专利名称：一种樟芝子实体椴木二段培养方法
技术领域：
本发明涉及发酵工程领域，尤其涉及一种樟芝子实体椴木二段培养方法。
背景技术：
樟芝属担子菌纲，多孔菌目，多孔菌科，薄孔菌属，是一种珍稀的药用真菌，樟芝中含有多种生理活性成分，如多糖、三萜类化合物、超氧歧化酶(SOD)腺苷、蛋白质(含免疫蛋白)、多种维生素、微量元素、核酸、凝集素、氨基酸、胆固醇、血压稳定物质等。其具备的生理活性功能具有抗肿瘤、增强免疫力、抗病毒、抗过敏、抗高血压、抑制血小板凝集、降血压、降胆固醇、抗细菌、保护肝脏等。樟芝为台湾特有品种，原生长于台湾特有的牛樟树上，是牛樟树上发现的唯一木腐菌。因樟芝的木腐性不强，只能表面腐朽，一般对牛樟树的危害不大，因此樟芝一般生长在心材已腐朽的老树干的中空内壁或倒伏牛樟树木材阴暗潮湿的表面。樟芝一般不会生长在香樟树、白樟树或其他类似的树种上，对牛樟树有明显宿主专一性。野生樟芝生长极为缓慢，生长期仅仅为每年的6-10月，由于樟芝的寄生病原性并不强，形成子实体时间漫长，一年左右才能形成较薄的子实体。樟芝人工培育可以分为三种方法，I)液体发酵法，2)固体栽培法，3)椴木栽培法。鉴于樟芝生长缓慢的特性，很多椴木栽培都存在着接种后竞争力低下、存活困难、培养周期长(一般2年左右)、转化率低(一般在10-20%左右)、产率低等问题。虽然樟芝菌是褐腐菌，但其褐腐能力不强，樟芝菌在牛樟树上只腐朽表面，并不会将其腐朽致死。因为樟芝转化木材的能力很低，一般只有10% -20%,由于牛樟木的主要成分90%为木质素、纤维素和半纤维素，而樟芝一般都是生长在被腐朽过的牛樟树上，是因为樟芝菌分解木质素和纤维素的能力比较差，木材腐朽是因为木材中的主要成分木质素，纤维素和半纤维素被分解，产生木糖，葡萄糖，戊糖等小分子的单糖以利于樟芝菌生长，而樟芝菌本身分解木材能力不强是因为樟芝菌本身分泌的木质素分解酶，纤维素，半纤维素分解酶其活力不够强大，一般白腐菌的转化率都在95%以上，像香菇，木耳，灵芝等白腐菌都能把98%椴木分解转化，而樟芝的椴木转化率才10% _20%，木材的主要成分90%为木质素，纤维素，半纤维素，而实验证明樟芝分解纤维素和半纤维素的能力比较强，分解木质素的能力很差，由于樟芝菌无法快速分解木材中木质素做营养，所以生长缓慢，因为樟芝无法从他处获得生长的必须营养，只能依靠牛樟树本身少量的多糖，淀粉等营养物质维持，同时还依靠本身缓慢地分解木质素，纤维素和半纤维素等来获得生长的必须营养，因而樟芝的产率不高，生长慢。中国专利ZL201010518942.0公开了一种微通气椴木栽培樟芝的方法，该专利通过对樟木的处理，采用液体发酵扩繁得到液体菌种接种于樟木的表面，采用微透气的方式，并通过控制培养温度，湿度，光照等条件进行培养，采用微透气方式，既保证透气性又有效的防止了杂菌污染，栽培得到樟 芝子实体；但是该专利未揭示如何提高椴木利用率的方法
发明内容
本发明的目的在于提供一种樟芝子实体椴木二段培养方法。—种樟芝子实体椴木二段培养方法，包括以下步骤:人工辅助椴木腐朽；樟芝优势菌培植，待樟芝形成优势菌群后，将其接入人工辅助腐朽的椴木中培养
3-6个月，得到樟芝子实体。所述人工辅助椴木腐朽步骤为，向椴木中添加木质素酶，木聚糖酶，纤维素酶和半纤维素酶，或者向椴木中添加真菌，所述真菌可产生分解木质素，纤维素和半纤维素的酶。所述半纤维素酶包括β -葡聚糖酶，半乳聚糖酶和木聚糖酶。所述真菌·为可食用的白腐真菌或褐腐真菌。所述白腐真菌为香菇、木耳或灵芝。所述人工辅助椴木腐朽步骤中同时加入樟芝菌种。所述人工辅助椴木腐朽步骤中椴木首先打孔，灭菌，无菌条件下向孔中添加木质素酶，木聚糖酶，纤维素酶，半纤维素酶，或者向孔中添加可产生木质素酶或纤维素酶的可食用的白腐真菌或者褐腐真菌。所述樟芝优势菌培植步骤中，樟芝菌种为液体菌种或固体菌种。所述液体菌种的培养方法为:将已经活化的樟芝斜面菌种切成2-10mm大小的菌丝块接种于液体培养基中，于80-150r/min，15_35°C恒温培养5_15天，做液体菌种备用。所述固体菌种的培养方法为:将已经活化的樟芝斜面菌种切成2-10mm大小的菌丝块接种于液体培养基中，于80-150r/min，15_35°C恒温培养5_15天，得液体菌种备用，将10ml-20ml液体菌种接种到固体樟粉培养基中，上摇床培养,待木粉成球状并长满粉红色菌体和孢子后可得固体菌种。本发明所述方法先用木质素分解酶，木聚糖酶，纤维素酶和半纤维素酶，或者接种产木质素分解酶系和分解纤维素酶系的菌种，如香菇，木耳，灵芝，等可食用的菌种进行分解腐化椴木，先将椴木的木质素和纤维素部分水解，以提供樟芝菌的必需营养。本方法有效解决了樟芝对椴木的转化率和营养补给的问题，从而有效提高了生产的速率和效率，培养出子实体，樟芝菌对木头的转化率从原始的10%_20%可以有效提高到50%-80%，解决了樟芝液体培养过程的渗透压问题和出菇的问题，液体培养一般培养基总浓度(W/V)不超过10%，这样就限制了樟芝的产量，而椴木培养过程中，营养物质是从木质素和纤维素水解而来，木质素分解酶系和纤维素·分解酶系不断水解椴木，使樟芝源源不断获得营养而不存在渗透压的问题，所以有足够的营养合成菌体而形成子实体，该工艺有效提高了樟芝栽培4-8倍的产率，时间有效缩短了 5-8个月，从而有效实现了樟芝椴木子实体工业化培养方式。
具体实施例方式实施例1 一种樟芝子实体椴木二段培养方法本实施例采用樟芝菌种:ATCC200183。材料:牛樟树椴木，高温PE袋。1.樟芝液体菌种的培养斜面培养基:麦芽浸膏20g，葡萄糖20g，蛋白胨lg，硫酸镁0.5g，琼脂粉20g，定容1L，PH5.0，然后加琼脂制备斜面培养基。
液体种子培养基:麦芽浸膏20g，葡萄糖20g，蛋白胨lg，硫酸镁0.5g定容1L，PH5.0。
樟芝液体菌种的培养，将已经活化的樟芝斜面菌种切成5mm大小的菌丝块接种于液体种子培养基中，250ml三角瓶装IOOml培养液，于120r/min，25°C恒温培养7天，做液体囷种备用。2.将椴木中心打拇指大的孔径，装高温PE袋灭菌，冷却后无菌条件下加入木质素酶，木聚糖酶，纤维素酶，半纤维素酶，用复配培养液混合浸泡10-30天(此时也可以一起加入樟芝液体菌种)，使木头腐化酥软，培养液大部分被吸入椴木中，此时手捏木头有腐化过的松软的感觉，然后无菌操作接入上面培养好的樟芝液体种子，接种量10%，在25°C，湿度70%以上黑暗无菌条件下培养10-15天可看到椴木长满橘红色的菌丝体继续培养，60天后可以看到厚度为1-2厘米的子实体或者菌块。接种量的范围可以是5%_10%，培养温度在20_30°C。复配培养液:用1000ML水煮IOOg马铃薯过滤得出的溶液配MEA培养基(2%葡萄糖，2%麦芽浸膏，0.1%蛋白胨，硫酸镁0.5g，pH5.00)，121°C，灭菌20min。本实施例还可用香樟椴木，黄樟椴木，栎树椴木等樟树品系的椴木。每种椴木的效果不一致，都能生长，牛樟树最快，其次是香樟和黄樟。本实施例还可用樟芝菌种CCRC36716，AC0623，每种菌种独立接种，还可以任选两种或三种同时接种。实施例2 —种樟芝子实体椴木二段培养方法1.樟芝液体菌种的培养斜面培养基:麦芽浸膏20g，葡萄糖20g，蛋白胨lg，硫酸镁0.5g，琼脂粉20g，定容1L, PH5.0。液体种子培养基:麦芽浸膏20g,葡萄糖20g,蛋白胨Ig,硫酸镁0.5g,定容1L,PH5.0。固体樟粉培养基:麦芽浸膏20g，葡萄糖20g，蛋白胨lg，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾Ig,定容1L，然后与樟树的木粉混合均匀，配成含水量40%-90%含水量的固体培养基。樟芝菌种:CCRC36716。材料:香樟椴木,高温PE袋。樟芝固体菌种的培养，将已经活化的樟芝斜面菌种切成5mm大小的菌丝块接种于液体种子培养基中，250ml三角瓶装IOOml培养液，于150r/min，25°C恒温培养7天，得液体菌种备用，将15ml液体菌种接种到250ml三角瓶樟粉固体培养基中，上摇床培养10天，等木粉成球状并长满粉红色菌体和孢子后可得固体种子。摇床培养，可以增大通气量，因为樟芝需氧量较大，所以培养基不能压实，固体樟粉培养基在上摇床后可以增大通气量，同时也能使木粉摇成团，上摇床在剪切力作用下打断菌丝体，这样可以获得更多的生长点，以提高生长的速度。2.将椴木中心打拇指大的孔径，装高温PE袋灭菌，冷却后无菌条件下加入木质素酶，木聚糖酶，纤维素酶，半纤维素酶，复配培养液混合浸泡10-30天(此时也可以一起加入樟芝固体菌种)，使木头腐化酥软，培养液大部分被吸入椴木中，此时手捏木头有腐化过的感觉，然后无菌操作接入上面培养好的樟芝固体种子，接种量在10%-20%在20-30°C，黑暗无菌条件下培养10-15天可看到椴木长满橘红色的菌丝体，60天后可以看到厚度为1-2厘米的子实体。本实施例还可选用牛樟锻木，黄樟锻木，栎树锻木等樟树品系的锻木。本实施例还可用樟芝菌种ATCC200183和AC0623，每种菌种独立接种，还可以任选两种同时接 种。
权利要求
1.一种樟芝子实体椴木二段培养方法，包括以下步骤: 人工辅助椴木腐朽； 樟芝优势菌培植，待樟芝形成优势菌群后，将其接入人工辅助腐朽的椴木中培养3-6个月，得到樟芝子实体。
2.根据权利要求1所述的一种樟芝子实体椴木二段培养方法，其特征在于，所述人工辅助椴木腐朽步骤为，向椴木中添加木质素酶，木聚糖酶，纤维素酶和半纤维素酶，或者向椴木中添加可食用的真菌，所述真菌可产生分解木质素，纤维素和半纤维素的酶。
3.根据权利要求2所述的一种樟芝子实体椴木二段培养法，其特征在于，所述半纤维素酶包括葡聚糖酶，半乳聚糖酶和木聚糖酶。
4.根据权利要求2或3所述的一种樟芝子实体椴木二段培养法，其特征在于，所述真菌为可食用的白腐真菌或褐腐真菌。
5.根据权利要求4所述的一种樟芝子实体椴木二段培养法，其特征在于，所述白腐真菌为香菇、木耳或灵芝。
6.根据权利要求2所述的一种樟芝子实体锻木二段培养方法,其特征在于，所述人工辅助椴木腐朽步骤中同时加入樟芝菌种。
7.根据权利要求2、3或6中任意一项所述的一种樟芝子实体锻木二段培养方法,其特征在于，所述人工辅助椴木腐朽步骤中椴木首先打孔，灭菌，无菌条件下向孔中添加木质素酶，木聚糖酶，纤维素酶，半纤维素酶，或者向孔中添加可产生木质素酶或纤维素酶的可食用的白腐真菌或者褐腐真菌。
8.根据权利要求1所述的一种樟芝子实体椴木二段培养法，其特征在于，所述樟芝优势菌培植步骤中，樟芝菌种为液体菌种或固体菌种。
9.根据权利要求8所述的一种樟芝子实体椴木二段培养法，其特征在于，所述液体菌种的培养方法为:将已经活化的樟芝斜面菌种切成2-10mm大小的菌丝块接种于液体培养基中，于80-150r/min，15_35°C恒温培养5_15天，做液体菌种备用。
10.根据权利要求8所述的一种樟芝子实体椴木二段培养法，其特征在于，所述固体菌种的培养方法为:将已经活化的樟芝斜面菌种切成2-10mm大小的菌丝块接种于液体培养基中，于80-150r/min，15_35°C恒温培养5_15天，得液体菌种备用，将10ml-20ml液体菌种接种到固体樟粉培养基中， 上摇床培养，待木粉成球状并长满粉红色菌体和孢子后可得固体菌种。
全文摘要
本发明涉及真菌培养领域，提供了一种樟芝子实体椴木二段培养方法，包括以下步骤人工辅助椴木腐朽；樟芝优势菌培植，待樟芝形成优势菌群后，将其接入人工辅助腐朽的椴木中培养，得到樟芝子实体。本方法有效解决了樟芝对椴木的转化率和营养补给的问题，从而有效提高了樟芝栽培4-8倍的产率，时间有效缩短了5-8个月，从而有效实现了樟芝椴木子实体工业化培养方式。
文档编号A01G1/04GK103109679SQ20131006593
公开日2013年5月22日 申请日期2013年2月28日 优先权日2013年2月28日
发明者赵宗杰, 谢海涛, 杨如钢 申请人:深圳市仁泰生物科技有限公司