专利名称：一种中国冬虫夏草真菌的生产方法
技术领域：
本发明涉及一种中国冬虫夏草(Ceordyceps sinensis sp.)无性型菌(Hirsutella sp.)的工业发酵生产方法。
背景技术：
中国专利ZL97110448.4公开了一种“中国冬虫夏草真菌的发酵生产方法”，该方法是将菌种植入液体培养基置于摇床上，温度12-20℃，培养8天，然后植入一级种子罐，温度12-20℃，发酵6-8天，然后以培养基量的10倍扩大，逐级发酵，直至达到所需要的量，出罐过滤而成；发酵过程均在液体培养基中进行，培养基为碳原0.5-5％，氮原0.2-5％，微量元素、维生素少许，其余为水份。该方法实现了中国冬虫夏草真菌的规模工业化生产，生产成本低，生产速度快。用该方法生产的产品具有治疗各种虚症以及器官移植手术后的抗排异作用，对人体内分泌有双向调节作用，与天然冬虫夏草的作用极为接近。
然而，随着生产的不断延续，真菌的一代代的繁殖，产品也在不断地发生着变异第一，种上的变异。由于在冬虫夏草上除了中国冬虫夏草真菌外还伴生着数十种不同的真菌，只要在培养基、营养、温度、消毒、分菌材料等条件上，稍不适合就会生长出完全不同的其它真菌种，工业生产不可能完全模拟冬虫夏草生产的自然条件。所以，随着生产的不断延续，菌种一代代转接，选择生长较快的扩大生产，传代越多，时间越长，虫草原有的种性就会慢慢地发生变异，产品的品质会越来越差。第二，即使“种”没有变，但其固有菌种特性也会逐渐变异。由于冬虫夏草原本是生长在高海拔地区(海拔3000米-5200米)，气温很低，其主产区7月份5cm的地温在10℃以下，一年有8个月是冻冰期。而工业化生产，为了使冬虫夏草真菌长得快、产量高，通常是在16-18℃的培养液中培养生产，使得其生长温度偏离了其天然的生长温度，而且为了降低成本，培养液通常也是选用真菌菌丝长得好的培养液，而这种培养液的成份往往偏离冬虫夏草真菌寄主蝙蝠蛾的成分较远，造成生产用菌长期在不符合其原有生长发育需要的条件下培养，月月如此，代代相传，固有的菌种特性便逐渐变异，原有的药用作用就逐渐降低，以致丧失特有的药理作用。
在提取产品(菌丝)时，一般采用离心机绢纱袋过滤法，由于绢纱袋孔径大小不均匀，离心机高速转动导致部分菌丝流失，这是其一。其二，被过滤的菌丝紧贴在过滤袋上形成一层厚而坚实的菌片层，须要用手工撕成薄片，手工操作撕的菌丝片厚薄不均匀，导致烘烤干燥时受热和氧化不一致，影响产品的成份和色泽。其三，手工操作增加了产品的染菌机会。
发明的内容本发明的目的是克服上述不足，准备提供一种能不断修正和检验冬虫夏草真菌的真实品种不变和保持固有菌种特性，继而使得产品质量稳定，最终使产品的药效长期保持稳定的生产方法。
本发明的第二目的是要提供一种改进了的能提高产量，改善产品质量的菌丝提取和干燥方法。
本发明的技术方案是其特点是每年到产区分离新菌种，并利用该菌种曾在灭菌培养基上完成完整发育周期的特点，18℃培养，获得新分离菌种后，接入250毫升以上的三角瓶中，在10℃以下培养，以其能否生长出子座，作为检验菌种是否正确，能否用于生产的手段。已投产使用的菌种纯化和繁殖10代以上的，必须进行高营养低温传代的复壮培养，在培养温度为10℃以下的低温条件下繁殖5代以上，培养后生长出分生孢子和孢子梗与产区新分菌(能在三角瓶中形成子座并在菌落中生长)的分生孢子相比较要一样，才能继续用于生产。进行上述培养的培养基配方为(在水+牛肉汤+牛奶为1000克中)牛肉汤(1∶2)300-600克，水解乳蛋白5-10克，酵母粉1克，葡萄糖20-40克，牛奶100-200克，核酸0.5克，硫酸镁0.2克，磷酸氢二钾1克，复合维生素1克(VB1、VB2各1克+(硫胺素0.1+核黄素0.1+水100克))，琼脂粉15克，水400-500克，PH7.2。将经上述程序处理后的菌种植入液体培养，并置于摇床上，温度12-18℃，培养8天，然后植入一级种子罐，温度12-18℃，发酵6-8天，然后以培养基体积的10倍扩大，逐级发酵，直至第四级进入20-30吨的生产罐，出罐过滤而成。发酵过程均在液体培养基中进行。液体培养基为重量配比碳原0.5-5％，氮原0.5-2％，微量元素、维生素少许，其余为水份。
本发明的另一特点是在所述的发酵步骤完成后，将液体培养基(含菌丝)打入高位贮存罐中，按工作流量慢慢输入转鼓真空干燥机中将菌丝均匀地吸附在底部，由传送带徐徐通过15-20米长的烤干隧道，到出口时已失去70-80％的水分，用切片机切成约1公分长宽的菌片，再进行沸腾干燥，粉碎过筛而成产品。
本发明的优点及效果是首先，由于采用了每年到产区采集新菌，并对已用菌进行“复壮”的方法，并且培养其曾完成整个生长发育周期的创举，观察其发育特征能否生长出子座的办法，来检验菌种真伪及无性孢子特征来鉴定固有的遗传特性是否丧失，所以能不断地修正冬虫夏草真菌的品种真伪和“种性”特征，使产品质量保持稳定，使产品保持了稳定药用效果。其次，实践检验证明，用本发明的方法制造的产品始终保持着与天然冬虫夏草基本一致的作用，在治疗各种虚症，以及人体器官移植术后抗排异(特别是肾移植手术)后，该产品始终保持着与天然冬虫夏草一致的抗排异和解除服用环孢霉素等抗排异药引起毒害作用。而该产品价格却远远低于天然冬虫夏草，很受欢迎。最后，由于本发明采用了转鼓真空干燥法提取、干燥产品，所以菌丝收率提高约5-20％。质量更有较大的提高，颜色由原来的灰色和深褐色变为现在的棕黄色或深棕色，与天然虫草外表颜色一致，说明其氧化过程均匀，产品的品质更加接近天然冬虫夏草。
具体实施例方式
每年到产区分离新菌种，将该菌种进行有性和无性繁殖型发育周期的培养(即生长子座和分生孢子)，即18℃以下培养，获得新分菌后，接入500毫升三角瓶中，10℃以下培养，能生长出子座的菌种，证明是虫草菌，否则淘汰。已投产使用的菌种，纯化和繁殖10代以上的，必须进行低温和高营养固体培养基“复壮”，在10℃以下的低温条件下繁殖5代以上，在菌落中，生长出来的分生孢子和孢子梗要与在产区新分离的菌种，在三角瓶中生长了“子座”，同时在菌落中生长的分生孢子相比较要一样，，证明没有变异或变异不严重，仍可以作为生产用菌。
进行上述培养的培养基配方为(在水+牛肉汤+牛奶为1000克中)牛肉汤300克，水解乳蛋白5克，酵母粉1克，葡萄糖40克，牛奶200克，核酸0.5克，硫酸镁0.2克，磷酸氢二钾1克，复合维生素1克，琼脂粉15克，水500克，PH7.2。
将经上述程序处理后的菌种植入液体培养基并置于摇床上，温度12-18℃，培养8天，然后植入一级种子罐，温度12-18℃发酵6-8天，然后以培养基体积的10倍扩大，逐级发酵，直至第四级进入20-30吨的生产罐，发酵过程均在液体培养基中进行。液体培养基为(重量百分比)碳原0.5-5％，氮原0.5-2％，微量元素、维生素少许，其余为水份。然后将发酵后的液体培养基(含菌丝)送入转鼓真空干燥机中，菌丝便均匀沉淀在过滤器的底部，由传送带徐徐通过恒温烤干的隧道移动烘干，温度为60-80℃，菌丝受热均匀，氧化一致，到出口处已失去70-80％的水份，然后再经切片机切成约1公分大小的薄片，再进入沸腾干燥器快速干燥粉碎过筛而成产品。
实施例2培养能生长子座或分生孢子的培养基的配方为(在水+牛肉汤+牛奶为1000克中)加牛肉汤500克，水解乳蛋白10克，酵母粉1克，葡萄糖20克，牛奶100克，核酸0.5克，硫酸镁0.2克，磷酸氢二钾1克，复合维生素1克，琼脂粉15克，水400克，PH值为7.2。三角瓶用容积为250ml的三角瓶。其余步骤和条件与实施例1相同。
实施例3培养能生长子座或分生孢子的培养基的配方为(在水+牛肉汤+牛奶为1000克中)加牛肉汤400克，水解乳蛋白5克，酵母粉1克，葡萄糖30克，牛奶100克，核酸0.5克，硫酸镁0.2克，磷酸氢二钾1克，复合维生素1克，琼脂粉15克，水500克，PH值为7.2。其余步骤和条件与实施例1相同。
权利要求
1.一种中国冬虫夏草真菌的生产方法，其特征在于每年到产区分离新菌种，18℃培养，获得新菌种后接入三角瓶中，在10℃以下培养，以其能否生长出子座，作为检验菌种是否正确、能否用于生产的手段；已投产使用的菌种，纯化和繁殖10代以上的必须进行复壮培养，在培养温度为10℃以下的低温条件下繁殖5代以上，培养后生长出的分生孢子和孢子梗与产区能生长子座的新分菌的分生孢子相比较要一样，才能继续用于生产；进行上述培养的培养基配方为(在水+牛肉汤+牛奶为1000克中)牛肉汤(1∶2)300-500克，水解乳蛋白5-10克，酵母粉1克，葡萄糖20-40克，牛奶100-200克，核酸0.5克，硫酸镁0.2克，磷酸二氢钾1克，复合维生素1克，琼脂粉15克，水400-500克，PH值为7.2；将经上述程序处理后的菌种植入液体培养，并置于摇床上，温度12-18℃，培养8天，然后植入一极种子罐，温度12-18℃，发酵6-8天，然后以培养基体积的10倍扩大，逐级发酵，直至达到所需要的量，出罐过滤、干燥而成；发酵过程均在液体培养基中进行，液体培养基为重量百分比碳原0.5-5％，氮原0.5-2％，微量元素、维生素少许，其余为水分。
2.如权利要求1所述的一种中国冬虫夏草真菌的生产方法，其特征在于所述的复合维生素为维生素B1、维生素B2各1克，硫胺素0.1克，核黄素0.1克，水100克混合而成。
3.如权利要求1或2所述的一种中国冬虫夏草真菌的生产方法，其特征在于在所述的发酵步骤完成后，将液体培养基打入高位贮存罐中，按工作流量慢慢输入转鼓真空干燥机中，菌丝被均匀地吸附在低部，由传送带徐徐通过15-20米长的烤干隧道，到出口时已失去70-80％的水分，再用切片机切成约1厘米长宽的菌片，再进行沸腾干燥而成产品。
全文摘要
一种中国冬虫夏草真菌的生产方法，其特点是每年到产区分离新菌种，18℃培养，获得新菌种后接入三角瓶中，在10℃以下培养，以其能否生长出子座，作为检验菌种是否正确、能否用于生产的手段；已投产使用的菌种，纯化和繁殖10代以上的必须进行复壮培养，在培养温度为10℃以下的低温条件下繁殖5代以上，培养后生长出的分生孢子和孢子梗与产区能生长子座的新分菌的分生孢子相比较要一样，才能继续用于生产；然后进行逐级发酵生产。该方法能不断地修正本菌品种的“种性”特征，用该方法生产的的产品能保持稳定的药用效果和具有和天然冬虫夏草基本一致的作用。
文档编号A61K36/066GK1704469SQ20041003711
公开日2005年12月7日 申请日期2004年5月31日 优先权日2004年5月31日
发明者沈南英 申请人:沈南英