专利名称：复方丹参滴丸在制备抑制肥大细胞脱颗粒药物中的应用的制作方法
专利说明复方丹参滴丸在制备抑制肥大细胞脱颗粒药物中的应用 本发明属医药领域，具体涉及复方丹参滴丸在制备抑制肥大细胞脱颗粒药物中的应用。肥大细胞脱颗粒是一复杂的生物化学过程，且受多种刺激影响。经典理论认为变应原与肥大细胞表面的IgE分子桥联后，使IgE分子发生变构，后者改变了肥大细胞膜的能量代谢和通透性，并促进细胞膜磷脂甲基化过程和钙离子通道开放。细胞外液钙离子的内流可能通过脑浆内微丝的活动(细胞肌作用)导致颗粒围膜与细胞膜的融合，并和颗粒围膜间的相互融合一起，形成了连接细胞外液的复杂通路、颗粒物质即藉此通路释放，此种颗粒释放方式组织学上称为“胞吐”，它包括细胞和颗粒及其膜结构发生变化的生化过程。肥大细胞广泛分布于皮肤、淋巴组织、子宫、膀胱以及呼吸道和消化道粘膜及粘膜下结缔组织中毛细血管及淋巴管周围。肥大细胞脱颗粒是很多机体病理反应的原因之一，它与肿瘤发生、血脂清除、血管发生、神经系统功能、生殖系统的性周期变化、过敏反应等都有不等程度的关系。肥大细胞不仅在过敏反应中起关键作用，而且在许多疾病的过程中表现出功能的多态性，如，炎症反应、细胞毒性作用、血管的生长与形成以及免疫调节作用等都有肥大细胞的参与。
丹参对缺血再灌注引起的微循环障碍有预防和治疗作用。其作用机制包括保护血管内皮细胞、清除过氧化物、抑制白细胞与血管内皮粘附、抑制肥大细胞脱颗粒、抑制细静脉内的白蛋白漏出等。丹参通过对微循环的多环节、多靶点综合作用，发挥了其预防和治疗缺血再灌注引起的微循环障碍作用。然而，在心脑血管疾病的预防和需要长期治疗时，丹参需静脉给药受到各方面因素的限制。如果口服的丹参制剂也能取得与静脉给药近似效果的话，对于预防和治疗心脑血管疾病或其他微循环障碍性疾病将是非常有意义的。
经过多年的临床观察与实验研究，复方丹参滴丸的应用范围得到了很大的拓展，目前已证实具有以下方面的作用增加冠脉血流量，舒张血管平滑肌，促进侧枝循环的开放，提高静脉窦血氧含量，明显改善急性心肌缺血和梗塞；保护细胞免受缺氧及缺氧/复氧的损伤；对缺血心肌细胞再灌注心肌细胞坏死性变化有良好的保护作用；改善微循环；抗心律失常；抗血小板聚集，促进纤溶，抗血栓形成；降低血液粘滞度，调节血脂，防止动脉粥样硬化；提高缺氧耐受力，抗脂质过氧化，清除有害的自由基；降低血浆内皮素的含量，显著改善动物的肝、肾和胰腺等脏器功能；阻止血管及神经病变的发生发展；增强免疫；调节植物神经平衡，等等，并应用于相应的有关疾病(中国专利CN1348815A)。目前，尚未见复方丹参滴丸抑制肥大细胞脱颗粒的报道。虽然有复方丹参滴丸改善微循环方面的报道，但微循环的改善是结果，并未详细说明是通过哪一个或几个环节或靶点的作用而使微循环改善，亦未见复方丹参滴丸抑制肥大细胞脱颗粒而改善微循环的报道。本发明的目的是提供复方丹参滴丸在制备抑制肥大细胞脱颗粒药物中的新用途。
本发明研究显示在缺血再灌注30分钟观察结束后，用0.1％的toluidine blue(甲苯胺蓝)对肠系膜肥大细胞进行活体染色，可见复方丹参滴丸经口给药可以抑制由缺血再灌注引起的肥大细胞脱颗粒，并且复方丹参滴丸的口服作用与丹参静脉给药的作用几乎相同。因此，复方丹参滴丸可治疗因肥大细胞脱颗粒所致的疾病。
缺血再灌注产生的过氧化物损伤血管内皮和血管基膜，促使白蛋白外漏，肥大细胞脱颗粒释放的血管活性物质更加剧了白蛋白外漏。白蛋白外漏和肥大细胞脱颗粒是微循环障碍的重要标志之一。另外，复方丹参滴丸具有服用和携带方便，可以长期服用等优点，所以，复方丹参滴丸可作为预防和治疗微循环障碍性疾病的理想药物。
图1复方丹参滴丸预给药在缺血再灌注后30分钟时大鼠肠系膜肥大细胞脱颗粒率。
图2复方丹参滴丸后给药在缺血再灌注后30分钟时大鼠肠系膜肥大细胞脱颗粒率。下面结合实施例对本发明做一步说明，下述各实施例仅用于说明本发明而并非对本发明的限制。
实施例一 复方丹参滴丸在缺血再灌注前给药对大鼠肠系膜肥大细胞脱颗粒的抑制作用(一)实验方法1.试验组和对照组
(1)正常对照组不进行缺血再灌注处理。
(2)缺血再灌注组经10分钟基础观察之后，用4G聚乙稀管将还流于观察部的肠系膜动静脉血管同时结扎10分钟(缺血)，解除结扎(再灌注)。将时间记录仪调至0处。在同一视野连续观察30分钟。
(3)复方丹参滴丸给药组在缺血再灌注60分钟前，按0.4g/kg的给药量，将复方丹参滴丸用生理盐水溶解，一次性灌胃。
(4)丹参静脉给药组在缺血再灌注10分钟前，经颈静脉缓慢推注丹参注射液1ml(1g丹参提取物/ml)，再用连续推注器按每小时1.2g/kg的给药量，经颈静脉连续注入丹参注射剂至观察结束。
2.实验方法取日本庆应义塾大学医学部实验动物中心饲养的Wistar雄性大鼠(体重200～250g，Charles River实验动物，东京)，按30mg/kg的剂量腹腔注射戊巴比妥钠进行麻醉。从右侧颈静脉插入并置3G聚乙烯管。沿腹正中线作2～3cm切口，轻柔地把近回盲部的回肠移至腹腔外，将肠系膜在附有薄玻片的台板上展开。为维持温度和湿度，在展开的肠系膜的表面持续滴加37℃的Krebs-Ringer缓冲液。肠系膜微循环的动态，用置于37℃恒温槽内的倒置生物显微镜(Diaphot TMD-2S，Nikon，东京)观察，并用高感度摄像机摄像，S-VHS录像机录像。
选直径在25～40μm之间的细静脉非分支部(长200μm以上)为观察部位。经10分钟基础观察之后，用4G聚乙烯管将观察部的肠系膜动静脉血管同时结扎10分钟(缺血)，解除结扎(再灌注)，将时间记录仪调至0处。在同一视野连续观察30分钟。
3.测定方法肠系膜肥大细胞脱颗粒率计数缺血再灌注30分观察结束后，将0.1％的toluidineblue滴加于肠系膜表面，1分钟之后，用生理盐水缓慢地冲洗肠系膜表面。用连接于倒置生物显微镜的高感度摄影系统，沿观察的血管记录5个视野，计数脱颗粒和未脱颗粒的肥大细胞数，用脱颗粒的肥大细胞占计数的肥大细胞总数的百分比来表示肥大细胞脱颗粒率。
每组6只大鼠的各测定值用one-way analysis of variance(ANOVA)处理，Fisher’spost hoc test检验。各组数值用平均数±标准误表示，设P＜0.05为有显著意义。
(二)结 果图1显示复方丹参滴丸和丹参静脉给药对缺血再灌注后大鼠肠系膜肥大细胞脱颗粒的抑制作用。缺血再灌注30分钟之后，肠系膜细静脉周围的肥大细胞脱颗粒率与正常对照组相比显著增加。而复方丹参滴丸经口给药组和丹参静脉给药组的肥大细胞脱颗粒率与缺血再灌注组相比显著减少，其作用相同。
实施例二 复方丹参滴丸在缺血再灌注后给药对大鼠肠系膜肥大细胞脱颗粒的抑制作用(一)实验方法1.试验组和对照组(1)正常对照组不进行缺血再灌注处理。
(2)复方丹参滴丸给药组在缺血再灌注后，将复方丹参滴丸用生理盐水配成50mg/ml的溶液，在观察的肠系膜表面连续滴加(2.6ml/min)。
(3)SOD(超氧化物歧化酶)给药组在缺血再灌注10分钟时，用连续推注器按12000u/kg/hr的给药量，经颈静脉连续注入SOD至观察结束。
2.实验方法同实施例一。
3.测定方法同实施例一。
(二)结 果图2显示缺血再灌注30分钟时，SOD后给药组肥大细胞脱颗粒率与缺血再灌注组相比没有显著差异，而复方丹参滴丸后给药组的肥大细胞脱颗粒率显著低于缺血再灌注组。
权利要求
1.复方丹参滴丸在制备抑制肥大细胞脱颗粒药物中的应用。
2.复方丹参滴丸在制备治疗肥大细胞脱颗粒所致疾病的药物中的应用。
3.复方丹参滴丸在制备改善肥大细胞脱颗粒所致微循环障碍药物中的应用。
4.复方丹参滴丸在制备治疗肥大细胞脱颗粒所致微循环障碍之心脑血管疾病药物中的应用。
全文摘要
本发明属医药领域，具体涉及复方丹参滴丸在制备抑制肥大细胞脱颗粒药物中的应用。本发明研究显示在缺血再灌注后对肠系膜肥大细胞进行活体染色，可见复方丹参滴丸经口给药可以抑制由缺血再灌注引起的肥大细胞脱颗粒，并且复方丹参滴丸的口服作用与丹参静脉给药的作用几乎相同。复方丹参滴丸可作为预防和治疗肥大细胞脱颗粒所致疾病，特别是肥大细胞脱颗粒所致微循环障碍性疾病的理想药物。
文档编号A61K9/20GK1522714SQ0310450
公开日2004年8月25日 申请日期2003年2月17日 优先权日2003年2月17日
发明者韩晶岩, 秋叶保忠, 铃木秀和, 永田博司, 三浦总一郎, 织田正也, 石井裕正, 一郎, 也, 司, 和, 忠, 正 申请人:天津天士力制药股份有限公司