一种深层发酵竹荪菌丝体的制备及其在化妆品中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及食用真菌领域，具体涉及一种深层发酵竹荪菌丝体的制备方法及其在 化妆品中的应用。
【背景技术】
[0002] 近年来随着消费者对自身健康和安全的日益关注，相对于工业合成的化妆品功效 原料，来源于天然且功效卓著的原料更受青睐，特别是从天然植物中提取有效成分作为化 妆品原料更易为消费者所接受。中国古代的日常美容用药，较之皮肤疾患治疗的处方更加 倾向于整体肤质的改善所带来的美容功效，因而不仅较为安全，而且能够通过调节皮肤内 外的阴阳气血平衡，恢复健康有序的自身良好状态而达成综合的美容护养功效。正如古代 常见的美容护肤面脂、面膏等对功效的记载："令面光悦"、"令光润"、"令人好颜色"、"令人 面白净悦泽"等等，都间接体现了美白、保湿、滋润、抗衰老等作用。因此这也为我们拓展美 容用药的思路提供了 一定的指导。
[0003] 竹荪又名竹笙、竹参、面纱菌、网纱菌、竹姑娘、僧竺蕈、竹菌等，是鬼笔科竹荪属中 珍贵的食用菌。素有"菌菇之花"、"雪裙仙子"、"山珍之花"、"菌中皇后"的美誉。竹荪是 优质的植物蛋白和营养源，菌体含有丰富的营养成分，据报道菌体约含蛋白20. 2%，粗脂肪 2. 6 %，碳水化合物38. 1 %，粗纤维9. 4%，还含有21种氨基酸，8种为人体所必需，其中谷 氨酸的含量高达1. 76%，占氨基酸总量的17. 0%以上，为蔬菜和水果所不及，且竹荪所含 的氨基酸大多以菌体蛋白的形态存在，因此不易丧失。竹荪富含多种维生素，如B族维生素 中的VB^VBpVBe，以及维生素A、D、E、K等。其中VB2(核黄素）含量较高。竹荪所含多糖 以半乳糖、葡萄糖、甘露糖和木糖为主。竹荪还含有多种微量元素，其中重要的有锌、铁、铜、 硒。
[0004] 竹荪性温味甘，有活血、健脾益胃、助消化之功效，适用于咳嗽、高血压、高血脂等 症的治疗和预防。在云南，苗族同胞将竹荪和糯米一起泡水喝，可以治疗虚弱症、损伤症和 咳嗽，有直通补气之功效，竹荪还具有解腻助消化的作用。中医认为竹荪有大补之功，但其 药用价值在历代本草著作中鲜有论述。常食竹荪能保护肝脏，减少腹壁脂肪的积存，有俗称 "刮油"的作用。竹荪还有延长汤羹食品的存放时间、保持菜肴的鲜味而不霉馊的奇特功能。
[0005] 竹荪是世界上名贵的大型食用菌之一，其不仅营养丰富，而且富含多糖及其他活 性物质，具有抑菌、提1?机体免疫力等多种生物功能，因此，其在医药、食品、保健品等领域 具有较高的应用前景。研究表明，竹荪子实体提取物具有较好的美白和抗衰老效果，在细胞 平台其美白效果可以与熊果苷相媲美，在人体功效测试中亦具有明显美白功效。但竹荪属 珍稀食用菌，资源有限且价格昂贵。另一方面由于竹荪的产地、来源及培育方法不同，因此 其产品质量不易控制，这些因素都限制了对其进一步开发和利用。
[0006] 深层发酵培养技术是近年来发展较快的现代生物工程技术之一，该技术以真菌的 无性繁殖为基础，通过培养获得菌丝体和发酵液，从中获取活性物质。具有生产周期短、生 产工艺简便、培养材料易得、产品质量易于控制及成本低等优点，特别是对于不能人工栽培 的食用菌来说，发酵法是大量获得其活性物质的重要途径。目前关于竹荪液体发酵的报道 较少，且未有针对性获得美白及抗衰老活性产物的竹荪发酵工艺的报道，因此本发明首次 提供一种竹荪液体发酵工艺方法，获得的菌丝体提取物和发酵液具有较好的美白及抗衰老 效果。
[0007] 本发明开发了针对竹荪菌株的深层发酵方法，首次提出经过我们的发酵工艺得到 的竹荪菌丝体提取物具有美肤功效，适用于具有美白及抗衰老功效的化妆品中。
【发明内容】
[0008] 经本发明人研究发现，竹荪菌丝体提取物具有卓越的美白肌肤功效。它可以通过 抑制酪氨酸酶活性的方式，减少B16黑素细胞中黑素的生成以达到亮白肌肤的效果。并且 该提取物具有提高角质细胞活力的功效，进而具有抗衰老的功效。
[0009] 因此，本发明的一个目的是提供一种竹荪菌丝体提取物的制备方法，该方法包括 深层发酵竹荪菌丝体的制备以及竹荪菌丝体提取物的制备。
[0010] 深层发酵竹荪菌丝体的制备包括：取竹荪母菌种菌丝块接种于斜面培养基上，避 光培养待菌丝长满斜面，取出保存待用。将已活化的斜面菌种接种于装有液体种子培养液 的三角瓶中，摇床培养10天，制得一级种子液，然后将一级种子液按一定接种量接到液体 种子培养基中，在相同的培养条件下制备二级种子液。以此类推，得到三级种子液。以二级 或三级种为种子液，以相同接种量，接种于装有发酵培养液的三角瓶中，摇床培养7天，摇 瓶得到菌丝体。
[0011] 竹荪菌丝体提取物的制备包括：取竹荪菌丝体与蒸馏水按照一定的料液比混合， 采用超声法及高温水提法经过离心，去除沉淀，得到的上清液即为竹荪菌丝体提取物。
[0012] 因此，在本发明的一个方面，提供了一种深层发酵竹荪菌丝体的制备方法，所述方 法包括以下步骤：
[0013] a.提供竹荪菌株，所述竹荪菌株以ACCC4912来自中国微生物菌种保藏管理委员 会农业微生物中心上海食用菌分中心，
[0014] b.斜面培养，
[0015] c.液体种子培养，
[0016]d.发酵液培养，得到竹荪菌丝体。
[0017] 在一个具体的实施方式中，所述斜面培养采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基。在一个 具体的实施方式中，所述液体种子培养采用马铃薯葡萄糖培养基。在一个具体的实施方式 中，所述发酵液培养采用的培养基包含玉米粉，葡萄糖，七水硫酸镁，磷酸二氢钾，维生素 Bl〇
[0018] 在本发明的另一方面，提供了一种竹荪菌丝体，该竹荪菌丝体是通过本发明的深 层发酵方法制备得到的。
[0019] 在本发明的另一方面，提供了一种竹荪菌丝体提取物的制备方法，所述方法包括 以下步骤：
[0020] a.提供本发明深层发酵方法制备得到的竹荪菌丝体，
[0021] b.超声提取，
[0022] c.温度60~90°C水提4~6小时，
[0023] d.离心后，取上清液，得到竹荪菌丝体提取物。
[0024] 在本发明的另一方面，提供了本发明方法制备得到的竹荪菌丝体提取物在具有美 白和/或抗衰老功效的化妆品中的应用。
[0025] 在本发明的另一方面，提供了一种化妆品组合物，所述组合物包含竹荪菌丝体提 取物和化妆品领域可接受的辅料。在一个实施方式中，所述化妆品领域可接受的辅料选自： 溶剂、增溶剂、防腐剂、抗氧剂、pH调节剂、促渗剂、脂质体、保湿剂、增稠剂、螯合剂、肤感调 节剂、表面活性剂、乳化剂、推进/抛射剂、香精、色素，以及其他功效添加剂。在一个具体的 实施方式中，所述化妆品组合物可以为霜剂、乳剂、溶液剂、膜剂、气雾或喷雾形式，更具体 地，所述组合物可以为洗面奶、沐浴露、柔肤水、护肤啫喔、护肤乳液、护肤霜、精华液、眼霜、 面膜、气雾或喷雾形式。这些形式可通过本领域技术人员熟知的方法制备。
【附图说明】
[0026] 图1显示了竹荪菌丝体对黑素形成的影响。
[0027] 图2显示了竹荪菌丝体对酪氨酸酶的影响。
[0028] 图3显示了D0PA染色结果。
[0029] 图4显示了竹荪菌丝体对角质细胞活力的影响。
【具体实施方式】
[0030] 本发明的发明人在经过了广泛而深入的研究之后发现：竹荪菌丝体提取物具有抑 制酪氨酸酶活性的作用，并且增强角质细胞活力的作用。因此，本发明涉及竹荪菌丝体的美 白及抗衰老功效，竹荪菌丝体提取物可作为功效添加剂加入到化妆品组合物中。
[0031] 文献中均未涉及竹荪菌丝体具有美白及抗衰老的作用，也未提及将其作为功能添 加剂加入化妆品中。也就是说，本发明首次提出经过我们的发酵工艺得到的竹荪菌丝体具 有美肤作用，可以作为功能添加剂加入化妆品中，用于实现美白及抗衰老功效。
[0032] 本发明具体描述了一种深层发酵竹荪菌丝体的制备方法，所述方法包括：
[0033]提供竹郝菌株（DictyophoraduplicataACCC4912)，来自于中国微生物菌种保藏 管理委员会农业微生物中心上海食用菌分中心；
[0034] 使用的培养基为：
[0035] ①斜面培养基（PDA斜面）：马铃薯葡萄糖琼脂（美国BD公司生产，商品名：马铃 薯葡萄糖琼脂）粉末35-45g溶于1L去离子水中灭菌后即得。
[0036] ②种子培养基（g/L):马铃薯葡萄糖（美国BD公司生