灵芝菌丝体的工业级培养方法
【技术领域】
[0001] 本揭示内容是有关于一种工业级的灵芝培养方法，特别是用以培养灵芝菌丝体， 而非灵芝子实体的工业级培养方法。
【背景技术】
[0002] 长久以来，在东南亚地区，食用性真菌都被当作营养补充品或健康食品来使用， 其中又以灵芝（Ganoderma lucidum)为大宗，且因其具有医疗效果也被当作药材使用 超过千年之久。自灵芝中分离出来的活性成分大致包括灵芝三砲类（triterpenoids)、 多糖体（polysaccharides)、核苷（nucleic acids)、多肽类（polypeptides)、和植物 固醇类（phytosterols)等等。在这些活性成分中，又以灵芝三萜类最重要，因其具 有药学活性，包括抑制胆固醇合成、抗癌、抗高血压等等。灵芝三萜类包含各式灵芝 酉爱(ganoderic acids, GAs)、赤灵酉爱(ganodermic acids, GMAs)、灵芝酉享(ganoderic alcohol)、灵芝酮（ganoderic ketone)、灵芝酸（ganoderic aldehyde)等化合物。在 灵芝酸的相关研究中发现，灵芝酸具有可杀死癌细胞的细胞毒性和抑制其扩增的效 果。举例来说，已知灵芝酸D(ganoderic acid D，GAD)可防止人类子宫颈癌细胞（即， Hela 细胞）增生（Yue et al.，Mol Cell Proteomics(2008)7:949-961);灵芝酸 A 和 H(ganoderic acids A and Η;简称GAA及GAH)可抑制乳癌细胞生长或防止其侵犯其 它组织（Jiang et al·，Int J Mol Med(2008)21:577-584);灵芝酸 X(ganoderic acid X，GAX)可抑制拓朴酶活性并能诱使肝癌细胞进入细胞凋亡程序（Li et al.，Life Sci. (2005) 77, 252-265);灵芝酸M除了可有效地抑制癌细胞生长外，还可抑制肺癌细胞的 迁移（Wang et al.，Int Immunopharmacol (2007) 7:864-870)，GMAS 则已知可诱发血 小板聚集（Wang et al.，Biochim. Biophys. Acta. (1989)986, 151-160)、抑制血小板 功能（Wang et al.，Biochem. J. (1991) 277 (Pt 1)，189-197)和抑制由血栓素 A2 (Su et al. , Biochem. Pharmacol. (1999)58, 587-595 ；Su et al. , Biochim. Biophys. Acta. (1999b) 1437, 223-234)或前列腺素 El (Su et al.,Thromb. Res. (1999c) 99, 135-145)在血 小板中所诱发的细胞反应。
[0003] 过去，灵芝仅能在自然环境中生长或仅出现在偏远高山的老树上。但是，随着灵芝 培育技术不断被改进，现在已可在人工环境下培育出灵芝，但多半使用固态基质；例如，日 本公开专利第57014816号揭示一种透过将赤芝孢子种植在木材中而来培育赤芝的方法， 但此方法的缺点是产率太低，因播种孢子本身就需要花费许多人力，且培育期太长，需等到 120至150天才能采收，此外，所长成的灵芝及其所含活性化合物（三萜类化合物）的种类 与含量都与天然灵芝相去甚远。
[0004] 基于此，相关领域亟需一种改良的灵芝培育方法，其可在极短的时间内产生可供 制造药物用的灵芝活性化合物。
【发明内容】
[0005] 因此，本揭示内容目的是提供一种用以培育灵芝，特别是用以培育灵芝菌丝体， 而非子实体，的工业级培育方法。依据本揭示内容，每隔30天可自约300公升的液态培 养物中收成高达约15公斤的干燥灵芝菌丝体，且所收成的干燥灵芝菌丝体中富含高量的 三砲化合物，其至少包含灵芝酸S(ganoderic acid S，GAS)、灵芝酸T(ganoderic acid 1'，6厶1')、灵芝酸]^(8&11〇(161'；^&(^(1]\16,6厶]\16)、灵芝酸1?(8&11〇(161'；^&(^(11?，6厶1?)、及赤灵 酸S(ganodermic acid S，GMAS)。依据一较佳实施方式，由所述方法培育而成的灵芝菌丝 体，每公克干燥菌丝体含有约28-33毫克的三萜化合物。
[0006] 所揭示工业级培育灵芝菌丝体的方法包含以下步骤：
[0007] (a)将灵芝菌丝体接种在不超过1公升的液态培养基中并培育约5-15天；
[0008] (b)将步骤（a)所收成的液态培育物接种在至少30公升的液态培养基中并培育约 2-5 天；
[0009] (c)将步骤（b)所收成的液态培育物接种在至少300公升的液态培养基中并培育 约2-5天；以及
[0010] (d)将步骤（c)所收成的液态培育物移转到复数个培养盘中，使每一培养盘中每 毫升液态培养基分别具有约1. 5-2. 5平方公分的表面积，并且在介于约200-2, 000照度下 培育约10-20天。
[0011] 依据一较佳实施方式，所揭示方法的每一步骤均是在介于约20-35°C的温度、约 50-100%的相对湿度、以及约5-200LPM (公升/分钟）的通气量下实施。
[0012] 依据一较佳实施方式，所述步骤（a)、（b)及（c)均是在黑暗中且振荡或搅拌速度 介于约50-200rpm下实施：且所述步骤（d)的照度为7201ux。
[0013] 适合用于本发明的液态培养基至少包含葡萄糖、蔗糖、蛋白胨、酵母抽出物和盐 类。非必要的，此液态培养基还可更包含黄豆粉。
[0014] 依据一较佳实施方式，本发明方法更包含以下步骤：
[0015] (e)从步骤（d)的液态培育物中收获灵芝菌丝体；和
[0016] (f)将步骤（e)所收获的灵芝菌丝体干燥直到其水分含量低于5%为止，其中每公 克该干燥的灵芝菌丝体中含有约28-33毫克的三萜化合物。
[0017] 依据本发明培育方法所获得的干燥的灵芝菌丝体中的三萜化合物至少包含灵芝 酸 S(ganoderic acid S，GAS)、灵芝酸 T(ganoderic acid T，GAT)、灵芝酸 Me(ganoderic acid Me，GAMe)、灵芝酸 R(ganoderic acid R，GAR)、及赤灵酸 S(ganodermic acid S，GMAS) 〇
[0018] 依据一较佳实施方式，步骤（d)中的培养盘数目为288 ;且依据本发明方法每隔30 天可收获至少约15公斤的干燥灵芝菌丝体。
[0019] 透过以下的详细说明、图示与附随的权利要求书，将可更了解本揭示内容的这些 及其它特征。需知以上的概述及以下的详细说明仅为例示，用来阐述本揭示内容，而非用以 限制本揭示内容的范畴。
【附图说明】
[0020] 为让本发明的上述与其它目的、特征、优点与实施例能更明显易懂，所附图式的说 明如下：
[0021] 图1是依据本发明一实施方式所显示的培养系统100的示意图；及
[0022] 图2是依据本发明另一实施方式所显示的培养盘121a和培养架120的示意图。
【具体实施方式】
[0023] 为了使本
【发明内容】
的叙述更加详尽与完备，下文针对了本发明的实施方式与具体 实施例提出了说明性的描述；但这并非实施或运用本发明具体实施例的唯一形式。实施方 式中涵盖了多个具体实施例的特征以及用以建构与操作该多个具体实施例的方法步骤与 其顺序。然而，亦可利用其它具体实施例来达成相同或均等的功能与步骤顺序。
[0024] 虽然用以界定本发明较广范围的数值范围与参数皆是约略的数值，此处已尽可能 精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而，任何数值本质上不可避免地含有因个别测试 方法所致的标准偏差。在此处，"约"通常是指实际数值在一特定数值或范围的正负10%、 5%、1%或0.5%之内。或者是，"约"一词代表实际数值落在平均值的可接受标准误差之 内，视本发明所属技术领域中具有通常知识者的考虑而定。除了实验例之外，或除非另有明 确的说明，当可理解此处所用的所有范围、数量、数值与百分比（例如用以描述材料用量、 时间长短、温度、操作条件、数量比例及其它相似者）均经过"约"的修饰。因此，除非另有 相反的说明，本说明书与附随权利要求书所揭示的数值参数皆为约略的数值，且可视需求 而更动。至少应将该多个数值参数理解为所指出的有效位数与套用一般进位法所得到的数 值。
[0025] 除非本说明书另有定义，此处所用的科学与技术词汇的含义与本发明所属技术领 域中具有通常知识者所理解与惯用的意义相同。此外，在不和上下文冲突的情形下，本说明 书所用的单数名词涵盖该名词的复数型；而所用的复数名词时亦涵盖该名词的单数型。
[0026] 本
【发明内容】
是关于一种工业级培养灵芝菌丝体的方法，依据所揭示方法，每隔30 天可收