一种樟芝菌丝体粉的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种樟芝菌丝体粉的制备方法。
【背景技术】
[0002] 樟芝，学名为AntrodiaCamphorata，俗名牛樟燕、红樟芝、樟内燕、樟燕等，因其疗 效特殊神奇、活人无数，在民间甚至有"阴阳对口菇"之称。因樟芝具有解毒保肝、抗癌、强 化免疫、抗过敏、降血脂等神奇功效，素有"药芝之王"、"中国台湾森林中之红宝石"的美誉。
[0003] 樟芝中含有多种生理活性成分，如多糖、三萜类化合物、SOD腺苷、蛋白质、多种维 生素、微量元素等。其具备的生理活性功能为抗肿瘤、增强免疫力、抗病毒、抗过敏、抗高血 压、降低胆固醇等。
[0004] 樟芝中含有的三萜类化合物种类是所有真菌产品中最多的，一般认为樟芝萃取物 中苦味成分的主要来源。其中多达10多种新发现三萜类为樟芝所独有，试验证实：这些三 萜类化合物能抑制肝癌细胞的增殖、毒杀老鼠血癌细胞活性、抗副交感神经作用、抗血清素 活性、活化神经细胞生长能力等功能；比樟芝多糖扮演着更重要的活性调节角色。
【发明内容】
[0005] 本发明要解决的技术问题是：采用发酵滤液循环利用的发酵工艺生产樟芝菌丝体 粉，利用发酵滤液中的有效成分等微量因子刺激樟芝菌快速合成有效成分，显著缩短发酵 周期，由原来的7天缩短到5-6天，并提高有效成分的含量，樟芝三萜由原来的4%提高到 7%，樟芝多糖由原来的2%提高到4%，樟芝菌粉不经过复杂的提取工艺，节约了劳动时间 且减少了有效成分的流失。
[0006] 本发明的目的是通过以下方式实现的：
[0007]-种樟芝菌丝体粉的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
[0008] 樟芝菌种经液体深层发酵，发酵结束后收集樟芝菌丝体，菌丝体再经真空干燥和 超微粉碎得樟芝菌丝体粉；其中，所述的液体深层发酵采用发酵滤液循环利用和分批补料 的发酵方式获得。
[0009] 所述的发酵滤液循环利用和分批补料的发酵方式为：发酵2天后，樟芝菌球增多， 此时加入上批樟芝发酵滤液，加入量占发酵液总体积的10% -12%，继续发酵3-4天，待发 酵液pH降到2. 7-3. 3,发酵液残糖< 0. 5,还原糖< 0. 3时，结束发酵。
[0010] 樟芝菌种摇瓶培养后再经液体深层发酵，所述的摇瓶培养是将樟芝菌株以常规方 法活化后，用接种环取樟芝菌株2-3环接种于种子液培养基摇瓶，培养温度26-27°C，培养 时间为6-8天，转速为120rpm，种子培养基组成为葡萄糖5% -6%、酵母粉1. 5% -2%、蛋 白胨3% -4%、磷酸二氢钾0? 2% -0? 3%、硫酸镁0? 02% -0? 03%、消泡剂0? 1%，pH调至 4.5 ;优选种子培养基组成为葡萄糖6%、酵母粉2%、蛋白胨4%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁 0.03%、消泡剂0.1%，口11调至4.5。
[0011] 所述的深层发酵是指摇瓶培养结束后，将樟芝种子液接种到发酵培养基中，接种 量5% -6%;发酵培养基组成为葡萄糖4% -5%、酵母粉2% -3%、蛋白胨5% -6%、磷酸二 氢钾0. 2% -0. 3%、硫酸镁0. 02% -0. 03%、消泡剂0. 1%，调pH至4. 5 ;培养温度26-28°C， 通气比1:0. 4。优选将樟芝种子液接种到发酵培养基中，接种量6% ;发酵培养基组成为葡 萄糖4 %、酵母粉2 %、蛋白胨5 %、磷酸二氢钾0. 3 %、硫酸镁0. 03 %、消泡剂0. 1 %，调pH 至4.5 ;培养温度26-28°C，通气比1:0. 4。
[0012] 发酵结束后，发酵液进行离心分离得樟芝菌丝体，离心转速3000rpm，离心时间 20-30min〇
[0013] 离心分离得到的樟芝菌丝体进行低温真空干燥，干燥时控制真空度 0. 08-0. 09MPa，温度 70°C以下，干燥时间 15-18h。
[0014] 所述的上批樟芝发酵滤液为：将樟芝菌株以常规方法活化后，用接种环取樟芝菌 株2-3环接种于种子液培养基摇瓶，培养温度26-27°C，培养时间为6-8天，转速为120rpm， 种子培养基组成为葡萄糖5 % -6 %、酵母粉1. 5 % -2 %、蛋白胨3 % -4 %、磷酸二氢钾 0.2% -0.3%、硫酸镁0.02% -0.03%、消泡剂0. 1%，pH调至4.5 ;摇瓶培养结束后，将樟 芝种子液接种到发酵培养基中，接种量5 % -6 % ;发酵培养基组成为葡萄糖4 % -5 %、酵母 粉2% -3%、蛋白胨5% -6%、磷酸二氢钾0.2% -0.3%、硫酸镁0.02% -0.03%、消泡剂 0. 1 %，调pH至4. 5 ;培养温度26-28°C，通气比1:0. 4,待发酵液pH降到2. 7-3. 3,发酵液残 糖< 0. 5,还原糖< 0. 3时，结束发酵。发酵液进行离心分离得樟芝菌丝体和发酵滤液，离心 转速3000rpm，离心时间20-30min;或者是在深层液体发酵过程中已经采用过发酵滤液循 环利用和分批补料的发酵方式得到的发酵滤液。
[0015] 本发明樟芝菌丝体粉的制备方法可具体包括以下步骤：
[0016] 将樟芝菌株以常规方法活化后，用接种环取樟芝菌株2-3环接种于种子液培养基 摇瓶，每个5L摇瓶种子培养瓶装培养基的量为2L，培养温度26-27°C，培养时间为6-8天， 转速为120rpm，培养基组成为葡萄糖6%、酵母粉2%、蛋白胨4%、磷酸二氢钾0. 3%、硫酸 镁0? 03%、消泡剂0? 1%，pH调至4. 5。
[0017] 摇瓶培养结束后，将樟芝种子液接种到发酵培养基中，接种量6%;发酵培养基组 成为葡萄糖4 %、酵母粉2 %、蛋白胨5 %、磷酸二氢钾0. 3 %、硫酸镁0. 03 %、消泡剂0. 1 %， 调pH至4.5 ;培养温度26-28°C，通气比1:0.4。
[0018] 发酵2天后，樟芝菌球增多，此时加入上批樟芝发酵滤液，加入量为总发酵液体积 的10%-12%，继续发酵3-4天，待发酵液pH降到2. 7-3. 3,发酵液残糖<0. 5,还原糖<0. 3 时，结束发酵。
[0019] 本发明可使用市售的樟芝菌株。
[0020] 发酵结束后，发酵液经卧式螺旋卸料沉降离心机进行分离得樟芝菌丝体，离心转 速 3000rpm，离心时间 20_30mins。
[0021] 离心分离得到的樟芝菌丝体经低温真空干燥箱进行干燥，干燥时控制真空度 0. 08-0. 09MPa，控制温度70°C以下，烘干时间15-18h。
[0022] 樟芝菌丝体粉碎过80目筛即得樟芝菌粉。
[0023] 以下通过实验例，对本发明主要参数筛选进行进一步说明：
[0024] 1.不同樟芝滤液流加量对发酵周期和产品指标的营养如表1 :
[0025]表1
[0026]
[0027] 从上表可以看出，樟芝发酵滤液添加量较少作用不大，当添加量在占本批发酵液 总体积的10% -12%之间时，其发酵周期最短，总三萜和多糖含量最多，当樟芝发酵滤液添 加量高于12 %时，由于发酵滤液添加量过高，导致对发酵罐中发酵营养物质，如葡萄糖、蛋 白胨、酵母粉等的稀释，使其营养浓度降低，反而不利于菌体的生长和有效成分的合成。
[0028] 2.取本发明实施例樟芝菌丝体粉与市售牛樟芝子实体粉比较其保肝作用，有显著 性差异，结果见表1。
[0029] 本试验共分4组，每组20只小鼠。试验分正常对照组（No. 0,喂普通饲料），高脂 对照组（No. 1，喂高脂饲料），实验组No. 2 (喂高脂饲料的同时，并每日灌胃Ig本发明实施 例樟芝菌粉），实验组No. 3 (喂高脂饲料的同时，并每日灌胃Ig市售牛樟芝子实体粉）。
[0030] 普通饲料：玉米料78. 8 %，麦麸20 %，鱼粉5 %，谷粉1 %，食盐0. 5 % ;
[0031] 高脂饲料：基础饲料78. 8%，胆固醇1%，牛胆盐0.2%，蛋黄粉10%，猪油10% ;
[0032] 分笼饲养，内垫消毒木肩，饮用自来水，喂养天数都是20d，20d后检测肝脏中TC、 TG、FFA、MDA和SOD的浓度。
[0033] 试验结果见表2:
[0034] 表2本菌粉与市售牛樟芝菌粉保肝试验结果
[0035]
[0036] 从表2中可以看出，高脂饲料组中TC、TG、FFA、MDA的含量显著高于空白组（P < 0. 05)，而SOD含量显著低于空白组（P< 0. 05)，说明高脂喂养对小鼠肝脏造成损伤，同 时减弱了小鼠肝脏的抗氧化能力；
[0037] 本菌粉组和市售子实体菌粉组TC、TG、FFA、MDA的含量显著低于高脂组（P < 0. 05)，SOD含量显著高于高脂组（P< 0. 05)，说明本发酵菌粉和市售子实体菌粉都有保 肝的作用；本菌粉组TC、TG、FFA、MDA的含量显著低于市售子实体菌粉组（P< 0. 05)，SOD 含量显著高于市售菌粉组（P< 〇. 05)，说明在保肝功能方面本发明菌粉比市售牛樟芝菌粉 效果显著。
[0038]与现有技术比较本发明的有益效果：本发明采用发酵滤液循环利用的发酵工艺生 产樟芝菌丝体粉，发酵滤液中的有效成分等微量因子刺激樟芝菌快速合成有效成分，显著 缩短发酵周期，由原来的7天缩短到5-6天，并提高有效成分的含量，樟芝三萜由原来的4% 提高到7%以上，樟芝多糖由原来的2%提高到4%以上，且樟芝菌粉不经过复杂的提取工 艺，节约了劳动时间且减少了有效成分的流失，同时还能显著增强保肝作用。
【具体实施方式】
[0039] 以下通过具体实施例进一步说明本发明。但实施例的具体细节仅用于解释本发 明，不应理解为对本发明总的技术方案的限定。本发明使用的樟芝菌株（JNPF-AC01)由江 南大学提供，经中国科学院微生物研究所菌种保藏中心鉴定。
[0040] 对比例1
[0041] 将樟芝菌株以常规方法活化后，用接种环取樟芝菌株2-3环接种于种子液培养基 摇瓶，每个5L摇瓶种子培养瓶装培养基的量为2L，培养温度26-27°C，培养时间为6-8天， 转速为120rpm，培养基组成为葡萄糖6%、酵母粉2%、蛋白胨4%、磷酸二氢钾0. 3%、硫酸 镁0? 03%、消泡剂0? 1%，pH调至4. 5。
[0042] 摇瓶培养结束后，将樟芝种子液接种到发酵培养基中，接种量6% ;发酵培养基组 成为葡萄糖4 %、酵母粉2 %、蛋白胨5 %、磷酸二氢钾0. 3 %、硫酸镁0. 03 %、消泡剂0. 1 %， 调pH至4. 5 ;培养温度26-28°C，通气比1:0. 4,待发酵液pH降到2. 7-3. 3,发酵液残糖 < 0. 5,还原糖< 0. 3时，结束发酵。
[0043] 发酵结束后，发酵液经卧式螺旋卸料沉降离心机进行分离得樟芝菌丝体和发酵滤 液，离心转速3000rpm，离心时间20_30mins。
[0044] 离心分离得到的樟芝菌丝体经低温真空干燥箱进行干燥，干燥时控制真空度0. 08 到0. 09MPa，控制温度70°C以下，烘干时间15-18h。
[0045] 樟芝菌丝体经粉碎过80目筛后即得樟芝菌粉，质量检测结果见表3
[0046] 表3樟芝菌丝体粉质量检测结果
[0047]
[0049] 实施例1
[0050] 将樟芝菌株以常规方法活化后，用接种环取樟芝菌株2-3环接种于种子液培养基 摇瓶，