一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的蒲黄提取物及其制剂和制备方法

专利名称：一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的蒲黄提取物及其制剂和制备方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体地是涉及一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的蒲黄提取物及其制剂和制备方法。
背景技术：
急性胰腺炎(Acute Pancreatitis，缩写为AP)为临床常见的急腹症之一，其发病率逐年上升。其中85％以上为水肿型AP，发达国家(日本、西欧)的发病率高于不发达国家的，其病因及发病机理尚未完全明确。AP的治疗是近年来普外科研究的重点和难点，也是研究的热门课题。
根据《2002年世界胃肠病大会急性胰腺炎诊治指南》，认为“对AP的治疗，目前还没有公认的特效药物”。
心脑血管疾病是目前人类疾病死亡的头号杀手，其致病机理多年来人们进行了深入研究，但到目前为止，仍未彻底研究清楚。随着社会的进步，人们生活水平逐步提高，其发病率呈逐年快速上升趋势。
蒲黄系香蒲科植物狭叶香蒲、长苞香蒲等的干燥花粉，性味甘平无毒，归肝、心包二经，为临床常用的活血化瘀药。公元17世纪，元朝罗天益用蒲黄五灵脂治疗“心气痛不可忍”，效果卓越，该方也就成为中药名方，命名为“失笑散”。《本草纲目》记载“蒲黄性甘平，利小便......止心腹诸痛。”近年来对蒲黄进行了一系列现代研究表明蒲黄中含有异鼠李素，槲皮素、柚皮素、山奈黄素及其甙等黄酮类成分，香草酸、原儿茶酸、反式对羟基肉桂酸，琥珀酸，对羟基苯甲酸性成分以及6-氨基嘌呤、三十一烷醇，β-谷甾醇，还含有赖氨酸等十几种氨基酸等，其中异鼠李素有强心、利尿、消肿、提高心肌C-AMP水平，抗血栓形成等作用，槲皮素有解痉、抗炎、抗过敏、抗菌等活性。
蒲黄具有抗菌、抗过敏、消肿、改善微循环、抗动脉粥样硬化，抗血栓形成等作用。体外试验证明其具有促进动脉内皮细胞合成PGI2(前列环素)，降低TXA2/PGI2的比值(TXA2为血浆血栓素)，使之恢复正常，据认为该比值异常是胰腺血流损伤和病理过程加重的重要因素。许多专家指出氧自由基引起的脂质过氧化在急性胰腺炎发病过程中起重要作用，蒲黄含有多种黄酮类化合物，后者具有较强的抗脂质过氧化作用；最新研究表明，胰腺炎的发生和发展与微循环因素有极其重要的联系，而蒲黄具有显著改善微循环的作用；近年苏州医学院又从蒲黄中分离纯化了有改善微循环作用的纤维蛋白溶介酶，国内又有报道其中所含香草酸能使血小板不可逆聚集发生解聚作用。同时，国内外不少研究也发现蒲黄水提部分B对心脑血管疾病的治疗可能有较好的作用。

发明内容
由于目前临床尚缺乏治疗AP公认的中药治疗药，研究其治疗药物在临床上很有意义。从继承和发展祖国医药学的角度来看也很有意义，虽然近年来西药抑肽酶(广谱蛋白酶抑制剂)取得较好疗效，但一则该药需要进口，应用地区受到很大限制；二则药费高昂，给患者带来沉重负担。丞需研发新药，满足临床应用。根据我们的研究，发现蒲黄的有效成分对胰腺炎治疗有较好作用；而以该有效成分制成的蒲黄注射液本身具有三个特点1活性部位明确，疗效肯定，其中总黄酮及总有机酸具有抗菌、抗炎、消肿、解痉、止血、改善微循环，抗血小板聚集，抗脂质过氧化、促进动脉内皮细胞合成PGI2(前列环素)，保护血管内皮细胞、调节免疫、对水肿型AP动物有降低血清淀粉酶、减轻病理改变等作用，经反复进行药理试验均证明其对水肿型AP有效。2资源丰富，价廉易得，工艺不复杂，成本低，相当用量的抑肽酶180元/支，而蒲黄注射液成本不足15元。3为静脉注射剂，见效快，可提供一个治疗AP的中药急症用药。同时利用蒲黄提取的活性部位还可以制备成多种剂型药物，供临床应用。
蒲黄注射液治疗水肿型AP具有疗效肯定，起效快，符合临床禁食治疗的原则，并有药源丰富、价格低廉、无明显毒副作用等特点，可填补中草药注射剂治疗AP领域的空白，开发前景广阔，在发展祖国医学的理论与实践、提供新的治疗手段、减轻病人负担、发展经济等方面均有重大意义。
本发明的目的在于提供一种治疗急性胰腺炎和脑血管疾病的蒲黄提取物及其制剂和制备方法，本发明的一种治疗急性胰腺炎和脑血管疾病的制剂是由中药蒲黄提取物(活性部位)和药学上可接受的载体或赋形剂组制成的，该制剂可以是药剂学上可以接受的任何剂型，包括注射液、粉针剂、冻干粉针剂、输液剂、软胶囊、胶囊、片剂、缓释片剂及颗粒剂。
本发明的制备方法包括蒲黄提取物的提取方法和制剂的制备方法。
蒲黄提取物的提取包括下述步骤A、取蒲黄加1-3倍量(以蒲黄重量计)60-80％(V/V)乙醇浸泡8-24小时后，每次加8-12倍量(以蒲黄重量计)的60-90％(V/V)乙醇加热回流提取2-4次，每次1.5-3小时，趁热过滤，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.2-1.3(55±5℃)；B、浓缩液2-4℃冷藏8-12天，使分层；C、将上层油状物水洗，分层，水层浓缩，与下层合并，得浸膏I；D、浸膏I加10-20倍量(以浸膏I体积计)水溶解、煮沸、过滤、浓缩至相对密度为1.10，得浸膏II；E、浸膏II加8-12倍量(以浸膏II体积计)95％乙醇充分搅拌，滤过，反复二次，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.20，得浸膏III；F、浸膏III加10-20倍量(以浸膏III体积计)水溶解、煮沸、滤过，滤渣用2-4倍量水洗，滤液浓缩至相对密度为1.10，得浸膏IV；G、浸膏IV在水中通过聚酰胺交换柱，水洗至近无色，Mg粉-HCL反应(+)，弃去水洗液，以40-70％乙醇洗脱至Mg粉-HCL反应(-)，合并乙醇洗脱液，减压回收乙醇，蒸干，得浸膏粉；H、浸膏粉加10-20倍量(以浸膏粉重量计)水煮沸50min(补充损失的水)，2-4℃冷藏10-24hr，过滤，反复二次，滤液蒸干，浸膏100℃烘干、粉碎，得蒲黄活性部位提取物的棕黄色粉末。
上述步骤A蒲黄浸泡乙醇用量优选为2倍量(以蒲黄重量计)，乙醇浓度优选为65-75％，浸泡时间优选为10-14h；回流用乙醇浓度优选为65-75％，乙醇用量优选为8-10倍量(以蒲黄重量计)，回流提取2-3次，每次2-2.5小时。滤液浓缩至相对密度优选为1.23-1.26(55±5℃)。
步骤B中，浓缩液冷藏时间优选为9-11天。
步骤D中，溶解浸膏I的用水量优选为13-16倍(以浸膏I体积计)。
步骤E中，溶解浸膏II的乙醇用量优选为8-10倍(以浸膏II体积计)。
步骤G中，洗脱乙醇浓度优选为45-55％。
步骤H中，冷藏时间优选为10-14h。
本发明蒲黄提取物制剂的制备A、注射液的制备取蒲黄提取物，溶于注射用水中，搅拌使溶解，煮沸50min(补充损失的水)，2-4℃冷藏12hr，过滤，重复煮沸、冷藏、过滤步骤二次，加注射用水至1000ml，每毫升溶液中含蒲黄提取物3.5mg调节PH至6-8，滤过，4号垂熔漏斗滤过或超滤(半成品质量检查、调节含量)，滤液灌装，每安瓿10-100ml，充氮、熔封、100℃45min灭菌、灯检、漏气检查、印字、包装，即得。
B、粉针剂的制备取蒲黄提取物，溶于500ml注射用水中，搅拌使溶解，煮沸50min(补充损失的水)，2-4℃冷藏12hr，过滤，煮沸冷藏重复二次，加入适量药用辅料，溶解后加注射用水至1000ml，调节PH至6-8，滤过，4号垂熔漏斗滤过或超滤(半成品检查、调节含量)，滤液经喷雾干燥，密闭冷却24h，按规定量无菌分装于西林瓶中，每瓶折合含蒲黄提取物30-100mg，扎盖、包装即得。
C、冻干粉针剂的制备冻干粉针剂制备过程与粉针剂制备过程基本相同，调节溶液中蒲黄提取物浓度为30-50mg/ml，经超滤后，滤液分装于安瓿瓶或西林瓶中，每安瓿装量1ml，每西林瓶装量2ml，冷冻干燥，每安瓿折合含蒲黄提取物30-50mg；每西林瓶折合含蒲黄提取物60-100mg；熔封或扎盖包装即得。
D、软胶囊的制备取蒲黄提取物适量备用。按规定量取食用油和蜂蜡，加热至蜂蜡完全溶解，冷却至40-50℃，加入蒲黄提取物，胶体磨研磨，用常规软胶囊压制法或注射液成型法制备软胶囊，1000粒，每粒胶囊内含蒲黄提取物35mg，检验合格，包装即得。
E、片剂、胶囊剂、颗粒剂、缓释片剂的制备均按常规工艺制备，每片、或每颗胶囊中含蒲黄提取物35mg；颗粒剂每小袋为1g，含蒲黄提取物100mg；经检验合格后，包装即得。
本发明的蒲黄提取物注射剂型的PH值优选为7.0-7.5，最优选择为7.2。
本发明的一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的蒲黄提取物制剂具有很好的治疗效果。以下通过本发明的一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的中药制剂的注射液药学试验对本发明作进一步说明。
1 动物模型的制作参照文献方法，动物在禁食、戊巴比妥钠麻醉下无菌开腹，经十二指肠主胰管，逆行加压注射生理盐水(1ml/kg)制成轻型急性胰腺炎模型，麻醉维持8-12小时，其间滴注1％葡萄糖盐水500ml，次日给予流汁，以后逐步改为普通食。
2 给药方法动物手术后4小时将蒲黄注射液1ml/kg与500ml 5％葡萄糖盐水混合滴注，手术后1天开始将同样剂量的药物进行推注，每日一次，连续给药六天，对照组静脉注射等体积生理盐水。
3 血清淀粉酶测定手术前、手术后1、3、7天分别采血用碘比色法测定血清淀粉酶活力，结果见表1。
表1不同供试品对狗急性胰腺炎血清淀粉酶的影响

实验小结1 实验结果表明手术后所有动物均发生急性胰腺炎。
2 静脉注射蒲黄注射液能抑制狗急性胰腺炎血清淀粉酶的升高。实验结果提示本发明的一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的中药制剂对急性胰腺炎具有较好的治疗效果。
本发明的一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的蒲黄提取物及其制剂和制备方法中的注射液对大鼠大脑中动脉栓线法局灶性脑缺血再灌注损伤模型的治疗作用。
1 方法将大鼠用10％的水合氯醛3ml/kg腹注(ip)麻醉，颈正中切口、分离、结扎右侧颈总动脉、颈外动脉及其分支动脉。分离右侧颈内动脉，沿颈内动脉向下分离翼颈动脉，根部结扎该分支。在颈内动脉近端备线、远端放置动脉夹，颈总动脉分叉处切口，插入4-0尼龙线，深度为17-20mm，栓线进入颈内动脉，入颅至大脑前动脉，阻断大脑中动脉所有血流来源。撤掉动脉夹，扎紧备线，外留1cm长线头。缝合皮肤。缺血1h后静脉注射(iv)给药或生理盐水。缺血2h后再灌注，勿需再次麻醉和切开皮肤，轻轻提拉线头至有阻力时，提示尼龙线头端已至颈总动脉切口处，血流再通，假手术组除不插线外，其余步骤同上。存活鼠再灌注24h后，观察大鼠行为学变化，进行神经病学评分。
参考Zea Longa的5分制评分标准0分，无神经损伤症状1分，不能完全伸展对侧前爪
2分，向外侧转圈3分，向对侧倾倒4分，不能自发行走，意识丧失脑含水量测定神经病学评分后，快速断头取鼠大脑。一部分分别称左右脑半球湿重，置120℃烤箱烘干至恒重，按以下公式计算脑组织含水量，脑组织含水量(％)＝(湿重-干重)/湿重*100％。
脑梗塞范围的测定另一部分大鼠断头取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干后切成5片，以红四氮唑(TTC)染色。正常组织经染色后呈红色，梗塞组织呈白色。用图像分析仪计算梗塞组织重量占总脑重的百分比作为梗塞范围。
病理检查将TTC染色后的脑片置10％福尔马林中固定，经脱水、包埋、切片、染色等步骤制备组织切片，并用JEM1200-EX透射电子显微镜(日本电子)进行超微结构的观察。
观察指标及观察时间观察大鼠行为学、脑水肿、脑梗塞、组织形态学的变化。观察时间为再灌注后24小时。
数据及统计学处理实验数据用X±S表示，采用方差分析和Student t test进行显著性检验。
脑梗塞模型大鼠分组假手术组20只；模型(给予溶剂治疗)组20只本发明注射液iv小剂量组20只；本发明注射液iv中剂量组20只；本发明注射液iv大剂量组20只。
结果一般观察经过脑梗塞的大鼠麻醉清醒后即有偏瘫样症状出现。主要表现为不同程度的手术对侧前肢内收，肩内旋，肌张力降低，推右肩向对侧移动，抵抗阻力降低，甚至有些动物还出现不停地向一侧转圈现象。与模型组(生理盐水治疗)比较，术后模型组动物的一般状态较差，活动减少，大多数动物体重有所下降，而各治疗组动物一般状况均有明显的改善。
随机选取各实验组前8只大鼠进行神经病学评分，术后24h的行为评分，本发明各剂量治疗组均有明显低的行为学评分，统计分析有显著差异(P＜0.01)，结果见表2。iv本发明注射液高、中组大鼠与模型组比较，大鼠的行为障碍明显地改善，有些动物基本恢复正常。假手术组动物行为无异常，结果见表3。
表2本发明注射液对大鼠大脑中动脉梗塞后的神经病学评分影响(X±S)

与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.0001脑含水量从表3可以看出，各组大鼠未梗塞的左侧大脑的湿重，干重均无明显的差别；而对于梗塞的右侧脑组织，模型组脑含水量显著高于假手术组；本发明注射液大剂量组和中剂量组则显著低于模型对照组，而与假手术组接近，本发明注射液小剂量组的脑含水量虽有降低趋势，但与模型对照组相比无统计学意义。
表3脑梗塞大鼠脑含水量的比较(X±S，n＝8)

与假手术组比较，**P＜0.01；与模型组比较#P＜0.05，#P＜0.01。
大鼠脑梗塞范围的观察及本发明注射液对梗塞范围的影响由于TTC染色适合于脑缺血24-48h内检测脑梗塞情况，本实验是脑梗塞后24h利用TTC染色技术检查脑梗塞程度。由表4可以看出，脑缺血再灌注24h后脑组织梗塞程度明显，梗塞面积占总脑面积的36.68±10.51％。本发明注射液给药后，使脑梗塞面积百分比明显下降。假手术动物未见脑梗塞发生。
表4本发明注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用(X±S)

与模型组比较，**P＜0.01，***P＜0.001。
大鼠脑梗塞后组织形态学变化及本发明注射液的影响大鼠经脑梗塞术后24h，病灶侧脑表面苍白、无光，脑表面血管较对侧充血，血管数目也有所增多，位于嗅束和大脑下静脉之间的一段大脑中动脉颜色变暗。术后48h病灶侧脑组织水肿明显，随时间延长逐渐出现软化。在光镜下观察脑组织切片，可见大脑中动脉内有血栓形成，血栓成分主要是血小板、红细胞和纤维蛋白，表现为混合血栓的特征。脑组织主要呈缺血性改变，随时间延长，缺血软化灶范围和深度有所增加。假手术组无明显病理改变。
经本发明药物治疗后的动物，肉眼即可看见大脑中动脉较对照组动物红润，组织切片示血栓明显减轻甚至完全溶解。脑组织缺血程度减轻，只有小片软化灶。各实验组大脑组织病理学改变如下假手术组神经元及脑实质细胞结构基本正常，细胞核未见肿胀，核仁清楚，虎斑清晰可见，细胞周围间隙略扩大，毛细血管内有轻微充血，呈轻度变性水肿改变。
模型(生理盐水)组左侧大脑半球结构基本正常，呈轻度水肿改变；右侧见神经元及脑实质细胞周围间隙明显扩大，细胞核肿胀明显，核仁模糊，脑实质内有出血，毛细血管周围间隙扩大，成变性、坏死、出血改变。
本发明注射液(2.92mg/kg)组左侧脑细胞结构未见异常，细胞周围间隙略增大。神经元及脑实质细胞、毛细血管周围间隙略增大，细胞轻度水肿，核仁不清，毛细血管内有充血，周围间隙增大，呈变性，水肿改变。
本发明注射液(5.83mg/kg)组左侧脑细胞结构未见异常，细胞周围间隙略增大，呈轻度变形改变。右侧神经元及脑实质细胞、毛细血管周围间隙略增大，神经元细胞核轻度肿胀，核仁不见，可见较多胶制细胞增生，呈变性，水肿改变。
本发明注射液(11.66mg/kg)组左侧脑细胞结构未见异常，细胞周围间隙略增宽，呈轻度变形改变。右侧神经元及脑实质细胞、毛细血管周围间隙略增大，神经元细胞核轻度肿胀，核仁清楚，可见较多胞质细胞增生现象。呈变性，水肿改变。
大鼠脑梗塞后超微结构的观察
假手术组细胞结构清晰，可见完整的神经元轴突，核膜完整，染色质分布均匀，线粒体，高尔基体及粗面内质网清晰可见。
模型(生理盐水)组细胞肿胀，细胞器数量变少，染色质凝聚，高尔基体池扩大，空泡变，粗面内质网，线粒体肿胀，线粒体嵴紊乱，结构不清，周围间隙扩大。
本发明注射液(2.92mg/kg)组缺血、再灌注损伤较重，核内染色质溶解。
本发明注射液(5.83mg/kg)组水肿程度稍重，染色质凝聚，粗面内质网，高尔基体及线粒体均有不同程度的肿胀。
本发明注射液(11.66mg/kg)组水肿程度较轻，细胞大致结构存在，粗面内质网及线粒体均有肿胀，线粒体嵴消失。
本发明的一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的蒲黄提取物制剂对大鼠冠状动脉结扎心肌缺血的影响。
方法体重200-300g Wistar种大鼠，雌雄各半，随机分4组，分别灌服本发明的中药制剂颗粒剂(以蒲黄总黄酮计)25、50、100mg/kg、FDS 100g/kg和同容积生理盐水(简称NS)，每天1次，连续给药7天，末次药后1小时，用600mg/kg乌拉坦腹腔注射麻醉，背部固定，测标准II及V3导联心电图为梗塞前心电图。开胸后，用医用无损伤缝合针(5个零号线)，在肺动脉圆锥与左心耳根部之间向下约1.5mm处，穿线结扎冠状动脉，造成急性心肌梗塞，迅速关胸。梗塞后1小时测定心电图，取心电图有明显心肌缺血改变者实验用。于梗塞后8小时同前灌服药物1次，24小时测定心电图后，由眼眶静脉丛取血，测定血清肌酸磷酸激酶和乳酸脱氢酶含量，用红细胞电泳仪测定红细胞电泳速度，然后处死大鼠，摘取心脏，放-20℃冰箱中冷冻30分钟，沿冠状动脉剪取心室，将心室横向切成5片、放N-BT液中38℃水浴保温15分钟，将各片心肌非兰染区(梗塞区)切下，称湿重，计算与心室重之比为心肌梗塞范围。
结果1 对心肌梗塞范围的影响NS组心肌梗塞范围为14.79％，给药各组梗塞范围显著减小(P＜0.01)(见表5)。表明本发明的蒲黄提取物制剂有显著缩小心肌梗塞范围的作用，同时看到随剂量增加作用增强的量效关系。
表5蒲黄颗粒剂对结扎冠状动脉大鼠梗塞范围的(X±SD)

与NS组比较**P＜0.012 对肌酸磷酸激酶、乳酸脱氢酶水平的影响。
测定给药组血清肌酸磷酸激酶、乳酸脱氢酶水平与NS组比较均有显著性差异(P＜0.001)，实验证明，蒲黄颗粒剂具有显著降低肌酸磷酸激酶和乳酸胶氢酶含量，表明该药能显著降低心肌损伤，改善心肌无氧代谢和改善血液流变学。
表6蒲黄颗粒剂对结扎冠状动脉大清肌酸磷酸激酶、乳酸脱氢酶水平的影响(X±SD)

与NS组比较**P＜0.013 对心和心电图的影响测定心肌梗塞前后II导联心电图计算心率变化；测定V3导联心电图T波高度变化，以梗塞前后T波高度差值进行统计，结果各组大鼠梗塞前后心率变化不明显(见表7)，NS组梗塞后略有增加，给药各组梗塞后1小时心率略有降低，24小时基本恢复正常，梗塞前后心率变化均无显著性差异(P＞0.05)；NS组梗塞后心电图T波明显增高，给药各组心电图T波抬高均明显减小(见表7)，表明该药对心率无明显影响，但能明显改善心肌梗塞所致的缺血性心电图。
表7蒲黄颗粒剂对结扎冠状动脉大鼠心电图T波的影响(X±SD)

二 对小鼠耐缺氧的影响方法体重18-22g昆明种小鼠60只，雌雄各半，随机分5组，分别灌服DA 100g/kg、本发明的蒲黄提取物制剂颗粒剂(以蒲黄提取物计)100、50、25mg/kg和同容积NS，每天1次，连续给药7天，末次给药后1小时，im 10u的异丙肾上腺素后将小鼠放置250ml广口瓶内，瓶内放15g钠石灰，一瓶只放一只小鼠，观察记录动物存活时间。
结果NS组动物存活时间为29.4分钟，给药各组存活时间均延长了11分钟(见表8)，与NS组比较高中低剂量组有显著差异(P＜0.01)。本发明的中药制剂蒲黄提取物颗粒剂有明显耐受缺氧、降低氧代谢的作用。
表8蒲黄颗粒剂对小鼠耐缺氧的影响(X±SD)


与NS组比较**P＜0.01三 对大鼠血栓形成的影响方法体重250-300g小鼠，雌雄各半，随机分5组，每组8只，分别灌服DA 100g/kg，本发明的中药制剂颗粒剂(以蒲黄总黄酮计)100、50、25mg/kg和同容积NS，每天给药1次，连续7天，末次给药后30分钟，以乌拉坦腹腔注射麻醉，分离右颈总动脉和左颈外静脉，用颈动脉-颈外静脉血管旁路法进行血栓形成实验(参考《中药药理研究方法学》)，在开放血流15分钟后取出丝线，称量血栓湿重。比较在各药物作用下血栓重量。
结果NS组血栓湿重19.1mg，DA、本发明的蒲黄提取物颗粒剂三个剂量组血栓湿重明显下降(见表9)，血栓形成抑制率分别为45.5％、30.9％和27.7％(P＜0.01)，表明该药具有显著抑制血栓形成的作用。
表9蒲黄颗粒剂对大鼠血栓形成的影响(n＝10，X±SD)


与NS组比较**P＜0.01结论通过结扎大鼠冠状动脉致心肌缺血的模型结果表明100、50、25mg/kg，本发明的一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的蒲黄提取物制剂可显著缩小心肌梗塞面积，对缺血性心电图的改变有明显保护作用，可明显降低该心肌缺血大鼠血清肌酸磷酸激酶(LDH)和乳酸脱氢酶(CK)水平。200、100mg/kg能显著延长小鼠缺氧存活时间、具有耐缺氧作用。实验还证明，该药可显著抑制血栓形成，表明该药经口服给药具有显著活血化瘀作用。综上结果可见本发明的一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的蒲黄提取物制剂对心肌缺血有明显的防治作用。
药理学研究表明，本发明的一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的蒲黄提取物制剂，静脉注射小鼠LD50为123.03mg/kg；口服给药LD50为1.5g/kg。提示在治疗剂量下，对人是安全的。
下面通过实施例对本发明的一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的蒲黄提取物制剂及其制备方法作进一步说明。但本发明决不只限于实施例的范围。
实施例1
取蒲黄加2倍量70％乙醇浸泡12小时，每次加9倍量70％乙醇加热回流提取3次，每次2小时，趁热过滤，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.25(55±5℃)，2-4℃冷藏10天，使分层，上层油状物水洗，分层，水层浓缩，与下层合并，下层浸膏加15倍量水溶解、煮沸、过滤、浓缩至相对密度为1.10得浸膏I，浸膏加9倍量95％乙醇充分搅拌，滤过，反复二次，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.20得浸膏II，浸膏II加15倍量水溶解、煮沸、滤过，滤渣用2倍量水洗，滤液浓缩至相对密度为1.10得浸膏III，浸膏III在水中通过聚酰胺交换柱，水洗至近无色，Mg粉-HCL反应(+)，弃去水洗液，以50％乙醇洗脱至Mg粉-HCL反应(-)，合并乙醇洗脱液，减压回收乙醇，蒸干得浸膏IV，浸膏IV加15倍量水煮沸50min(补充损失的水)，2-4℃冷藏12hr，过滤，反复二次，滤液蒸干，粉碎，得蒲黄有效部位提取物的棕黄色粉末。
取蒲黄提取物3.5g，溶于500ml注射用水中，搅拌使溶解，煮沸50min(补充损失的水)，2-4℃冷藏12hr，过滤，煮沸冷藏重复二次，加注射用水至1000ml，调节PH至7.2，滤过，4号垂熔漏斗滤过或超滤(半成品质量检查、调节含量)，滤液灌装，每安瓿10ml，充氮、熔封、100℃ 45min灭菌、灯检、漏气检查、印字、包装，即得本发明的蒲黄提取物制剂的注射液。
取蒲黄提取物70g，溶于500ml注射用水中，搅拌使溶解，煮沸50min(补充损失的水)，2-4℃冷藏12hr，过滤，煮沸冷藏重复二次，加入适量药用辅料，溶解后加注射用水至1000ml，调节PH至7.2，滤过，4号垂熔漏斗滤过或超滤(半成品检查、调节含量)，滤液经喷雾干燥，密闭冷却24h，按规定量无菌分装于西林瓶中，每瓶含蒲黄提取物30-50mg，扎盖、包装即得蒲黄粉针剂。
冻干粉针剂制备过程与粉针剂制备过程基本相同，经超滤后，调整溶液中蒲黄提取物含量为30-50mg/ml，滤液分装于安瓿瓶或西林瓶中，每安瓿装量1ml，每西林瓶装量2ml，冷冻干燥，熔封或扎盖包装即得蒲黄冻干粉针剂。
取蒲黄提取物35g备用。按规定量取食用油和蜂蜡，加热至蜂蜡完全溶解，冷却至40-50℃，加入蒲黄提取物，胶体磨研磨，用常规软胶囊压制法或注射成型法制备软胶囊，每粒胶囊含蒲黄提取物35mg。检验合格，包装即得蒲黄软胶囊。
片剂、胶囊剂、颗粒剂、缓释片剂均按常规工艺制备，片剂每片或每颗胶囊中含蒲黄提取物35mg；颗粒剂每小袋为1g，含蒲黄提取物100mg，经检验合格后，包装即得。
实施例2取蒲黄，加入3倍量65％乙醇浸泡10hr，加入8倍量75％乙醇回流提取3次，第一次2hr，第二次、第三次每次1.5hr，趁热过滤，合并滤液，减压回收乙醇至相对密度为1.25，2-4℃冷藏10-11天，分层；上层油状物水洗，水层浓缩至相对密度为1.25后与下层合并，加入浸膏体积15倍量水煮沸，过滤；浓缩至相对密度为1.10；向浓缩液中加入9倍量95％乙醇搅拌，滤过；重复乙醇浸提步骤2次，合并3次滤液，滤液减压浓缩，回收乙醇，得浸膏；加入浸膏体积15倍量水，煮沸、溶解，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.10；将浓缩液带水上AB-8大孔吸附树脂柱，用水洗脱至洗脱液近无色，用50％乙醇洗脱，至Mg粉-HCL反应(-)，洗脱液减压回收乙醇，水浴蒸干，得洗脱液浸膏；向浸膏中加入20倍量水煮沸50min，2-4℃冷藏，过滤；重复煮沸、冷藏，过滤一次，滤液蒸干，粉碎得蒲黄提取物深棕黄色粉末。
制备本发明的一种治疗急性胰腺炎、心脑血管疾病的蒲黄提取物制剂的制备方法同实施例1。
权利要求
1.一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的蒲黄提取物，它是通过以下方法得到的A、取蒲黄，加1-3倍蒲黄重量的60％-80％乙醇浸泡8-24 hr后，每次加8-12倍蒲黄重量的60％-90％乙醇，加热回流提取2-4次，每次1.5-3hr，趁热过滤，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至55±5℃时相对密度为1.2-1.3；B、浓缩液于2-4℃冷藏，使分层；C、将上层油状物水洗，分层，将水层浓缩至55±5℃时相对密度1.2-1.3，将浓缩液与步骤A中的水层合并，得浸膏I；D、向浸膏I中加入浸膏I体积的10-20倍量的水，溶解、煮沸、过滤、浓缩至相对密度为1.10，得浸膏II；E、向浸膏II中加8-12倍浸膏II体积的95％乙醇，充分搅拌，溶解，滤过，滤液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度1.20，得浸膏III；F向浸膏III中加10-20倍浸膏III体积的水，溶解、煮沸、过滤，滤渣用2-4倍滤渣重量的水洗，滤液浓缩至相对密度为1.10，得浸膏IVG、将浸膏IV在水中通过树脂交换柱吸附，水洗至近无色，Mg粉-HCL反应(+)，弃去水洗液，以40％-70％乙醇洗脱至Mg粉-HCL反应(-)，合并乙醇洗脱液，减压回收乙醇后蒸干，得浸膏粉；H、向浸膏粉中加入其重量10-20倍量的水，煮沸50min，于2-4℃冷藏10-24hr，过滤；重复本步骤操作二次，合并滤液；滤液蒸干，粉碎，得有效部位蒲黄提取物的棕黄色粉末。
2.根据权利要求1所述的蒲黄提取物，其特征在于步骤A中蒲黄浸泡的乙醇用量为蒲黄重量2倍量。
3.根据权利要求1所述的蒲黄提取物，其特征在于步骤A中乙醇浓度为65％-75％，浸泡时间为10-14hr，回流用乙醇浓度为65％-75％，乙醇用量为8-10倍量，回流提取次数为2-3次，回流时间为每次2-2.5hr；滤液浓缩至相对密度为1.23-1.26。
4.根据权利要求1所述的蒲黄提取物，其特征在于步骤B中浓缩液冷藏时间为9-11天。
5.根据权利要求1所述的蒲黄提取物，其特征在于步骤D中溶解浸膏I的用水量为13-16倍。
6.根据权利要求1所述的蒲黄提取物，其特征在于步骤E中，溶解浸膏II的乙醇用量为8-10倍。
7.根据权利要求1所述的蒲黄提取物，其特征在于步骤F中，溶解浸膏III的水用量为14-16倍。
8.根据权利要求1所述的蒲黄提取物，其特征在于步骤G中，洗脱乙醇浓度为45％-55％。
9.根据权利要求1所述的蒲黄提取物，其特征在于步骤H中，冷藏时间为10-14hr。
10.根据权利要求1-9任一所述的蒲黄提取物，其特征在于所述树脂是聚酰胺或大孔吸附树脂AB-8中的一种。
11.一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的蒲黄提取物制剂，其特征在于它是由权利要求1-10任一所述的蒲黄提取物和任意药剂学上可接受的载体或赋形剂制成的。
12.根据权利要求11所述的制剂，其特征在于它可以是片剂、分散片剂、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、注射液、粉针剂、或冻干粉针剂。
13.权利要求12所述的注射液制剂的制备方法，其特征在于取权利要求1-10所述的任一蒲黄提取物溶于注射用水中，煮沸50min，补充损失的水量，2-4℃冷藏12hr后过滤，重复煮沸、冷藏、过滤，加注射用水，调PH至6-8，过滤后，滤液经4号垂熔漏斗滤过或超滤，调节至蒲黄提取物含量为3-5mg/ml，无菌灌装，每安瓿10-100ml，充氮、熔封或轧盖、100℃45min灭菌。
14.权利要求12所述的粉针剂的制备方法，其特征在于取权利要求1-10所述的任一蒲黄提取物溶于注射用水中，煮沸50min，补充损失的水量，2-4℃冷藏12hr后过滤，重复煮沸、冷藏、过滤一次，滤液中加入注射用水溶性药用辅料适量，加注射用水；调节PH至6-8，过滤后，滤液经0.2um微孔滤膜超滤，调节至蒲黄提取物含量为3-5mg/ml，喷雾干燥，密闭冷却，无菌分装。每瓶含蒲黄提取物30-50mg。
15.权利要求12所述的冻干粉针剂的制备方法，其特征在于取权利要求1-10所述的任一蒲黄提取物溶于注射用水中，煮沸50min，补充损失水量，2-4℃冷藏12小时后过滤，重复煮沸。冷藏、过滤一次，滤液中加入注射用水溶性药用辅料适量，调节PH为6-8，过滤后，滤液经0.2um微孔滤膜超滤，调节蒲黄提取物含量为30-50mg/ml，无菌分装于安瓿或西林瓶中，每安瓿1ml，每西林瓶2ml，冻干即得。
16.权利要求12所述的软胶囊制剂的制备方法，其特征在于适量食用油和蜂蜡，加热完全溶解，冷却至40-50℃，将权利要求1-10所述的任一蒲黄提取物加入，胶体磨研磨后，用常规软胶囊压制工艺或注射成型工艺制备软胶囊。
17.根据权利要求13、14或15所述的制备方法，其特征在于PH为7.0-7.5，更优选择为7.2。
全文摘要
本发明涉及到一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的蒲黄提取物及其制剂和制备方法，该制剂是由蒲黄中提取的有效部位为活性成分和任意药学上可接受的载体或赋形剂制备而成，其剂型是药剂学上所有可以接受的剂型，本发明还涉及到一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的蒲黄提取物制剂的制备方法，包括从蒲黄中提取有效部位和以蒲黄有效部位提取物为活性成分制备不同剂型制剂的方法。药效学研究表明，本发明的一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的蒲黄提取物制剂对急性胰腺炎模型动物具有良好的治疗作用；对心脑血管疾病模型动物有极佳的治疗效果，提示本发明药物是一种治疗急性胰腺炎和心脑血管疾病的有效药物。
文档编号A61K9/48GK1528331SQ20031010192
公开日2004年9月15日 申请日期2003年10月13日 优先权日2003年10月13日
发明者张晴龙 申请人:张晴龙