于36土 1°C培养48h±2h，菌落计数， 并计算得到原料胶中菌体含量。由此，能够有效提高原料胶中菌体含量的检出率，检测结果 准确性强。
[0023] 下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的 实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条 件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪 器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0024] 1、仪器：
[0025] 恒温培养箱；
[0026] 冰箱：2°C ~5°C;
[0027] 天平：感量为0. lg、均质器、振荡器。
[0028] 2、试剂与材料
[0029] 无菌吸管：ImL (具0.0 lmL刻度）、IOmL (具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头；
[0030] 无菌锥形瓶：容量250mL、500mL ;
[0031] 无菌均质袋：长32cmX宽24cm ;
[0032] pH计或pH比色管或精密pH试纸；
[0033] 载玻片。
[0034] 实施例1
[0035] 在该实施例中，按照下列步骤检测卡拉胶中菌落总数：
[0036] 1、培养基的配制
[0037] 营养肉汤19. Og(市售）；
[0038] 1 % TTC 溶液（0· 4gTTC 溶于 40mL 蒸馏水中）40mL ;
[0039] 琼脂 15. Og ;
[0040] 蒸馏水 960mL ;
[0041] ρΗ7· 1 ~7. 3(25°C )。
[0042] 准确称取营养肉汤19. Og溶于960mL蒸馏水中，煮沸完全溶解后分装，121°C高压 灭菌15min，取出冷却至50°C左右，每240mL营养肉汤中加入经过煮沸灭菌的1% TTC溶液 IOmL0
[0043] 2、操作过程
[0044] (1)称取25g卡拉胶置于盛有225mL生理盐水中的无菌均质袋中，在均质机上以 10000r/min的转速进行第一均质处理2min，制成1 :10的稀释液；
[0045] (2)称取IOg稀释液置于无菌均质袋中，加入15ml培养基，在均质机上以8000r/ min的转速进行第二均质处理lmin，然后用载玻片刮涂均质袋，使得第二均质处理产物的 厚度为〇. 33毫米。同时，分别吸取ImL发酵培养基加入两个无菌均质袋内作空白对照；
[0046] (3)将步骤（2)所得到的含有第二均质处理产物的无菌均质袋和空白对照置于 36°C ±1°C培养 48h±2h。
[0047] 对比例I
[0048] 按照实施例1的方法检测卡拉胶中菌体含量，区别在于，
[0049] 步骤⑵为：称取1克稀释液置于无菌平皿内，然后及时将15mL~20mL冷却至 46 °C左右的培养基倾注平皿，摇匀。
[0050] 实施例2
[0051] 按照GB4789. 2-2010的方法对实施例1和对比例1进行菌落计数和报告。
[0052] 表1给出了实施例1和对比例1的方法检出的菌落数。结果发现，对比例1的方 法不能完全检出所有菌体，原因主要是原料胶与培养基在平皿中混合不均匀，原料胶聚集 成大量块状物，其中的菌体无法接触培养基，以致无法生长，导致不能检出，只有少部分菌 体能够被检出。实施例1的方法能够充分检出原料胶中菌体。
[0053] 表1实施例1和对比例1的菌落总数
[0054]
[0055] 对比例2
[0056] 按照实施例1的方法检测卡拉胶中菌体含量，区别在于，
[0057] 步骤（1)进一步包括：取1毫升1:10的稀释液置于盛有IOmL生理盐水中的无菌 均质袋中，l〇〇〇〇r/min均质2min，制成I :100的稀释液，
[0058] 步骤（2)称取1:100的稀释液进行试验。
[0059] 实施例2
[0060] 每个原料胶样品分别独立地按照实施例1和对比例2的方法进行10次，测定其菌 体含量。结果发现，按照实施例1的方法进行检测时，各次得到的结果之间的相对偏差较 小，而按照对比例2的方法进行检测时，各次得到的结果之间偏差较大，准确性较差。
[0061] 实施例3
[0062] 在该实施例中，按照下列步骤分别测定实施例1和对比例1方法的检出率
[0063] (1)通过向无菌样品中添加已知菌落数的目标菌，得到待测样；
[0064] (2)分别按照实施例1和对比例1的方法测定待测样的菌落数；以及
[0065] (3)分别计算实施例1和对比例1方法的检出率，其中检出率（％) =(待测样检 测出的菌落数/已知目标菌的菌落数）X 100 %。
[0066] 表2给出了实施例1和对比例1的方法的检出率，可以看出本发明的方法检出率 较高，可以用于原料胶中的菌落总数的检测。
[0067] 表2实施例1和对比例1的检出率
[0068]
[0069] 在本说明书的描述中，参考术语"一个实施例"、"一些实施例"、"示例"、"具体示 例"、或"一些示例"等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特 点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不 必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任 一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技 术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结 合和组合。
[0070] 尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例 性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述 实施例进行变化、修改、替换和变型。
【主权项】
1. 一种检测原料胶中菌体含量的方法，其特征在于，包括： (1) 称取营养肉汤溶于蒸馏水中煮沸，然后将得到的混合物在121°c高压灭菌15min， 将灭菌得到的产物冷却至50°C左右，并向冷却的混合物中加入经过煮沸灭菌的1%TTC溶 液，调节pH值为7. 1~7. 3,得到发酵培养基； (2) 称取25g原料胶置于盛有225mL生理盐水中的无菌均质袋中，在10000r/min的转 速下进行第一均质处理2min，制成1 :10的稀释液； (3) 称取10g所述稀释液置于无菌均质袋中，加入15ml所述发酵培养基，在8000r/min 的转速下进行第二均质处理lmin，然后刮涂均质袋，使得第二均质处理产物的厚度为0. 33 毫米； (4) 将步骤（3)所得到的含有第二均质处理产物的无菌均质袋置于36±1°C培养 48h±2h，菌落计数，并计算得到原料胶中菌体含量。2. -种检测原料胶中菌体含量的方法，其特征在于，所述方法包括： (1) 将所述原料胶置于含有生理盐水的无菌均质袋中，进行第一均质处理，得到第一均 质处理产物； (2) 将所述第一均质处理产物置于无菌均质袋中，再向无菌均质袋中加入培养基，并进 行第二均质处理，得到第二均质处理产物； (3) 将含有所述第二均质处理产物的均质袋进行平整化处理；以及 (4) 将经过所述平整化处理的含有所述第二均质处理产物的均质袋进行静置培养，通 过计数菌落数，以便对所述原料胶中菌体含量进行测定， 优选地，所述原料胶与所述生理盐水的体积比为1: 9。3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于， 所述第一均质处理是在转速为8000~10000r/min的条件下进行1~2min; 所述第二均质处理是在转速为8000~10000r/min的条件下进行lmin。4. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述培养基包括TTC。5. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述平整化处理所得到的所述第二均质 处理产物的厚度为0. 1~0. 5毫米，优选为0. 3~0. 4毫米。6. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述培养基中不含有琼脂。
【专利摘要】本发明提出检测原料胶中菌体含量的方法。所述方法包括：(1)将所述原料胶置于含有生理盐水的无菌均质袋中，进行第一均质处理，得到第一均质处理产物；(2)将所述第一均质处理产物置于无菌均质袋中，再向无菌均质袋中加入培养基，并进行第二均质处理，得到第二均质处理产物；(3)将装有所述第二均质处理产物的均质袋进行平整化处理；以及(4)将经过所述平整化处理的装有所述第二均质处理产物的均质袋进行静置培养，以便对所述原料胶中菌体含量进行测定。本发明检测原料胶中菌体含量的方法能够有效提高原料胶中菌体含量的检出率，准确性强，降低了质量安全风险。
【IPC分类】C12Q1/06
【公开号】CN105385750
【申请号】CN201511001108
【发明人】吴玉秋, 李雪晶, 俞东威, 马文丽, 宋晓东
【申请人】内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2015年12月28日