一种牛樟芝中三萜化合物的精制方法
【专利摘要】一种牛樟芝中三萜化合物的精制方法，按照下述步骤进行：牛樟芝前处理、三萜类化合物超临界CO2萃取、三萜类化合物超声提取、减压蒸馏得到三萜类化合物粗提物浸膏、乙酸乙酯提取，得三萜类化合物精提物萃取液以及减压蒸馏得到三萜类化合物精提物。与现在技术相比，操作更为简单，提取更为有效，且整个操作条件温和，可充分保留三萜类化合物的生理活性；对牛樟芝粉末采用氯仿定容溶解，避免了氯仿对产物的影响；经过超临界CO2萃取后的滤渣，再进行超声萃取，使得牛樟芝中的三萜类化合物提取完全，提高三萜类化合物的提取产率。
【专利说明】一种牛樟芝中三萜化合物的精制方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及三萜类化合物的提取方法【技术领域】，更具体地说，涉及一种牛樟芝中三萜化合物的精制方法。
【背景技术】
[0002]牛樟芝是台湾特有的真菌，仅生长于台湾特有的牛樟树上。野生牛樟芝是台湾岛特有的保育类树种，在大安溪上游的雪山坑牛樟保护区，育有100余株牛樟林木。牛樟芝是牛樟树上发现的唯一腐木菌，但是牛樟芝的寄生病源性并不强，因此牛樟树很少死亡，可生长数百年。野生牛樟灵芝唯一赖以为生的宿主----台湾牛樟树，放眼全世界，只生长于台湾海拔450至2000米的山区，牛樟灵芝仅生长于牛樟树腐朽之内壁的中空处，或枯死伏倒之牛樟树阴暗潮湿的表面，数量非常稀少，且生长速度非常缓慢，每年生长厚度仅几公分而已。已被台湾立法为国宝级保护类树种。由于数量稀少，采集不易，市价高达每台斤十万至数十万新台币，价值远远凌驾于灵芝、人参、冬虫夏草等名贵药材之上，被称作药材中的王中之王。
[0003]牛樟灵芝的神奇早为台湾山地原住民部落里广为流传，早期由山地原住民于无意间发现野生牛樟灵芝，食用之后发觉不但神清气爽、精神提振、疲劳感顿时消失，体力也增强不少，陆续有许多族人身上发现神奇见证，所以多年以来，将牛樟灵芝视为祖传神秘灵药。
[0004]牛樟芝生长于牛樟树干腐朽的中空内部或倒伏树干的潮湿表面。野生牛樟芝长在老龄的牛樟树，子实体形态多变化，有板状、锺状、马蹄状或塔状；初生时鲜红色，渐长变为白色、淡红褐色、淡褐色或淡黄褐色。牛樟芝气芳香味辛苦、平。有祛风行气、化淤活血、温中消结、解毒消肿、镇静止痛、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、提升机体免疫力之效；对于治疗胃肠疼痛、腹泻呕吐、食物中毒、毒蕈中毒、糖尿病、酒精肝、脂肪肝、肝硬化、肝癌等更是有独特功能。牛樟芝是有许多的生理活性成分，如多糖体、三萜类化合物、超氧歧化酶、腺苷、蛋白质(含免疫蛋白)、维生素、微量元素、核酸、凝集素、氨基酸、固醉累、纤维素、血压稳定物质等。牛樟芝的有效成分中以三萜类化合物为最特别，高达200种以上，是其他菇菌无法相比的，200多种三萜类化合物使牛樟芝具有抗癌、保肝等功效。由于樟芝在台湾被视为独特而珍贵的药用真菌，因此具有极高的研宄和商业价值，也是目前台湾最昂贵的野生真菌，在港澳被称为“神芝”，台湾民间称之为“森林中的红宝石”。
【发明内容】
[0005]本发明克服了现有技术中的不足，现有的三萜类化合物的提取方法主要有大孔吸附树脂法及色谱柱制备法，但上述方法对三萜类化合物的提取易受到牛樟芝中其他成分的影响，导致提取效果差，且操作繁琐，不容易进行产业化生产，提供了一种牛樟芝中三萜化合物的精制方法，本方法采用加压溶剂萃取技术，该技术具有回收率高、快速等优点，同时适用于产业化生产。
[0006]本发明的目的通过下述技术方案予以实现。
[0007]一种牛樟芝中三萜化合物的精制方法，按照下述步骤进行:
[0008]步骤一，将经过处理的牛樟芝粉末与硅藻土混合后放置于萃取釜中，再加入乙醇，乙醇的体积与牛樟芝粉末与硅藻土混合物重量的比例为4-5:1(乙醇的体积为毫升，灵芝子实体的重量为克)，进行超临界0)2萃取；
[0009]步骤二，将步骤一萃取后剩余的萃取渣，加入碳酸氢钠溶液，进行超声提取，超声提取的次数为3-6次，超声提取的时间为5-15min，提取后经微孔过滤后，取滤液；
[0010]步骤三，将步骤一所得萃取液与步骤二所得滤液进行合并，减压蒸馏，蒸去溶剂，得到三萜类化合物粗提物浸膏；
[0011]步骤四，将步骤三所得的三萜类化合物粗提物浸膏用水溶解后，加入乙酸乙酯进行进一步的提取，得到三萜类化合物精提物萃取液；
[0012]步骤五，将步骤四所得的三萜类化合物精提物萃取液进行减压蒸馏，最后得到三萜类化合物精提物。
[0013]所述步骤一中经过处理的牛樟芝粉末制备的方法为:首先将牛樟芝进行切片，将牛樟芝片在温度为50-55°C的干燥箱内干燥2-4h，然后将干燥后的牛樟芝片进行粉碎，粉碎至80-120目，得到牛樟芝粉末。
[0014]所述步骤一中经过处理的牛樟芝粉末与硅藻土的混合比例为3:1-1:1，所述乙醇的浓度为80-95%，所述超临界CO2萃取的条件为:萃取压力为36-40MPa，萃取温度为35-40 °C，萃取时间为3-4h。
[0015]所述步骤二中碳酸氢钠溶液的浓度为8-12%，超声提取的次数为5次，超声提取的时间为12min。
[0016]所述步骤三中减压蒸馏的条件为:减压蒸馏压力为7.0-8.2kPa，减压蒸馏的温度为 55-60 °C。
[0017]所述步骤四中乙酸乙酯的浓度为75-85%。
[0018]所述步骤五中减压蒸馏的条件为:减压蒸馏压力为8.0-9.5kPa，减压蒸馏的温度为 68-75 °C。
[0019]本发明的有益效果为:本发明中在提取前先对牛樟芝进行预处理，包括干燥粉碎，减压蒸发制得三萜类粗提物浸膏，再进行加压萃取，对牛樟芝中的三萜类化合物可充分提取，与现在技术相比，操作更为简单，提取更为有效，且整个操作条件温和，可充分保留三萜类化合物的生理活性；对牛樟芝粉末采用氯仿定容溶解，避免了氯仿对产物的影响；对牛樟芝粉末首先进行超临界CO2萃取，再进行超声萃取，CO 2超临界萃取的萃取率稍低于乙醇的提取率，但是CO2超临界萃取的萃取物中三萜的种类比乙醇萃取物中多，CO2超临界萃取安全、无毒，流程简单，耗时短，效率高，对经过超临界0)2萃取后的滤渣，再进行超声萃取，使得牛樟芝中的三萜类化合物提取完全，提高三萜类化合物的提取产率。
【具体实施方式】
[0020]下面通过具体的实施例对本发明的技术方案作进一步的说明。
[0021]实施例1
[0022]—种牛樟芝中三萜化合物的精制方法，按照下述步骤进行:
[0023]步骤一，将经过处理的牛樟芝粉末与硅藻土以3:1的比例混合后放置于萃取釜中，再加入浓度为8 O %的乙醇，乙醇的体积与牛樟芝粉末与硅藻土混合物重量的比例为5:1(乙醇的体积为毫升，灵芝子实体的重量为克)，进行超临界CO2萃取，超临界CO 2萃取的条件为:萃取压力为36MPa，萃取温度为40°C，萃取时间为4h ;
[0024]步骤二，将步骤一萃取后剩余的萃取澄，加入浓度为8%碳酸氢钠溶液，进行超声提取，超声提取的次数为3次，超声提取的时间为15min，提取后经微孔过滤后，取滤液；
[0025]步骤三，将步骤一所得萃取液与步骤二所得滤液进行合并，减压蒸馏，减压蒸馏压力为7.0kPa，减压蒸馏的温度为60°C，蒸去溶剂，得到三萜类化合物粗提物浸膏；
[0026]步骤四，将步骤三所得的三萜类化合物粗提物浸膏用水溶解后，加入浓度为75%乙酸乙酯进行进一步的提取，得到三萜类化合物精提物萃取液；
[0027]步骤五，将步骤四所得的三萜类化合物精提物萃取液进行减压蒸馏，减压蒸馏压力为8.0kPa，减压蒸馏的温度为75°C，最后得到三萜类化合物精提物。
[0028]经过处理的牛樟芝粉末制备的方法为:首先将牛樟芝进行切片，将牛樟芝片在温度为50°C的干燥箱内干燥2h，然后将干燥后的牛樟芝片进行粉碎，粉碎至80目，得到牛樟芝粉末。
[0029]实施例2
[0030]一种牛樟芝中三萜化合物的精制方法，按照下述步骤进行:
[0031]步骤一，将经过处理的牛樟芝粉末与硅藻土以1:1的比例混合后放置于萃取釜中，再加入浓度为95%的乙醇，乙醇的体积与牛樟芝粉末与硅藻土混合物重量的比例为4:1(乙醇的体积为毫升，灵芝子实体的重量为克)，进行超临界CO2萃取，超临界CO 2萃取的条件为:萃取压力为40MPa，萃取温度为35°C，萃取时间为3h ;
[0032]步骤二，将步骤一萃取后剩余的萃取渣，加入浓度为12%碳酸氢钠溶液，进行超声提取，超声提取的次数为6次，超声提取的时间为5min，提取后经微孔过滤后，取滤液；
[0033]步骤三，将步骤一所得萃取液与步骤二所得滤液进行合并，减压蒸馏，减压蒸馏压力为8.2kPa，减压蒸馏的温度为55°C，蒸去溶剂，得到三萜类化合物粗提物浸膏；
[0034]步骤四，将步骤三所得的三萜类化合物粗提物浸膏用水溶解后，加入浓度为85%乙酸乙酯进行进一步的提取，得到三萜类化合物精提物萃取液；
[0035]步骤五，将步骤四所得的三萜类化合物精提物萃取液进行减压蒸馏，减压蒸馏压力为9.5kPa，减压蒸馏的温度为85°C，最后得到三萜类化合物精提物。
[0036]经过处理的牛樟芝粉末制备的方法为:首先将牛樟芝进行切片，将牛樟芝片在温度为55°C的干燥箱内干燥4h，然后将干燥后的牛樟芝片进行粉碎，粉碎至120目，得到牛樟芝粉末。
[0037]实施例3
[0038]—种牛樟芝中三萜化合物的精制方法，按照下述步骤进行:
[0039]步骤一，将经过处理的牛樟芝粉末与硅藻土以2:1的比例混合后放置于萃取釜中，再加入浓度为8 O %的乙醇，乙醇的体积与牛樟芝粉末与硅藻土混合物重量的比例为4.5:1(乙醇的体积为毫升，灵芝子实体的重量为克)，进行超临界CO2萃取，超临界CO 2萃取的条件为:萃取压力为38MPa，萃取温度为38°C，萃取时间为3h ;
[0040]步骤二，将步骤一萃取后剩余的萃取澄，加入浓度为8%碳酸氢钠溶液，进行超声提取，超声提取的次数为5次，超声提取的时间为12min，提取后经微孔过滤后，取滤液；[0041 ] 步骤三，将步骤一所得萃取液与步骤二所得滤液进行合并，减压蒸馏，减压蒸馏压力为7.9kPa，减压蒸馏的温度为59°C，蒸去溶剂，得到三萜类化合物粗提物浸膏；
[0042]步骤四，将步骤三所得的三萜类化合物粗提物浸膏用水溶解后，加入浓度为80%乙酸乙酯进行进一步的提取，得到三萜类化合物精提物萃取液；
[0043]步骤五，将步骤四所得的三萜类化合物精提物萃取液进行减压蒸馏，减压蒸馏压力为8.6kPa，减压蒸馏的温度为73°C，最后得到三萜类化合物精提物。
[0044]经过处理的牛樟芝粉末制备的方法为:首先将牛樟芝进行切片，将牛樟芝片在温度为53°C的干燥箱内干燥3h，然后将干燥后的牛樟芝片进行粉碎，粉碎至100目，得到牛樟芝粉末。
[0045]以上对本发明做了示例性的描述，应该说明的是，在不脱离本发明的核心的情况下，任何简单的变形、修改或者其他本领域技术人员能够不花费创造性劳动的等同替换均落入本发明的保护范围。
【权利要求】
1.一种牛樟芝中三萜化合物的精制方法，其特征在于:按照下述步骤进行: 步骤一，将经过处理的牛樟芝粉末与硅藻土混合后放置于萃取釜中，再加入乙醇，乙醇的体积与牛樟芝粉末与硅藻土混合物重量的比例为4-5:1 (乙醇的体积为毫升，灵芝子实体的重量为克)，进行超临界0)2萃取； 步骤二，将步骤一萃取后剩余的萃取渣，加入碳酸氢钠溶液，进行超声提取，超声提取的次数为3-6次，超声提取的时间为5-15min，提取后经微孔过滤后，取滤液； 步骤三，将步骤一所得萃取液与步骤二所得滤液进行合并，减压蒸馏，蒸去溶剂，得到三萜类化合物粗提物浸膏； 步骤四，将步骤三所得的三萜类化合物粗提物浸膏用水溶解后，加入乙酸乙酯进行进一步的提取，得到三萜类化合物精提物萃取液； 步骤五，将步骤四所得的三萜类化合物精提物萃取液进行减压蒸馏，最后得到三萜类化合物精提物。
2.根据权利要求1所述的一种牛樟芝中三萜化合物的精制方法，其特征在于:所述步骤一中经过处理的牛樟芝粉末制备的方法为:首先将牛樟芝进行切片，将牛樟芝片在温度为50-55°C的干燥箱内干燥2-4h，然后将干燥后的牛樟芝片进行粉碎，粉碎至80-120目，得到牛樟芝粉末。
3.根据权利要求1所述的一种牛樟芝中三萜化合物的精制方法，其特征在于:所述步骤一中经过处理的牛樟芝粉末与硅藻土的混合比例为3:1-1:1，所述乙醇的浓度为80-95%，所述超临界CO2萃取的条件为:萃取压力为36-40MPa，萃取温度为35-40°C，萃取时间为3-4ho
4.根据权利要求1所述的一种牛樟芝中三萜化合物的精制方法，其特征在于:所述步骤二中碳酸氢钠溶液的浓度为8-12%，超声提取的次数为5次，超声提取的时间为12min。
5.根据权利要求1所述的一种牛樟芝中三萜化合物的精制方法，其特征在于所述步骤三中减压蒸馏的条件为:减压蒸馏压力为7.0-8.2kPa，减压蒸馏的温度为55-60°C。
6.根据权利要求1所述的一种牛樟芝中三萜化合物的精制方法，其特征在于所述步骤四中乙酸乙酯的浓度为75-85%。
7.根据权利要求1所述的一种牛樟芝中三萜化合物的精制方法，其特征在于所述步骤五中减压蒸馏的条件为:减压蒸馏压力为8.0-9.5kPa，减压蒸馏的温度为68-75?。
【文档编号】A61P1/16GK104435005SQ201410811689
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月22日 优先权日:2014年12月22日
【发明者】季延滨, 李涛 申请人:芝圣（天津）生物科技有限公司