灵芝菌丝体的工业级培养方法_2

文档序号:9620325阅读:来源:国知局
获至少约15公斤的干燥灵芝菌丝体,其中每公克干燥灵芝菌丝体含高达约28-33毫 克的三砲化合物,其至少包含灵芝酸S(ganoderic acid S,GAS)、灵芝酸T(ganoderic acid 1',6八1')、灵芝酸]^(区&11〇(161';^&(^(1]\16,6八]\16)、灵芝酸1?(区&11〇(161';^&(^(11?,6八1?)和赤灵酸 S(ganodermic acid S,GMAS)。此外,依据本揭示内容,若需要将产量放大时,仅需将所揭示 批次制备方法成比例放大(即,2倍、3倍或更多),即可获得成比例量的干燥灵芝菌丝体。
[0027] 依据所揭示培育灵芝菌丝体的方法,其至少包含四个阶段。在第一阶段,先将灵芝 菌丝体接种在内含不超过1公升第一液态培养基的培养瓶内,并于适当培养条件下培育约 5-15天。较佳是,将灵芝菌丝体接种不超过0. 8公升,更佳是不超过0. 5公升的第一液态培 养基内。所揭示的第一液态培养基至少包含:1. 5%葡萄糖、1. 5%蔗糖、0. 5%蛋白胨、0. 2% 酵母抽出物、和〇. 06 % KH2PO4。接种后,于持续振荡的情况下,将整个液态培养基培养在符 合以下条件的环境下:振荡速度介于约50-120rpm,例如约50、55、60、65、70、75、80、85、90、 95、100、105、110、115 或 120rpm ;温度介于约 20-35°C,例如约 20、21、22、23、24、25、26、27、 28、29、30、31、32、33、34 或 35°C ;培育约 5-15 天,例如约 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14 或 15 天。较佳是,振荡速度是介于约65-105rpm,例如约65、70、75、80、85、90、95、100或105rpm ; 温度介于约 22-33°C,例如约 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33°(:;培育约8-12天, 例如约8、9、10、11或12天;更佳是,振荡速度是介于约75-90rpm,例如约75、80、85或90、 rpm ;温度介于约25-30°C,例如约25、26、27、28、29或30°C;培育约9-11天,例如约9、10或 11天。在一较佳实施方式中,是在振荡速度约85rpm、温度约28°C下培育约10天。
[0028] 在第二阶段,先将第一阶段所收获的液态培育物接种在内含至少30公升第一液 态培养基的酿酵槽内,并于适当培养条件下培育约2-5天。类似的,接种后,于持续搅拌 的情况下,将整个液态培养基培养在符合以下条件的环境下:搅拌速度介于约80-200rpm, 例如约 80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、 170、175、180、185、190、195 或 200rpm ;通气量介于约 5-15LPM,例如约 5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14 或 15LPM ;和温度介于约 20-35°C,例如约 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、 31、32、33、34或35°C ;培育约1-5天,例如约1、2、3、4或5天。较佳是,搅拌速度是介于约 110-170rpm,例如约 110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165 或 170rpm ;通 气量介于约7-12LPM,例如约7、8、9、10、11或12LPM ;温度介于约22-33°C,例如约22、23、 24、25、26、27、28、29、30、31、32或33°C ;培育约2-4天,例如约2、3或4天;更佳是,搅拌速 度是介于约 120-160rpm,例如约 120、125、130、135、140、145、150、155 或 160rpm ;通气量介 于约9-10LPM,例如约9或10LPM ;;温度介于约25-30°C,例如约25、26、27、28、29或30°C ; 培育约3天。在一较佳实施方式中,是在搅拌速度约150rpm、通气量约10LPM、温度约28°C 下培育约3天。
[0029] 在第三阶段,先将第二阶段所收获的液态培育物接种在内含至少300公升第二液 态培养基的酿酵桶内,并于适当培养条件下培育约2-6天。第二液态培养基至少包含:3% 葡萄糖、6. 5 %蔗糖、1. 0 %蛋白胨、3 %黄豆粉、0. 6 %酵母抽出物、0. 06 % KH2POjP 0. 05 % MgSO4。类似的,接种后,于持续搅拌的情况下,将整个液态培养基培养在符合以下条件的 环境下:搅拌速度介于约 50-150rpm,例如约 50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、 110、115、120、125、130、135、140、145 或 150rpm ;通气量介于约 50-150LPM,例如约 50、60、 70、80、90、100、110、120、130、140 或 150LPM ;和温度介于约 20-35°C,例如约 20、21、22、23、 24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34 或 35°C ;培育约 2-6 天,例如约 2、3、4、5 或 6 天。较 佳是,搅拌速度是介于约 70-130rpm,例如约 70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、 125或130rpm ;通气量介于约80-130LPM,例如约80、90、100、110、120或130LPM ;温度介于 约 22-33°C,例如约 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32 或 33°C;培育约 3-5 天,例如约 3、 4或5天;更佳是,搅拌速度是介于约85-115rpm,例如约85、90、95、100、105、110或115rpm ; 通气量介于约90-110LPM,例如约90、100或110LPM ;温度介于约25-30°C,例如约25、26、 27、28、29或30°C ;培育约4天。在一较佳实施方式中,是在搅拌速度约llOrpm、通气量约 100LPM、温度约28°C下培育约4天。
[0030] 在第四阶段,将第三阶段所收获的液态培育物转移到多个培养盘中,使得每个培 养盘中每_升液态培养基具有约1. 5-2. 5平方公分的表面积,之后在约200-2, 000照度下 培养约10-20天。简言之,是在每一培养盘中倒入约0. 5-1公升的第三阶段所收获的液态 培育物,每一培养盘的面积介于约1,000-2, 500平方公分间,较佳是介于约1,500-2, 000平 方公分间,更佳是约1,800平方公分。在本阶段中,使用高达约288个培养盘来盛装第三阶 段所收获的液态培育物,以进行后续的培育。接着,将该多个盛装有第三阶段所收获的液态 培育物的培养盘堆栈起来,放在培养盘架上,推入具有温度、湿度、通气以及光照控制的环 境中,继续培育。详言之,是将培育温度控制在约20-35°C间,例如约20、21、22、23、24、25、 26、27、28、29、30、31、32、33、34 或 35°C ;相对湿度控制在约 50-100%间,例如约 50、60、70、 80、90 或 100% ;通气量介于约 5-20LPM 间,例如约 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19或201^]?;光照强度约100至1,000 照度间,例如约100、130、200、260、300、390、400、 460、520、650、780、910 或 1000 照度;培育约 10-20 天,例如约 10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19或20天。较佳是将培育物维持在温度约22-33°C间,例如约22、23、24、25、26、27、 28、29、30、31、32或33°C ;相对湿度控制在约70-100%间,例如约70、80、90或100% ;通气 量介于约8-18LPM间,例如约8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18LPM ;光照强度约200至 780 照度间,例如约 200、260、300、390、400、460、520、650 或 780 照度;培育约 12-18 天,例 如约12、13、14、15、16、17或18天。更佳是将培育物维持在温度约25-30°C间,例如约25、 26、27、28、29或30°C ;相对湿度控制在约80-100%间,例如约80、90或100% ;通气量介于 约10-16LPM间,例如约10、11、12、13、14、15或16LPM ;光照强度约300至520照度间,例如 约300、390、400、460或520照度;培育约14-16天,例如约14、15或16天。在一较佳实施 方式中,是在通气量约15LPM、相对湿度100%、光照强度约460照度且温度约28°C下培育约 14天。
[0031] 典型的情况是在如图1所示的培育系统100中进行第四阶段的培育。此培育系统 100包括一外壳110以及至少4个培养架;但图1中仅示出两个培养架(120, 130)。每一培 养架(120)
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