一种丹参的微波提取工艺的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种丹参的微波提取工艺取丹参，粉碎，加水，微波提取，浓缩，即得。本发明对丹参微波提取工艺参数进行了筛选和优化。本发明所述的丹参微波提取工艺制成的丹参提取物，丹参中的有效成分没有变性。本发明工艺还具有高效、节能、无污染、高选择性等优点。
【专利说明】
-种丹参的微波提取工艺
技术领域
[0001] 本发明设及一种丹参的微波提取工艺，属于药品技术的领域。
【背景技术】
[0002] 丹参为唇形科鼠尾草植物丹参（Salvia Μ化iorrhizaBge)的干燥根及根茎，具有 桂疲止痛、活血通经、清屯、除烦之功。临床上用于治疗屯、绞痛、冠屯、病等屯、血管疾病。丹参主 要含有水溶性和脂溶性两类成分。水溶性成分主要是酪酸类，如丹酪酸B、丹参素、原儿茶醒 等，其中丹酪酸B含量最高，是活血化疲的有效成分，具有保护脑损伤、屯、脏W及抗氧化等作 用，多作为工艺研究的指标性成分。
[0003] 目前，丹参提取时，常采用传热加热方式进行提取，即加热回流提取，但是加热回 流提取时，由于传热速度慢，因此提取溶剂从室溫升高到提取溫度所需时间长，易造成丹酪 酸B、丹参酬IIA等热敏性物质在逐渐的加热过程被分解。微波加热与传热加热方式上存在 较大的区别，微波加热是通过水对微波能的吸收作用，进行选择性加热，利用微波能使植物 细胞中的水分或有机溶剂迅速升溫，升压，细胞壁穿孔，从而把提取物从细胞中溶出。微波 提取丹参时，耗时短，大大缩短了提取物在高溫条件下的受热时间，有利于丹参酬类物质的 提取。丹参微波提取相对传统提取具有的优势:①操作简单;②提取效率高、耗时较短，微波 提取时间仅用传统提取时间的1/4,且综合有效成分含量差不多；③能耗低，节约了生产成 本，微波提取在工业化生产中具有较大的应用价值。
[0004] 然而，微波技术用于中药有效成分提取目前还存在应用原理、技术及工程放大等 一系列问题：1、中药疗效的多途径、多祀点是基于中药多组分，改变传统的加热方式，是否 会引起中药物质组在质量或数量上的变化，从而影响疗效;2、微波对不同的植物细胞或组 织有不同的作用，细胞内产物的释放也有一定的选择性，因此应根据产物的特性及其在细 胞内所处的位置的不同，选择不同的处理方式;3、微波提取仅适用于对热稳定的产物，如生 物碱、黄酬、巧类等，而对于热敏感的物质如蛋白质、多肤等，微波加热能导致运些成分的变 性，甚至失活;4、由微波加热原理可知，微波提取要求被处理的物料具有良好的吸水性，否 则细胞难W吸收足够的微波能将自身击破，使其内容物难W释放出来。
[0005] 丹参为唇形科植物丹参Salvia mltiorrhiza Bge的干燥根及根茎,在中医临床上 具有桂疲止痛、活血通经、清屯、除烦和滋补之功效，现代药理研究表明丹参对屯、血管系统、 血液系统的作用十分显著，丹参中含有大量的热敏感的物质如蛋白质、多肤等，按照常规微 波技术提取，微波加热能导致运些成分的变性，甚至失活。
【发明内容】
[0006] 本发明目的在于，提供一种丹参的微波提取工艺。本发明所述的丹参微波提取工 艺制成的丹参提取物，丹参中的有效成分没有变性。本发明工艺还具有高效、节能、无污染、 高选择性等优点。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案实现:一种丹参的微波提取工艺， 取丹参，粉碎，加水，微波提取，浓缩，即得。
[000引前述的丹参的微波提取工艺中，微波提取时，提取功率为500-700W。
[0009] 前述的丹参的微波提取工艺中，提取功率为600W。
[0010] 前述的丹参的微波提取工艺中，微波提取时，提取时间为20-30min。
[0011] 前述的丹参的微波提取工艺中，提取时间为25min。
[0012] 前述的丹参的微波提取工艺中，微波提取时，固液比0.5-1.1:10-14。
[0013] 前述的丹参的微波提取工艺中，固液比为1:12。
[0014] 发明人进行了大量的实验，W下是部分实验研究：
[0015] 实验例1:提取工艺研究
[0016] 1实验材料
[0017] 超高效液相色谱仪（型号:Wates U化C，沃特斯中国有限公司）；奥润微波提取器； 数显恒溫水浴锅(常州奥华仪器有限公司）；电子天平(AE/240,上海特勒仪器有限公司）。
[0018] 丹参药材均购于贵阳同济堂(批号20130928,产地山东），经鉴定为中国药典品种； 迷迭香酸(批号111871-201102)购于中国药品生物制品检定所，供含量测定用;丹酪酸B(批 号115939-25-8)购于成都植标化纯生物技术有限公司，纯度含98% ;乙腊(色谱纯）；甲酸 (色谱纯）；屈臣氏蒸馈水。其他试剂均为分析纯。
[0019] 2方法和结果
[0020] 2.1丹参微波工艺含量测定方法的建立
[002。 2.1.1色谱条件
[0022] 色谱柱：ACQUITY IMX BEH aiield RP18 1.化 m 2.1X50mm Column;流动相： 0.5%甲酸水溶液(A)-乙腊(B)梯度洗脱;柱溫:30°C ;流速:0.2mL/min;检测波长:280皿;进 样量化L。梯度洗脱条件：0~lOminaO~27%B;10~15min，27~32%B;15~35min，32~ 50%B〇
[0023] 2.1.2对照品溶液的制备
[0024] 精密称取迷迭香酸、丹酪酸B，放入25mL栋色容量瓶中，加入甲醇溶解，并稀释至刻 度，摇匀，制成制成迷迭香酸〇.〇55mg · mL-i、丹酪酸B 0.135mg · mL-i、对照品储备液。
[0025] 2.1.3标准曲线的制备
[0026] 分别精密吸取迷迭香酸储备液、丹酪酸B储备液不同量配成6个不同浓度的对照品 溶液。混合对照品溶液中迷迭香酸的浓度分别为13.75，41.25，68.75，82.50，96.25，110.00 μg·mL-l;丹酪酸B的浓度分别为10.00,90.00，165.00，195.00,280.00,580.00μg·mL-l。注 入UPLC测定，W进样量为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，进行线性回归，得回归方程(见表1)。 结果表明：迷迭香酸、丹酪酸B分别在0.0275~0.2200，0.0200~1. leOOug内线性关系良好。
[0027] 表1 5种指标性的回归方程 [002引
[0029] 2.1.4精密度试验
[0030]取同一份丹参微波提取的样品溶液，按上述相应的色谱条件连续进样6次，测定其 中各成分的峰面积。结果表明：6次进样5种成分的峰面积RSD均小于2.26%，表明仪器精密 度良好。
[00川 2.1.5稳定性试验
[0032] 取同一份丹参微波提取的样品溶液，分别于0、2、4、8、12、2地进行检测，测定各成 分的峰面积，结果表明：6次进样5种成分的峰面积RSD均小于2.27%，表明样品溶液在24h内 稳定。
[0033] 2.1.6重复性试验
[0034] 在同一提取工艺条件下，平行制备6份丹参微波提取的样品溶液，分别取样测定。 记录迷迭香酸、丹酪酸B色谱峰的峰面积，计算各成分含量RSD(n = 6)。结果表明6份供试品 溶液中巧中成分含量结果RSD均小于2.62%，说明此方法的重复性良好。
[00巧]2.2丹参微波水提的正交工艺考察
[0036] W固液比、提取时间、微波功率为考察因素，每个因素设计3个水平，W迷迭香酸、 丹酪酸B的含量之和考察指标(综合Π )，每份样品50g，按L9(34)正交表按排试验。因素水平 见表2，试验安排及结果见表3，方差分析结果见表4。
[0037] 表2因素水平表 [00；3 引
[0040] 分别取丹参药材9份，每份50g，按L9(34)正交表设计进行微波提取，过滤，按2.1.1 项下色谱条件测定上述样品，计算综合指标的含量，结果分别见表3。
[0041] 表3微波水提正交实验结果
[0042]
[0045] 注:Fo'o 己(2,2) = 19
[0046] 从结果可知，影响综合指标的因素顺序为A>B>C，无显著性。微波水提取最佳工 艺为A3B3C2,即功率600w、提取时间25min和固液比1:12。
[0047] 2.3验证试验
[004引取丹参药材50g，按上述优选工艺提取，测定含量并比较图谱，与传统提取方法进 行比较，结果见表5。
[0049]表5丹参传统提取与微波提取的比较(n = 3)
[(Κ)加]
[0051 ] W上试验表明，微波提取参数为:功率600w、提取时间25min和固液比1:12时，提取 效果最好。且该提取工艺，提取效率高、耗时较短，且综合有效成分含量差不多；能耗低，传 统提取方法的能耗为IkW · h，而微波提取的能耗仅为0.25kW · h，大大降低了能耗，节约了 生产成本。
[0052]实验例2:药效对比研究 [0化3] 1实验材料
[0化4] 1.1动物:清洁级SD大鼠，雌雄各半，体重200g±20g，80只。重庆市动物质检中屯、提 供，合格证号：SCXK(渝)2012-0005。
[0055] 1.2试药：阳性西药:硝酸异山梨醋片（山东鲁抗东岳制药有限公司，批号140107)， 阳性中药:复方丹参滴丸(天津天±力制药股份有限公司，批号：140511),本发明微波提取 工艺样品（按实施例1进行提取）、传统提取工艺样品均由贵阳中医学院药物制剂实验室自 审IJ，盐酸异丙肾上腺素(上海禾丰制药有限公司，批号141002)，乌拉坦(天津市光复精细化 工研究所，20140306) dCK(肌酸激酶）、LDH(乳酸脱氨酶）、S0D(超氧化物歧化酶）、MDA(丙二 醒)试剂盒均购于齐一生物科技(上海)有限公司，批号:201502。
[0化6] 1.3仪器:Bレ420S生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司），显微镜（BX51T- P皿-J11，日本奥林己斯），CM0S(日本奥林己斯），多功能真彩色细胞图象分析管理系统(美 国Media切bernetics公司Image-Pro Plus),石蜡切片机（德国莱卡RM2015)微量高速离屯、 机(型号：TG16W)，酶标仪(型号:面M-9602,北京普朗新技术有限公司），隔水式恒溫培养箱 (型号:GNP-9080 )，洗板机（型号:AC8，Thermo Labsysterns)等。
[0化7] 2实验方法
[0化引2.1动物分组及造模方法
[0059] 取健康大鼠80只，随机分成8组，每组10只，即空白组，模型组，消屯、痛组，即阳性西 组(3.2mg/kg)，本发明低剂量组(0.2g/kg)，本发明高剂量组(0.8g/kg)，传统工艺高剂量组 (0.8g/kg)，传统工艺低剂量组(0.2g/kg)，阳性中药组(86.00mg/kg)。实验开始后，各组均 按Iml/kg的灌胃容积给予相应剂量的药物，空白组及模型组给予等体积蒸馈水，每天1次， 连续15天。从实验第13天开始，除空白组腹腔注射同体积生理盐水外，其他各组均于灌胃给 药后化腹腔注射盐酸异丙肾上腺素注射液(5mg/kg)连续注射3天，时间间隔均为2地。
[0060] 2.2现憶指标
[0061 ] 2.2.1生理指标
[0062] 记录各组造模前的屯、电图，W及末次给予异丙肾上腺素后记录Imin，5min，lOmin， 15min，30min各时间点的屯、电图，W屯、电图出现ST段抬高或Τ波变化标志造模成功。
[0063] 2.2.2血清生化指标
[0064] 屯、电图结束后，大鼠股动脉取血，300化pm离屯、lOmin，分离出上清液，用放射免疫 法测定血清中CK、LDH、SOD、MDA的含量。
[00化]2.2.3组织形态学指标测定
[0066] 取血后立即取出屯、脏，W冰冷生理盐水漂洗去残留血液，除去大血管、结缔组织， 滤纸吸干，然后将屯、脏组织固定在4%多聚甲醒中保存，常规取材，脱水，石蜡包埋，制切片， 肥染色，在光学显微镜下观察屯、肌组织病理学改变。
[0067] 2.3统计分析
[0068] 采用SPSS16.0软件进行统计分析。实验数据W均数±标准差（丈，组间比较 采用t检验，显著性水平Wp<0.05和ρ<0.01为标准。
[0069] 3 结果
[0070] 3.1对ISO诱导的屯、肌缺血大鼠屯、电图及Τ波高度的影响
[0071] 结果见图1和表6,可见，与空白组比较，模型组大鼠屯、电图T波段显著增加（p< 0.01);大鼠在给予盐酸异丙肾上腺素造模后，阳性组、微波工艺剂量组、传统工艺剂量组均 能一定程度的降低屯、电图T波段的高度，与模型组比较具有显著性差异(p<0.01);微波工 艺组与传统工艺组比较，对ISO诱导的屯、肌缺血大鼠屯、电图及T波高度的影响没有显著性差 异。
[0072] 表6对急性屯、肌缺血模型大鼠屯、电图T波高度的影响
[0073]
[0074] 注与正常比较，冲<0.05，*冲<0.01;与模型组比较，▲?<0.05，▲▲?<0.01;与 传统工艺组比较，★P<0.05，^^P<0.01;N=10
[0075] 3.2对ISO诱导的屯、肌缺血大鼠血清CK、LDH活性的影响
[0076] 结果见表7,可W看出，盐酸异丙肾上腺素造模后，模型组大鼠血清中的CK和LDH水 平均升高，与空白组比较有差异(P<〇.01);微波工艺高剂量组与传统工艺高剂量组大鼠血 清中的CK、LDH水平明显降低，与模型组比较有显著性差(P<0.01);微波工艺高剂量组与传 统工艺高剂量组比较后，对于大鼠血清中的CK、LDH水平的影响都没有差异(P>ο. 05)。 [0077] 表7对血清CK、LDH活性的影响 [007引
[0079] 注与正常比较，冲<0.05，*冲<0.01;与模型组比较，▲?<0.05，▲▲?<0.01;与 传统工艺高剂量组组比较，★?<〇. 05，★★?<0.01; N= 10。
[0080] 3.3对ISO诱导的屯、肌缺血大鼠血清SOD、MDA活性的影响
[0081] 结果见表8,可知，模型组与空白组比较，SOD活性显著降低（P<0.01)，而血清中 MDA含量显著升高(P<0.01);与模型组比较，本发明工艺高剂量组、本发明工艺低剂量组、 传统工艺高剂量组、传统工艺低剂量组、阳性西组、阳性中组各组大鼠血清SOD活性显著升 高(P<0.01)，MDA含量显著降低(P<0.01)。本发明工艺高剂量组、本发明低剂量组。传统工 艺低剂量组和传统工艺高剂量组对于大鼠血清中的SOD活性及MDA含量的影响都没有差异 (P>0.05)〇
[0082] 表8对血清S0D、MDA活性的影响
[0083]
[0084] 注与正常比较，冲<0.05，*冲<0.01;与模型组比较，▲P<0.05，^^P<0.01; 与传统工艺高剂量组组比较，★?<〇. 05，★★?<0.01; N= 10。
[00化]3.4对ISO诱导的屯、肌缺血大鼠屯、肌组织病理学的影响
[0086] 从图2中可W看出，空白组大鼠的屯、肌组织结构正常，屯、肌纤维排列整齐，没有变 性、坏死、肥大、萎缩的病变。而模型组大鼠注射盐酸异丙肾上腺素后，引起了屯、肌损伤，有 大片坏死灶，肌纤维排列素乱、坏死细胞质溶解。与模型组比较，给药组大鼠屯、肌病变的程 度明显减轻。I SO诱导的屯、肌缺血大鼠屯、肌组织病理改变对高剂量组影响很小，本发明工艺 高剂量组与传统工艺高剂量没有明显的区别。
[0087] 结论:微波加热是通过水对微波能的吸收作用，进行选择性加热，利用微波能使植 物细胞中的水分或有机溶剂迅速升溫，升压，细胞壁穿孔，从而把提取物从细胞中溶出。而 传统提取方法则是通过胞内外溶液浓度差和渗透压差使成分透过半透膜的方式溶出。传统 的加热提取，由于传热速度慢，因此提取溶剂从室溫升高到提取溫度所需时间长，易造成丹 酪酸B等热敏性物质在逐渐的加热过程被分解。
[0088] 微波提取后的综合有效成分含量为45.392mg · g-i，高于传统提取;微波工艺、传统 工艺都能降低显著的降低血清中CK、LDH的水平;对ISO诱导的屯、肌缺血大鼠屯吨图、T波高 度、组织病理改变的影响没有显著性差异；能显著的降低反应自由基MDA水平，升高自由基 清除剂SOD水平，减少内皮细胞的损伤，抑制血栓的形成，也减轻了生物膜的损伤。
[0089] 因此，两种工艺所得的丹参提取物在有效成分、药效相同的提前条件下，微波提取 用时仅为传统提取1/4,提取效率高、耗时较短，大大降低了能耗，节约了生产成本，为微波 提取在工业化生产中的推广应用具有较大的实用价值。
[0090] 与现有技术相比，本发明所述的丹参微波提取工艺制成的丹参提取物，丹参中的 有效成分没有变性。本发明工艺还具有高效、节能、无污染、高选择性等优点。
【附图说明】
[0091] 图1是不同提取工艺对急性屯、肌缺血模型大鼠屯、电图；（a:空白组屯、电图，b:模型 组屯、电图，C:阳性西（消屯、痛)组屯、电图，d:本发明工艺高剂量组，e:传统工艺高剂量组，f: 本发明艺低剂量组，g:传统工艺低剂量组）；
[0092] 图2对ISO诱导的屯、肌缺血大鼠屯、肌组织病理学图；（a:空白组，b:模型组，C:传统 工艺低剂量组，d:本发明工艺低剂量组，e:阳性中组，f:阳性西，g:传统工艺高剂量，h本发 明工艺高剂量组）。
【具体实施方式】
[0093] 实施例1:
[0094] -种丹参的微波提取工艺，取丹参，粉碎，加水，微波提取，提取功率为600W，提取 时间为25min，固液比为1:12，浓缩，即得。
【主权项】
1. 一种丹参的微波提取工艺，其特征在于:取丹参，粉碎，加水，微波提取，浓缩，即得。2. 如权利要求1所述的丹参的微波提取工艺，其特征在于：微波提取时，提取功率为 500-70013. 如权利要求2所述的丹参的微波提取工艺，其特征在于:提取功率为600W。4. 如权利要求1所述的丹参的微波提取工艺，其特征在于:微波提取时，提取时间为20-30min〇5. 如权利要求4所述的丹参的微波提取工艺，其特征在于:提取时间为25min。6. 如权利要求5所述的丹参的微波提取工艺，其特征在于：微波提取时，固液比0.5-1.1:10-14。7. 如权利要求6所述的丹参的微波提取工艺，其特征在于：固液比为1:12。
【文档编号】A61K36/537GK105878375SQ201610304846
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年5月10日
【发明人】张永萍, 徐剑, 杨立勇, 缪艳燕, 刘耀
【申请人】贵阳中医学院