检测原料胶中菌体含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及食品领域，具体地，本发明涉及检测原料胶中菌体含量的方法。
【背景技术】
[0002] 原料胶主要是指能够作为乳化剂用于食品生产的一类胶体物质。由于其本身可携 带菌群，为防止其携带的菌群进入食品中，引起不良后果，需要对原料胶中菌体含量进行测 定，满足要求的才可应用于食品生产中。
[0003] 然而，目前测定原料胶中菌体含量的方法仍有待改进。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明提 出了一种检测原料胶中菌体含量的方法，该方法能够有效提高原料胶中菌体含量的检出 率，检测结果的准确性高。
[0005] 在本发明的第一方面，本发明提出检测原料胶中菌体含量的方法。根据本发明的 实施例，所述方法包括：（1)将所述原料胶置于含有生理盐水的无菌均质袋中，进行第一均 质处理，得到第一均质处理产物；(2)将所述第一均质处理产物置于无菌均质袋中，再向无 菌均质袋中加入培养基，并进行第二均质处理，得到第二均质处理产物；（3)将含有所述第 二均质处理产物的均质袋进行平整化处理；以及（4)将经过所述平整化处理的含有所述第 二均质处理产物的均质袋进行静置培养，通过计数菌落数，以便对所述原料胶中菌体含量 进行测定。根据本发明的优选实施例，所述原料胶与所述生理盐水的体积比为1:9。根据本 发明的具体实施例，所述培养基中不含有琼脂。
[0006] 发明人意外地发现，通过根据本发明实施例的方法，能够准确地检测原料胶中的 菌体含量，有效地避免了现有技术例如GB4789. 2-2010《食品安全国家标准-食品微生物 学检验-菌落总数的测定》应用于原料胶检测时的缺陷。具体地，利用国标方法，将稀释的 样液加入至平皿，再向平皿中倾注培养基，混匀后进行培养。但是，由于原料胶经10倍稀释 后，与培养基混合后容易聚集成团，导致成块的原料胶中的菌体无法接触培养基，进而无法 生长，影响检测的准确性及可信度。
[0007] 需要说明的是，本发明的技术方案是发明人通过大量的筛选试验而获得的，发明 人曾经尝试过其他的检测方案，并未获得有效的检测结果。例如，发明人采用过下列检测步 骤：（1)将原料胶用生理盐水梯度稀释100倍，得到稀释液；（2)取稀释液与培养基在均质 袋中混合，并静置培养，通过计数菌落数以确定原料胶中菌体含量。由于原料胶本身具有凝 固性，无需添加琼脂即可与液体培养基混合，得到半固体培养基，适于菌体生长。将原料胶 稀释100倍得到的稀释液与培养基混合静置时，由于稀释液本身含有的原料胶较少，所以 需要吸取少量稀释液与培养基混合，否则，若吸取大量稀释液与培养基混合，得到的混合物 中水含量较大，无法形成半固体，影响培养及菌落计数。但是，原料胶中菌体含量较少，吸取 少量稀释液容易导致每次吸取的稀释液中菌数不同，造成误差。另外，还将使检测限升高。
[0008] 根据本发明的实施例，上述检测原料胶中菌体含量的方法还可以具有下列附加技 术特征：
[0009] 根据本发明的实施例，所述第一均质处理是在转速为8000~1000r/min的条件下 进行1~2min ;所述第二均质处理是在转速为8000~1000r/min的条件下进行lmin。由 此，根据本发明实施例的检测原料胶中菌体含量的方法能够有效提高原料胶中菌体含量的 检出率，检测结果的准确性高。
[0010] 根据本发明的实施例，所述培养基包括TTC。由此，根据本发明实施例的检测原料 胶中菌体含量的方法能够有效提高原料胶中菌体含量的检出率，检测结果的准确性高。
[0011] 根据本发明的实施例，所述平整化处理所得到的所述第二均质处理产物的厚度为 0. 1~0. 5毫米，优选为0. 3~0. 4毫米。由此，根据本发明实施例的检测原料胶中菌体含 量的方法能够有效提高原料胶中菌体含量的检出率，检测结果的准确性高。
[0012] 在本发明的第二方面，本发明提出检测原料胶中菌体含量的方法。所述方法包括： (1)称取营养肉汤溶于蒸馏水中煮沸，然后将得到的混合物在121°c高压灭菌15min，将灭 菌得到的产物冷却至50°C左右，并向冷却的混合物中加入经过煮沸灭菌的1 % TTC溶液，调 节pH值为7. 1~7. 3,得到发酵培养基；（2)称取25g原料胶置于盛有225mL生理盐水中的 无菌均质袋中，在l〇〇〇〇r/min的转速下进行第一均质处理2min，制成1 :10的稀释液；（3) 称取IOg所述稀释液置于无菌均质袋中，加入15ml所述发酵培养基，在8000r/min的转速 下进行第二均质处理lmin，然后刮涂均质袋，使得第二均质处理产物的厚度为0. 33毫米； (4)将步骤（3)所得到的含有第二均质处理产物的无菌均质袋置于36± 1°C培养48h±2h， 菌落计数，并计算得到原料胶中菌体含量。由此，根据本发明实施例的检测原料胶中菌体含 量的方法能够有效提高原料胶中菌体含量的检出率，检测结果的准确性高。
【具体实施方式】
[0013] 下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发 明，而不能理解为对本发明的限制。
[0014] 需要说明的是，术语"第一"、"第二"仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相 对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有"第一"、"第二"的特征可 以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说 明，"多个"的含义是两个或两个以上。
[0015] 在本发明的第一方面，本发明提出检测原料胶中菌体含量的方法。根据本发明 的实施例，该方法包括：（1)将原料胶置于含有生理盐水的无菌均质袋中，进行第一均质处 理，得到第一均质处理产物；(2)将第一均质处理产物置于无菌均质袋中，再向无菌均质袋 中加入培养基，并进行第二均质处理，得到第二均质处理产物；（3)将含有第二均质处理产 物的均质袋进行平整化处理；以及（4)将经过平整化处理的装有第二均质处理产物的均质 袋进行静置培养，通过计数菌落数，以便对原料胶中菌体含量进行测定，根据本发明的优选 实施例，原料胶与生理盐水的体积比为1:9。
[0016] 发明人发现，将原料胶进行10倍稀释，并将得到的稀释液与培养基在均质机上进 行均质处理，以使原料胶与培养基充分混合，然后将含有均质产物的均质袋进行平整化处 理，以使培养基厚度一致，方便后续菌落计数。由此，能够有效地确定原料胶中菌落总数，检 出率较高，准确性高。
[0017] 根据本发明的实施例，第一均质处理是在转速为8000~10000r/min的条件下进 行1~2min。利用生理盐水对原料胶进行溶解和稀释，并进行均质处理，使原料胶均匀分散 于生理盐水中。由此，能够有效提高原料胶中菌体含量的检出率，准确性强。
[0018] 根据本发明的实施例，第二均质处理是在转速为8000~lOOOOr/min的条件下进 行lmin。发明人经过大量实验优化得到最优第二均质处理条件。在此均质条件下，能够有 效地使原料胶均匀分散于培养基中。由此，能够有效提高原料胶中菌体含量的检出率，准确 性强。
[0019] 根据本发明的实施例，培养基包括TTC。根据本发明的具体实施例，培养基进一步 包括常规用于检测菌体含量的成分，例如营养肉汤。在营养肉汤中添加 TTC，即2, 3, 5-氯化 三苯四氮唑，TTC可以接受细菌脱氢酶作用所得到的氢，形成红色的甲替使菌落呈红色，而 且甲替不再被氧气所氧化，从而有助于菌落形态的观察与计数。由此，能够有效提高原料胶 中菌体含量的检出率。
[0020] 根据本发明的实施例，平整化处理所得到的第二均质处理产物的厚度为0. 1~ 0. 5毫米，优选为0. 3~0. 4毫米。发明人经过大量实验优化得到最优的第二均质处理产 物的厚度。如第二均质处理产物的厚度过高，菌落之间相互遮挡，影响计数。若第二均质处 理产物的厚度较薄，菌体易重叠，影响计数。具体地，可以通过对装有第二均质处理产物的 均质袋进行刮涂处理，以达到平整化的效果。由此，能够有效提高原料胶中菌体含量的检出 率。
[0021] 根据本发明的实施例，培养基中不含有琼脂。原料胶溶于水后呈凝固状态，无需加 热即可凝固。所以原料胶既可以作为待测样品，又起到了凝固培养基的作用，减低了成本， 省略了加热过程，缩短了检测时间，提高效率。
[0022] 在本发明的第二方面，本发明提出检测原料胶中菌体含量的方法。该方法包括： (1)称取营养肉汤溶于蒸馏水中煮沸，然后将得到的混合物在121°C高压灭菌15min，将灭 菌得到的产物冷却至50°C左右，并向冷却的混合物中加入经过煮沸灭菌的1 % TTC溶液，调 节pH值为7. 1~7. 3,得到发酵培养基；（2)称取25g原料胶置于盛有225mL生理盐水中的 无菌均质袋中，在l〇〇〇〇r/min的转速下进行第一均质处理2min，制成1 :10的稀释液；（3) 称取IOg稀释液置于无菌均质袋中，加入15ml发酵培养基，在8000r/min的转速下进行第 二均质处理lmin，然后刮涂均质袋，使得第二均质处理产物的厚度为0. 33毫米；(4)将步骤 (3)所得到的含有第二均质处理产物的无菌均质袋置