一种樟芝菌丝体中腺苷的提取方法
【专利摘要】本发明涉及一种樟芝菌丝体中腺苷的提取方法。所述的提取方法包括以下步骤：先对樟芝菌丝体进行预处理得到预处理后的樟芝菌丝体；再将预处理后的樟芝菌丝体加至蒸馏瓶中恒温水浴加热，离心过滤，制得待测样品溶液；最后在待测样品溶液中加入甲醇溶液，加热回液提取，静置后采用微孔滤膜过滤，取滤液进行HPLC检测。本发明中，采用一定浓度的甲醇溶液进行腺苷提取，且温度限定为42-45℃，可以保证腺苷被充分有效的提取，整个过程中，操作条件温和，避免了腺苷在提取过程中被破坏，操作过程仅使用一般的溶剂，有效避免了现有技术存在的污染问题。
【专利说明】一种樟芝菌丝体中腺苷的提取方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种真菌有效成份的提取，具体涉及一种樟芝菌丝体中腺苷的提取方法。
【背景技术】
[0002]樟芝Antrodia camphorata又称牛樟芝或牛樟燕，是台湾特有珍贵真菌。研究发现樟芝成分复杂，含有很多生理活性物质具有多种生理活性，如抗氧化、保肝、抗癌、解毒、消炎等，对食物中毒等危急病症具有神奇的疗效。其中最主要的活性成分是多糖和三萜类化合物。其中三萜类化合物是樟芝子实体中含有的成分，可抑制癌细胞生成，用于癌症的辅助治疗。多糖也具有抗肿瘤活性，还具有抗菌、抗病毒、保肝、降血糖、平喘、提高动物对缺氧的耐受性及降低血粘度等作用。腺苷(Adenosine)是一种嘌呤核苷，由糖苷键连接腺嘌呤和核糖而成它是机体代谢的中间产物，具有扩张血管降低窦房结的自律性减慢房室传导和抑制肾素分泌等作用，从而引起心率减慢和血压降低。核苷是组成DNA、RNA必不可少的重要物质，也是合成三磷酸腺苷(ATP)的主要原料，其具有广泛生理活性，能抑制血小板的过度聚集.降低血液的粘度，从而改善人体血液循环，对年老血稠或有瘀血倾向者具有良好的抗血凝的效果.能防止血栓病如脑血栓、心肌梗塞等的发生。目前ATP已广泛用于心功能不全及血管动脉硬化等疾病的治疗。相关文献采用HPLC测定樟芝中腺苷含量，但由于测定过程中未能对样品中腺苷进行充分提取及分离，导致检测结果也缺乏准确性。为此，本发明提供一种可对樟芝菌丝体中腺苷进行有效提取与分离的方法，以保证腺苷测定的准确性。
【发明内容】
[0003]针对上述现有技术的不足，本发明提供一种对樟芝菌丝体中腺苷进行有效提取与分离的方法。
[0004]本发明的技术方案如下:
一种樟芝菌丝体中腺苷的提取方法，所述的提取方法包括以下步骤:
(1)菌丝体预处理:将樟芝菌丝体干燥至恒重，粉碎过筛得到预处理后的樟芝菌丝体；
(2)称取步骤(I)中制得的预处理后的樟芝菌丝体0.5-3g加至蒸馏瓶中，加蒸馏水20-30ml水浴加热，离心，微孔滤膜过滤，将离心管与沉淀加水洗涤2次，将滤液与洗涤后的滤液合并作为待测样品溶液，转入另一支蒸馏瓶中备用；
(3)在步骤(2)中装有待测样品溶液的蒸馏瓶中加入溶剂，加热回液提取，静置后采用微孔滤膜过滤，取滤液进行HPLC检测。
[0005]步骤(I)中所述的干燥为真空干燥，干燥温度为60_75°C。
[0006]步骤(I)中所述的过筛为过60-80目筛。
[0007]步骤(2)中所述的水浴加热为恒温水浴，温度为50_60°C，水浴加热时间为20_40mino
[0008]步骤(2)中所述的离心时离心速度为4000-6000r/min,离心时间为20_30min。
[0009]步骤(3)中所述的溶剂为体积浓度为80%_95%的甲醇水溶液步骤(3)中所述的溶剂的加入量20-30ml。
[0010]步骤(3)中所述的加热回流提取的时间为45-60min，提取温度为42_45°C。
[0011]步骤(3)中所述的静置时间为20_30min。
[0012]步骤(3)中所述的过滤次数为2-5次。
[0013]本发明与现有技术相比，有益效果体现在以下几点:
1.研究显示，蛹虫草菌丝体中腺苷提取的最佳温度为44°C，实际提取率与理论提取率的误差仅为1.31%，因此，本发明中，在对樟芝中腺苷进行提取时，提取温度限定为42-45°C，而且本发明中，将预处理后的樟芝菌丝体在水浴恒温加热、离心后，将离心管与沉淀加水洗涤2次，均可以保证腺苷被充分有效的提取。
[0014]2.本发明操作简单，整个过程中，操作条件温和，避免了腺苷在提取过程中被破坏。
[0015]3.现有技术中，在对真菌进行腺苷提取时，操作中加入了乙醚与石油醚，对环境及操作人员均造成了不利的影响，而本发明中先后对樟芝菌丝体进行预处理、恒温水浴加热、离心、甲醇水溶液回流加热提取，也保证了樟芝菌丝体中腺苷的充分提取，而且可有效避免了现有技术存在的污染问题。
【具体实施方式】
[0016]下面结合实施例对本发明做进一步说明。
[0017]实施例1
一种樟芝菌丝体中腺苷的提取方法，所述的提取方法包括以下步骤:
(1)菌丝体预处理:将樟芝菌丝体在60°C下真空干燥至恒重，粉碎过60目筛得到预处理后的樟芝菌丝体；
(2)称取步骤(I)中制得的预处理后的樟芝菌丝体0.5g加至蒸馏瓶中，加蒸馏水20ml，在5(TC水浴中恒温加热20min,以4000r/min离心20min,微孔滤膜过滤,将离心管与沉淀加水洗涤2次，将滤液与洗涤后的滤液合并作为待测样品溶液，转入另一支蒸馏瓶中备用；
(3)在步骤(2)中装有待测样品溶液的蒸馏瓶中加入20ml体积浓度为80%的甲醇水溶液，在42°C条件下加热回液提取45min，静置20min后采用微孔滤膜过滤2次，取滤液进行HPLC检测。
[0018]实施例2
一种樟芝菌丝体中腺苷的提取方法，所述的提取方法包括以下步骤:
(1)菌丝体预处理:将樟芝菌丝体在75°C下真空干燥至恒重，粉碎过80目筛得到预处理后的樟芝菌丝体；
(2)称取步骤(I)中制得的预处理后的樟芝菌丝体3g加至蒸馏瓶中，加蒸馏水30ml，在60°C水浴中恒温加热40min,以6000r/min离心30min,微孔滤膜过滤,将离心管与沉淀加水洗涤2次，将滤液与洗涤后的滤液合并作为待测样品溶液，转入另一支蒸馏瓶中备用；
(3)在步骤(2)中装有待测样品溶液的蒸馏瓶中加入20-30ml体积浓度为95%的甲醇水溶液，在45 °C条件下加热回液提取60min，静置20_30min后采用微孔滤膜过滤5次，取滤液进行HPLC检测。
[0019]实施例3
一种樟芝菌丝体中腺苷的提取方法，所述的提取方法包括以下步骤:
(1)菌丝体预处理:将樟芝菌丝体在70°C下真空干燥至恒重，粉碎过80目筛得到预处理后的樟芝菌丝体；
(2)称取步骤(I)中制得的预处理后的樟芝菌丝体0.5-3g加至蒸馏瓶中，加蒸馏水25ml,在55°C水浴中恒温加热30min,以5000r/min离心25min,微孔滤膜过滤,将离心管与沉淀加水洗涤2次，将滤液与洗涤后的滤液合并作为待测样品溶液，转入另一支蒸馏瓶中备用;
(3)在步骤(2)中装有待测样品溶液的蒸馏瓶中加入20-30ml体积浓度为90%的甲醇水溶液，在44°C条件下加热回液提取50min，静置25min后采用微孔滤膜过滤3次，取滤液进行HPLC检测。
[0020]上述实施例仅为本发明的优选实施方式，并不应理解为对本发明的限定，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种樟芝菌丝体中腺苷的提取方法，其特征在于，所述的提取方法包括以下步骤: (1)菌丝体预处理:将樟芝菌丝体干燥至恒重，粉碎过筛得到预处理后的樟芝菌丝体； (2)称取步骤(I)中制得的预处理后的樟芝菌丝体0.5-3g加至蒸馏瓶中，加蒸馏水20-30ml水浴加热，离心，微孔滤膜过滤，将离心管与沉淀加水洗涤2次，将滤液与洗涤后的滤液合并作为待测样品溶液，转入另一支蒸馏瓶中备用； (3)在步骤(2)中装有待测样品溶液的蒸馏瓶中加入溶剂，加热回液提取，静置后采用微孔滤膜过滤，取滤液进行HPLC检测。
2.根据权利要求1所述的樟芝菌丝体中腺苷的提取方法，步骤(I)中所述的干燥为真空干燥，干燥温度为60-75°C。
3.根据权利要求1所述的樟芝菌丝体中腺苷的提取方法，步骤(I)中所述的过筛为过60-80目筛。
4.根据权利要求1所述的樟芝菌丝体中腺苷的提取方法，步骤(2)中所述的水浴加热为恒温水浴，温度为50-60°C，水浴加热时间为20-40min。
5.根据权利要求1所述的樟芝菌丝体中腺苷的提取方法，步骤(2)中所述的离心时离心速度为4000-6000r/min，离心时间为20_30min。
6.根据权利要求1所述的樟芝菌丝体中腺苷的提取方法，步骤(3)中所述的溶剂为体积浓度为80%-95%的甲醇水溶液。
7.根据权利要求1所述的樟芝菌丝体中腺苷的提取方法，步骤(3)中所述的溶剂的加入量 20_30ml。
8.根据权利要求1所述的樟芝菌丝体中腺苷的提取方法，步骤(3)中所述的加热回流提取的时间为45-60min，提取温度为42_45°C。
9.根据权利要求1所述的樟芝菌丝体中腺苷的提取方法，步骤(3)中所述的静置时间为 20_30min。
10.根据权利要求1所述的樟芝菌丝体中腺苷的提取方法，步骤(3)中所述的过滤次数为2-5次。
【文档编号】A23L1/28GK104223044SQ201410471599
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年9月17日 优先权日:2014年9月17日
【发明者】刘巴宁, 郑安乔 申请人:中山安荞生物科技有限公司