分别包含两栏（120a, 120b)，每一栏可分别置入至少一个培养盘（121a)。培养 盘可由金属或塑料材料制成，且可以具有任意的形状或大小。在如图2所示的实施方式中， 该培养盘（121a)是由不锈钢金属制成，为长方形形状，宽度约40公分、长度约60公分且高 度约5公分。每一培养架的每一栏最多可置入36个培养盘，因此每一培养架上可堆栈高达 72个培养盘；故，所揭示培育系统100最多可放入288个培养盘。
[0032] 接着，将依据以上所揭示方法而培育并收获的灵芝菌丝体在不高于70°C的温度下 风干，最好是在不高于60°C的温度下风干，直到其水分含量低于约10 %以下，较佳是低于 约5 %以下，更佳是低于约3 %以下。
[0033] -般来说，依据上述培育方法，可从每一批次培育物或300公升的第三阶段液态 培育物中收成约10-20公斤的干燥灵芝菌丝体，较佳是可收成约13-17公斤的干燥灵芝菌 丝体。
[0034] 并且，依据本发明揭示培育方法而收成的干燥灵芝菌丝体中，每公克干燥灵芝菌 丝体中含有高达约28-33毫克的三萜化合物；较佳是，每公克干燥灵芝菌丝体中含有高达 约30毫克的三萜化合物。该多个三萜化合物至少包含GAS、GAT、GAMe、GAR、及GMAS。
[0035] 此外，当需要获得更高量的三萜化合物时，此领域具有通常知识的相关技艺人士 可轻易地借由成倍复制此所揭示的培育方法与系统，而将所揭示制备方法放大，以获得成 倍（如2倍、3倍或更高倍数）的干燥灵芝菌丝体。
[0036] 以下实施例是用来阐明本揭示内容特定方式，并帮助已知技艺者了解并实施本揭 示内容。但本揭示内容范畴并不限于该多个实施例中。
[0037] 实施例
[0038] 实施例1以工业级规模培育灵芝菌丝体
[0039] I. 1生产第一阶段液态培育物
[0040] 将约1平方公分的灵芝菌丝体接种在400毫升的第一液态培养基中，此第一液态 培养基包含1. 5%葡萄糖、1. 5%蔗糖、0. 5%蛋白胨、0. 2%酵母抽出物、和0. 06% KH2PO4。接 着，以约85rpm的速度持续搅拌培育物，并在约28°C的温度下培育约10天，所得培育物称 "第一阶段液态培育物"。
[0041] L 2生产第二阶段液态培育物
[0042] 将约30公升的第一液态培养基倒入体积约50公升的酿酵槽内，接着，将约2. 8公 升的实施例1. 1的第一阶段液态培育物接种在酿酵槽内的第一液态培养基中。以约150rpm 的速度持续搅拌培育物，并在通气量约10LPM、温度约28°C下培育约3天，所得培育物称"第 二阶段液态培育物"。
[0043] 1. 3生产第三阶段液态培育物
[0044] 将约300公升的第二液态培养基倒入体积约500公升的酿酵槽内，接着，将约50 公升的实施例1.2的第二阶段液态培育物接种在酿酵槽内的第二液态培养基中。此第二 液态培养基至少包含：3 %葡萄糖、6. 5 %蔗糖、1. 0 %蛋白胨、3 %黄豆粉、0. 6 %酵母抽出物、 0. 06% KH2POjP 0. 05% MgSO4。接着，以约IOOrpm的速度持续搅拌培育物，并在通气量约 100LPM、温度约28°C下培育约4天，所得培育物称"第三阶段液态培育物"。
[0045] 1. 4放大培育第三阶段液态培育物
[0046] 在无菌情况下，于288个培养盘（40公分x60公分x5公分）中分别倒入约1公升 的第三阶段液态培育物，接着，将培养盘放入如图1所示的培养系统中，于100 %相对湿度、 通气量约15LPM、温度约28°C、光照约460照度下培育约14天。收集所产生的灵芝菌丝体， 并以约60°C的温度风干直到其含水量低于约5%为止。
[0047] 实施例2各培育条件对实施例1的干燥灵芝菌丝体内三萜化合物量的影响
[0048] 在本实施例中，透过改变实施例1. 4的培育条件以及产物中所含三萜化合物的 量，来找出最适宜放大实施例1.3的第三阶段液态培育物的培育条件。所测试并加以变 化的培育条件包括：光照强度从〇至720照度，通气量从0至30LPM，相对湿度从50 %至 100%，温度从约23°C至33°C。之后，收集各条件下所培育出来的灵芝菌丝体，于60°C的温 度下风干直到水分含量低于5%，并测定其所含的三萜化合物（其至少包含GAS、GAT、GAMe、 GAR、及GMAS)的总量。结果示于表1-5。
[0049] 表1光照强度对实施例1的灵芝菌丝体中三萜化合物量的影响
[0051] 表2通气量对实施例1的灵芝菌丝体中三萜化合物量的影响
[0052]
[0053] 表3相对湿度对实施例1的灵芝菌丝体中三萜化合物量的影响
[0056] 表4培育温度对实施例1的灵芝菌丝体中三萜化合物量的影响
[0058] 表5每一培养架上装载的培养盘数对实施例1的灵芝菌丝体中三萜化合物量的 影响
[0059]
[0060] 综合以上表1-5的结果，可发现如果将最后放大阶段的灵芝培育物培育在有光照 的环境下，可提高灵芝菌丝体内三萜化合物的含量高达3倍，比较表1中无光照以及光照 260照度的结果，每克菌丝干重内三萜化合物的含量从9. 11毫克提高至26. 66毫克。至于 其它培育条件对三萜化合物含量的影响，则发现通气量至少需达15LPM、相对湿度至少需达 80 %、且温度至少需为28 °C。
[0061] 至于系统中培养细胞的盘数，实验也发现当培养盘数少的时候，灵芝菌丝体内三 萜化合物的含量反而呈现微幅下降。推测此是因为培育系统中因培育物减少造成相对湿度 下降（即，无法维持80% )所致。
[0062] 当可理解上述实施方式与实施例仅为例示，且熟习此技艺者可对齐进行各种修 饰。上文提出的说明书、实施例与数据的目的在于使本说明书的结构完备，并作为实作本发 明的例示。虽然本
【发明内容】
已以实施方式揭示如上，然其并非用以限定本揭示内容，任何熟 习此技艺者，在不脱离本揭示内容的精神和范围内，当可作各种的更动与润饰，因此本发明 内容的保护范围当视后附的权利要求书所界定者为准。
【主权项】
1. 一种工业级培养灵芝菌丝体的方法，包含： (a) 将灵芝菌丝体接种在不超过1公升的一液态培养基中并培育5-10天； (b) 将步骤（a)的液态培育物接种在至少30公升的该液态培养基中并培育2-5天； (c) 将步骤（b)的液态培育物接种在至少300公升的该液态培养基中并培育2-5天； 及 (d) 将步骤（c)的液态培育物分装到多个培养盘中，并在介于200至2, 000照度下培育 10-20天，其中在每个培养盘中，每毫升培养基约具有1. 5-2. 5平方公分的表面积； 其中，步骤（a)、（b)及（c)均是在黑暗中进行，且步骤（a)至（d)任一步骤都是在温度 20-30°(：间、相对湿度50-100%间、通气量5-2001^]\1间实施。2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，在每个培养盘中，每毫升培养基约具有1. 8 平方公分的表面积。3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，该液态培养基包含葡萄糖、蔗糖、蛋白胨、酵 母抽出物、及盐类。4. 如权利要求3所述的方法，其特征在于，该液态培养基更包含黄豆粉。5. 如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（d)的照度为460照度。6. 如权利要求2所述的方法，其特征在于，该多个培养盘的数目为288。7. 如权利要求2所述的方法，更包含： (e) 自步骤（d)的培育物中收获菌丝体；以及 (f) 干燥步骤（e)所收获的菌丝体直到其含水量低于5%为止，其中该干燥的灵芝菌丝 体中，每公克灵芝菌丝体干重中三萜化合物总量高达28-33毫克。8. 如权利要求7所述的方法，其特征在于，该三萜化合物至少包含GAS、GAT、GAMe、GAR、 及GMAS〇9. 如权利要求7所述的方法，其特征在于，该方法可产生约15公斤的干燥灵芝菌丝体。
【专利摘要】本文揭示一种用以培养灵芝菌丝体的工业级方法。依据所揭示内容，每隔30天可自约300公升的液态培养物中收成高达约15公斤的干燥灵芝菌丝体，且所收成的干燥灵芝菌丝体中富含高量的三萜化合物，其至少包含灵芝酸S(ganoderic？acid？S,GAS)、灵芝酸T(ganoderic？acid？T,GAT)、灵芝酸Me(ganoderic？acid？Me,GAMe)、灵芝酸R(ganoderic？acid？R,GAR)、及赤灵酸S(ganodermic？acid？S,GMAS)。
【IPC分类】A01G1/04, C12M1/04, C12N1/14
【公开号】CN105378056
【申请号】CN201380075962
【发明人】黄立铭, 陈智玮, 陈孟堂, 刘彦均, 陈光地
【申请人】双鹤生物科技股份有限公司
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2013年8月9日
【公告号】EP2997127A1, US20160044872, WO2015018076A1