一株淡紫拟青霉菌及其在普洱茶生产中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及普洱茶生产领域，具体涉及一株淡紫拟青霉菌及其在普洱茶生产中的 应用。
【背景技术】
[0002] 随着食品科学与技术的进步，以及微生物资源的挖掘与利用，微生物优良菌株的 选育和应用研究越来越广泛。
[0003] 淡紫拟青霉真菌能够产生丰富的几丁质酶、葡聚糖酶与蛋白酶等功能酶，在普洱 茶发酵过程中能够促进物质变化，对普洱茶品质的形成具有很好的促进作用。同时，该真菌 具有一定程度的农药降解作用，Somaseknar研究发现，淡紫拟青霉真菌能够促进难溶磷酸 盐的溶解。实验室研究结果证实，淡紫拟青霉真菌的增溶效果达到30%，其它线虫拮抗菌达 到20%~40%。同类研究还表明，淡紫拟青霉真菌还能够促进许多化学聚合物（如农药， 制革废水等）的分解，具有一定的环保效应。因此，半个多世纪以来，国内外许多专家学者 对该真菌进行了广泛而深入的研究，在生物学、生态学、大量培养、控害效能与田间应用等 方面均取得了一系列的研究成果。
[0004] 然而，在普洱茶发酵研究领域中，前期偏重于进行基础性研究，而缺乏在具体应用 方面的深度跟踪。随着对普洱茶发酵技术的突破，从传统渥堆发酵样品中获得具有潜在应 用价值的微生物菌株，并应用于普洱茶的发酵生产中已经成为普洱茶生产的必然趋势，具 有重要的意义。
【发明内容】
[0005] 为了解决以上问题，本发明从微生物的专业角度出发，对普洱茶的生产，尤其是普 洱茶的渥堆过程进行了研究，提供了一株在普洱茶发酵生产中，能够提高普洱茶品质的潜 在菌株，并将其应用于普洱茶的生产中，为发酵普洱茶品质的稳定和提高发挥了重要作用。
[0006] 因此，本发明一方面提供了一株淡紫拟青霉菌株，该菌株为淡紫拟青霉 (Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株，其已于2014年01月06日保藏于中国微生 物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC)，该菌株的登记入册编号为CGMCC No.8680〇
[0007] 本发明所述的淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株，分离自動 海茶业有限责任公司（勐海茶厂）的传统渥堆普洱茶发酵样品中，利用常规培养基，通过传 统的初筛、复筛、纯化培养获得的。
[0008] 本发明的淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株划线接种在察 氏培养基上，培养24小时后开始生长，4天后菌落直径约为50mm，菌落形状呈规则圆形，菌 落外圈颜色为白色，中间呈淡紫色，7天以后菌落变成暗红色。孟加拉红、PDA和察氏培养基 菌丝量增长最为显著，PDB、PCA培养基菌丝量增加较为缓慢。发达菌丝上分生出大量孢子， 在察氏和燕麦培养基上产孢量最大。
[0009] 本发明另一方面提供了本发明的淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株在普洱茶生产中的应用。
[0010] 其中，在一个优选的实施方案中，该菌株与已潮水的普洱毛茶的接种比例为 1:20 (体积/重量）。
[0011] 本发明的淡紫拟青霉真菌（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株从普海茶 渥堆样品中分离得到，将制备好的该菌株的种子液按特定比例应用于普洱茶发酵生产中， 可以得到红浓、且口感温润的普洱茶茶汤，同时该菌株还可以降解普洱茶原料中残存的农 药，提高普洱茶的农药残存指标。
[0012] 本发明的淡紫拟青霉真菌（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株的生物材 料信息如下：
[0013] 分类命名：淡紫拟青霉真菌（Paecilomyces lilacinus);
[0014] 菌株编号：TMCC 70004 ;
[0015] 保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；
[0016] 保藏机构简称：CGMCC ;
[0017] 保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；
[0018] 保藏日期：2014年01月06日；
[0019] 保藏中心登记入册编号：CGMCC No. 8680。
【具体实施方式】
[0020] 下面通过实施例对本发明作进一步的详细说明，旨在用于说明本发明而非限定本 发明。应当指出，对于本领域技术人员而言，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发 明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也同样落入本发明的保护范围之内。
[0021 ] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0022] 下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0023] 实施例1淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株的筛选
[0024] 从普洱茶渥堆中采集新鲜的发酵茶样，通过常规的培养基分离得到淡紫拟青霉 (Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004 菌株。
[0025] 纯化培养基为：硝酸钠3g、磷酸氢二钾lg、硫酸镁0. 5g、氯化钾0. 5g、硫酸亚铁 0· 01g、鹿糖 30g、琼脂 15g、蒸馏水 1000mL，121°C灭菌 30min。
[0026] 分离纯化方法如下：
[0027] 1、培养基准备：将配制好的培养于121°C灭菌30min，冷却至45°C左右，倒入无菌 培养皿中，每皿约20ml，冷却凝固后备用；
[0028] 2、样品处理：取待分离的普洱茶样，研磨粉碎，取10g，在超净工作台中加入到装 有90ml无菌水的三角烧瓶中，振荡制成菌悬液，浓度记为10 S
[0029] 3、稀释：按十倍稀释法逐步稀释，稀释5次为止。十倍稀释法是指下一管的菌悬液 浓度是上一管的十分之一；
[0030] 4、接种：将标记有10 2、10 3、10 4、10 5、10 6浓度的菌悬液分别取200 μ 1注入到已 配制好的培养皿中，每个稀释度三次重复，并用涂布棒均匀涂布。完成后放置于10°c、20°C、 30°C、4(TC四个温度梯度下培养，每隔24小时观察一次；
[0031] 5、纯化：培养4~8天，挑取单菌落转接到察氏培养基中培养，多次划线纯化直至 得到纯化菌株；
[0032] 6、种子液的制备：将纯化得到的TMCC 70004菌株接种于马铃薯一葡萄糖液体培 养基中，然后放置于摇床（150rpm/min、30°C )培养5天后，用于接种发酵。
[0033] 实施例2淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株的形态鉴定
[0034] 将本发明的淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株划线接种在 察氏培养基上，培养24小时后开始生长，4天后菌落直径约为50mm，菌落形状呈规则圆形， 菌落外圈颜色为白色，中间呈淡紫色，7天以后菌落变成暗红色。孟加拉红、PDA和察氏培养 基菌丝量增长最为显著，H)B、PCA培养基菌丝量增加较为缓慢。发达菌丝上分生出大量孢 子，在察氏和燕麦培养基上产孢量最大。
[0035] 实施例3淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株的生产应用
[0036] 将大叶种晒青毛茶加水至含水量达到20% - 45%左右，121°C灭菌30min，随后在 灭菌的毛茶中，按照1:20的接种量接种TMCC 70004种子液，放置到30°C - 45°C培养数周。
[0037] 以周为单位补水并翻堆，在第一周内TMCC 70004开始大量繁殖，菌株数量呈几何 倍数增加，其生物活性物质、酶等分泌物增加。促进普洱茶红浓、且口感温润的普洱茶茶汤 的形成，而且可以降解普洱茶原料中残存的农药，提高普洱茶农药残存指标。
[0038] 具体的比较结果参见表1中的数据。
[0039] 表1采用淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004在不同条件下发酵 普洱茶后，其内含物质与大益2012年7572普洱熟茶的比较表
[0040]
【主权项】
1. 一株淡紫拟青霉菌株，其特征在于，该菌株为淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记 入册编号为CGMCC No. 8680。2. 根据权利要求1所述的淡紫拟青霉菌株，其是从普洱茶渥堆样品中，利用常规培养 基，通过传统的初筛、复筛、纯化培养获得的。3. 权利要求1或2所述的淡紫拟青霉菌株在普洱茶生产中的应用。4. 根据权利要求3所述的应用，其中该菌株与已潮水的普洱毛茶的接种比例为 1:20 (体积/重量）。
【专利摘要】本发明属于普洱茶生产领域，具体公开了一株淡紫拟青霉菌株及其在普洱茶生产中的应用。本发明所提供的淡紫拟青霉菌株为淡紫拟青霉(Paecilomyces？lilacinus)TMCC？70004菌株，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC？No.8680。将本发明的淡紫拟青霉菌株应用于普洱茶的渥堆过程中，可以得到红浓、且口感温润的普洱茶茶汤，同时该菌株还可以降解普洱茶原料中残存的农药，提高普洱茶的农药残存指标。CGMCC No. 868020140106
【IPC分类】C12N1/14, A23F3/10, C12R1/79
【公开号】CN105602854
【申请号】CN201410680966
【发明人】唐蜀昆, 高林瑞, 田飞, 卢开阳, 任万增, 童一峰, 黄华伟, 刘韬, 邹小林, 卢晓慧
【申请人】勐海茶业有限责任公司
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2014年11月24日