专利名称：中国被毛孢菌粉生产方法
技术领域：
本发明涉及一种微生物的生产方法，特别涉及一种冬虫夏草中国被毛孢菌 粉的生产方法。
背景技术：
冬虫夏草是麟翅目蝙蝠蛾属的虫草蝙蝠蛾(Hepialus armoricamus Oberthur)
幼虫感染中国被毛孢真菌后，在体内大量繁殖后形成的虫菌复合体。中国专利 CN97110448.4公开的中国冬虫夏草真菌的发酵生产方法，CN200410101728.X
公开的冬虫夏草大规模发酵生产及菌粉加工工艺。上述两件专利均利用中国被 毛孢菌种利用大型工业发酵罐逐级扩大繁殖的四级深层发酵方法生产出菌粉， 其缺点是沿用了抗生素发酵模式，菌粉中培养基的化学物质易残留，环节复杂， 污染机率大，设备投资大，风险大，生产周期长，得率低。 一直以来，本领域 技术人员从未考虑过不采用四级液体深层发酵生产冬虫夏草菌粉的方法，比如 固体培养、液体静止培养或固液联合静止培养以縮短生产周期、降低投资风险、 提高生产得率，而且技术人员对此种思路认为完全否定。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足和上述技术偏见，提供一种完全不同 于以往生产冬虫夏草中国被毛孢生产菌粉的新方法。
本发明所需的菌种为中国被毛孢(Hirsutella sinensis Liu，Guo,Yu et Zeng)。 现保存在中国微生物保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号 CGMCCNo.2126，包藏日期2007年8月6日。
本发明的技术解决方案是通过以下方法来实现的 一种中国被毛孢菌粉的 生产方法包括如下歩骤首先，将谷类10 50%、豆类0 10%、水50 70%按重量百分比配比后置 入培养容器，培养基占培养容器体积的1/5 4/5，在120 13(TC、 0.15Mpa条件 下灭菌20 40分钟，接入占培养基重量1% 4%的中国被毛孢菌种在0 14°C 条件下培养2 5天培养基表面长满菌丝；
其次，在培养容器中补加占上述培养基重量20 40%的液体培养基，该培 养基按重量百分比计蛋91 100%、奶0 0.9%、马铃薯0 0.9%、胡萝卜汁0 1.9%在0 14"C条件下培养3 8天；
最后，将培养物取出、千燥、粉碎即得中国被毛孢菌粉。
优选步骤是步骤一将谷类20 40%、豆类0 6%、水55 65%按重量 百分比配比后置入培养容器，培养基占培养容器体积的2/5 4/5，在122 128"C、 0.15Mpa条件下灭菌25 35分钟，接入占培养基重量2% 4%的中国被毛孢菌 种在3 1(TC条件下培养3 4天培养基表面长满菌丝；
歩骤二在培养容器中补加占上述培养基重量25 35%的液体培养基，该 培养基按重量百分比计蛋93 98°/。、奶0.3 0.6%、马铃薯0.3 0.6%、胡萝卜 汁0.5 1.5%在5 10。C条件下培养4 7天；
步骤三将培养物取出、干燥、粉碎即得中国被毛孢菌粉。 '最好采用的步骧是步骤一将谷类30%、豆类5%、水65%按重量百分比 配比后置入培养容器，培养基占培养容器体积的3/5，在125°C、 0.15Mpa条件 下灭菌27分钟，接入占培养基重量3%的中国被毛孢菌种在6"C条件下培养3 天培养基表面长满菌丝；
步骤二在培养容器中补加占上述培养基重量30%的液体培养基，该培养 基按重量百分比计蛋98%、奶0.5%、马铃薯0.5%、胡萝卜汁1%在8"条件下 培养5天；
歩骤三将培养物取出、干燥、粉碎即得中国被毛孢菌粉。
还可直接将谷类20 50%、豆类0 20%、水50 70°/。按重量百分比配比后 置入培养容器，培养基占培养容器体积的1/5 4/5，在120 130°C、 0.15Mpa 条件下灭菌20 40分钟，接入占培养基重量1% 4%的中国被毛孢菌种在0 14。C条件下培养10 20天后取出培养物干燥、粉碎可得中国被毛孢菌粉也可将培养基按重量百分比计蛋91 100%、奶0 0.9"/。、马铃薯0 0.9%、 胡萝卜汁0 1.9%、蛋白胨0 9%在120 130°C、 0.15Mpa条件下灭菌20 40 分钟，接入占培养基重量1% 4%的0 1fC条件下培养7 10天；
上述步骤一培养基中的水可用液体奶或含糖、蛋白质的液体代替，其中糖 占液体总重量的1 10%，蛋白质占1 20%。
上述中国被毛孢菌粉的专用培养容器，最好采用食用级耐高温材质的容器 (包括瓶塞)，瓶底直径最好大于等于瓶口直径。
上述方法及培养容器还可用于冬虫夏草拟青霉、头孢菌及其他伴生菌粉的 生产。
本发明的效果是发酵周期短，工艺简单、无化学残留、污染机率小、设
备投资小、成本低、无风险、得率高达40 50%。
具体实施例方式
实施例1
将10g小麦、10g大豆分别破碎过10目筛并与80g水按重量百分比配比 混合后置入培养容器，培养基占培养容器体积的1/5，在120°C、 0.15Mpa条件 下灭菌40分钟，接入4g中国被毛孢菌种在O'C条件下培养3天即可在培养基表 面长满白色菌丝；然后在该长满白色菌丝的培养容器中补加40g的液体培养基， 该培养基按重量百分比计鸡蛋(全蛋)40g在14。C条件下培养3天；取出培养 物干燥、粉碎即得70g中国被毛孢菌粉。
实施例2
将50g稻谷破碎过20目筛并与50g牛奶按重量百分比配比后置入培养容 器，培养基占培养容器体积的2/5，在122'C、 0.15Mpa条件下灭菌25分钟，接 入lg中国被毛孢菌种在3。C条件下培养2天即可在培养基表面长满白色菌丝； 然后在该长满白色菌丝的培养容器中补加占20g的液体培养基，该培养基按重 量百分比计鸭蛋(全蛋)18.2g、蛋白胨1.8g混合配制，在0。C条件下培养4天； 取出培养物干燥、粉碎即得48g中国被毛孢菌粉。
实施例3将20g玉米、6g蚕豆分别破碎过10目筛并与74g的蛋白质+糖的水溶液 (1%的糖和10%的蛋白质水溶液)按重量百分比配比混合后置入培养容器，培 养基占培养容器体积的3/5，在128°C、 0.15Mpa条件下灭菌27分钟，接入3g 中国被毛孢菌种在6"C条件下培养3天即可在培养基表面长满白色菌丝；然后在 该长满白色菌丝的培养容器中补加30g的液体培养基，该培养基按重量百分比 将鸡蛋(全蛋)27.3g、奶0.27g，马铃薯0.27g，胡萝卜汁0.57g，蛋白胨1.59g 混合配制，在5"C条件下培养4天；取出培养物干燥、粉碎即得55g中国被毛孢 菌粉。
实施例4
将40g小米、5g绿豆分别破碎过10目筛并与55§蛋白质+糖的水溶液(20% 的糖和1%的蛋白质水溶液)按重量百分比配比混合后置入培养容器，培养基占 培养容器体积的4/5，在125匸、0.15Mpa条件下灭菌35分钟，接入2g中国被 毛孢菌种在l(TC条件下培养2天即可在培养基表面长满白色菌丝；然后在该长 满白色菌丝的培养容器中补加35g的液体培养基，该培养基按重量百分比将鸡 蛋(全蛋)33g、奶0.105g，马铃薯0.105g,胡萝卜汁0.14g，蛋白胨2.1g混合 配制，在1(TC条件下培养3天；取出培养物干燥、粉碎即得60g中国被毛孢菌 粉。
实施例5
将30g高粱、5g豌豆分别破碎过10目筛并与65g蛋白质+糖的水溶液(10。/。 的糖和5%的蛋白质水溶液)按重量百分比配比混合后置入培养容器，培养基占 培养容器体积的1/5，在130。C、 0.15Mpa条件下灭菌20分钟，接入4g中国被 毛孢菌种在14'C条件下培养2天即可在培养基表面长满白色菌丝；然后在该长 满白色菌丝的培养容器中补加25g的液体培养基，该培养基按重量百分比将鸡 蛋(全蛋)24g、奶0.15g，马铃薯0.15g，胡萝卜汁0.375g，蛋白胨0.325g混合 配制，在8X:条件下培养4天；取出培养物干燥、粉碎即得51g中国被毛孢菌粉。
实施例6
将32g小麦、8g赤豆分别破碎过10目筛并与6(^蛋白质+糖的水溶液(5% 的糖和3%的蛋白质水溶液)按重量百分比配比混合后置入培养容器，培养基占培养容器体积的3/5，在125'C、 0.15Mpa条件下灭菌27分钟，接入3g中国被 毛孢菌种在6"C条件下培养3天即可在培养基表面长满白色菌丝；然后在该长满 白色菌丝的培养容器中补加38g的液体培养基，该培养基按重量百分比将鸡蛋 (全蛋)36.86g、奶0.152g，马铃薯0.152g，胡萝卜汁0.456g，蛋白胨0.38g混 合配制，在8"C条件下培养4天；取出培养物干燥、粉碎即得66g中国被毛孢菌 粉。
实施例7
将27g稻谷、3g蚕豆分别破碎过10目筛并与70g蛋白质+糖的水溶液(15n/。 的糖和7%的蛋白质水溶液)按重量百分比配比混合后置入培养容器，培养基占 培养容器体积的2/5，在127'C、 0.15Mpa条件下灭菌26分钟，接入2.5g中国被 毛孢菌种在13"C条件下培养2天即可在培养基表面长满白色菌丝；然后在该长 满白色菌丝的培养容器中补加28g的液体培养基，该培养基按重量百分比将鸡 蛋(全蛋)27.44g、奶0.084g，马铃薯0.084g，胡萝卜汁0.112g，蛋白胨0.28g 混合配制，在13。C条件下培养3天；取出培养物干燥、粉碎即得62g中国被毛 孢菌粉。
实施例8
将谷类10g、豆类20g、水70g按重量百分比配比后置入培养容器，培养基 占培养容器体积的1/5，在12(TC、 0.15Mpa条件下灭菌40分钟，接入lg中国 被毛孢菌种在O'C条件下培养20天后取出培养物干燥、粉碎可得41g中国被毛 孢菌粉。
实施例9
将谷类30g、豆类10g、 15%的糖和7%的蛋白质水溶液60g按重量百分比配 比后置入培养容器，培养基占培养容器体积的3/5，在125'C、 0.15Mpa条件下 灭菌30分钟，接入3g中国被毛孢菌种在8"C条件下培养15天后取出培养物干 燥、粉碎可得45g中国被毛孢菌粉。
实施例10
将谷类50g、 5%的糖和3%的蛋白质水溶液50g按重量百分比配比后置入培 养容器，培养基占培养容器体积的4/5，在130°C、 0.15Mpa条件下灭菌20分钟，接入4g中国被毛孢菌种在14。C条件下培养10天后取出培养物干燥、粉碎可得
50g中国被毛孢菌粉。
将按重量百分比计100g全蛋搅拌均匀后装入玻璃容器中用滤纸封口，在 130°C、 0.15Mpa条件下灭菌20分钟，接入4g中国被毛孢菌种0。C条件下培养7 天后取出培养物干燥、粉碎可得50g中国被毛孢菌粉。 .
实施例12
将按重量百分比计91g全蛋搅拌均匀后装入玻璃容器中，再加入9g蛋白胨 用滤纸封口，在12(TC、 0.15Mpa条件下灭菌40分钟，接入lg中国被毛孢菌种 14"C条件下培养9天后取出培养物干燥、粉碎可得45g中国被毛孢菌粉。
实施例13
将按重量百分比计97.7g全蛋搅拌均匀后装入玻璃容器中，再加入0.9g牛 奶、0.9g马铃薯、1.9g蛋白胨用滤纸封口，在130°C、 0.15Mpa条件下灭菌30
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得40g中国被毛孢菌粉。
权利要求
1、一种中国被毛孢菌粉的生产方法，其特征在于包括如下步骤步骤一将谷类10～50％、豆类0～10％、水50～80％按重量百分比配比后置入培养容器，培养基占培养容器体积的1/5～4/5，在120～130℃、0.15Mpa条件下灭菌20～40分钟，接入占培养基重量1～4％的中国被毛孢菌种在0～14℃条件下培养2～3天培养基表面长满菌丝；步骤二在培养容器中补加占上述培养基重量20～40％的液体培养基，该培养基按重量百分比计蛋91～100％、奶0～0.9％、马铃薯0～0.9％、胡萝卜汁0～1.9％、蛋白胨0～9％在0～14℃条件下培养3～4天；步骤三将培养物取出、干燥、粉碎即得中国被毛孢菌粉。
2、 根据权利要求l所述中国被毛孢菌粉的生产方法，其特征在于包括如下步骤步骤一将谷类20 40%、豆类0 6%、水55 74%按重量百分比配比后 置入培养容器，培养基占培养容器体积的2/5 4/5，在122 128°C、 0.15Mpa 条件下灭菌25 35分钟，接入占培养基重量2% 4%的中国被毛孢菌种在3 l(TC条件下培养2 3天培养基表面长满菌丝；步骤二在培养容器中补加占上述培养基重量25 35%的液体培养基，该 培养基按重量百分比计蛋93 98%、奶0.3 0.6%、马铃薯0.3 0.6%、胡萝卜 汁0.4 1.5%、蛋白胨1 6%在5 1(TC条件下培养3 4天；步骤三将培养物取出、干燥、粉碎即得中国被毛孢菌粉。
3、 根据权利要求l所述中国被毛孢菌粉的生产方法，其特征在于包括如下步骤步骤一将谷类30%、豆类5%、水65%按重量百分比配比后置入培养容器， 培养基占培养容器体积的3/5，在125"C、 0.15Mpa条件下灭菌27分钟，接入占 培养基重量3%的中国被毛孢菌种在6"C条件下培养3天培养基表面长满菌丝；步骤二在培养容器中补加占上述培养基重量30%的液体培养基，该培养 基按重量百分比计蛋97°/。、奶0.4%、马铃薯0.4%、胡萝卜汁1.2%、蛋白胨1% 在8。C条件下培养3天；步骤三将，物取出、干燥、粉碎即得中国被毛孢菌粉。
4、 根据权利要求l所述中国被毛孢菌粉的生产方法，其特征在于所述中国 被毛菌种经步骤一培养后取出、千燥、粉碎即可得中国被毛孢菌粉，也可直接 用步骤二培养后取出、干燥、粉碎即可得中国被毛孢菌粉。
5、 根据权利要求l所述中国被毛孢菌粉的生产方法，其特征在于所述步骤一中的水可用液体奶或含糖、蛋白质的液体代替。
6、 根据权利要求3所述中国被毛孢菌粉的生产方法，其特征在于所述培养 基中含糖、蛋白质的液体，其中糖占液体总重量的1 10%，蛋白质占1 20%。
7、 根据权利要求1所述一种中国被毛孢菌粉的专用培养容器，其特征在于， 容器为食用级耐高温材质制备，瓶底直径大于等于瓶口直径，瓶塞为具有透气 性的食用级耐高温材质制备。
8、 上述方法及培养容器还可用于冬虫夏草拟青霉、头孢菌及其他伴生菌粉 的生产。
全文摘要
本发明涉及一种微生物的生产方法，特别涉及一种冬虫夏草中国被毛孢菌粉的生产方法。本发明包括如下步骤将谷类10～50％、豆类0～10％、水50～70％按重量百分比配比后置入培养容器，培养基占培养容器体积的1/5～4/5，接入占培养基重量1％～4％的中国被毛孢菌种在0～14℃条件下培养2～5天培养基表面长满菌丝；在培养容器中补加占上述培养基重量20～40％的液体培养基，该培养基按重量百分比计蛋91～100％、奶0～0.9％、马铃薯0～0.9％、胡萝卜汁0～1.9％在0～14℃条件下培养3～8天；最后，将培养物取出、干燥、粉碎即得中国被毛孢菌粉。本发明的效果是发酵周期短，工艺简单、无化学残留、污染几率小、设备投资小、成本低、无风险、得率高达40～50％。
文档编号C12M1/24GK101423799SQ20081014778
公开日2009年5月6日 申请日期2008年11月29日 优先权日2008年11月29日
发明者张玉业, 李树志, 李桂全, 峰 涂, 陈永凤 申请人:峰 涂