一种用淡水鱼制备胶原蛋白肽的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种胶原蛋白肽的制备方法，特别是一种用淡水鱼制备胶原蛋白肽的 方法。
【背景技术】
[0002] 传统的胶原蛋白主要来源于猪、牛等陆生哺乳动物的皮、骨和肌脏中，但是由于疯 牛病、口蹄疫等流行病的发生，对此种胶原蛋白的安全产生了质疑，与此同时，宗教问题与 素食者对饮食的特殊需求，使得寻求一种新的高品质胶原蛋白来源成为急需解决的问题。 因此，从水生动物中提取安全的、可以满足更多人需求的高品质胶原蛋白成为当今社会的 研究热点。
[0003] 我国淡水鱼产量居世界首位，淡水鱼加工工业随着淡水鱼产量的增长而快速发 展。目前，淡水鱼加工过程仅局限于对鱼体肌肉的利用，而对鱼皮、鱼鳞等通常认为的下脚 料加工利用甚少，绝大多数被抛弃。据统计，我国每年淡水鱼加工业的废弃物总量达到200 万吨以上，其中鱼皮约占8%，即16万吨。这样既造成环境污染，又浪费了资源。为了充分 合理的利用资源，出现了利用淡水鱼皮制备胶原蛋白的技术。早期多采用清水高温蒸煮法、 酸水解法和碱水解法等，但上述方法都会破坏胶原蛋白、氨基酸等活性成分，提取率和纯度 低，成品利用价值低。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种用淡水鱼制备胶原蛋白肽的方法，先分别对鱼鳞和鱼皮 进行预处理，再采用复合酶解技术，大大缩短了提取时间，制得质量好、提取率和纯度高的 胶原蛋白。
[0005] -种用淡水鱼制备胶原蛋白肽的方法，具体步骤为：
[0006] (1)将淡水鱼鱼鳞用5-7倍重量的蒸馏水浸泡10_20h，过滤，滤液减压浓缩至原体 积的3/4,加稀盐酸调节pH值为5-6,过滤，加入2-3倍鱼鳞重量的90%乙醇80-90°C加热回 流30_60min，过滤，滤液加饱和石灰水调节pH值为7, 500-1000r/min离心分离10_20min， 取上清液，加0. 03-0. 05%上清液重量的中性蛋白酶和0. 04-0. 08%上清液重量的胶原蛋 白酶，加热至l〇〇°C酶解20-30min，85°C灭酶5min，备用；
[0007] (2)将淡水鱼鱼皮用5倍重量的50%乙醇浸泡10-20h，过滤，滤液减压浓缩至原体 积的3/4,加稀盐酸调节pH值为5-6,过滤，滤液以2BV/h的速率上AB-8大孔吸附树脂柱，先 用50% 7醇以2BV/h的速率洗脱，再用30%乙醇以2BV/h的速率洗脱，滤液、树脂柱、50% 乙醇和30%乙醇的体积比为I : 1 : 1.2-1. 8 : 1.2-1. 8,收集洗脱液，加0.02-0. 04%洗 脱液重量的脂肪酶酶解30分钟，85°C灭酶5分钟，500-1000r/min离心分离10-20min，取上 清液，加0. 03-0. 05%上清液重量的木瓜蛋白酶和0. 05-0. 09%上清液重量的风味蛋白酶， 加热至l〇〇°C酶解20-30min，85°C灭酶5min，备用；
[0008] (3)把步骤（1)和（2)的中间产物合并，减压浓缩，真空干燥，即得淡水鱼胶原蛋白 肽。
[0009] 本发明先对淡水鱼皮和鱼鳞分别进行特殊工艺的预处理，有利于后续工艺有效成 分的提取，再采用分别复合酶解技术，大大缩短了提取胶原蛋白肽的时间，制备的淡水鱼胶 原蛋白肽提取率高、纯度高、质量好，可广泛应用于食品、化妆品、生物医学等领域。
[0010] 本发明的原料淡水鱼可以为青鱼、草鱼、鲢鱼、鲤鱼、鲫鱼、罗非鱼等，均通过检疫， 无腐变、无病害，去除鱼肉、鱼鳍，把鱼鳞和鱼皮进行清洗消毒。
【具体实施方式】：
[0011] 实施例1 :
[0012] -种用淡水鱼制备胶原蛋白肽的方法，具体步骤为：
[0013] (1)将淡水鱼鱼鳞用5倍重量的蒸馏水浸泡10h，过滤，滤液减压浓缩至原体积的 3/4,加稀盐酸调节pH值为5-6,过滤，加入2倍鱼鳞重量的90%乙醇80°C加热回流30min， 过滤，滤液加饱和石灰水调节pH值为7, 500r/min离心分离lOmin，取上清液，加0. 03%上 清液重量的中性蛋白酶和0. 04%上清液重量的胶原蛋白酶，加热至100°C酶解20min，85°C 灭酶5min，备用；
[0014] (2)将淡水鱼鱼皮用5倍重量的50 %乙醇浸泡10h，过滤，滤液减压浓缩至原体积 的3/4,加稀盐酸调节pH值为5-6,过滤，滤液以2BV/h的速率上AB-8大孔吸附树脂柱，先 用50 %乙醇以2BV/h的速率洗脱，再用30%乙醇以2BV/h的速率洗脱，滤液、树脂柱、50% 乙醇和30%乙醇的体积比为I : 1 : 1.2 : 1.2,收集洗脱液，加0.02%洗脱液重量的脂 肪酶酶解30分钟，85°(：灭酶5分钟，50(^/1^11离心分离101^11，取上清液，加0.03%上清液 重量的木瓜蛋白酶和〇. 05%上清液重量的风味蛋白酶，加热至100°C酶解20min，85°C灭酶 5min，备用；
[0015] (3)把步骤（1)和（2)的中间产物合并，减压浓缩，真空干燥，即得淡水鱼胶原蛋白 肽。
[0016] 实施例2:
[0017] -种用淡水鱼制备胶原蛋白肽的方法，具体步骤为：
[0018] (1)将淡水鱼鱼鳞用6倍重量的蒸馏水浸泡15h，过滤，滤液减压浓缩至原体积 的3/4,加稀盐酸调节pH值为5-6,过滤，加入2. 5倍鱼鳞重量的90 %乙醇85°C加热回流 45min，过滤，滤液加饱和石灰水调节pH值为7,800r/min离心分离15min，取上清液，加 0. 04%上清液重量的中性蛋白酶和0. 06%上清液重量的胶原蛋白酶，加热至100°C酶解 25min，85°C灭酶 5min，备用；
[0019] (2)将淡水鱼鱼皮用5倍重量的50%乙醇浸泡15h，过滤，滤液减压浓缩至原体积 的3/4,加稀盐酸调节pH值为5-6,过滤，滤液以2BV/h的速率上AB-8大孔吸附树脂柱，先 用50 %乙醇以2BV/h的速率洗脱，再用30%乙醇以2BV/h的速率洗脱，滤液、树脂柱、50% 乙醇和30%乙醇的体积比为I : 1 : 1.5 : 1.5,收集洗脱液，加0.03%洗脱液重量的脂 肪酶酶解30分钟，85°(：灭酶5分钟，70(^/1^11离心分离151^11，取上清液，加0.04%上清液 重量的木瓜蛋白酶和〇. 07%上清液重量的风味蛋白酶，加热至100°C酶解25min，85°C灭酶 5min，备用；
[0020] (3)把步骤（1)和（2)的中间产物合并，减压浓缩，真空干燥，即得淡水鱼胶原蛋白 肽。
[0021] 实施例3:
[0022] -种用淡水鱼制备胶原蛋白肽的方法，具体步骤为：
[0023] (1)将淡水鱼鱼鳞用7倍重量的蒸馏水浸泡20h，过滤，滤液减压浓缩至原体积的 3/4,加稀盐酸调节pH值为5-6,过滤，加入3倍鱼鳞重量的90%乙醇90°C加热回流60min， 过滤，滤液加饱和石灰水调节？!1值为7，100〇17 /1]1；[11离心分离201]1；[11，取上清液，加0.05%上 清液重量的中性蛋白酶和0. 08%上清液重量的胶原蛋白酶，加热至100°C酶解30min，85°C 灭酶5min，备用；
[0024] (2)将淡水鱼鱼皮用5倍重量的50 %乙醇浸泡20h，过滤，滤液减压浓缩至原体积 的3/4,加稀盐酸调节pH值为5-6,过滤，滤液以2BV/h的速率上AB-8大孔吸附树脂柱，先 用50 %乙醇以2BV/h的速率洗脱，再用30%乙醇以2BV/h的速率洗脱，滤液、树脂柱、50% 乙醇和30%乙醇的体积比为I : 1 : 1.8 : 1.8,收集洗脱液，加0.04%洗脱液重量的脂肪 酶酶解30分钟，85°C灭酶5分钟，1000r/min离心分离20min，取上清液，加0. 05%上清液 重量的木瓜蛋白酶和〇. 09%上清液重量的风味蛋白酶，加热至100°C酶解30min，85°C灭酶 5min，备用；
[0025] (3)把步骤（1)和（2)的中间产物合并，减压浓缩，真空干燥，即得淡水鱼胶原蛋白 肽。
[0026] 实施例4 :
[0027] -种用淡水鱼制备胶原蛋白肽的方法，具体步骤为：
[0028] (1)将淡水鱼鱼鳞用4倍重量的蒸馏水浸泡5h，过滤，滤液减压浓缩至原体积 的3/4，加稀盐酸调节pH值为