专利名称：人工培育无虫体虫草的新技术的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种人工培育无虫体虫草的新技术，属于用杂交冬虫夏草真菌感染大米固体培养基或琼脂、葡萄糖半固体培养基进行人工培育生长虫草的生物工程技术领域。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案为(1)培育杂交冬虫夏草真菌a.采集新鲜冬虫夏草，分离得到优良虫草菌株，其菌号为虫草拟青霉和虫草头孢霉；b.将虫草拟青霉和虫草头孢霉两个虫草菌株进行筛选、训化、培养，使其改变生理性能；
c.将虫草拟青霉和虫草头孢霉两个虫草菌株进行原生质体融合即杂交；d.采用健康细胞繁殖法，将健康细胞导入循环育种过程中，剔劣留优，培育出纯壮的虫草菌丝体备用；(2)将纯壮的虫草菌丝体接种感染大米固体培养基或琼脂、葡萄糖半固体培养基上，并培育无虫体虫草。
虫草的培育方法是模拟野生冬虫夏草的生育条件，进行人工培育，在接种后的发菌期，室温控制在20～28℃，室内光线暗些，勤通风换气，发菌期为15～20天；当菌丝长满培养基时，即改为在变温条件下培养，白天室温控制在26～28℃，夜间室温控制在4～6℃，室内光线为散射光，勤通风保持空气清新，培养5～7天即长出子座，10天后小草丛生，小草长半寸高时，其色泽由乳白色变为黄褐色，开始散发孢子即成熟，从接种到虫草成熟共40天即可采收。
所述的大米固体培养基各组分的重量份数比为大米1000，蚕蛹粉≥2；大米固体培养基的制作方法为将大米煮熟，沥净水份，拌入蚕蛹粉，然后分装在容器内，容器内培养基的厚度为3～4厘米，用聚丙烯塑料布将容器口封住，进行消毒。
所述的琼脂、葡萄糖半固体培养基各组分的重量份数比为琼脂20，蚕蛹粉2，葡萄糖30，蛋白胨3，酵母浸膏1，磷酸二氢钾1，硫酸镁0.5，生长素1，无菌水1000；PH值自然；琼脂、葡萄糖半固体培养基的制作方法同常规制菌法中的制作方法。
本发明的有益效果如下(1)摆脱了虫源，便于在虫源较少的地区推广应用。
(2)生长周期短，从接种发菌到虫草成熟，共培育40天即可采收。(3)培育工艺简单、成本较低，效益高。
二、配制大米固体培养基及琼脂、葡萄糖半固体培养基按下列配比称取大米固体培养基各组分大米1000g，蚕蛹粉2g或3g；大米固体培养基的制作方法为将大米煮熟，沥净水份，拌入蚕蛹粉，然后分装在容器内，容器内培养基的厚度为3～4厘米，用聚丙烯塑料布将容器口封住，进行消毒。
按下列配比称取琼脂、葡萄糖半固体培养基各组分琼脂20g，蚕蛹粉2g，葡萄糖30g，蛋白胨3g，酵母浸膏1g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，生长素1g，无菌水1000ml；PH值自然；琼脂、葡萄糖半固体培养基的制作方法同常规制菌法中的制作方法。
三、将纯壮的虫草菌丝体接种感染大米固体培养基或琼脂、葡萄糖半固体培养基上，并培育无虫体虫草。
虫草的培育方法是模拟野生冬虫夏草的生育条件，进行人工培育，在接种后的发菌期，室温控制在20～28℃，室内光线暗些，勤通风换气，发菌期为15～20天；当菌丝长满培养基时，即改为在变温条件下培养，白天室温控制在26～28℃，夜间室温控制在4～6℃，室内光线为散射光，勤通风保持空气清新，培养5～7天即长出子座，10天后小草丛生，小草长半寸高时，其色泽由乳白色变为黄褐色，开始散发孢子即成熟，从接种到虫草成熟共40天即可采收。
利用本发明培育出的无虫体虫草经国家食品质量监督检验中心检测，检测结果表明其营养成份与野生冬虫夏草基本相同，有些营养成份还高于野生冬虫夏草的含量，例如维生素E高于野生冬虫夏草的10倍，虫草素高于野生冬虫夏草的60倍。这给生产虫草药品及虫草保健品的厂家提供了丰富的虫草原料来源，从而缓解了虫草市场货源奇缺的矛盾。
权利要求
1.一种人工培育无虫体虫草的新技术，其特征在于(1)培育杂交冬虫夏草真菌a.采集新鲜冬虫夏草，分离得到优良虫草菌株，其菌号为虫草拟青霉和虫草头孢霉；b.将虫草拟青霉和虫草头孢霉两个虫草菌株进行筛选、训化、培养，使其改变生理性能；c.将虫草拟青霉和虫草头孢霉两个虫草菌株进行原生质体融合即杂交；d.采用健康细胞繁殖法，将健康细胞导入循环育种过程中，剔劣留优，培育出纯壮的虫草菌丝体备用；(2)将纯壮的虫草菌丝体接种感染大米固体培养基或琼脂、葡萄糖半固体培养基上，并培育无虫体虫草虫草的培育方法是模拟野生冬虫夏草的生育条件，进行人工培育，在接种后的发菌期，室温控制在20～28℃，室内光线暗些，勤通风换气，发菌期为15～20天；当菌丝长满培养基时，即改为在变温条件下培养，白天室温控制在26～28℃，夜间室温控制在4～6℃，室内光线为散射光，勤通风保持空气清新，培养5～7天即长出子座，10天后小草丛生，小草长半寸高时，其色泽由乳白色变为黄褐色，开始散发孢子即成熟，从接种到虫草成熟共40天即可采收。
2.根据权利要求1所述的人工培育无虫体虫草的新技术，其特征在于大米固体培养基各组分的重量份数比为大米1000，蚕蛹粉≥2；大米固体培养基的制作方法为将大米煮熟，沥净水份，拌入蚕蛹粉，然后分装在容器内，容器内培养基的厚度为3～4厘米，用聚丙烯塑料布将容器口封住，进行消毒。
3.根据权利要求1所述的人工培育无虫体虫草的新技术，其特征在于琼脂、葡萄糖半固体培养基各组分的重量份数比为琼脂20，蚕蛹粉2，葡萄糖30，蛋白胨3，酵母浸膏1，磷酸二氢钾1，硫酸镁0.5，生长素1，无菌水.1000；PH值自然；琼脂、葡萄糖半固体培养基的制作方法同常规制菌法中的制作方法。
全文摘要
本发明涉及一种人工培育无虫体虫草的新技术。其技术要点是用杂交冬虫夏草真菌感染大米固体培养基或琼脂、葡萄糖半固体培养基，模拟野生冬虫夏草的生育条件，进行人工培育，在发菌期控制室温在20～28℃，当菌丝长满培养基时在变温条件下培养，白天控制室温在26～28℃，夜间控制室温在4～6℃，培养5～7天即长出子座，10天后小草丛生，小草半寸高时，其色泽由乳白色变为黄褐色，开始散发孢子即成熟。本发明的有益效果为(1)摆脱了虫源，便于在虫源较少的地区推广应用。(2)生长周期短，从接种发菌到虫草成熟，共培育40天即可采收。(3)培育工艺简单、成本较低，效益高。
文档编号C12N1/14GK1445359SQ0210416
公开日2003年10月1日 申请日期2002年3月14日 优先权日2002年3月14日
发明者李健 申请人:李健