR抑制剂和一种诸如吉西他滨或氟尿嘧啶的抗代谢抗肿瘤剂的联合在肿瘤治疗中的用途。
文档编号A61P35/00GK1545419SQ02807749
公开日2004年11月10日 申请日期2002年4月5日 优先权日2001年4月6日
发明者J·J·小吉邦斯, G·杜卡特, J·H·E·弗里施, E 弗里施, J J 小吉邦斯, ㄌ 申请人:惠氏公司