专利名称：蛹虫草的培育方法
技术领域：
本发明涉及一种蛹虫草的培育方法。
背景技术：
蛹虫草是一种具有很高药用及滋补功效的珍贵中药材，野生虫草 分布稀少、资源极缺。为满足市场需求，现有用人工培育虫草的，人 工培育的蛹虫草也称北冬虫夏草，其有效成份接近于天然，部分成份 含量甚至高于天然冬虫夏草的几倍或几十倍。
目前，国内外许多家在从事蛹虫草的人工培育研究工作，以得到 人工培育虫草的最佳生长自然规律，努力培育出具有更高质量更高产 量的虫草子实体，并且多项技术申请了专利，综合这些技术不难看出 目前在短期内培育出更高质量、更高产量的子实体，还未见报道，其
原因在于在培育过程中主要存在如下几个瓶颈问题
1、菌丝体和子实体生长的各个不同时期的控温管理不当。现有 技术中菌丝体和子实体培育生长的温度与生长时期或者没有联系，如 在各个阶段统一提供16-25'C的温度，或者在各个生长时期温度控制 不合理，如有的技术在接入菌种时提供较高的温度，子实体萌发阶段 又将温度降低一些，子实体长出后又将温度提高一些，经过实验验证， 上述技术菌丝体的培养温度过高，菌丝体生长潜入培养基内部的速度 比在较低温条件下培养的速度要快，但是菌丝体生长过猛，变的较为 老化、活力下降，萌发的子实体在生长过猛、较为老化、活力不足的 菌丝体中生长，比在较低温下培养的活力足的菌丝体中萌发的子实体 的生长发育较差，子实体达不到在低温下培育的粗壮成度和高度，子 实体萌发的数量也会相对减少，影响产量。
子实体萌发分为三个时期，各个时期如果温度控制不当会影响到 子实体的质量与产量。实验表明子实体刚萌发的初期，由于子实体比 较弱小，如果高温会使它生长比紊乱，会出现参差不齐。给予低温培 养子实体能够处于一致的生长状态，为后期生长打好整齐待发的基
础；等子实体长出时，能适应较高的温度，必须随之提高一定温度， 满足其生长需要；当子实体进入生长旺盛的后期是整个子实体生长过 程中最快也是能够适应和需要较高温度的时期，必须要顺应生长的需 要提高温度，才能达到在短时间内子实体长到瓶口成熟采收。如果对 上述时期给以统一的温度，或者虽是不同的温度，但并没有充分满足 其生长需要的话都会造成子实体产量减少、质量降低。
2、 谷物培养基中的谷物等原料与水的比例的调配不当。现有技 术中米与水的比例不是过高就是过低，实验表明如果谷物培养基中
的水分太少，在经过培养基高温灭菌后，谷物不能充分地吸收水分， 培养基处于干旱状态，子实体就不能够充分地吸收培养基中的水分及 营养成分而影响生长发育。如果水分过高，在经过培养基高温灭菌后， 谷物充分吸收水分膨胀后，把谷物之间的缝隙挤紧，菌丝体就不能有 力地潜入培养基内部，子实体也不能通过菌丝体充分地吸收培养基中 的全部营养成分，并且子实体在湿度过大的培养基生长，容易变烂而 影响质量，同时影响产量。
3、 固体大米培养基所接入液体菌种量的多少，直接关系到大米 培养基中的菌丝体的生长发育和对子实体形成的数量多少。现有培养 基接入液体菌种普遍过多，培养基接入液体菌种过多，会造成培养基 表面营养过剩，菌种密集，生长过猛，在短时间内致使培养基表面的 菌丝体增厚，增厚的菌丝体象一层棉被一样压在培养基的表面。由于
子实体是在培养基表面较稀薄的菌丝体中形成，所以较厚的菌丝体很 难产生子座形成子实体，使子实体产生的较少，达不到培养基表面的 子实体全面萌发，而影响以后的产量。
发明内容
本发明目的在于克服上述问题和不足提供一种蛹虫草的培育方法，从而提 高蛹虫草子实体的质量与产量。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案予以实现 一种蛹虫草的培育方法，包括如下步骤
a、 培育液体菌种；
b、 在培养瓶中调配谷物培养基；
c、 将培育好的液体菌种接种入所述谷物培养基；
d、 将接种后的所述谷物培养基置栽培室培养，培养过程分两个 时期
dl、菌丝体生长时期
① 将接入液体菌种的培养瓶移至培养室避光培养6-10天，温度 控制在16-18°C，湿度62-67%;
② 10-15天，将培养并瓦瓶口扎透气孔，温度控制在18-20°C，湿 度82-87%，自然光照射；
d2、子实体生长时期
① 15-20天子实体萌发时期
温度控制在18-20°C,湿度82-87%,光照750-8501ux,每天照射 4-6hj
② 20-25天子实体长出时期
温度提高到20-22 °C ,湿度82-87%,光照750-850 lux，每天照 射4-6h;
③ 2 5-30天子实体进入到生长旺盛时期温度提高到22-25 °C,湿度82-87%，光照1 000-1 500lux,每天照 射7-9h，到39-40天子实体长到瓶口成熟采收。 进一步地，所述谷物培养基的调配包括以下步骤 bl、调制营养液配方；
b2、将谷物、营养液及蚕蛹粉按如下关系调配谷物与营养液的 重量比为1: U.9—2.0),谷物与蚕蛹粉的重量比为(11-38): 1;
b3、将上述调配的谷物培养基通过1 20-1 23 °C高压蒸气灭菌 29 —31min，耳又出冷i卩。
进一步地，所述营养液4要如下配方调制葡萄糖2. 5—3%,蛋白胨0. 5 —1.5°/。，磷酸氢二钾0.2—0.5%,磷酸二氢钾1 — 1.5%，柠檬酸三胺 0.5—1%,维生素B!O. 005— 0. 01%,其余为水，所述营养液PH值为7 一8。
进一步地，所述将培育好的液体菌种接种入所述谷物培养基的过程 为接种室经过紫外线灯管照射杀菌29-31h，将培育好的液体菌种使 用喷雾装置每瓶喷入0. 1—0. 2ml。
进一步地，所述液体菌种的培养过程如下按照水与原料的比例，依 如下配方调配培养基葡萄糖5 — 6%，酵母膏1 — 1.5%,蛋白胨1 — 1.5%,磷酸二氢钾0. l — O. 15%,维生素B!O. 005— 0. 01 0%,将调配好 的液体培养基倒入培养瓶中进行12 0-12 3°C高压蒸气灭菌29-31min， 冷却后接入已制备具有稳定性良好的纯菌种培养4-6天即为液体菌 种。上述培养基中采用酵母膏的优点在于调配好的菌液清澈，有利于 喷洒。
再进一步地，所述谷物为大米或小米或高粱米或玉米渣或稻米。 与现有技术相比，本发明的优点和积极效果如下
1、根据谷物培养基中的菌丝体和子实体在不同时期的生长发育 特性，恰到好处地给予它实际生长需要的从低温到高温的各种不同生长时期渐序提高的温度，创造一个适合菌丝体与子实体在各种不同生
长时期所需要的良好的生长温度环境，使得菌丝体前6—10天的初期 以16—18。C的低温培养，保证其生长稳定；在10-15天期间提高温度 到18-2(TC，菌丝体在此温度下生长活跃，形成菌团，为子实体的萌 发打好基础；子实体处在15 —20天萌发的初期，对其保持18 —20°C 温度的培养，子实体在培养基平面整齐一致地全面萌发；20— 25天子 实体长到少年时期，提高温度到20— 22 。C,子实体生长稳定，保持挺 拔直上的活力；25— 30天子实体生长到青壮年时期，随着子实体在这 个时期生长快和能适应较高温度的特点，提高温度到22 — 25 。C ,此时， 子实体生长旺盛有力，节节上升，到39 — 40天长到瓶口采收，缩短 了成熟周期，提高了产量，提高了劳动效率。
2、 谷物培养基的米与营养液按照1: 1.9—1: 2.0的比例调配， 由于营养液大部分成份为水，故水的用量充足，能保证培养基有充足 的水分，从而保证子实体的充分吸收。培养基经过121°C高压灭菌后， 谷物的颗粒能充分吸收水分膨胀，又能保证谷物的颗粒之间留有缝 隙，既能使菌丝体在短时间内潜入全部培养基形成菌团，又能合理的 满足子实体生长发育周期的生理生长需求，在较短时间内子实体能够 整齐一致的全面萌发。上述比例为最佳比例，小于则处于干旱状态， 大于则处于过涝状态，都会降低培养基的质量，从而不利于子实体的 生长，可以说上述比例使培养基发生了质的变化，
3、 每瓶固体培养基接入菌液0. 1-0. 2ml，由于菌液用量少，没有
过多的高营养物质的液体和密集的菌种停留在培养基表面，所以少量 的菌种只顾进发潜入培养基的内部，培养基表面的菌丝体生长形成的 较薄、较松的菌丝体很有利于原基分化，又为子实体的全面萌发打好 基础，同时菌液用量少，提高了增加接种培养瓶的数量，减少了在培 养液体菌种时的用工用料，随之降低成本。
具体实施例方式
实施例一，本实施例包括如下步骤
a、 培育液体菌种；
按照水与原料的比例，依如下配方调配培养基葡萄糖5 — 6%， 酵母膏1 —1.5%,蛋白胨1一1.5%，磷酸二氬钾0. l — O. 15%,维生素 B:O. 005— O. G10%,将调配好的液体培养基倒入培养瓶中进行121°C高 压蒸气灭菌30min,冷却后接入已制备具有稳定性良好的纯菌种培养 5天即为液体菌种。
b、 在培养瓶中调配大米固体培养基；
本发明选用500ml培养瓶，装大米33— 38g，蚕蛹粉l一3g，调 制如下营养液配方葡萄糖2.5—3%，蛋白胨0.05%—1.5%,磷酸氬 二钾0. 2%—0. 5% ,磷酸二氢钾1%—1. 5%，柠檬酸三胺0. 5%—1°/。，维 生素BiO. 002 — 0. 005%,其余为水，PH值7 — 8之间。取营养液63 — 76ml，倒入培养瓶，将上述调配的大米固体培养基通过121°C高压蒸 气灭菌30min,取出冷却。由于有充分的水分就不需要太多的大米， 500ml培养瓶用33— 38g大米足以满足子实体的生长；如果大米用的 太少，满足不了子实体生长从而导致减产。本发明所用以上米与营养 液的比例足以满足子实体生长过程所需要的水分，给予子实体后期的 生长打下良好基础。
c、 将培育好的液体菌种接种入所述大米固体培养基； 接种室经过紫外线灯管照射杀菌30min，将培育好的液体菌种使
用喷雾装置每瓶喷入0. l—O. 2ml。
由于液体菌种用量少，培养基表面没有聚集过剩的营养液体和密 集的菌种，所以培养基表面的菌丝体也不会迅猛生长增高增厚而影响
子实的萌发。少量的菌种在接触到培养基表面时，经过一段稳定时期， 会迅速的扩繁分化潜于培养基内部扎满所有培养基，菌丝体生长反而 强劲有力，如此，培养基表面薄薄的一层菌丝体就会全面密致地萌发 子实体。
d、将接种后的所述大米固体培养基置栽培室培养，培养过程分 两个时期
dl、菌丝体生长时期
① 将接入液体菌种的培养瓶移至培养室避光培养6-10天，温度 控制在16-18°C ,湿度65°/。；
② 10-15天，将培养jf瓦瓶口扎透气孔，温度控制在18-20°C，湿 度85%,自然光照射；
d2、子实体生长时期
① 15-20天子实体萌发时期，子实体呈钉尖状，表面光滑，此时 温度控制在18-20°C ,湿度85%，光照8001ux，每天照射4-6h;
② 2 0-25天子实体长出时期，即子实体长到2cm左右，子实体顶 端的子嚢体的形态已开始形成，此时将温度提高到2 0-22°C ，湿度8 5%， 光照8001ux,每天照射4-6h;
③ 25-30天子实体进入到生长旺盛时期，即子实体长到3-4cm左 右，子实体的顶端开始形成棒状，此时将温度提高到22-25°C ，湿度 85%,光照1 000-15001ux，每天照射8h,到39-40天子实体长到并瓦口 成熟采收，成熟的子实体。
本实施例在大米培养基4妄入液体菌种后6—10天，温度控制在16 一18。C,菌丝体基本潜入培养基的内部。当菌丝体培养到10—15天 的时候，菌丝体潜入培养基内部形成饱满的菌团，培养基表面的菌丝 体形成较松、较薄的一层。随着菌丝体生长发育成熟，子实体开始萌
发，温度相对提高到18 — 2(TC,子实体在此适宜的温度环境中如雨后 春夢般地萌发于全部培养基表面。如果温度过高，萌发的子实体生长 反而朝气不足，或者会出现培养基表面只是局部形成子实体，培养基 表面没有形成子实体的菌丝体的内部营养成分提供给了局部形成的 子实体，没有形成子实体的菌丝体比较难易形成子实体而造成减产。 在子实体生长的幼小时期和少年及青壮年的不同时期，温度的控 制需要不断的提高。当子实体生长到15—20天时，温度仍保持18 — 20°C，以保证子实体的良好生长发育。温度过高会造成子实体生长的 参差不齐，子实体比较粗一点的生长较快，较细矮的生长緩慢会拉开 差距，会影响以后的产量。当子实体生长到20 — 25天时，温度提高 到20— 22。C ,子实体在此生长时期是比较緩慢的时期，如果温度过高， 子实体生长的后期会出现一部分子实体过早的发育成熟， 一部分正在 生长中的现象，这样拔苗助长达不到子实体全部应长到的高度和应达 到的产量，如果温度太低，子实体生长较为緩慢。当子实生长到25 一30天时，子实体在此时期很需要较高温度的时期，也是在子实体生 长全过程当中生长最快的时期，很需要较高的温度来促使它生长发 育，温度应提高到22 — 25 。C,在此温度环境中生长，几天的时间就会 看到子实体节节上升产生根本的生长变化。
按照上述方法培育的蛹虫草，在固体大米培养基接入液体菌种经 过39 — 40天的培养管理子实体成熟采收，38克大米培养基可获子实 体4一5克。
实施例二，本实施例包括以下步骤
a、培育液体菌种；
按照水与原料的比例，依如下配方调配培养基葡萄糖5 —6%, 酵母膏1 — 1.5%,蛋白胨1 — 1.5%,磷酸二氢钾0. 1 —0. 15%，维生素 B,O. 0 05— 0. 01 0%,将调配好的液体培养基倒入培养瓶中进行12 0°C高
压蒸气灭菌29min,冷却后接入已制备具有稳定性良好的纯菌种培养 4天即为液体菌种。
b、 在培养瓶中调配小米固体培养基；
本发明选用500ml培养瓶，装小米33— 38g，蚕蛹粉l一3g,调 制如下营养液配方葡萄糖2.5—3%,蛋白胨0. 05%—1.5%，磷酸氩 二钾0. 2°/。一0. 5% ，磷酸二氢钾1%—1. 5%, 一宁檬酸三胺0. 5%—1%,维 生素B』.002 — 0. 005%,其余为水，PH值7 —8之间。取营养液63 — 76ml,倒入培养瓶，将上述调配的小米固体培养基通过121°C高压蒸 气灭菌3 0min，取出冷却。
c、 将培育好的液体菌种接种入所述小米固体培养基； 接种室经过紫外线灯管照射杀菌29min，将培育好的液体菌种使
用喷雾装置每瓶喷入0. l — O. 2ml。
d、 将接种后的所述小米固体培养基置栽培室培养，培养过程分 两个时期
dl、菌丝体生长时期
① 将接入液体菌种的培养瓶移至培养室避光培养6-1Q天，温度 控制在16-18°C ，湿度62%;
② 10-15天，将培养瓶^f瓦口扎透气孔，温度控制在18-2Q°C,湿 度82%,自然光照射；
d2、子实体生长时期
① 15-20天子实体萌发时期
温度控制在18-2CTC ，湿度82%，光照7501ux,每天照射4-6h;
② 2 0-25天子实体长出时期，即子实体长到2cm左右 温度提高到20-22 °C ,湿度82%,光照75 01ux，每天照射4-6h;
③ 25-30天子实体进入到生长旺盛时期，即子实体长到3-4cm左
右 温度提高到22-25 °C ,湿度82%,光照1 000-15001ux,每天照射 7h，到39-40天子实体长到瓶口成熟采收。 实施例三，本实施例按如下步骤培育-.
a、 培育液体菌种；
按照水与原料的比例，依如下配方调配培养基葡萄糖5 — 6%, 酵母膏1一1.5°/。，蛋白胨1一1.5。/。，磷酸二氬钾0. l — O. 15°/。，维生素 BiO. 005— 0. 01 0%,将调配好的液体培养基倒入培养瓶中进行123°C高 压蒸气灭菌31min，冷却后接入已制备具有稳定性良好的纯菌种培养 6天即为液体菌种。
b、 在培养瓶中调配玉米固体培养基；
本发明选用5 00ml培养瓶，装玉米33— 38g，蚕蛹粉l一3g，调 制如下营养液配方葡萄糖2.5—3%，蛋白胨0. 05%—1.5%，磷酸氢 二钾0. 2%—0. 5% ，磷酸二氮钾1%—1. 5%, 一宁檬酸三胺0. 5%—1%，维 生素B!O. 002 — 0. 005%，其余为水，PH值7 —8之间。取营养液63 — 76ml,倒入培养瓶，将上述调配的玉米固体培养基通过121°C高压蒸 气灭菌30min,取出冷却。
c、 将培育好的液体菌种接种入所述玉米固体培养基； 接种室经过紫外线灯管照射杀菌31min,将培育好的液体菌种使
用喷雾装置每瓶喷入0. l — O. 2ml。
d、 将接种后的所述玉米固体培养基置栽培室培养，培养过程分 两个时期
dl、菌丝体生长时期
① 将接入液体菌种的培养瓶移至培养室避光培养6-10天，温度 控制在16-18°C ，湿度67%;
② 10-15天，将培养弁瓦瓶口扎透气孔，温度控制在18-20°C，湿 度87%,自然光照射；
d2、子实体生长时期
① 15-20天子实体萌发时期
温度控制在18-2(TC ，湿度87%,光照8501ux,每天照射4-6h;
② 20-25天子实体长出时期，即子实体长到2cm左右 温度提高到20-22 °C ，湿度87%,光照8501ux,每天照射4-6h;
③ 25-30天子实体进入到生长旺盛时期，即子实体长到3-4cm左
右
温度提高到22-25 °C ,湿度87%，光照1 000-lS001ux，每天照射 9h，到39-40天子实体长到瓶口成熟采收。
权利要求
1、一种蛹虫草的培育方法，包括如下步骤a、培育液体菌种；b、在培养瓶中调配谷物培养基；c、将培育好的液体菌种接种入所述谷物培养基；d、将接种后的所述谷物培养基置栽培室培养，培养过程分两个时期d1、菌丝体生长时期①将接入液体菌种的培养瓶移至培养室避光培养6-10天，温度控制在16-18℃，湿度62-67％；②10-15天，将培养瓶瓶口扎透气孔，温度控制在18-20℃，湿度82-87％，自然光照射；d2、子实体生长时期①15-20天子实体萌发时期温度控制在18-20℃，湿度82-87％，光照750-850lux，每天照射4-6h；②20-25天子实体长出时期温度提高到20-22℃，湿度82-87％，光照750-850lux，每天照射4-6h；③25-30天子实体进入到生长旺盛时期温度提高到22-25℃，湿度82-87％，光照1000-1500lux，每天照射7-9h，到39-40天子实体长到瓶口成熟采收。
2、 根据权利要求1所述的蛹虫草的培育方法，其特征在于所述谷物培 养基的调配包括以下步骤bl、调制营养液配方；b2、将谷物、营养液及蚕蛹粉按如下关系调配谷物与营养液的 重量比为1: ( 1. 9一2. 0 )，谷物与蚕蛹粉的重量比为(11-38 ): 1;b3、将上述调配的谷物培养基通过120-12 3 °C高压蒸气灭菌 29 — 31min，取出冷^卩。
3、 根据权利要求2所述的蛹虫草的培育方法，其特征在于所述营养液 按如下配方调制葡萄糖2. 5—3%，蛋白胨0. 5—1. 5%，磷酸氬二钾0. 2 一O. 5%，磷酸二氢钾1 — 1.5%,柠檬酸三胺0. 5—1°/。，维生素B,O. 005 —0.01%,其余为水，所述营养液PH值为7 —8。
4、 根据权利要求l、 2或3所述的蛹虫草的培育方法，其特征在于所述 将培育好的液体菌种接种入所述谷物培养基的过程为接种室经过紫 外线灯管照射杀菌29-31min，将培育好的液体菌种使用喷雾装置每瓶 喷入0. 1 — 0. 2ml。
5、 根据权利要求4所述的蛹虫草的培育方法，其特征在于所述液体菌种 的培养过程如下按照水与原料的比例，依如下配方调配培养基葡萄 糖5 — 6%，酵母膏l一l. 5%,蛋白胨l一l. 5°/ ,磷酸二氢钾0. l — O. 15%, 维生素BiO. 005— 0. 01 0%，将调配好的液体培养基倒入培养瓶中进行 120-12 3°C高压蒸气灭菌29-31min,冷却后接入已制备具有稳定性良 好的纯菌种培养4-6天即为液体菌种。
6、 根据权利要求5所述的蛹虫草的培育方法，其特征在于所述谷物为大 米或小米或高粱米或玉米渣或稻米。
全文摘要
本发明涉及一种蛹虫草的培育方法，该方法将接种后的所述谷物培养基置栽培室培养后，培养过程分两个时期菌丝体生长时期、子实体生长时期，针对各个时期的生长特点给予其生长需要的、循序渐进提高的温度环境，从而缩短培育周期，获得高质、高产的蛹虫草。
文档编号C12N1/14GK101173218SQ20071011313
公开日2008年5月7日 申请日期2007年9月30日 优先权日2007年9月30日
发明者孙婵娟, 袁博阳, 袁有宝 申请人:袁有宝