流感疫苗的分子增强型皮肤递送的制作方法

专利名称：：流感疫苗的分子增强型皮肤递送的制作方法流感疫苗的分子增强型皮肤递送本申请要求申请日为2003年5月12日的美国临时申请号60/470，243的优先权，以上文献被以全文形式收作本文参考。1.发明领域本发明涉及皮肤疫苗制剂，它被设计成将免疫原性组合物定向递送到皮肤的真皮区室，皮肤包括真皮内和表皮区室。本发明的皮肤疫苗制剂包括抗原性或免疫原性剂，和至少一种分子，例如，化学制剂，它能增强抗原性或免疫原性剂向真皮内区室或表皮区室的免疫细胞的呈递和/或可利用性，导致了增强的免疫反应。本发明的皮肤疫苗制剂具有增强了的效力，在将抗原性或免疫原性剂递送到真皮内区室或表皮区室时，对存在于它里面的免疫细胞具有增强了的呈递和/或可利用性。所述皮肤疫苗制剂的增强了的效力导致了使用比常规更低的抗原性或免疫原性剂的剂量，在施用一个真皮内或表皮剂量之后产生治疗有效的免疫反应，并且没有必要进行强化免疫。2.发明背景2.l疫苗疫苗通常由活的减毒的病原体、完整的失活的有机体或失活的毒素组成。在很多场合下，这些方法业已成功地诱导了基于抗体介导的反应的免疫保护作用。然而，某些病原体，例如，HIV，HCV，TB，和痴疾，需要诱导细胞介导的免疫性(CMI)。非活性疫苗通常被证实不能有效产生CMI。另外，尽管活的疫苗可以诱导CMI，但某些活的减毒的疫苗可能导致在免疫抑制对象体内发病。上述问题的结果是，已出现了疫苗开发的若干种新途径，如重组蛋白亚基，合成肽，蛋白多糖缀合物，以及质粒DM。尽管这些新的方法可以提供重要的安全性优点，但一般的问题是，疫苗本身通常具有较差的免疫原性。因此，一直需要开发有效的和安全的佐剂，可将它用于疫苗制剂中以增强疫苗的免疫原性。例如，有关疫苗开发技术现状的综述参见，Edelman，2002，MolecularBiotech.21:129-148;O'Hagan等，2001,BiomolecularEngineering,18:69-85;Singh等，2002，Pharm.Res.19(6):715-28)。传统上，疫苗制剂的免疫原性是通过以包括佐剂的制剂形式注射它提高的。免疫学佐剂最初由Ramon(1924，Ann.Inst.Pasteur,38:1)披露为"与特异性抗原组合使用的物质，它能产生比抗原本身更可靠的免疫反应"。业已将多种物质，包括生物学和合成物质用作佐剂。不过，尽管多年来对大量的候选物质进行了深入评估，目前唯一得到美国食品和药物管理署批准的佐剂是铝-基矿物质(通常称之为明讽)。明讽具有引起争议的安全性记录(例如，参见，Malakoff，Science,2000,288:1323)，并且比较性研究表明，对于蛋白亚基的抗体诱导来说，它是弱的佐剂，而对于CMI来说是差的佐剂。另外，明矾佐剂可以诱导IgE抗体反应，并且与某些对象的过敏反应相关(例如，参见，Gupta等，1998，DrugDeliv.Rev.32:155-72;Relyveld等，1998，Vaccine16:1016-23)。自从明矾开发以来，很多实验佐剂业已发展到临床试验阶段，并且某些佐剂业已被证实为高效的，但是证明了在用于人体治疗时具有太高的毒性。另外，尽管特定的佐剂可能证实为在一种组织中是安全的和有效的，但是相同的制剂在另一种组织空间中可能表现较差或者是有毒的。因此，必须对每一种制剂作为新的递送器械进行重新评估，使得临床医生可用于新的組织空间。现有的疫苗制剂通常要在几个月的时间跨度上施用若干次，以便诱导免疫反应，使宿主在随后遇到所述抗原时能够产生保护作用，例如，所述抗原是微生物本身。因此，尽管用于多种传染性疾病的疫苗目前是可以得到的，但其中的很多，包括流感、破伤风和乙型肝炎疫苗需要施用一次以上，以便产生保护作用。在卫生保健匮乏或不足的国家，上述限制是非常成问题的。另外，在发达国家，依从性也是一个问题，特别是对于儿童免疫计划来说更是如此。因此，很显然存在对能导致增强了的治疗效力和保护性免疫反应的更有效的疫苗制剂和递送它们的更有效的方法的需要。具体地讲，需要开发能够减弱或消除对长期注射方案的需要的疫苗制剂。2.2流感疫苗根据抗原性差异，可以将流感病毒划分成A,B和C型。曱型流感病毒是通过命名法描述的，它包括亚型或型、地理学起源、菌抹编号、以及分离年份，例如A/Beijing/353/89。HA具有至少15种亚型(H1-H13)和9种NA亚型(N1-N9)。所有亚型都发现于禽类中，但是只有H1-H3和N1-N2发现于人类、猪和马体内(Murphy和Webster,"Orthomyxoviruses",inVirology,ed.Fields,B.N.,Knipe，D.M.，Chanock，R.M.，p.1091-1152，RavenPress,NewYork,1990)。曱型和乙型流感病毒流行病可在老年人和患有慢性疾病的患者中导致较高的死亡率。流行性感冒是每年发生的，并且是世界范围内的高发病率和死亡率的原因.儿童具有最高的发病率，并且主要造成了流感病毒在人类群体中的传播。老年人和存在健康问题，如免疫损伤的个体，具有引起并发症和因为流感感染而住院的较高的风险。仅在美国，在1956-1988年间，在7个流感季节中的每一个因为肺炎和流感而出现的死亡超过IO，000例，在两个季节中的每一个报道的死亡人数超过40,000例(Update:InfluenzaActivity--UnitedStatesandWorldwide,andCompositionofthe1992—1993influenzavaccine,MorbidityandMortalityWeeklyReport.U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,PublicHealthService,41No.18:315-323，1992)。典型的流感流行，导致肺炎和下呼吸道发病率的增加，这是由较高的住院率和死亡率所证明的。老年人或患有潜在慢性疾病的人最有可能出现这种并发症，不过年幼的嬰儿也有可能患严重疾病。这样的人群特别需要保护。目前现有的流感疫苗是失活的或活的减毒的流感疫苗。失活的流感疫苗包括三种类型抗原制剂之一失活的全病毒、亚病毒体，其中用去污剂或其他制剂破坏纯化的病毒颗粒，以便溶解脂类外被，(所谓的"分离的"疫苗)或纯化的HA和NA(亚单位疫苗)。这些失活的疫苗通常是肌内注射U.m.)使用的。流感疫苗通常是三价疫苗，它们通常包括来自两种甲型流感病毒菌抹和一种乙型流感菌林的抗原。在大多数场合下，标准的0.5mL的注射剂量包括来自每一种菌林的15jjg的血细胞凝集素抗原，它是通过单向散射免疫扩散法(SRD)测定的(Wood等，1977，J.Biol.Stand.5:237-247;Wood等，1981，J.Biol.Stand.9:317-330)。现有控制与每年流感流行相关的发病率和死亡率的措施是基于肌内施用的失活的分离的或亚单位流感疫苗的使用。这种疫苗在预防呼吸道疾病和流感并发症方面的效力从在健康成年人中的75%到在老年人中的不到50%。因此，明显存在对施用流感疫苗的替代方法的需要，特别是无痛或以比肌内注射疼痛更轻的方法，不存在注射部位感染的相同的危险，并且不会出现因为"针恐惧"而导致的患者依从性相关的负面效应。另外，需要通过不会对卫生保健工作者造成负面影响，如高的针刺伤危险的施用途径施用流感疫苗。仍然需要治疗上更有效的流感疫苗制剂，它能减少或消除对长时间注射方案的需要，并且还能减轻任何类型的刺激，无论它是局部的或系统性的。3.发明概述本发明在某种程度上是基于本发明人的出人意料的发现。通过专一性地靶定对象皮肤的真皮内区室进行真皮，特别是真皮内疫苗递送制剂，能提高疫苗的治疗效力和保护性免疫反应。基于本发明人的理解和认识，本发明的真皮内疫苗制剂的增强了的效力在某种程度上是由于真皮内区室提供了理想的免疫空间，使抗原性或免疫原性剂能够直接接触存在于它里面的免疫细胞。实际上，真皮内区室很少被作为抗原性或免疫原性剂的递送部位有效靶定，至少在某种程度上是由于专一性和可再现地，即将针精确地放入真皮内空间，和适当的递送压力递送抗原性或免疫原性剂的难度。本发明的优点还可能出现在其他真皮区室，包括，但不局限于皮肤的表皮区室。尽管不希望受任何特定作用机制的限制，但皮肤是用于递送疫苗和基因治疗剂的吸引人的目标部位。对于疫苗(遗传学和常规疫苗)来说，皮肤是诱人的递送部位，因为在该组织中存在高浓度的抗原呈递细胞(APC)和APC前体，特别是存在于真皮内区室中的表皮朗罕氏细胞(LC)和免疫细胞。本发明制剂的增强了的效力可以用包括用于真皮内和表皮递送的皮肤疫苗制剂实现。在某些实施方案中，本发明的皮肤疫苗制剂(包括表皮和真皮制剂)包括抗原性或免疫原性剂，和至少一种分子，例如，化学制剂，它能增强抗原性或免疫原性剂向免疫细胞，例如，真皮内区室的免疫细胞(例如，抗原呈递细胞)，或表皮区室的免疫细胞(例如，表皮朗罕氏细胞(LC))的呈递和/或可利用性，产生增强了的保护性免疫反应。在具体实施方案中，所述分子起着延长抗原性或免疫原性剂与真皮区室的免疫细胞，例如，抗原呈递细胞、表皮朗罕氏细胞(LC)的接触时间的作用，产生增强了的保护性免疫反应。本发明的皮肤疫苗制剂(包括表皮和真皮制剂)具有增强了的效力，例如，增强了的保护性免疫反应，在所述抗原性或免疫原性剂被递送到皮肤区室时，具有对存在于它里面的免疫细胞，例如，抗原呈递细胞的增强了的可利用性和/或呈递。另外，在所述抗原性或免疫原性剂被递送到皮肤区室时，本发明的皮肤疫苗制剂具有增强了的效力，时间，^致^强了i疫反应。皮肤疫苗制剂(包"表皮和真皮制剂)的增强了的效力在施用比常用的抗原性或免疫原性剂更低的剂量到皮趺之后导致了治疗有效反应，例如，保护性免疫反应，并且不需要强化免疫。可用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括表皮和真皮制剂)中的分子包括一旦施用到皮肤空间之后能够聚合或胶凝，以产生半固体或固体明胶状基质的胶凝剂。在某些实施方案中，使所述明胶状基质使得抗原性和/或免疫原性制剂对皮肤空间中的免疫细胞具有增强了的呈递和/或相互作用。在具体实施方案中，所述胶凝剂是在一旦施用到真皮空间之后能够聚合或胶凝的胶凝剂。优选的是，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的聚合物能增强抗原性或免疫原性剂对皮肤区室的免疫细胞，例如，抗原呈递细胞的呈递和/或可利用性。根据由真皮内区室所产生的物理限制，本发明的真皮内疫苗制剂除了抗原性或免疫原性剂和分子，特别是胶凝剂，例如，在一旦施用到真皮内空间之后能够聚合或胶凝的聚合物之外，原本还打算包括生物或粘膜附着性物质。不过，根据本发明人的意外发现，本发明的真皮内疫苗制剂除了粘膜或生物附着性物质之外不需要胶凝剂。本发明的真皮内疫苗制剂可简单地具有粘膜或生物附着性物质。另外，本发明的真皮内疫苗制剂可简单地具有在一旦施用到真皮内空间之后能够聚合或胶凝的聚合物。在某些实施方案中，本发明涉及真皮内疫苗制剂，它包括抗原性或免疫原性剂，以及一旦施用到真皮内空间之后能够聚合或胶凝的至少两种聚合物。可用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括表皮和真皮制剂)中的其他分子包括粘膜或生物附着性物质，它能增强抗原性或免疫原性剂对真皮区室的免疫细胞的呈递和/或可利用性。在某些实施方案中，所述粘膜或生物附着性物质可以允许抗原性或免疫原性剂附着在真皮空间的免疫细胞，例如，抗原呈递细胞上。在某些实施方案中，本发明涉及包括抗原性或免疫原性剂和至少两种粘膜或生物附着性分子的皮肤疫苗制剂。在其他实施方案中，本发明的皮肤疫苗制剂(包括表皮和真皮制剂)还包括一种或多种添加剂，包括但不局限于，佐剂、赋形剂、稳定剂和渗透促进剂。可用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括表皮和真皮制剂)中的分子包括聚合物，优选生物相容性和/或生物可降解的聚合物，它能发生热诱导的物理转变，在生理温度下，例如，在25-37'C的温度下由液体转变成凝胶。本领域技术人员可以理解的是，所述生理温度应当是高于所述聚合物的液体-凝胶转变的温度。优选的，所述聚合物是非离子嵌段共聚物，又被称作普卢兰尼克或泊洛沙姆，包括，但不局限于，普卢兰尼克F-127，普卢兰尼克F-68，和普卢兰尼克F108。在某些实施方案中，所述聚合物起着补给站的作用。另外，所述聚合物能增强抗原性或免疫原性剂对真皮区室的免疫细胞例如抗原呈递细胞的呈递和/或可利用性。在某些实施方案中，所述聚合物是佐剂。在其他实施方案中，所述聚合物还是生物附着性和/或粘膜附着性物质。用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括表皮和真皮制剂)中的分子还可以是粘膜或生物附着性物质，它导致了增强了的免疫反应。在某些实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的粘膜或生物附着性物质可以促进抗原性或免疫原性剂对皮肤区室的免疫细胞表面的附着性。用于本发明的皮肤疫苗制剂中的粘膜或生物附着性物质的例子包括，但不局限于，聚卡波非，聚丙烯酸(PAA),carobopols，聚羟乙烯EX55，capricol，卡波姆，多糖，透明质酸，壳聚糖；外源凝集素；纤维素，甲基纤维素，羧甲基纤维素，羟丙基曱基纤维素，藻酸钠，明胶，果胶，阿拉伯胶，和聚维酮。本发明的皮肤疫苗制剂(包括表皮和真皮制剂)还可以包括抗原性或免疫原性剂和起着胶凝剂作用，例如，能在生理温度下聚合或胶凝的分子，以及起着粘膜或生物附着性物质作用的分子。在本发明的真皮内疫苗制剂中使用聚合物的一个优点是，它们特别适合在低于生理温度的温度下，例如，在25-37t:下的真皮内递送，所述真皮内疫苗制剂是液体，并且在真皮内注射之后，所述真皮内疫苗制剂随着在对象体内被加热到高于液体-凝胶转变温度而形成凝胶。在具体实施方案中，明胶样制剂能够将抗原性或免疫原性剂緩慢释放到真皮中，加强了有效的免疫反应。另外，本发明的真皮内疫苗递送系统对于真皮内施用是理想的，因为明胶状材料能防止任何液体泄露，从而增加了业已确定了的真皮内递送的优点。本发明的真皮内疫苗递送系统以下以流感疫苗制剂为例，该制剂在施用到对象皮肤的真皮内区室时，增强了所述流感疫苗制剂的保护性免疫反应和效力。在一种具体实施方案中，所述流感疫苗递送系统包括来自流感病毒的一种或多种抗原，和至少一种生物相容性、生物可降解的胶凝剂，例如，能发生热诱导的物理转变的聚合物，其在生理温度下由液体转变成凝胶。在另一种具体实施方案中，所述流感疫苗递送系统包括来自流感病毒的一种或多种抗原，和至少一种粘膜或生物附着性物质。在另一种具体实施方案中，所述流感疫苗递送系统包括来自流感病毒的一种或多种抗原，至少一种胶凝剂，例如聚合物，和至少一种粘膜或生物附着性物质。本发明的真皮内疫苗制剂在产生针对抗原性或免疫原性剂的免疫反应的快速和高水平的免疫反应方面是特别有利的，针对所述制剂的免疫反应是理想的。本发明的真皮内疫苗制剂能够用低剂量的抗原性或免疫原性剂获得预防水平上的系统免疫。在某些实施方案中，本发性剂的剂量的60%，优选50%，更优:40i的抗原':或免i原;生剂产i了保护性免疫反应。在优选实施方案中，本发明的真皮内疫苗制剂包括抗原性或免疫原性剂的剂量，该剂量低于本领域常用剂量，例如，在Physician'sDeskReference中，采用常规疫苗递送方法，例如，肌内和静脉内所推荐的剂量。优选的是，本发明的真皮内疫苗制剂在一个真皮内剂量之后导致了治疗性和预防性有效免疫反应。本发明的真皮内疫苗制剂可以真皮内施用，用于每年一次的免疫。相对现有制剂而言，本发明的皮肤疫苗制剂(包括表皮和真皮制剂)具有增强了的治疗效力，安全性，和毒性特征。由本发明的皮肤疫苗制剂所产生的效果和优点在某种程度上是由于所述特定制剂以及它们在靶定皮肤的真皮内区室方面的应用。优选的是，本发明的皮肤疫苗制剂提供了更大的和更持久的保护作用，特别是对于不能对免疫作出良好反应的高危群体来说更是如此。本发明的真皮内疫苗制剂的治疗效力在某种程度上是由于抗原性或免疫原性剂向皮肤的真皮内区室中的抗原呈递细胞(APCs)的緩慢释放，明胶状基质对局部皮肤组织的促炎作用，使所述组织具有对白细胞的增强了的化学趋化作用，或明胶状基质的促-佐剂作用。在优选实施方案中，本发明的真皮内疫苗制剂在免疫学不成熟，抑制或衰老对象体内增强免疫反应方面具有治疗和/或预防作用。本领域技术人员可以理解的是，本文所提供的原理同样可应用于将疫苗制剂递送到角质层以外的部位，以便沉积到对象皮肤的表皮内区室。用于摩擦皮肤，特别是皮肤的角质层以将物质沉积到表皮区室的方法和器械为本领域所公知，并且包括在本发明中，如在申请日分别为2001年10月29日、2001年11月27日、2000年5月22日和2002年10月29日的美国临时专利申请号60/330，713、60/333，162和美国专利申请流水号09/576，643、美国申请流水号10/282，231中所披露的，以上所有文献都以它们的全文形式收作本文参考。本发明还涉及试剂盒，包括本文所披露的本发明真皮内施用的器械和真皮内疫苗制剂。本发明还涉及包括本文所披露的本发明的真皮施用器械和真皮疫苗制剂的试剂盒。本发明还涉及包括本文所披露的本发明的表皮施用器械和皮肤疫苗制剂的试剂盒。4.附图的简要说明图l当流感接种物补充了普卢兰尼克F127时对流感抗原的血清反应。用含有普卢兰尼克F127的流感病毒疫苗制剂对Balb/c小鼠免(w/oF127)。图2当流感接种物补充了普卢兰尼克F127和粘膜附着性物质时对流感抗原的血清反应。用含有普卢兰尼克F127和粘膜附着性物质的流感病毒疫苗制剂对Balb/c小鼠进行免疫的血清抗体反应与单独使用流感病毒疫苗制剂的抗体反应进行比较(w/oF127/粘膜附着性物质)。图3当流感接种物补充了普卢兰尼克F127和羧曱基纤维素时对流感抗原的血清反应。用含有普卢兰尼克F127和羧甲基纤维素的流感病毒疫苗制剂对Balb/c小鼠进行免疫的血清抗体反应与单独使用流感病毒疫苗制剂的抗体反应进行比较(w/o羧甲基纤维素)。图4当流感接种物补充了明胶时对流感抗原的血清反应。用含有明胶的流感病毒疫苗制剂对Balb/c小鼠进行免疫时的血清抗体反应与单独使用流感病毒疫苗制剂的抗体反应进行比较(w/o明胶)。图5当流感接种物补充了甲基纤维素时对流感抗原的血清反应。在用含有曱基纤维素的流感病毒疫苗制剂对Balb/c小鼠进行免疫时的血清抗体反应与单独使用流感病毒疫苗制剂的抗体反应进行比较(w/o曱基纤维素)。图6当流感接种物补充了曱基纤维素(终点效价)时对流感抗原的血清反应。用含有曱基纤维素的流感病毒疫苗制剂对Balb/c小鼠进行免疫时的血清抗体反应与单独使用流感病毒疫苗制剂的抗体反应进行比较(w/o甲基纤维素)。对每一个动物的反应进行作图。图7猪的DRAIZE评分。对甲基纤维素补充和当甲基纤维素与流感病毒疫苗免疫原组合时进行皮肤相容性测定。图8针器械。根据本发明设计的针组件的分解透视图。图9针器械。图8所示实施方案的部分剖视图。图10针器械。图9所示实施方案结合在注射器主体上，以便形成注射器械。图11A是优选实施方案的手柄末端的正视图。图IIB是微型研磨机的优选实施方案的側视图。图12A是图11A和IIB所示微型研磨器械的透视图。图12B是图IIB所示微型研磨器械的剖视图。图13是图11A,IIB，12A，和12B所示微型研磨器械在对象皮肤上的研磨表面的侧视图。图14是图13所示实施方案中的研磨表面的透视图。图14A是研磨表面的剖视侧视图。图15是图13所示实施方案的研磨表面的仰视图。图16是皮肤的研磨皱紋的部分剖视透视图。5.发明的详细说明本发明涉及专门设计的用于定向递送，优选选择性地和专一性地递送抗原性或免疫原性剂到对象皮肤的特定区室，包括真皮内和表皮区室的皮肤疫苗制剂。在某些实施方案中，本发明的皮肤疫苗制剂被设计成定向递送，优选选择性地和专一性地递送抗原性或免疫原性剂到对象皮肤的真皮内区室。在某些实施方案中，本发明的真皮内疫苗制剂被直接定向递送到皮肤的真皮内区室。本发明的真皮内疫苗制剂包括抗原性或免疫原性剂和至少一种分子，例如，化学制剂，它能增强所述抗原性或免疫原性向免疫细胞，如真皮内区室的免疫细胞的呈递和/或可利用性，产生增强了的保护性免疫反应。在具体实施方案中，本发明的真皮内疫苗制剂中的分子延长了所述抗原性或免疫原性剂与真皮内区室的免疫细胞，例如，抗原呈递细胞的接触时间，产生增强了的保护性免疫反应。尽管不希望受特定作用机制的限制，本发明的真皮内疫苗制剂获得了增强了的治疗效力，例如，增强了的保护性免疫反应，在某种程度上是由于抗原性或免疫原性剂在注射部位的持续存在，即"补给站效应"。优选的是，本发明的真皮内疫苗制剂能降低抗原性或免疫原性剂从注射部位清除的速度。更具体地讲，本发明的真皮内疫苗制剂可以在注射部位，例如，真皮空间緩慢释放抗原性或免疫原性剂。本发明的真皮内疫苗制剂可以增强抗原性或免疫原性剂的免疫学反应或治疗效力，包括(l)增强抗原性或免疫原性剂的免疫原性；(2)增强免疫反应的速度和/或持续时间；(3)调节抗体反应的活性，专一性，同种型或类型分布；(4)刺激细胞介导的免疫反应；(5)促进粘膜免疫性；或(6)降低抗原性或免疫原性剂的剂量。尽管不希望受特定作用模式的限制，本发明的真皮内疫苗制剂通过使抗原性或免疫原性剂专一性靶定皮肤的真皮内区室能增强细胞介导的免疫反应，所述区室中包括抗原呈递细胞，例如，树突状细胞和朗罕氏细胞。本发明的真皮内疫苗制剂能够增强细胞介导的和/或体液介导的免疫反应。可以通过本发明的真皮内疫苗制剂调控的细胞介导的免疫反应包括，例如，Thl或Th2CD4+T-辅助细胞介导的或CD8+细胞毒性T-淋巴细胞介导的反应。在某些实施方案中，本发明的皮肤疫苗制剂被设计成定向递送，优选选择性地和专一性地递送抗原性或免疫原性剂到对象皮肤的表皮内区室。在某些实施方案中，本发明的表皮疫苗制剂被直接定向递送到皮肤的表皮区室。本发明的表皮疫苗制剂包括抗原性或免疫原性剂和至少一种分子，例如，化学制剂，它能增强抗原性或免疫原性剂向免疫细胞，如表皮区室的免疫细胞的呈递和/或可利用性，产生增强了的保护性免疫反应。在具体实施方案中，本发明的表皮疫苗制剂延长了抗原性或免疫原性剂与表皮区室的免疫细胞，例如，抗原呈递细胞的接触时间，产生增强了的保护性免疫反应。可用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)中的分子包括胶凝剂，如能够聚合或胶凝，例如形成半固体或固体二维或三维基质的聚合物。优选的是，所述分子一旦施用到真皮内或表皮区室，就能够，例如，使抗原性或免疫原性剂与其中的免疫学空间接触和相互作用。在最优选的实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的聚合物不形成脂质体或胶束结构。所述聚合物优选能增强抗原性或免疫原性剂向皮肤区室的免疫细胞，例如，真皮内或表皮区室的免疫细胞的呈递和/或可利用性。优选的是，用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)中的分子是生物学相容性的和/或生物可降解的。在具体实施方案中，所述分子是生物分子，包括但不局限于蛋白、多肽和肽。在某些实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)中的分子是在施用皮肤疫苗制剂的对象的生理温度，例如，对于人类对象来说，在25-37。C下能够发生从液体转变成凝胶的物理转变的任何聚合物。在某些实施方案中，所述物理转变不包括脂质体或胶束。优选的是，用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)中的聚合物的从液体到凝胶的转变是热诱导的，并且最优选是可逆的。在某些实施方案中，聚合物的液体-凝胶转变是化学诱导的。所述聚合物的液体-凝胶转变温度优选低于施用皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)的对象的生理温度。在某些实施方案中，所述聚合物从液体到凝胶的转变还导致了聚合物的黏度提高至少30%，至少50%，至少60%，至少80%,至少90°/。或至少99%。在优选实施方案中，所述聚合物是非离子嵌段共聚物，包括但不局限于，普卢兰尼克F-127，普卢兰尼克F-108,和普卢兰尼克F108。所述聚合物可以具有佐剂，生物附着性物质或粘膜附着性物质的一种或多种特征。可用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)中的其他分子是生物或粘膜附着性物质，它的优点在某种程度上是由于它们能够使抗原性或免疫原性剂附着在皮肤空间的生物学和免疫学表面，例如，皮肤空间的免疫细胞的表面上。可用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)中的生物或粘膜附着性物质的非限定性例子包括，聚卡波非、capricol、聚丙烯酸(PAA)、carobopols、聚鞋乙烯EX55、卡波姆、多糖、透明质酸、壳聚糖、外源凝集素、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙甲基纤维素、藻酸钠、明胶、果胶、阿拉伯胶和聚维酮。在某些实施方案中，本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)还包括一种或多种添加剂，包括但不局限于，佐剂、赋形剂、稳定剂、渗透促进剂和粘膜或生物附着性物质。在其他实施方案中，本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)还可以包括一种或多种其他可以药用的载体，包括任何合适的稀释剂或赋形剂。优选的是，所述可以药用的载体本身不会诱导生理学反应，例如，免疫反应。最优选的是，所述可以药用的栽体不会导致任何负面或不希望的副作用和/或不会导致过高的毒性。用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)中的可以药用的载体包括但不局限于，盐水、緩沖过的盐溶液、葡萄糖、水、甘油、无菌等渗含水緩沖液以及它们的组合。可以药用的载体、稀释剂、和赋形剂的其它例子披露于以下文献中Remington'sPharmaceuticalSciences(MackPub.Co.,N.J.，currentedition;以上所有文献都被以全文形式收作本文参考)。在具体实施方案中，本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)还可以包括湿润剂、乳化剂或pH緩冲剂。本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)可以是固体，如适合重构的冷冻干燥的粉末、液体溶液、悬浮剂、片剂、丸剂、胶嚢、緩释制剂、或粉末。在具体的优选实施方案中，本发明的真皮内疫苗制剂不是乳液，因为乳液的真皮内递送在技术上是困难的，并且是浪费劳动力的。本发明的真皮内疫苗制剂可以是适合真皮内递送的任何形式。在一种实施方案中，本发明的真皮内疫苗制剂是可流动的、可注射介质形式，即可以用注射器注射的低黏度制剂。在另一种实施方案中，本发明的真皮内疫苗制剂是明胶状基质形式的，例如，半固体或固体二维或三维基质。在另一种实施方案中，本发明的真皮内疫苗制剂是具有有限的流动性的高黏度、稠的介质形式的。在任一种实施方案中，所述抗原性或免疫原性剂一致性地并且均匀地分散在所述制剂中。在优选实施方案中，所述真皮内疫苗制剂可以通过改变温度而从可流动的、可注射介质转变成明胶，或者相反，以便真皮内疫苗制剂在低于转变温度的情况是可流动的、可注射介质形式，并且在高于转变温度下是明胶。所述可流动的、可注射介质可以是液体。另外，所述可流动的、可注射介质是颗粒状材料分散在它里面，以便所述介质保持流动性，可以注射，例如，可以用注射器施用的液体。本发明的表皮疫苗制剂可以是适合真皮内递送的任何形式，正如在申请日为2001年10月29日、2001年11月27日、2000年5月22日和2002年10月29日的美国临时专利申请号60/330，713，60/333，162和美国专利申请流水号09/576，643，美国申请号10/282,231中所披露的，以上所有文献都以它们的全文形式收作本文参考。优选的是，本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)是稳定的制剂，即，所述抗原性或免疫原性剂发生很小的至不可检测水平的降解和/或聚集，并且可以长时间地保存而又不丧失生物学活性，例如，所述抗原性制剂的抗原性或免疫原性。本发明的皮肤疫苗制剂的稳定性在某种程度上是由于抗原性或免疫原性剂被包埋，例如，一致性地和均匀地分散在所述聚合物的明胶状基质中，它提供了能保护并且防止抗原性或免疫原性剂发生降解和/或其他不希望的会导致生物学活性降低的聚合物结构网络。在某些实施方案中，本发明的皮肤疫苗制剂在2x:-8x:，优选4匸的温度下具有至少2年的稳定性，这是当真皮内疫苗制剂是液体形式时(即，不是凝胶形式时)通过高效大小排阻层析(HPSEC)所测定的。即，本发明的皮肤疫苗制剂在保存上述限定时间之后具有低的至不可检测水平的抗原性或免疫原性剂的聚集和/或降解。优选的是，不超过5%,不超过4%，不超过3%，不超过2%，不超过1%，最优选不超过0.5。yi的抗原性或免疫原性分子形成了聚集或降解，这是在保存上述限定时间之后通过HPSEC所测定的。另外，本发明的皮肤疫苗制剂在上述条件下长时间保存时几乎没有表现出抗原性或免疫原性剂的生物学活性的丧失，这是通过本领域所公知的标准方法评估的。本发明的皮肤疫苗制剂在保存上述时间之后保持了超过80%、超过85%、超过90%、超过95°/。、超过98%、超过99%、或超过99.5%的在保存之前的起始生物学活性。用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)中的测定，并且取决于抗原性或免疫原性剂的效力和性质。对于本发明的强化递送系统来说，抗原性或免疫原性剂的浓度优选低于在采用其他施用途径，例如肌内途径时的常用浓度。用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)中的抗原性或免疫原性剂的浓度为常用于获得有效免疫反应的浓度的60%、优选50%、更优选40%。通常，用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)中的抗原性或免疫原性剂的起始浓度为使用常规施用途径，例如，肌内注射常用于引起所需免疫反应的浓度。然后调整用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)中的抗原性或免疫原性剂的浓度，例如，通过用合适的稀释剂稀释，以便获得有效的保护性免疫反应，这是通过本领域所公知的以及本文所披露的标准方法所评估的。用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)中的分子的浓度取决于所使用的特定分子。在具体实施方案中，当所述分子是聚合物时，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的聚合物浓度可以为至少5%(w/v)、至少10%(w/v)、至少15%(w/v)、至少20%(w/v)、至少25%(w/v)或至少30%(w/v)。在某些实施方案中，所述聚合物的浓度高于大约30%(w/v)。在其他实施方案中，所述聚合物的浓度低于大约0%(w/v)。在另一种具体实施方案中，当所述分子是粘膜或生物附着性物质时，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的浓度可以为至少0.1%(w/v)、至少0.5%(w/v)、至少1%(w/v)、至少5°/。(w/v)或至少10%(w/v)。本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)可以制备成单位剂型。每个小瓶中的单位剂量可以包括0.1mL-lmL，优选0.1-0.5mL的制剂。在某些实施方案中，本发明的皮肤疫苗制剂的单位剂型可以包括50nL-100jnL、50|aL-200|uL或50mL-500jaL的制剂。如果必要，可以通过向每一个小瓶中添加无菌稀释剂将所述制剂调整到理想浓度。本发明的皮肤疫苗制剂在诱导理想的免疫反应方面更有效，因此用于皮肤递送的总体积可以小于常规的体积。在某些实施方案中，本发明的皮肤疫苗制剂的成分，例如，抗原性或免疫原性剂和分子，例如聚合物是分别提供的或以单位剂型形式混合在一起，例如，作为干燥的冷冻干燥的粉末或无水浓缩物装在密封的容器，如安瓿或小袋中，上面标明了活性成分，例如，抗原性或免疫原性剂的用量。在其他实施方案中，可以提供无菌稀释剂安瓿，以便所述成分可以在施用之前混合。在具体实施方案中，所述分子可以在施用之前与抗原性或免疫原性剂混合。在另一种具体实施方案中，所述分子可以在施用期间在真皮内递送器械中与抗原性或免疫原性剂混合。在另一种具体实施方案中，所述分子可以在施用期间在真皮递送器械中与抗原性或免疫原性剂混合。在另一种具体实施方案中，所述分子可以在施用期间在表皮递送器械中与抗原性或免疫原性剂混合。本发明还提供了包装在密封容器，如标明成分用量的安瓿或小袋中的真皮内疫苗制剂。在一种实施方案中，所述真皮内疫苗制剂是以液体形式提供的，在另一种实施方案中，是作为干灭菌的冷冻干燥的粉末或无水浓缩物在密封的容器中提供的，并且可以重构，例如用水或盐水重构到适合给对象使用的浓度。在另一种实施方案中，所述真皮内疫苗制剂是以液体形式在标明了成分用量和浓度的密封容器中提供的。本发明的真皮内疫苗制剂可以通过能产生稳定的，无菌的，可注射制剂的任何方法制备。在具体实施方案中，当所述分子是聚合物时，所述聚合物可以溶解在水溶液，例如水中，在低于聚合物的液体-凝胶转变温度，并且具有在高于所述液体-凝胶转变温度时能够形成明胶状基质的浓度下进行。形成聚合物溶液的最佳浓度取决于特定聚合物，并且将在5.1.l节中讨论。在同一种实施方案中，将抗原性或免疫原性剂溶解在水溶液，例如水中，并且与所述聚合物混合，以便形成稳定的，无菌的，可注射制剂。或者，所述抗原性或免疫原性剂可以是颗粒状的，并且溶解在聚合物溶液中，以便形成稳定的、无菌的、可注射制剂。对于本发明的真皮内疫苗制剂的增强的性能来说，所述抗原性或免疫原性剂应当均匀地分散在整个明胶状基质中，这一目的可以通过将抗原性或免疫原性剂溶解在含有聚合物的溶液中实现，溶解是在低于液体-凝胶转变温度的温度下进行的，以便一旦温度提高，所述抗原性或免疫原性剂能均匀地分散并且包埋在明胶状基质中。本发明的真皮内疫苗制剂具有将抗原性或免疫原性剂真皮内递送到对象皮肤的真皮内区室的特殊用途。优选的是，本发明的真皮内疫苗制剂是使用披露于以下文献中的真皮内器械和方法施用的美国专利申请号09/417，671，申请日为1999年10月14曰；09/606,909，申请日为2000年6月29日；09/893，746，申请日为2001年6月29曰；10/028，989，申请曰为2001年12月28曰；10/028,988，申请日为2001年12月28日；或国际公开号EP10922444，公开日为2001年4月18日；WO01/02178,公开日为2002年1月10日；和WO02/02179,公开日为2002年1月10日；以上所有文献的内容都被全文收作本文参考。本发明的真皮内疫苗制剂被用于对象皮肤的真皮内区室，使得刺入对象皮肤的真皮内空间，而又不穿过它。优选的是，所述真皮内疫苗制剂被施用到大约1.0-3.0mm的深度上，更优选1.0-2.0mm的深度的真皮内空间。与常规施用模式，例如疫苗制剂的肌肉注射相比，本发明的用于真皮内递送的真皮内疫苗制剂提供了无痛和较少入侵性的施用模式，因此，例如在对象依从性方面更为有利。本发明的表皮疫苗制剂具有用于表皮内递送抗原性或免疫原性剂到对象皮肤的表皮内区室的特殊用途。优选地，本发明的表皮疫苗制剂是使用披露于以下文献中的任何方法和器械施用的申请日分别为2001年10月29日，2001年11月27日，和2000年5月22日，和2002年10月29日的美国临时专利申请号60/330，713，60/333，162和美国专利申请流水号09/576，643，美国申请号10/282，231，以上所有文献都以它们的全文形式收作本文参考。在某些实施方案中，所述真皮内疫苗制剂是在例如，用冷冻干燥的粉末重构制备之后12小时之内、优选6小时之内、5小时之内、3小时之内或1小时之内施用的。在优选实施方案中，所述真皮内疫苗制剂在即将真皮内施用之前被制备成用于给对象真皮内施用，即与所述分子混合。本发明的皮肤疫苗制剂(包括表皮和真皮内疫苗制剂)在按照本发明的方法施用时少有或没有短期和/或长期的毒性。最优选的是，本发明的真皮内疫苗制剂在真皮内施用时，在注射部位少有或没有负面或不希望的反应，例如，皮肤刺激、肿胀、皮疹、坏死、皮肤敏化。在另一种最优选的实施方案中，本发明的表皮疫苗制剂在施用于表皮时，在注射部位少有或没有负面或不希望的反应，例如，皮肤刺激，肿胀，皮渗、坏死、皮肤敏化。在具体实施方案中，本发明的真皮内疫苗制剂优选以可流动的介质，例如，液体形式，在低于对象的生理温度的温度下施用到对象皮肤的真皮内区室。优选的是，施用的温度低于真皮内疫苗制剂中的聚合物的液体-凝胶转变温度。一旦将所述制剂导入对象皮肤的真皮内区室，所述真皮内疫苗制剂的黏度提高，以便形成明胶状基质，即流动性注射基质的稳定固体或半固体相，它能够抵抗流动。与流动性注射基质相比，明胶状基质的黏度提高了至少30%，或至少50%,或至少60%,或至少80%,或至少90%。本发明还提供了包括本发明的真皮内疫苗制剂的药物包或试剂盒。在具体实施方案中，本发明提供了包括装有本发明的真皮内疫苗制剂的一种或多种成分，例如，装有抗原性或免疫原性剂，分子，例如化学制剂的一个或多个容器的试剂盒。在另一种具体实施方案中，所述试剂盒包括两个容器，一个容器装有抗原性或免疫原性剂，另一个容器装有所述分子。与所述容器相关的可以是由管理生产，使用或销售药物或生物学产品的政府机构规定的标签，所述标签反应了得到用于人类给药的生产，使用或销售的机构的许可。本发明还涉及包括本文所披露的本发明的真皮内施用器械和真皮内疫苗制剂的试剂盒。本发明还涉及包括本文所披露的本发明的真皮施用器械和真皮疫苗制剂的试剂盒。本发明还涉及包括本文所披露的本发明的表皮施用器械和表皮疫苗制剂的试剂盒。本发明涉及免疫和/或在对象体内刺激免疫学免疫反应的方法，包括将本发明的真皮内疫苗制剂的单一剂量递送到对象，优选人体真皮内。在某些实施方案中，本发明涉及一次或多次强化免疫。本领域技术人员可以理解的是，本文所提供的原理还可适用于将疫苗制剂递送到超过角质层的部位，以便沉积到对象皮肤的表皮内区室。用于摩擦皮肤，特别是皮肤角质层以将一种物质沉积到表皮区室的方法和器械为本领域所公知，并且包括在本发明内，正如在以下文献中所披露的申请日分别为2001日10月29日，2001年11月27日，2000年5月22日，和2002年10月29日的美国临时专利申请号60/330，713，60/333，162和美国专利申请流水号09/576，643,美国申请流水号10/282，231中，以上所有文献都以它们的全文形式收作本文参考。5.1分子5.1.1胶凝剂在某些实施方案中，可用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮和表皮疫苗制剂)中的分子是一旦在施用到对象皮肤的皮肤区室时它们就聚合或胶凝的胶凝剂。所述胶凝剂，优选形成半固体至固体基质，所述基质可以是二维或三维的，它可以使抗原性或免疫原性剂与皮肤区室的生物学和免疫学空间，特别是与存在于它里面的免疫细胞相互作用。在某些实施方案中，所述胶凝剂能够增强抗原性或免疫原性剂与皮肤区室的生物学和免疫学空间的呈递和/或可利用性。适合本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮和表皮疫苗制剂)的胶凝剂优选在所施用的对象体内分解和/或降解，并且不会对对象产生任何毒性，有害的或不希望的作用。在某些实施方案中，所述胶凝剂可能不胶凝，而只是增稠，即，通过目测评估所述分子的祐度增加。无论所述胶凝剂在低于液体-凝胶转变温度时的物理状态如何，所述胶凝剂在高于转变温度的温度，例如，生理温度下，其祐度可以提高至少30%,至少50°/。，至少60°yi,至少80%,至少90%,或至少99°/。。用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮和表皮疫苗制剂)中的胶凝剂优选发生热诱导的物理转变，在皮肤疫苗制剂的温度提高到超过由第一温度和第二温度组成的温度范围时从液体转变成凝胶。优选的是，所述第一温度在l-2on的范围内，而所述第二温度在2s-"。c的范围内。用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮和表皮疫苗制剂)中的胶诱导的液体-凝胶转变。在具体实施方案中，当所述对象是人时，用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮和表皮疫苗制剂)中的胶凝剂是经过选择和配制的，以便所述皮肤疫苗制剂在低于40°C，优选低于37匸的温度下发生热诱导的液体-凝胶转变。在某些实施方案中，所述胶凝剂在大约10r-大约371C,优选大约25X:-37"C发生热诱导的液体-凝胶转变。优选的是，本发明的皮肤疫苗制剂的液体-凝胶转变是通过提高皮肤疫苗制剂的粘度实现的。在具体实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的胶凝剂是聚合物。任何生物相容性，生物可降解的聚合物都可以使用，只要在配体-凝胶转变特性就行。可用于制备本发明的皮肤疫苗制剂:包括真皮和表皮疫苗制剂)的某些聚合物的非限定性例子包括聚醚，优选聚氧化烯嵌段共聚物，更优选包括聚氧化乙烯-聚氧化丙烯嵌段共聚物的聚氧化烯嵌段共聚物，在本文中称之作POE-POP嵌段共聚物，如普卢兰尼克F68,普卢兰尼克F127，普卢兰尼克L121，和普卢兰尼克LlOl，和四聚醇胺T1501;和聚(醚-酯)嵌段共聚物。上述聚合物的某些例子披露于被以全文形式收作本文参考的美国专利号5，702，717和5,861，174中。本发明涉及皮肤疫苗制剂(包括真皮和表皮疫苗制剂)，它包括一种以上的上述聚合物和/或能够提供理想特征，例如，在递送到对象皮肤的真皮内区室时具有增强了的保护性免疫反应的其他聚合物。在某些实施方案中，所述皮肤疫苗制剂(包括真皮和表皮疫苗制剂)还可以包括其他聚合物和/或其他添加剂，所述额外成分的使用量不会导致本发明的皮肤疫苗制剂的性能要求的不一致性。另外，所述聚合物可以与其他聚合物或其他添加剂，如糖类组合，例如混合，以便改变液体-凝胶转变温度，通常在水溶液中混合。作为本发明的聚合物，聚氧化烯嵌段共聚物(普卢兰尼克共聚物)是特别优选的。聚氧化烯嵌段共聚物是包括第一种聚氧化烯的至少一个嵌段(即，聚合物片段)和第二种聚氧化烯的至少一个嵌段的聚合物，尽管还可以存在其他嵌段。在本发明的具体实施方案中，所述聚氧化烯嵌段共聚物包括第一种聚氧化烯的至少一个嵌段和第二种聚氧化烯的至少一个嵌段。在另一种具体实施方案中，第一种聚氧化烯是聚氧化乙烯，而第二种聚氧化烯是聚氧化丙烯。POE-POP嵌段共聚物是用作本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮和表皮疫苗制剂)中的生物学相容性聚合物的一种类型的优选的聚氧化烯嵌段共聚物。可以设计所述聚合物，并且用不同数量的POE-POP嵌段，并且通过POP和POE嵌段的不同排列合成。本领域已知的任何聚氧化烯嵌段共聚物都包括在本发明的方法和制剂的范围内。例如，有关聚氧化烯嵌段共聚物的综述，它们的分子结构，合成和纯化参见Newman等，1998，AdvancedDrugDeliveryReviews32:199-223;Verheul&Snippe，1992,Res.Immunol.143(5):512-9;Hunter等，1994AIDS,Res.andHumanRetroiruses10:Suppl.2，S95-8;Newman等，1998,Crit.Rev.Ther.DrugCarrierSyst.15(2):89-142;Kabanov等，2002AdvancedDrugDeliveryReviews54:223-233;Moghimi等，2000Tiptech，18:412-20;以上所有文献都以全文形式收作本文参考。可以在本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮和表皮疫苗制剂)中用作胶凝剂的聚氧化烯嵌段共聚物可以是三嵌段，例如L81，L92，L101,L121，L122,L141，L180,L185,反向三嵌段，例如，25R1，31R1,八嵌段，例如，TllOl，T1301,T1501,反向八嵌段，例如，T130R1，T130R2，T150R1。本发明涉及聚氧化烯共聚物，其中，POP和POE嵌段的方向和大小可以使用本领域的公知方法改变，以根据要制备的真皮内疫苗制剂获得理想的表面活性剂特性。在具体实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮和表皮疫苗制剂)和本发明的方法中的聚氧化烯共聚物是线性分子，所述聚合物嵌段组织成POE-POP-POE。本发明涉及低分子量聚氧化烯共聚物和高分子量聚氧化烯共聚物。低分子量共聚物的分子量可以为大约2-6KDa。高分子量共聚物的分子量可以为12-15KDa。优选的是，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的共聚物具有佐剂活性，例如，增强疫苗制剂的治疗效力。在优选实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的聚氧化烯共聚物的分子量为大约12-15KDa,具有佐剂活性。在另一种优选实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮和表皮疫苗制剂)中的聚氧化烯共聚物具有低的POE浓度，优选10%，更优选8%，最优选5%,以便获得最佳佐剂活性。在最优选的实施方案中，所述聚氧化烯的POE浓度不超过5%。本发明包括可以通过商业渠道获得的任何普卢兰尼克共聚物，例如，TiterMax(CytRxCorporation，Atlanta,GA.);Syntex佐剂制剂(SyntexRes.，PaloAlto，CA.)。在优选实施方案中，本发明包括由WyandotteChemicalCorporation和BASFPerformanceChemicals(Parsiponny，NJ)生产的普卢兰尼克共聚物，包括，但不局限于，L31，L81，L92，LlOl，L121,L122,P102,F108,L141，L180,L185,P1004和P1005。在某些实施方案中，本发明包括高分子量CRL共聚物，如由CytRxCorporation(Norcross，GA)出售的共聚物的用途。CRL共聚物在POE和POP嵌段的方向上与普卢兰尼克共聚物类似，不过，它们的尺寸明显更大。CRL共聚物包括9000-20，000道尔顿的P0P核心，其旁侧是P0E嵌段，它占总分子量的2.5-20%。本领域所公知的任何CRL共聚物都属于本发明方法和皮肤疫苗制剂的范围。用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮和表皮疫苗制剂)中的聚合物的浓度可以为至少10%(w/v)，至少15%(w/v)，至少20°/。(w/v),至少25。/。(w/v),或至少30Uw/v)。在某些实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的聚合物浓度低于10%(w/v)。在其他实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的聚合物浓度超过30%(w/v)。用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮和表皮疫苗制剂)中的聚合物浓度优选是这样的浓度，即在该浓度下，在生理温度，例如37iC下，所述聚合物的水溶液胶凝，形成半固体至固体二维或三维基质。在某些实施方案中，在生理温度，例如37'C下，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的聚合物在20分钟以内或更少，优选在IO分钟以内或更少，最优选在5分钟以内或更少时间内胶凝，这是通过肉眼检查所确定的，优选的是，所述聚合物的水溶液胶凝的浓度同样是本发明的皮肤疫苗制剂的治疗效力被提高的浓度，这是用本领域所公知的标准方法确定的，例如，根据对抗原性或免疫原性剂的抗体反应与对照制剂，例如，仅包括抗原性或免疫原性剂的制剂的抗体反应确定。用于测定本发明的皮肤内疫苗制剂的聚合物的浓度的典型方法可以包括以下方法制备所述聚合物的含水母液；然后在低于液体-凝胶转变温度的温度，例如，在水上在4X:下优选通过机械搅拌，例如磁力搅拌培养所述溶液，；将所述溶液的pH调整到生理学pH，在7.0-7.4的范围内，优选调整到7.2;然后对该溶液进行灭菌，优选通过过滤，例如，4吏用0.2微米的GelmanAcrodiscPFSyringeFilter#4187灭菌；然后在37t)下，例如，通过将它放入37X:的水浴中培养该溶液，肉眼监测该溶液；具体地讲，肉眼监测该溶液的勦度。在某些实施方案中，所述溶液在5分钟以内或更少时间内胶凝。在其他实施方案中，所述溶液在20分钟以内或更少时间内，在15分钟以内或更少时间内，10分钟以内或更少时间内凝胶。如果所述溶液不能在上述时间范围内胶凝的话，可以调整聚合物的浓度，以便使用更大百分比的聚合物。可以调整所述聚合物的浓度，以^^所述溶液优选胶凝，这是通过在生理温度，例如，371C下肉眼检查所述溶液确定的。在具体实施方案中，本发明涉及由BASFCorporations提供的LutrolF级化合物，包括，但不局限于，F127，F68，F87，和F108。优选的是，所述LutrolF级化合物在生理温度，例如，在25-37'C的温度范围内，在大约10%(w/v)-20%(w/v)，大约10%(w/v)-25%(w/v)，大约10%(w/v)-大约30%(w/v),或大约10%(w/v)-大约35%(w/v)的浓度范围内聚合形成凝胶。尽管不希望受特定作用机制的限制，Lutrol化合物的聚合导致了所述化合物的交联，这种交联是共价的或非共价的，以便形成二维或三维明胶状基质。聚合程度可以在5%-50%，优选60°/。-80%范围内，最优选大约90%。在具体实施方案中，用于本发明的真皮内疫苗制剂和方法中的LutrolF级化合物是F127,它能在37匸的温度下和20%(w/v)的浓度下形成明胶状基质。F127普卢兰尼克的聚合可以是化学和/或热诱导的。优选的是，F127普卢兰尼克的聚合是热诱导的。在另一种具体实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮和表皮疫苗制剂)和方法中的LutrolF级化合物是F68，它能在37"C的温度和超过30%(w/v)的浓度下形成明胶状基质。在另一种具体实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂和方法中的LutrolF级化合物是F108，它能在371C的温度和20%(w/v)的浓度下形成明胶状基质。在最优选的实施方案中，用于本发明的真皮内疫苗制剂和方法中的胶凝剂，例如，在体温，即在25-37r的温度范围内能聚合形成凝胶。所述胶凝剂的聚合可以是化学和/或热诱导的。尽管不希望受特定作用模式的限制，胶凝剂的聚合涉及所述聚合物的共价或非共价交联，以形成二维或三维明胶状基质。聚合程度可以在5%-50%,优选60%-80%范围内，最优选大约90。/。。用于本发明方法中的胶凝剂在热和/或化学变化之前可以是固体、液体或糊状物。在最优选的实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的胶凝剂具有一种或多种佐剂的生物学特性。在本文中，术语"佐剂"表示辅助化合物，当它存在于真皮内疫苗制剂中时，能协助皮肤疫苗制剂中的活性分子，例如，免疫原性或抗原性制剂产生需要的生理学反应，例如，增强对抗原性或免疫原性剂的免疫反应。在其他实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的胶凝剂具有黏膜或生物附着性特性。可用于本发明的真皮疫苗制剂中的胶凝剂的用量通常占真皮内疫苗制剂的大约1%-50%(w/v),大约15%(w/v)-大约30%(w/v)，优选大约10°/。(w/v)-大约30%(w/v)。5.1.2粘膜或生物附着性分子在某些实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮和表皮疫苗制剂)中的分子是粘膜或生物附着性分子，它能促进抗原性或免疫原性剂附着在皮肤区室的生物学和免疫学表面上，即，免疫细胞的表面。在本文中，生物附着性或粘膜附着性表示具有长时间附着在生物学表面上的能力。优选的是，所述粘膜附着性或生物附着性导致了所述真皮内疫苗制剂的生物学活性的增强，例如，增强了治疗效力。尽管不希望受特定作用机制的限制，粘膜或生物附着性能够使本发明胞，例如:存在于真皮内^室-的:原呈递细胞。由粘膜或生;附着性分子产生的附着特性最有可能导致抗原性或免疫原性剂在真皮区室中的长时间停留。抗原性或免疫原性剂的递送从粘膜附着性或生物附着性中受益，这是通过将抗原性或免疫原性剂附着或"粘贴"在目标生物学表面上，即，真皮空间实现的。另外，可以将抗原性或免疫原性剂固定在目标生物学表面上，从而使得抗原性或免疫原性剂能够緩慢释放，即，补给站效应。可用于本发明的皮肤疫苗制剂中的粘膜或生物附着性分子包括，但不局限于聚合物，例如，聚卡波非聚丙烯酸(PAA)，carobopols，capricol，聚羟乙烯EX55，卡波姆，多糖，透明质酸，壳聚糖；外源凝集素；纤维素，甲基纤维素，羧曱基纤维素，羟丙甲基纤维素，藻酸钠，明胶，果胶，阿拉伯胶，聚维酮。有关现有粘膜附着性和生物附着性分子的综述可以参见以下文献Robinson等，AnnalsNewYorkAcademyofSciences,307-314;Haas等，2002,ExpertOpin.Biol.Ther.2(3):287-298;Woodley，2001，CIin.Pharmacokin.40(2):77-84;Peppas等，1996,Biomaterials17;1553-61;以上戶斤有文献的内容都被全文收作本文参考。用于本发明的皮肤疫苗制剂中的生物附着性或粘膜附着性分子的浓度可以为0.1%(w/v)-1°/。(w/v)，0.1%(w/v)-5%(w/v)，或0.1%(w/v)-10%(w/v)，或0.01%(w/v)-10°/。(w/v)，或0.01%(w/v)-0.04%(w/v)。用于本发明的真皮内疫苗制剂中的粘膜或生物附着性分子的浓度优选是这样的浓度，在该浓度下本发明的真皮内疫苗制剂的治疗效力得到增强，例如，这是通过相对于例如，仅包括原性剂的抗体反应5.2免疫原性或抗原性制剂可用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮和表皮疫苗制剂)中的抗原性或免疫原性剂制剂包括来自动物，植物，细菌，原生动物，寄生虫，病毒的抗原或它们的组合的抗原。用于本发明的真皮内疫苗制剂中的抗原性或免疫原性剂可以是能够在合适条件下在对象体内产生免疫反应的任何物质，包括，但不局限于，多肽，肽，蛋白，糖蛋白，和多糖。本发明的皮肤疫苗制剂可以包括一种或多种抗原性或免疫原性剂。用于本发明的皮肤疫苗制剂中的抗原性或免疫原性剂的用量可以根据抗原性或免疫原性剂的化学性质和效力而改变。通常，本发明的皮肤疫苗制剂中抗原性或免疫原性剂的起始浓度是利用常规施用途径，例如，肌内注射诱导需要的免疫反应的常规用量。然后，例如通过用稀释剂稀释来调整本发明的皮肤疫苗制剂中抗原性或免疫原性剂的浓度，以便获得有效的保护性免疫反应，这是使用本领域所公知的和本文所披露的标准方法确定的。用于本发明的皮肤疫苗制剂中的抗原性或免疫原性剂的浓度为常用于获得有效免疫反应的浓度的60%,优选50°/。，更优选40%。在具体实施方案中，所述抗原性或免疫原性剂可以是来源于病毒的任何病毒肽，蛋白，多肽或它们的片段，所述病毒包括，但不局限于，RSV-病毒蛋白，例如，RSVF糖蛋白，RSVG糖蛋白，流感病毒蛋白，例如，流感病毒神经氨酸酶，流感病毒血细胞凝集素，单纯疱瘆病毒蛋白，例如，单纯疱渗病毒糖蛋白，例如，包括gB，gC，gD，和gE。细菌的例子包括衣原体MOMP和PorB抗原。在其他实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的抗原性或免疫原性剂可以是致病性病毒的抗原，例如包括但不局限于腺病毒科(例如，乳腺病毒和禽腺病毒)，疱疹病毒科(例如，单纯疱疹病毒1，单纯疱渗病毒2，单纯疱渗病毒5，和单纯疱渗病毒6)，leviviridae(例如，levivirus，肠细菌阶段MS2，allolevirus)，痘病毒科(例如，chordopoxvirinae，葛'J痘病毒属,麻雀痘病毒，capripoxvirus，leporiipoxvirus，suipoxvirus，molluscipoxvirus，和entomopoxvirinae)，papovaviridae(例如，多瘤病毒和乳头瘤病毒)，副粘病科(例如，副粘病，副流感病毒1，mobillivirus(例如，麻療病毒)，rubulavirus(例如，腮腺炎病毒)，肺炎病毒科(例如，肺炎病毒，人呼吸道合胞病毒)，和偏肺炎病毒(例如，禽肺炎病毒和人偏肺炎病毒))，小RM病毒科(例如，肠道病毒，鼻病毒，肝炎病毒(例如，人甲型肝炎病毒)，cardiovirus，和apthovirus)，呼肠孤病毒科(例如，正呼肠孤病毒，环状病毒，轮状病毒，cypovirus，fijivirus，phytoreovirus，和oryzavirus),retroviridae(例如，哺乳动物B型逆转录病毒，哺乳动物C型逆转录病毒，禽C型逆转录病毒，D型逆转录病毒类，BLV-HTLV逆转录病毒，慢病毒(例如人类免疫缺陷性病毒1和人类免疫缺陷性病毒2)，spumavirus)，黄病毒科(例如，丙型肝炎病毒)，肝病毒科(例如，乙型肝炎病毒)，togaviridae(例如，ot病毒(例如，辛德毕斯病毒)和rubivirus(例如，风渗病毒)),棒状病毒科(例如，vesiculovirus,狂犬病病毒,ephemerovirus，cytorhabdovirus，和necleorhabdovirus)，沙粒病毒科(例如，沙粒病毒，淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒，Ippy病毒，和拉沙病毒)，和冠状病毒科(例如，冠状病毒和torovirus)。用于本发明的皮肤疫苗制剂中的抗原性或免疫原性剂可以是传染性致病剂，包括，但不局限于，流感病毒血细胞凝集素(Genbank保藏号J02132;Air，1981，Proc.Natl.Acad.Sci.USA78:7639-7643;Newton等，1983，Virology128:495-501),人类呼吸道合胞病毒G糖蛋白(Genbank保藏号Z33429;Garcia等，1994,J.Virol;Collins等，1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:7683)，核心蛋白，基质蛋白或登革热病毒的其他蛋白(Genbank保藏号M19197;Hahn等，1988，Virology162:167-180)，麻渗病毒血细胞凝集素(Genbank保藏号M81899;Rota等，1992，Virology188:135-142)，单纯疱療病毒2型糖蛋白gB(Genbank保藏号M14923;Bzik等，1986,Virology155:322-333),脊髓灰质炎病毒IVPl(Emini等，1983，Nature304:699)，HIVI的外被糖蛋白(Putney等，1986，Science234:1392-1395)，乙型肝炎表面抗原(Itoh等，1986，Nature308:19;Neurath等，1986，Vaccine4:34)，白喉毒素(Audibert等，1981，Nature289:543)，链球菌24M表位(Beachey，1985，Adv.Exp.Med.Biol.185:193)，淋球菌菌毛蛋白(Rothbard和Schoolnik，1985，Adv.Exp.Med.Biol.185:247)，假狂犬病毒g50(gpD)，假狂犬病毒II(gpB)，假狂犬病毒gIII(gpC)，假狂犬病毒糖蛋白H，假狂犬病毒糖蛋白E,传染性胃肠炎糖蛋白195，传染性胃肠炎基质蛋白，猪轮状病毒糖蛋白38，猪细小病毒衣壳蛋白，Serpulinahydodysenteriae保护性抗原，牛病毒性腹竭糖蛋白55，新城鸡痘病毒血细胞凝集素-神经氨酸酶，猪流感血细胞凝集素，猪流感神经氨酸酶，口蹄疫病毒，猪霍乱病毒，猪流感病毒，非洲猪痘病毒，肺炎支原体，传染性牛鼻气管炎病毒(例如，传染性牛鼻气管炎病毒糖蛋白E或糖蛋白G)，或传染性喉气管炎病毒(例如，传染性喉气管炎病毒糖蛋白G或糖蛋白I)，LaCrosse病毒糖蛋白(Gonzales-Scarano等，1982，Virology120:42),新生牛腹泻病毒(Matsuno和Inouye，1983，InfectionandImmunity39:155)，委内瑞拉马脑脊髄炎病毒(MathewsandRoehrig，1982，J.Immunol.129:2763),puntatoro病毒(Dalrymple等,1981，inReplicationofNegativeStrandViruses,BishopandCompans(eds.)，Elsevier,NY，p.167)，鼠白血病病毒(Steeves等，1974，J.Virol.14:187),小鼠乳腺瘤病毒(Massey和Schochetman,1981,Virology115:20)，乙型肝炎病毒核心蛋白和/或乙型肝炎病毒表面抗原或它的片段或衍生物(例如，参见，英国专利公开号GB2034323A公开日为1980年6月4曰；Ganem和Va函s，1987，Ann.Rev.Biochem.56:651-693;Tiollais等，1985，Nature317:489-495)，马流感病毒或马疱渗病毒的抗原(例如，马流感病毒A型/阿拉斯加91神经氨酸酶，马流感病毒A型/迈阿密63神经氨酸酶，马流感病毒A型/肯塔基81神经氨酸酶马疱渗病毒1型糖蛋白B，和马疱疹病毒1型糖蛋白D，牛呼吸道合胞病毒或牛副流感病毒抗原(例如，牛呼吸道合胞病毒结合蛋白(BRSVG)，牛呼吸道合胞病毒融合蛋白(BRSVF)，牛呼吸道合胞病毒核壳蛋白(BRSVN)，牛副流感病毒3型融合蛋白，和牛副流感病毒3型血细胞凝集素神经氨酸酶)，牛病毒性腹泻病毒糖蛋白48或糖蛋白53。在其他实施方案中，本发明的皮肤疫苗制剂中的抗原性或免疫原性剂是癌抗原或肿瘤抗原。本领域技术人员所公知的任何癌或肿瘤抗原都可用于本发明的皮肤疫苗制剂中，包括，但不局限于，KS1/4泛-癌抗原(PerezandWalker,1990，J.Immunol.142:3662-3667;Bumal，1988，Hybridoma7(4):407-415)，卵巢癌抗原(CA125)(Yu等，1991，CancerRes.51(2):468-475),prostaticacidphosphate(Tailor等，1990,Nucl.AcidsRes.18(16):4928)，前歹'J腺特异性抗原(Henttu和Vihko，1989，Biochem.Biophys.Res.Comm.160(2):903-910;Israeli等，1993，CancerRes.53:227-230)，黑素瘤-相关的抗原p97(Estin等，1989,J.Natl.CancerInstit.81(6):445-446),黑素瘤抗原gp75(Vijayasardahl等，1990，J.Exp.Med.171(4):1375-1380)，高分子量黑素瘤抗原(丽-MAA)(Natali等，1987，Cancer59:55-63;Mittelman等，1990，JClin.Invest.86:2136-2144)，前列腺特异性膜抗原，癌胚抗原(CEA)(Foon等，1994，Proc.Am.Soc.Clin.Oracol.13:294)，多形表皮粘蛋白抗原，人乳脂球抗原，结直肠癌相关抗原，如:CEA，TAG-72(Yokata等，1992，CancerRes.52:3402-3408)、C017-1A(Ragnhammar等，1993，Int.J.Cuncer53:751-758):GICA19-9CHerlyn等，1982，J.CIin.Immunol.2:135)CTA-1和LEA,Burkitt's淋巴瘤抗原-38.13，CD19(Ghetie等，1994，Blood83:1329-1336),人B-淋巴瘤抗原-CD20(Reff等，1994，Blood83:435-445)，CD33(Sgouros等，1993，J.Nucl.Med.34:422-430)，黑素瘤特异性抗原，如神经节苷脂GD2(Saleh等，1993，J.Immunol.，151，3390-3398)，神经节苷脂GD3(Shitara等，1993，CancerImmunol.I腿unother.36:373-380)，神经节苷脂GM2(Livingston等，1994，J.Clin.Oncol.12:1036-1044),神经节苷脂GM3(Hoon等，1993，CancerRes.53:5244-5250)，肿瘤特异性移植类型的细胞表面抗原(TSTA)，如病毒诱导的肿瘤抗原，包括T-抗原DNA肿瘤病毒和RM肿瘤病毒的外被抗原，癌胚抗原-ot-胎蛋白，如结肠的CEA，膀胱癌癌胚抗原(Hellstrom等，1985，Cancer.Res.45:2210—2188),分化抗原，如人肺癌抗原L6，L20(Hellstrom等，1986，CancerRes.46:3917-3923)，纤维肉瘤的抗原，人白血病T细胞抗原-Gp37(Bhattacharya-Chatterjee等，1988，J.ofImmunospecifically.141:1398-1403)，新糖蛋白，鞘类磷脂，乳腺癌抗原，如EGFR(表皮生长因子受体)，HER2抗原(pl85HER2)，多形表皮粘蛋白(PEM)(Hilkens等，1992,TrendsinBio.Chem.Sci.17:359)，恶性人淋巴细胞抗原-APO-l(Bernhard等，1989,Science245:301-304)，分化抗原(Feizi，1985，Nature314:53-57)如存在于胎儿红细胞，原内胚层中的I抗原，存在于成年人红血球中的I抗原，植入前的胚胎，存在于胃腺癌中的I(Ma),存在于乳腺表皮中的M18,M39，存在于骨髓细胞中的SSEA-1,存在于结直肠癌中的VEP8，VEP9，Myl，VIM-D5，D56-22,TRA-1-85(血型H)，存在于结肠腺癌中的C14,存在于肺腺癌中的F3，存在于胃癌中的AH6,Y半抗原，存在于胎生癌细胞中的LeY，TL5(血型A)，存在于A431细胞中的EGF受体，存在于胰腺癌中的E1系列(血型B)，存在于胎生癌细胞中的FC10.2，胃腺癌抗原，存在于腺癌中的CO-514(血型Lea)，存在于腺癌中的NS-IO，CO-43(血型Leb)，存在于A431细胞中的EGF受体上的G49，存在于结肠腺癌中的MH2(血型ALeb/Ley)，存在于结肠癌中的19.9，胃癌粘蛋白，存在于骨髄样细胞中的TsA7，存在于黑素瘤中的R24，4.2，G03，Dl.l，OFA-l,GM2，0FA-2，GD2，和存在于胎生癌细胞中的Ml:22:25:8，和存在于4-8细胞阶段胚胎中的SSEA-3和SSEA-4。在一种实施方案中，所述抗原是来自皮肤T细胞淋巴瘤的T细胞受体衍生的肽(参见，Edelson，1998，TheCancerJournal4:62)。所述接种物还可以含有来自肾脏的癌抗原。所述抗原可以是自体的，以便所述抗原是从患者体内收集的，在体外进行处理，并且送回到相同的患者体内。在某些实施方案中，本发明的皮肤疫苗制剂的抗原性或免疫原性剂包括需要针对它的免疫反应的病毒。在某些实施方案中，本发明的皮肤疫苗制剂包括重组或嵌合病毒。在其他实施方案中，本发明的皮肤疫苗制剂包括减毒的病毒。重组，嵌合的和减毒的病毒的生产可以用本领域技术人员所公知的标准方法进行。本发明涉及活的重组病毒疫苗或失活的重组病毒疫苗，以便按照本发明进行配制。优选活的疫苗，因为在宿主中的增殖会导致相似类型和强度的长时间的刺激能够以天然感染形式发生，因此，产生显著的，长时间的免疫性。所述活的重组病毒疫苗制剂的生产可以通过常规方法实现，涉及在细胞培养物或在鸡胚胎的尿嚢中繁殖，和随后进行纯化。在具体实施方案中，所述重组病毒对所施用的对象是非致病性的。就此而言，将遗传工程病毒用于疫苗用途，可能需要在所述菌林中存在减毒特征。将合适的突变(例如，缺失)导入用于转染的模板，可能提供具有减毒特征的新型病毒。例如，与温度敏感性或冷适应相关的特异性错义突变可以产生缺失突变。这样的突变应当比与冷或热敏感性突变体相关的点突变更稳定，并且恢复频率应当非常低。另外，可以构建具有"自杀"特征的嵌合病毒，以便用于本发明的皮肤疫苗制剂。所述病毒在宿主内只会进行一轮或几轮复制。在用作疫苗时，所述重组病毒会进行有限的复制周期，并且诱导足够水平的免疫反应，但是不会在人体宿主内进一步发展并且导致疾病。另外，可以按照本发明的方法制备失活的(灭活的)病毒。失活的疫苗制剂可以使用常规技术制备，以"杀伤"嵌合病毒。失活的疫苗因为它们的感染能力已经被破坏而被说成是"死的"。理想的是，破坏病毒的感染性，而又不影响它的免疫性。为了制备失活的疫苗，可以让嵌合病毒在细胞培养物中或在鸡胚胎的尿嚢中生长，通过带状超速离心纯化，通过甲醛或-丙内酯失活，并且合并。在某些实施方案中，完全外源的表位，包括来自其他病毒或非病毒病原体的抗原可以通过工程方法进入病毒，以便用于本发明的皮肤疫苗制剂。例如，非相关病毒的抗原，如HIV(gp160，gpl20，gp41)寄生虫抗原(例如，痗疾)，细菌或真菌抗原或肿瘤抗原可以工程改造成减毒的菌林。实际上，任何异源基因序列都可以构建成本发明的嵌合病毒，以用于皮肤疫苗制剂。优选的是，异源基因序列是起着生物学反应调节剂作用的部分和肽。优选的是，可以诱导对多种病原体中任意一种保护性免疫反应的表位，或能结合中和抗体的抗原可以通过嵌合病毒表达或作为嵌合病毒的一部分。例如，可以构建成本发明的嵌合病毒的异源基因序列包括，但不局限于，流感和副流感血细胞凝集素神经氨酸酶和融合糖蛋白，如人PIV3的HN和F基因。在另一种实施方案中，可以工程改造成嵌合病毒的异源基因序列包括编码具有免疫调节活性的蛋白的序列。免疫调节蛋白的例子包括，但不局限于，细胞因子，1型干扰素，Y干扰素，菌落刺激因子，白介素-1,-2，-4,-5,-6,-12，和这些制剂的拮抗剂。其他异源序列可以来自肿瘤抗原，并且所得到的嵌合病毒被用于产生针对肿瘤细胞的免疫反应，导致了体内肿瘤抑制作用。根据本发明，重组病毒可以工程改造成能表达肿瘤相关抗原(TAAs)，包括，但不局限于由T细胞识别的人肿瘤抗原(Robbins和Kawakami，1996，Curr.Opin.Immunol.8:628-636,以全文形式收作本文参考)，黑素细胞系蛋白，包括gp100，MART-1/MelanA，TRP-1(gp75)，酪氨酸酶；肿瘤特异性广泛拥有的抗原，MAGE-1，MAGE-3，BAGE，GAGE-1，GAGE-1，N-乙酰葡糖氨基转移酶-V，pl5;肺瘤特异性突变抗原，P-catenin，MUM-1，CDK4;乳腺，卵巢，宫颈，和胰腺癌的非黑素瘤抗原，HER-2/neu，人乳头瘤病毒-E6，-E7，MUC-1。用于本发明的皮肤疫苗制剂的抗原性或免疫原性剂可以包括一种或多种特定制剂和由CenterforDiseaseControl确定的毒素。在具体实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的特定制剂可以包括选自葡萄球菌肠毒素B，肉毒杆菌毒素的一种或多种抗原，炭疽，和鼠疫耶尔森氏菌的保护性抗原。在表l中列举了用于本发明的皮肤疫苗制剂中的特定抗原和毒素的非限定性例子表I:选择抗原<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>5.2.1流感病毒抗原用于根据本发明方法的包括表皮和真皮内递送在内的皮肤递送的本发明优选的疫苗递送系统是流感病毒疫苗，它可以包括一种或多种流感病毒抗原。优选的是，用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括表皮和真皮内疫苗制剂)中的流感病毒抗原是表面抗原，包括，但不局限于，血细胞凝集素和神经氨酸酶抗原或它们的组合。所述流感病毒抗原可以构成完整流感疫苗制剂的一部分。或者，所述流感病毒抗原可以作为纯化的或大体上纯化的抗原形式存在。用于分离和纯化流感病毒抗原的技术是本领域技术人员所公知的，并且是本发明所采用的。适用于本发明的组合物的血细胞凝集素/神经氨酸酶制剂的例子是由EvansMedicalLimitedofSpeke，Merseyside，UnitedKingdom生产和销售的"Fluvirin"产品，还可参见S.Renfrey和A,Watts,1994Vaccine,12(8):747-752;以上文献被以全文形式收作本文参考。可用于本发明的皮肤疫苗制剂(包括表皮和真皮内疫苗制剂)中的流感疫苗可以是任何通过商业渠道获得的流感疫苗，优选三价亚单位疫苗，例如，流感病毒疫苗减毒的流感疫苗(AventisPasteur,Inc.Swiftwater,PA)。本发明的流感疫苗制剂在低于常用于肌内递送流感疫苗的剂量下具有治疗效力。用于本发明的皮肤疫苗(包括表皮和真皮内疫苗制剂)中的流感疫苗可以是非活性流感抗原性制剂，优选分离的流感或亚单位抗原性制剂，它是用本领域的公知方法制备的。最优选的是，用于本发明的流感疫苗是三价疫苗。本发明涉及包括非活性流感抗原性制剂的流感疫苗制剂，优选用活的病毒制备的分离的流感制剂或亚单位抗原制剂。最优选的是，所述流感抗原性制剂是分离的流感抗原性制剂。本发明的流感疫苗制剂可以包括来自一种病毒菌林，或来自多种菌林的流感病毒抗原。例如，所述流感疫苗制剂可以包括来自三种或三种以上病毒菌抹的抗原。纯粹是举例来说，流感疫苗制剂可以包括来自一种或多种甲型流感菌抹的抗原，以及来自一种或多种乙型流感菌抹的抗原。流感菌林的例子是甲型流感/Texas/36/91,A/Nanchang/933/95和B/Harbin/7/94)。在最优选的实施方案中，本发明的流感疫苗制剂包括商业出售的流感疫苗，流感病毒疫苗，它是减毒的流感疫苗(ConnaughtLaboratories,Swiftwater,Pa.)。流感病毒疫苗是三价亚病毒粒子疫苗，包括15jig/剂量的来自甲型流感/Texas/36/91(NINI)，A/Beijing/32/92(H3N2)和B/Panama，45/90病毒的每一种Has。优选的是，本发明的流感疫苗制剂与常规疫苗相比具有更少量的血细胞凝集素，并且以更小的体积施用。在某些实施方案中，每林流感的血细胞凝集素的量为大约1-7.5pg，更优选大约3jag或大约5pg，该用量大约分别为用于肌内施用的常规疫苗中的血细胞凝集素剂量的1/5或1/3。根据本发明的流感疫苗制剂的一个剂量的体积为0.025ml-2.5ml，更优选大约O.lffll或大约0.2ml。在具体实施方案中，本发明涉及50p1的流感疫苗的剂量体积。0.1ml的剂量大体上为常规肌内注射流感疫苗剂量体积的1/5。可以真皮内施用的液体的体积在某种程度上取决于注射部位。例如，对于在三角肌部位的注射来说，0.1ml是最大优选体积，而在腰部可以使用较大的体积，例如，大约0.2ml。用于测定流感疫苗效力的标准是国际通用的。在下面的表格中列举了抗流感的有效疫苗的欧盟官方标准。理论上讲，对于疫苗中所.包含的所有流感菌林来说，为了满足欧盟的要求，并因此在欧盟获得销售许可，流感疫苗必须满足以下表格中的标准之一。不过，在实践中，对于所有菌林，特别是将要上市的新疫苗来说，必须满足至少两种或两种以上，优选所有三种指标。在某些场合下，满足两项指标就足够的。例如，所有菌抹满足三项指标中的两项就可以接受，而第三项指标有某些菌抹而不是所有菌株满足(例如三种菌抹中的两种)。对于成年人群(18-60岁)和老年人群(>60岁)来说，所述要求是不同的。表II:有效的流感疫苗的欧盟标准<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>血清转化率被定义为在免疫之后，对每一种疫苗菌林来说血清血细胞凝集素抑制(HI)效价提高了至少四倍的疫苗的百分比。转化系数被定义为对每一种疫苗菌抹来说在免疫之后血清HI几何平均效价(C3MTs)的增加倍数。保护率被定义为在免疫之后血清HI效价等于或大于l:40的疫苗的百分比(每一种疫苗菌林的)，并且通常被认作是标志性保护作用。本发明的流感疫苗制剂满足了上文所提供的所有欧盟的流感疫苗标准，因此，所述疫苗在欧洲得到了批准。优选的是，在所述疫苗中所出现的所有流感菌林满足了三项欧盟标准中的两项。更优选的是，所有菌林满足了至少两项标准，而所有菌林满足了第三项标准，或至少所有菌株中除一项之外满足了第三项标准。更优选的是，所使用的所有菌林满足了所有三项标准。更优选的是，本发明的流感疫苗制剂还满足联邦药物管理和/或USPHS对现有流感疫苗的要求的某些或所有标准。5.3添加剂在某些实施方案中，本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮和表皮疫苗制剂)还包括一种或多种添加剂，包括，但不局限于，佐剂，赋形剂，稳定剂，渗透促进剂，粘膜附着性分子，和生物附着性分子。皮肤疫苗制剂中的添加剂能够以协同或补充形式起作用，以便增强本发明的皮肤疫苗制剂的效力。在某些实施方案中，本发明的皮肤疫苗制剂还可以包括一种或多种佐剂。用于疫苗制剂中增强疫苗制剂的效力和保护性免疫反应的任何常规佐剂都属于本发明的范围。例如，有关佐剂的综述参见，Vogel和Powell,1995，ACompendiumofVaccineadjuvantandexcipient;M.F.Powell,M.J.Newman(eds.)，PlenumPress,NewYork,page141-228;以上所有文献都被以全文形式收作本文参考。可用于本发明的皮肤疫苗制剂中的佐剂的非限定性例子在下面的表in中列举。通常，佐剂以包括至少三种类型的分子为特征，这三种类型是根据它们的功能划分的，并且所有分子都属于本发明的范围。在一种实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的佐剂可以起着补给站的作用。补给站的非限定性例子包括明矾和不完全弗氏佐剂，它保持抗原性或免疫原性剂是浓缩的，并且控制其释放。在另一种实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的佐剂可以起着刺激剂的作用，即，能刺激抗原呈递细胞，并最终导致广泛的有效免疫反应的分子。刺激剂的非限定性例子包括来自诸如C.Parvum的有机体的表面抗原和植物提取物。在另一种实施方案中，用于本发明的皮肤疫苗制剂中的佐剂是免疫原或抗原定向分子，例如，有助于使免疫原性或抗原性制剂集中在免疫抗原呈递细胞(APCs)的表面上，并因此增强它们的摄取,包括，但不局限于诸如抗体和a2-巨球蛋白的分子。表III.佐剂*确定给人类施用的佐剂。其中，只有铝盐，病毒颗粒，和MF-59是在美国被批准作为许可销售的疫苗制剂的佐剂。<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>可用于本发明方法的佐剂能刺激体液和/或细胞介导的免疫性，包括CD4+和CD8+介导的免疫反应。用于本发明的皮肤疫苗制剂中的佐剂的非限定性例子包括壳聚糖，它们的衍生物和类似物(通过几丁质的脱乙酰化衍生的阳离子多糖；)；细菌产生的产物，如单磷酸脂A(MPL;主要来自明尼苏达沙门氏菌的脂多糖的衍生物)；CpG基序(来自细菌质粒DNA,它通常被以合成寡核苷酸的形式使用；包括由未甲基化CpG基序组成的免疫刺激序列，它在哺乳动物DNA中是不常见的)；霍乱毒素的解毒的突变体(CT;来自Virbriocholorea)和热不稳定性毒素(LT;来自大肠杆菌)；奈瑟氏脑膜炎菌血清型b的外膜蛋白；二甲基双十八烷基溴化铵(DDA);细胞因子(例如，IL-12,IL-6,GM-SF，IL-4，IL-7);三薛系化合物糖苷或皂苷，它们的衍生物和类似物(来自皂树肥急草；智利皂树皮；皂苷通过与胆固醇相互作用嵌入细胞膜，形成孔，能促进抗原通过细胞膜的转运)；3-Q-脱乙酰-4'-单磷酸脂A(3D-MLA)，曱酰化-蛋氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸(fMLP);和IL-1P163-171肽("Sclavo肽")。在某些实施方案中，本发明涉及将壳聚糖用作本发明的皮肤疫苗制剂的添加剂。本发明涉及所有壳聚糖衍生物，类似物，以及它的变体(有关综迷参见VanderUbben等，2001,EuropeanJournalofPharmaceuticalSciences,14:201-7;Dodane等，1998，Pharm.Sci.Tech.Today,1:246-53;这两篇文献都以全文形式收作本文参考)。壳聚糖是线性多糖，它是由重复的P(l-4连接的)N-乙酰-D-葡糖胺和D-葡糖胺单位形成的，并且是由从曱壳类的甲壳中获得的几丁质部分脱乙酰化产生的。壳聚糖是可商购的，通常是通过对几丁质进行非均匀碱性水解，以得到具有随机分布的其余的乙酰部分的产物。用于完成。壳聚糖的性质在某种程度上取决于脱乙酰化程度和分子量。本发明涉及使用具有不同脱乙酰化程度的壳聚糖，以便获得需要的生物学反应，例如，在真皮内区室中的增强了的免疫反应，改变壳聚糖的乙酰化程度属于本领域技术人员的知识范围。大部分商业化壳聚糖包括具有不同分子量和具有不同浓度的成分N-乙酰-D-葡糖胺和D-葡糖胺基的一群壳聚糖分子，它们都属于本发明的范围。已知壳聚糖的免疫学特性与N-乙酰-D-葡糖胺和D-葡糖胺基之间的比例相关。可以用本领域技术人员所公知的方法改变N-乙酰-D-葡糖胺和D-葡糖胺基的比例，以便获得理想的生物学反应，例如，在真皮内区室中的增强了的免疫反应。业已披露了壳聚糖在免疫学上的应用，例如，参见，Iida等，1994Vaccine5:270-273;Nishimura等，1984Vaccine2(99):94-100;这两份文献的内容都以它们的全文形式收作本文参考。用于本发明的皮肤疫苗制剂中的壳聚糖可以具有佐剂、渗透促进剂、粘膜附着性物质、生物附着性物质或它们的组合的一种或多种特性。在其他实施方案中，本发明涉及涉及将皂苷，它的衍生物和类似物用于本发明的皮肤疫苗制剂中。皂树皂苷是三萜烯糖苷的混合物，它是从皂树肥皂素的树皮中提取的。很久以来它们都被认为是免疫刺激剂，可以用作疫苗佐剂，例如，参见，Campbell和Peerbaye,1992，Res.Immunol.143(5):526-530，和业已净皮用作佐剂的多种商业化复合皂苷提取物，它们都属于本发明的范围。本发明包括所有商业化皂苷型佐剂。用于制备皂苷型佐剂的方法属于本领域技术人员的知识范围。皂树皂苷的非限定性例子包括QS-7,QS-17,QS-18,和QS-21(还可以表示为QA-7，QA-17，QA-18，和QA-21)，它们都可用于本发明的皮肤疫苗制剂中。业已发现皂树皂苷，特别是QS-7，QS-17，QS-18,和QS-21是抗体反应的良好刺激剂，因此，特別适用于本发明的皮肤疫苗制剂。皂苷的免疫佐剂效应取决于剂量，该剂量可以用本领域技术人员所公知的方法确定。用于本发明的皮肤疫苗制剂中的佐剂的其他例子包括25-二羟基维生素D3(calcitrol)，calcitinin-基因调控肽，脱氢表雄酮(DHEA),N-乙酰葡糖胺1-(PI-4)-N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-谷酰胺(GMDP)/二曱基双十八烷(dioctadecyla)或二硬脂酰溴化铵(DDA)/锌L-脯氨酸，胞壁酰二肽(MDP)，N-乙酰葡糖胺(Acetylglucopaminyl)-(PI-4)-N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-谷酰胺(GMDP)，N-乙酰胞壁酰-L-苏氨酰-D-异谷酰胺(苏氨酰-MDP)，N-乙酰-L-丙氨酰-双谷氨酰胺(Disoglutaminyl)-1^-丙氨酸-2-(1，2-二棕榈酰-sn-甘油-3-(羟基-磷酰氧基)乙胺单钠盐(MTP-PE)，Nac-Mur-L-Ala-D-Gln-0CH3，Nac-Mur-IXThr-D-isoGln-sii-甘油二棕榈酰，Nac-Mur-D-Ala-D-isoGln-sn-甘油二棕榈酰，1-(2-甲基丙基)IH-咪唑[4,5-c]会啉-4-artnine，4-氨基-otec-二甲基-2-乙氧基甲基-IH-咪唑[4，5c]喹啉-l-乙醇，N-乙酰-葡糖胺-N-乙酰胞壁酰-L-Ala-D-isoGlu-L-Ala-二棕榈酸甘油(DTP-GDP)，N-乙酰葡糖胺-N-乙酰胞壁酰-L-A1a-D-isoG1u-L-A1a-二棕榈酰丙酰胺(DTP-PPP)，Y干扰素，7-烯丙基-8-氧鸟氨酸，聚-腺苷酸-聚-尿苷酸复合物，MIP-la，MlP-3a，RANTES;邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸二丁酯类寸以物。可用于本发明的皮肤疫苗制剂中的赋形剂包括，例如，糖类和多元醇。可以药用的载体，稀释剂，和其他赋形剂的例子披露于以下文献中Remington'sPharmaceuticalSciences(MackPub.Co.,N.J.，现行版；以上所有文献都被以全文形式收作本文参考)。在某些实施方案中，本发明的皮肤疫苗制剂可以包括渗透促进剂。在本文中，"渗透促进剂"是在添加到本发明的皮肤疫苗制剂中时能够使所述免疫原性或抗原性制剂透过生物膜或增强透过作用，从而增强免疫原性或抗原性制剂的吸收的任何分子。渗透促进剂的非限定性例子包括各种分子量的壳聚糖，如壳聚糖和N，0-羧甲基壳聚糖；聚-L-精氨酸；脂肪酸，如月桂酸；胆酸盐，如脱氧胆酸盐，乙醇酸盐，胆酸盐，牛磺胆酸盐，牛磺脱氧胆酸盐，和甘脱氧胆酸盐；梭链孢酸的盐，如牛黄二氬梭链孢酸盐；聚氧化乙烯山梨聚糖，如TweenTM20和TweenTM80;十二烷基硫酸钠；聚氧化乙烯-9-月桂基醚(Laureth9);EDTA;柠檬酸；水杨酸盐；辛酸/癸酸甘油酯；辛酸钠；癸酸钠；月桂酸钠；甘草亭酸钠；甘草酸二钾；甘草次酸氢琥珀酸，二钠盐(Carbenoxolone);乙酰肉碱，如棕榈酰肉碱；环糊精；和磷脂酰，如溶血磷脂酰胆碱。优选的是，渗透促进剂选自下列一组壳聚糖，脂肪酸，聚乙烯山梨醇和辛酸/癸酸甘油酯。除了佐剂和/或渗透促进剂之外，本发明的皮肤疫苗制剂还可以包括其他添加剂。例如，本发明的真皮内制剂可以包括蛋白稳定剂，例如，海藻糖，蔗糖，甘氨酸，甘露糖，白蛋白，甘油。在某些实施方案中，将抗原-稳定溶质，通常是蛋白-稳定溶质掺入本发明的皮肤疫苗制剂。诸如蔗糖的蛋白-稳定溶质的使用不仅有助于保护和/或稳定本发明的皮肤疫苗制剂中的抗原性或免疫原性剂(特别是当抗原性或免疫原性剂是蛋白时更是如此)，而且还能够操纵该制剂的特性，例如，液体-凝胶转变。例如，添加某些蛋白-稳定溶剂使得该制剂能够体-凝胶转变温度的条件;表:出、需要的热诱"导的液体-凝胶J二，'特别是当使用优选的聚烷氧基亚烃基嵌段共聚物时。因此，可以拓宽胶凝剂的工作浓度范围，并且改变转变温度。不过，通过向本发明的皮肤疫苗制剂中导入蛋白-稳定溶质，可以操纵转变温度，同时还能降低形成凝胶所需要掺入的胶凝剂的浓度。就此而言，优选的蛋白-稳定剂是糖类，例如蔗糖。5.4真皮内疫苗制剂的制备本发明的真皮内疫苗制剂可以通过能够得到稳定的，无菌的，可注射制剂的任何方法制备。优选的是，用于制备本发明的真皮内疫苗制剂的方法包括提供所述分子，例如，胶凝剂的溶液；提供抗原性或免疫原性剂的溶液；混合所述分子的溶液和抗原性或免疫原性剂的溶液，以形成接种物，例如，要注射到真皮内区室的溶液；并且在将该制剂施用到对象体内之前混合所得到的混合物大约1小时。优选，混合是在低于胶凝剂的液体-凝胶转变温度的温度下进行的。在具体实施方案中，当所述胶凝剂是聚合物时，该聚合物可以溶解在水溶液中，例如水，温度低于该聚合物的液体-凝胶转变温度，并且其浓度是这样的，即在高于液体-凝胶转变温度时，可以形成明胶状基质。用于测定本发明的真皮内疫苗制剂的聚合物浓度的典型方法可以包括以下步骤制备聚合物的含水母液，例如，用组织培养级水制备；然后优选通过机械搅拌，例如磁力搅拌，在低于液体-凝胶转变温度的温度下，例如，在水上在4C下培养所述溶液；将该溶液的pH调整到生理pH，在7.0-7.4的范围内，优选调整到7.2;对该溶液进行灭菌，优选通过过滤灭菌，例如，使用0.2微米的GelmanAcrodiscPFSyringeFilter#4187灭菌；在37C下，例如，将它放入37C的水浴中培养所述溶液；并且肉眼监测所述溶液。具体地讲，肉眼监测所述溶液的黏度。优选的是，所述溶液在5分钟以内或更少时间内胶凝。在某些实施方案中，所述溶液在20分钟以内或更少，15分钟以内或更少，IO分钟以内或更少时间内胶凝。如果所述溶液不能在上述时间范围内胶凝的话，就调整聚合物的浓度，以使用更高浓度百分比的聚合物。调节聚合物的浓度，使所述溶液优选在37'C下在20分钟以内或更少，在IO分钟以内或更少，优选在5分钟以内或更少时间内胶凝，这是通过肉眼检查确定的。形成聚合物溶液的最佳浓度取决于在上面的5.1.1节中所讨论的特定聚合物。用于本发明的真皮内疫苗制剂中的聚合物浓度可以为至少10%(w/v),至少10%(w/v)，至少15°/"w/v)，至少20%(w/v)，至少25%(w/v)，或至少30%(w/v)。用于本发明的真皮内疫苗制剂中的聚合物浓度优选是聚合物的水溶液胶凝的浓度，即，在生理温度，例如，37X:，在20分钟以内或更少，优选在IO分钟以内或更少，最优选在5分钟以内或更少时间内形成半固体至固体二维或三维基质。优选的是，聚合物的水溶液胶凝的浓度同样是本发明的真皮内疫苗制剂的治疗效力增强的浓度，正如使用本领域技术人员所公知的标准方法所确定的，例如，通过对抗原性或免疫原性剂的抗体反应，以及与，例如，仅包括抗原性或免疫原性剂的对照制剂的抗体反应的比较来确定。在一种实施方案中，所述抗原性或免疫原性剂溶解在含有聚合物的水溶液中，以便形成稳定的，无菌的，可注射制剂。另外，所述抗原性或免疫原性剂可以是颗粒物，并且溶解在聚合溶液中，以便形成稳定的，无菌的，可注射制剂。为了增强本发明的真皮内疫苗制剂的性能，所述抗原性或免疫原性剂应当均匀地分散在整个明胶状基质中，这一目的可以通过在低于聚合物的液体-凝胶转变温度的温度下，将抗原性或免疫原性剂溶解在包括所述聚合物的溶液中而实现，以便一旦温度升高，所述抗原性或免疫原性剂就均匀地分散并且包埋在明胶状基质中。在其他实施方案中，当所述分子是粘膜或生物附着性分子时，本发明的真皮内疫苗制剂中的粘膜或生物附着性分子的浓度可以为0.1%(w/v)-1%(w/v)，0.1%(w/v)-5%(w/v)，或0.1%(w/v)-10%(w/v)。用于本发明的真皮内疫苗制剂中的粘膜或生物附着性分子的浓度优选是能增强本发明的真皮内疫苗制剂的治疗效力的浓度，例如，通过对抗原性或免疫原性剂的抗体反应，并且相对例如，仅包括抗原性或免疫原性剂的对照制剂的抗体反应确定。用于本发明的真皮内疫苗制剂中的抗原性或免疫原性剂的用量可以根据抗原性或免疫原性剂的化学性质和效力而改变。通常，用于本发明的真皮内疫苗制剂中的抗原性或免疫原性剂的起始浓度是采用常规施用途径，例如，肌内注射时用于诱导需要的免疫反应的常用浓度。然后例如用稀释剂稀释来调整的本发明的真皮内疫苗制剂中抗原性或免疫原性剂的浓度，以便获得有效的保护性免疫反应，正如使用本领域所公知和本文所披露的标准方法所确定的。用于本发明的真皮内疫浓度的60%，优选50%，更优选40%。5.5表皮疫苗制剂的制备本发明的表皮疫苗制剂可以通过能得到稳定的，无菌制剂的任何方法制备，如本领域所公知的并且披露于以下文献中的方法申请日分别为2001年10月29日，2001年11月27日，2000年5月22日，和2002年10月29日的美国临时专利申请号60/330,713，60/333，162和美国专利申请流水号09/576，643，美国申请流水号10/282，231中所披露的，以上所有文献都以它们的全文形式收作本文参考。它们特别是能够以干燥粉末，凝胶，溶液，悬浮液，和乳脂形式递送。所述疫苗制剂能够以任何药理学上可接受的形式递送到皮肤的表皮区室中。在一种实施方案中，所述疫苗制剂被涂在皮肤上，并且随后移动摩擦器械或反复摩擦皮肤和所述物质。优选的是，使用能产生理想结果的最低数量的摩擦。特定疫苗制剂的合适的摩擦量的确定属于本领域普通技术人员的常识。在另一种实施方案中，所述疫苗制剂可以在涂敷之前以干燥形式涂在递送装置的研磨表面上。在该实施方案中，将重构的液体涂在递送部位的皮肤，并且将制剂-涂敷的摩擦器械放置在皮肤的重构液体的部位。然后移动或反复摩擦皮肤，以便使疫苗制剂溶解在皮肤表面上的重构液体中，并且在摩擦的同时给药。另外，所述重构液体可以容纳在摩擦器械中，并且释放，以便在所述器械放置在皮肤上用于摩擦时溶解疫苗制剂。业已发现，某些疫苗制剂还能够以明胶形式涂在摩擦器械上。5.6施用真皮内疫苗制剂本发明涉及将本文所披露的和解释的疫苗制剂优选通过直接和选择性地靶定真皮内空间真皮内递送到对象皮肤的真皮内区室的方法，。一旦按照上文所述方法制备了真皮内疫苗制剂，通常将接种物转移到用于真皮内递送的注射器械，例如，注射器中。优选的是，所迷接种物在制备l小时之内施用到对象皮肤的真皮内区室。本发明的真皮内疫苗制剂是使用披露于以下文献中的任何真皮内器械和方法施用的美国专利申请号09/417，671，申请曰为1999年10月14曰；09/606，909，申请日为2000年6月29日；09/893，746，申请日为2001年6月29日；10/028，989,申请日为2001年12月28日；10/028，988，申请日为2001年12月28日；或国际公开号EP10922444，公开日为2001年4月18日；WO01/02178，公开日为2002年1月10日；和WO02/02179，^S开日为2002年1月10日；以上所有文献的内容都以全文形式收作本文参考。在图8-10中示出了典型的器械。本发明通过专一性地和选择性地，优选直接地耙定真皮内空间提高了本文所披露的疫苗制剂的临床应用和治疗效力。真皮内疫苗制剂可以作为推注或通过输液递送到真皮内空间。本发明人业已意外地发现，将本文所讨论和解释的疫苗制剂递送到皮肤，提供了对所述疫苗制剂的有效的和/或改善了的反应。本发明的疫苗制剂在施用到真皮内区室时，在真皮内空间具有改善了的吸附和/或细胞吸收。业已发现，按照本发明的方法递送的疫苗制剂的免疫学反应与常规递送途径，例如肌内途径的反应相当或更好。本发明提供了改善本发明的疫苗制剂对存在于皮肤中的免疫细胞，例如，抗原呈递细胞的可利用性的方法，以便通过精确地耙定真皮内空间，实现对疫苗制剂的抗原-特异性免疫反应。优选的是，本发明的方法能够通过真皮内途径施用更小剂量的真皮内疫苗制剂。所述真皮内施用方法包括微型操作针-型注射，和输液系统或任何能精确靶定真皮内空间的其他装置。真皮内施用方法不仅包括微型器械-型注射装置，而且还包括其他递送方法，如将液体或粉末以无针发射注射，Mantoux-型真皮内注射，通过微型器械的强化离子电渗，和液体，固体，或其他剂型直接沉积到皮肤中的形式递送到真皮内空间。在具体实施方案中，本发明的真皮内疫苗制剂是使用真皮内Mantoux型注射施用到对象皮肤的真皮内区室中的，例如，参见，Flynn等，1994,Chest106:1463-5，以上文献被以全文形式收作本文参考。在具体实施方案中，本发明的真皮内疫苗制剂是使用以下典型方法递送到对象皮肤的真皮内区室中的。将按照在5.4节中披露的方法制备的真皮内疫苗制剂吸入注射器，例如，带有20号针的1mL无乳胶注射器；在装载注射器之后，换上30号针用于真皮内施用。对象皮肤，例如，小鼠的皮肤以尽可能浅的角度接近，使针的斜面向上，并且将皮肤拉紧。然后用5-IO秒钟时间将注射体积緩慢推入，形成典型的"水泡"，并且随后緩慢取出针。优选的是，仅使用一个注射部位。更优选的是，注射体积不超过lOOjaL，这是部分由于以下事实，较大的注射体积可能增加向周围组织空间，例如，皮下空间的溢出。本发明涉及采用单一的或多个针的阵列的常规注射针，导管或所有已知类型的微型操作针的使用。在本文中，术语"针"意在包括所有这样的针样结构。在本文中，术语"微型操作针"意在包括小于大约30号结构，当这种结构是圆柱形时，通常大约31-50号的针。因此术语微型操作针所包括的非柱形结构具有相当的直径，并且包括锥形，矩形，八边形，楔形，和其他几何形状。本发明的疫苗制剂的真皮内递送可以使用发射流体注射器械，粉末喷射递送器械，压电，电动，电磁协助的递送器械，气体协助的递送器械，它们能直接刺入皮肤，以便将本发明的疫苗制剂直接注射到皮肤空间的目标位置。将本发明的真皮内疫苗制剂导向真皮内空间的实际方法并不重要，只要它能刺入皮肤到达真皮内空间的理想目标深度，而又不穿过它就行。实际的最佳透深会根据对象皮肤的厚度而改变。在大多数场合下，刺入皮肤的深度为大约0.5-2mm。无论使用何种真皮内器械和递送方法，真皮内疫苗制剂优选将本发明的疫苗制剂导入至少0.3mm的深度，更优选至少0.5腿至最多不超过2.5mm，更优选不超过2.0mm，最优选不超过1.7mm的深度。本发明的方法包括使用上文所披露的递送器械，它将针的出口放置在真皮内空间的合适深度上，并且控制液体递送的体积和速度，将所述制剂精确递送到需要的部位，而又不会泄露。本发明涉及微型操作针的器械的使用，其长度足以刺入真皮内空间("穿入深度")，并且出口位于真皮内空间的一定深度("出口深度")上，它使得皮肤可以密封在针周围，克服倾向于迫使递送的制剂流向皮肤表面的反压力。一般，针长度不超过大约2mm，优选大约300jjm-2mm,最优选大约500ym-lmm。在针插入皮肤时，针出口通常位于大约250pm-2mm的深度上，优选位于大约750mm-l.5mm的深度上，最优选位于大约l腿的深度上。针出口的外露的高度，和针出口在真皮内空间的深度影响皮肤在针周围的密封程度。就是说，在较大深度上，具有较大暴露高度的针出口仍然能有效密封，而具有相同暴露高度的出口在放入真皮内空间的浅的深度时不能有效密封。通常，针出口的暴露高度在大约O-大约1mm，优选O-大约300pm范围内。暴露高度为O的针出口没有斜面，并且位于针的顶端。在这种场合下，出口的深度与针的刺入深度相同。针出口通过斜面形成或通过穿过针侧面具有可测定的暴露高度的开口形成。在某些实施方案中，所述疫苗制剂是在紧靠角质层下面的目标深度上递送的，并且包括表皮和浅真皮，例如，大约0.025mm-大约2.5mm。为了靶定皮肤中的特定细胞，优选的目标深度取决于要靶定的特定细胞和特定对象的皮肤厚度。例如，为了靶定人类皮肤的皮肤空间的朗罕氏细胞，递送需要至少部分包括在人体上通常为大约0.025mm-大约0.2mm的表皮组织深度。在某些实施方案中，当所述疫苗制剂需要系统循环时，优选的目标深度应当为至少大约0.4咖，最优选的是至少大约0.5mm，深度最多不超过大约2.5mm，更优选不超过大约2.0mm,最优选不超过大约1.7mm。将疫苗制剂主要导向真皮网织层的较大的深度和/或进入较下面的部分，通常认为是不太理想的。本发明提供了将疫苗制剂递送到对象皮肤的真皮内区室的改进方法，包括以下步骤提供药物递送器械，例如，在图8-10中所示出的器械，包括具有前端针尖的套管针，套管针是与容纳在药物递送器械中的制剂流体连通的，它还包括位于套管针周围的限制器部分，所述限制器部分包括皮肤接合表面，使套管针的针顶端从限制器部分上延伸超过皮肤接合表面的距离相当于大约0.5mm-大约3.0mm，并且套管针具有相对限制器部分的皮肤接合表面的平面取向的固定角度，将针顶端插入动物皮肤，并且使皮肤表面与限制器部分的皮肤接合表面接合，以便限制器部分的皮肤接合表面限制套管针顶端刺入动物皮肤的真皮层，并且通过套管针顶端将所述制剂从药物递送器械排入对象皮肤。另外，在其他优选实施方案中，本发明涉及选择对象皮肤上的注射部位，清洗对象皮肤上的注射部位，然后将本发明的疫苗制剂从药物递送器械排入对象皮肤。另外，所述方法包括用本发明的疫苗制剂填充药物递送器械。另外，所述方法包括将限制器部分的皮肤接合表面压在对象皮肤上，并且施加压力，以便拉紧对象皮肤，并且在注射疫苗制剂之后将套管针从皮肤中取出。另外，将所述前端插入皮肤的步骤还可以限定为将所述前端插入皮肤的深度为大约1.0mm-大约2.Omm，最优选插入皮肤的深度为1.5mm±0.2-0.3mm。图8-10示出了本发明的真皮内方法的具体实施方案。在所述方法的优选实施方案中，将前端插入对象皮肤的步骤还可以限定为以大约15度的大体上垂直于皮肤的角度将所述前端插入皮肤，所述角度最优选相对皮肤成90度角。在大约5度范围内，并且相对皮肤接合表面的方向的固定角度被进一步限定为大体上垂直的。在所述优选实施方案中，所述限制器包围在套管针周围，具有大体上平面状的扁平皮肤接合表面。另外，所述药物递送器械包括具有针筒和容纳在针筒中的柱塞杆的注射器，并且所述柱塞杵可以下压，以便将递送器械中的物质通过套管针的前端排出，例如，参见图7-10。在优选实施方案中，进一步限定通过以下方法将疫苗制剂从递送器械中排出用第一只手抓住皮下注射器针，并且用第二只手的食指按压柱塞杆，并且通过用第一只手抓住皮下注射器针，用第二只手的拇指按压皮下注射器针的柱塞杆将疫苗制剂从递送器械中排出，将前端插入动物皮肤的步骤可进一步限定为用限制器按压动物皮肤。另外，所述方法还可以包括将针组件结合在注射器针筒顶端的步骤，所述针组件包括套管针和限制器，在连接针组件之前通过从针筒顶端去掉盖子露出针筒顶端的步骤。另外，将针前端插入对象皮肤的步骤可进一步限定为同时用第一只手抓住皮下注射器针，并且将限制器按压在动物皮肤上，以便张紧动物皮肤，并且通过用第一只手的食指按压柱塞杆排出物质，或通过用第一只手的拇指按压柱塞杆排出所述物质。所述方法还包括在将所述物质注射到对象皮肤后将套管针的前端从对象皮肤中取出。另外，所述方法包括将前端插入皮肤优选到大约1.0咖-大约2.0咖的深度，最优选1.5mm±0.2-0.3mm的深度。优选的是，在插入套管针24之前(参见图8-10)，选择并且清洗对象皮肤上的注射部位。在选择并且清洗所述部位之后将套管针24的前端40插入对象皮肤，插入角度大体上为90度，直到皮肤接合表面42接触皮肤。皮肤接合表面42防止套管针42穿透皮肤的真皮层，并且将疫苗制剂注射到皮下层。在套管针42插入皮肤时，对所述疫苗制剂进行真皮内注射。疫苗制剂可预先填充到注射器60中，在进行注射之前填充并且保存。可以使用进行注射的若干种变化形式的方法，这取决于个体的喜好和注射器类型。在任何场合下，在套管针42的刺入深度最优选不超过大约1.5mm，因为皮肤接合表面42能阻止任何进一步刺入。另外，在进行真皮内注射期间，套管针42的前端40包埋在皮肤的真皮层中，这导致了在注射本发明的疫苗制剂期间具有合适的反压力。该反压力可以在76psi的级别上。为了通过由用户施加在注射器的柱塞杆66上的最小的力达到该压力，优选具有小内径的注射器管60，如0，183英寸(4.65mm)或更小。因此，本方法包括选择用于注射的注射器，它具有足够宽度的内径，以便产生在疫苗制剂从注射器中排出以便完成注射时足以克服真皮层的反压力的力。另夕卜，由于皮内注射通常是用要注射的小体积的疫苗制剂进行的，即，不超过0.5ml，优选大约0.1ml，优选具有小内径的注射器管60，以便缩小静区，这种静区有可能导致在注射完成之后保留在塞子70和注射器肩部之间被浪费的物质。另外，由于在0.1ml级别上的小体积的疫苗制剂，优选具有小内径的注射器管，以便降低在插入塞子的过程中在物质液面高度和塞子70之间的空气顶部空间。另外，小的内径增强了检查和观察注射器针筒中疫苗制剂的体积的能力。用于实施本发明的真皮内施用包括将疫苗制剂以推注和输液递送方式递送到对象，优选哺乳动物，最优选人体内。推注剂量是用较短的时间以一个体积单位形式递送的单一剂量，递送时间通常小于大约IO分钟。输液施用包括以特定的速度施用流体，该速度可以是恒定的或可变的，用相对较长的时间，通常超过大约IO分钟施用。将所述制剂真皮内递送到真皮内空间可以是被动的，不对要递送的制剂施加外部压力或其他驱动方式，和/或主动的，施加压力或其他驱动方式。优选的压力发生装置的例子包括泵，注射器，弹性膜，气体压力，压电，电动，电磁泵送或贝氏弹簧或垫圏或它们的组合。如果需要的话，本发明的真皮内疫苗制剂的递送速度可以通过所述压力发生装置可变地控制。按照本发明递送或施用的疫苗制剂包括用可以药用的稀释剂制备的它的溶液，悬浮液，凝胶，颗粒物，如微米和纳米颗粒，这些颗粒是悬浮的或分散的，以及它的原位形成的媒介物。本发明还涉及改变本发明的真皮内疫苗制剂递送的目标深度。递送真皮内疫苗制剂的目标深度可以由医生手工控制，或者借助或不借助于指示器，以便指示何时达到了需要的深度。不过，优选的是，用于本发明的器械具有用于控制刺入皮肤到达真皮内空间的理想深度的结构装置。递送的目标深度可以用在以下文献中披露的任何方法改变美国专利申请号09/417，671，申请日为1999年10月14日；09/606，909，申请日为2000年6月29日；09/893，746，申请日为2001年6月29日；10/028，989，申请日为2001年12月28日；10/028,988，申请日为2001年12月28日；或国际公开号EP10922444，公开日为2001年4月18日；WO01/02178,公开日为2002年1月10日；和WO02/02179，公开日为2002年1月10日；以上所有文献的内容都被全文收作本文参考。本发明的真皮内疫苗制剂的剂量取决于制剂中的抗原性或免疫原性剂。真皮内疫苗制剂的剂量可以用本领域所公知的标准免疫学方法确定，例如，通过首先确定能有效诱导预防性或治疗性免疫反应的剂量，通过与仅仅由抗原性或免疫原性剂组成的制剂，而没有本文所披露的分子的对照制剂相比较，测定抗原特异性免疫球蛋白的血清效价。最优选的是，所述有效剂量是在用于人体模型之前在动物模型上确定的。最优选的是，最佳剂量是用其皮肤厚度大体上接近人皮肤厚度的动物，例如猪来确定的。本发明的真皮内疫苗制剂还可以根据剂量方案施用，例如，初次施用所述疫苗制剂，随后进行强化施用。在具体实施方案中，第二个剂量的疫苗制剂是在首次施用之后从两周到一年的任何时间施用的，优选从一到六个月施用的。另外，笫三个剂量可以在第二个剂量之后施用，并且在首次施用之后三个月到两周，甚至更长时间施用，优选四-六个月，或六个月至一年。不过，在最优选的实施方案中，不需要强化免疫接种。本发明的疫苗制剂是使用本领域所公知或披露于以下文献中的任何器械和方法施用的W001/02178，公开日为2002年1月10日；和WO02/02179，公开日为2002年1月10日，美国专利号6，494，865，授权日为2002年12月17日和美国专利号6，569，143授权日为2003年5月27日，以上所有文献的内容都被全文收作本文参考。优选的是，用于本发明方法的真皮内施用的器械具有用于控制刺入皮肤到真皮内空间的合适深度的结构装置。这一目的通常是通过与真皮介入装置的轴相关的加宽的部分或套管实现的，它可以是支撑结构或平台形式的，针连接在它上面。作为真皮介入装置的微型操作针的长度在生产期间可以方便地改变，并且通常以小于2mm的长度生产。微型操作针同样是非常尖锐的，并且具有非常小的型号，以便进一步减轻在注射或输液期间的疼痛和其他感觉。在本发明中它们可以作为单个的腔体微型操作针使用或将多个微型操作针以线形阵列或二维阵列形式组装或生产，以便提高递送速度或增加在特定时间内递送物质的量。所述针可以从末端，侧面或两侧排出它的物质。微型操作针可以结合在多种器械上，如支架和外壳上，它们还可用于限制刺入的深度。本发明的真皮介入装置还可以配置容器或其他部件，以便在通过压力递送或泵送药物或其他物质之前容纳所述物质。另外，容纳真皮介入装置的器械可以从外部与所述其他部件连接。真皮内给药方法包括微型操作针-型注射和输液系统或任何其他装置，以便精确地靶定真皮内空间。真皮内给药方法不仅包括微型器械-型注射装置，而且还包括将流体或粉末通过无针发射注射方式注射到真皮内空间，Mantoux-型皮内注射的其他递送方法，通过微型器械的强化离子电渗，和直接将液体，固体，或其他剂型沉积到皮肤中。在某些实施方案中，本发明提供了药物递送器械，包括用于进行皮内注射的针组件。所述针组件具有能够结合在能预先填充的容器上的接头，如注射器等。所迷针组件是由接头支撑的，并且具有淺的空间的主体，其前端延伸通过所述接头。限制器环绕所述针，并且从所述接头向针的前端延伸。所述限制器具有适合容纳在诸如人的动物皮肤的皮肤接合表面。针前端从皮肤接合表面上突出一定距离，以便限制器限制针能够刺入动物皮肤的深度。在具体实施方案中，用于本发明方法的皮下注射器针组件包括实施本发明方法所必需的部件，涉及将疫苗制剂递送到对象皮肤，优选人类对象皮肤的改进方法，包括以下步骤提供包括套管针的药物递送器械，它具有针前端，并且套管针与容纳在药物递送器械中的物质流体连通，并且包括包围套管针的限制器部分，并且所述限制器部分包括皮肤接合表面，使套管针的针顶端从限制器部分上延伸超过皮肤接合表面的距离等于大约0.5mm-大约3.0mm，并且套管针具有相对限制器部分的皮肤接合表面平面的固定取向角度，将针顶端插入动物皮肤，并且使皮肤表面与限制器部分的皮肤接合表面结核，以便限制器部分的皮肤接合表面限制套管针顶端刺入动物皮肤的真皮层，并且通过套管针顶端将所述物质从药物递送器械排放到动物皮肤中。在具体实施方案中，本发明涉及如图8-图IO所示的药物递送器械，图中示出了药物递送器械的例子，可将它用于实施本发明的方法，用于完成图8-10所示的皮内注射。在图8-10中示出的器械IO包括针组件20，它可以连接在注射器管60上。可以使用的其他形式的递送器械，包括在以下文献中所披露类型的注射笔美国专利号5，279，586，美国专利申请流水号09/027，607和PCT申请号WO00/09135，以上文献的内容被以全文形式收作本文参考。针组件20包括支撑套管针24的针座22。限制器26接纳针座22的至少一部分，以便限制器26大体上环绕套管针24，正如在图9中所示出的。针座22的一端30能够固定在注射器的容器32上。可以使用多种类型的注射器容纳要按照本发明的方法进行真皮内递送的物质，使用设计的针组件，下面提供几种例子。针座22的相反一端优选包括延长部分34，它镶嵌容纳在限制器26内的对接表面36上。优选在限制器26上提供多个肋38，以,便提供结构完整性，并且有利于操作针组件20。通过适当设计所述组件的尺寸，针24前端或顶端40和限制器26上的皮肤接合表面42之间的距离"d"可以进行严格控制。距离"d"优选在大约0.5mm-大约3.0mm范围，最优选大约1.5mm±0.2mm-O.3mm。当套管针24的前端40延伸超过皮肤接合表面42的距离在所述范围内时，能确保皮内注射，因为针不能进一步刺入动物超过动物的典型真皮层的深度。通常，外皮层，表皮的厚度为50-200jum，而真皮，皮肤的内层和较厚层的厚度为1.5-3.5mm。在真皮层下面依次为皮下组织(有时又被称作下真皮层)和肌肉组织。参见图9,限制器26包括开口44,套管针24的前端40从它里面突出。开口44和前端40之间的空间关系可以根据特定场合的要求控制。在所示出的实施方案中，皮肤接合表面42通常是平面或扁平的，并且是连续的，以便能够将针组件20稳定放置在动物皮肤上。尽管没有具体说明，但优选具有大体上为平面的皮肤接合表面42，包括肋形式的突出部分或凹槽形式的凹陷部分，以便增强稳定性或有利于将针防护罩安装在针顶端40上。另外，沿限制器26侧面分布的肋38可以延伸超过皮肤接合表面42的平面。无论皮肤接合表面42的形状或轮廓如何，优选的实施方案包括足够的大体上为平面的或扁平的表面面积，该面积与皮肤接触，以便促进注射器相对对象皮肤的稳定化。在最优选实施方案中，所述皮肤接合表面42有利于保持注射器相对皮肤表面大体上成垂直方向，并且有利于在注射期间在皮肤上施加压力。因此，在所述优选实施方案中，限制器具有至少5mm的尺寸或外径。主要尺寸取决于用途和包装限制，不过常见直径低于15mm或更优选为11-12mm。重要的是，尽管图8和9示出了两件式组件，其中，针座22是独立于限制器26的，用于本发明的器械并不局限于这种结构。用一块塑料材料整体制成针座22和限制器26是图8和9所示例子的替代方案。另外，可以将针座22粘合或以其他方式固定在限制器26的如图8所示位置上，以便针组件20在组装时形成一个整体。采用针座22和限制器26，提供了可以生产真皮内针的优点。优选的针尺寸是小号皮下注射器针，通常为30号或31号针。使用这种战。限制器26和针座22有利于使用总体长度大于针的有效长度的针24，所述有效长度在注射期间能刺入个体的组织。采用本发明所设计的针组件，改善了生产，因为在生产和组装过程中可以操纵更大长度的针，同时仍然能获得完成皮内注射的短针的优点。图9表示固定在诸如注射器60的药物容器，以便形成器械10的针组件20。正如本领域所公知的，大体上为筒状的注射器主体62可以用塑料或玻璃制成。注射器主体62提供了用于容纳在注射期间要施用的物质的容器64。正如本领域所公知的，柱塞杆66具有位于一端的用手驱动的凸缘68，而在相反一端具有塞子70。柱塞杆66在容器64中的手工运动，迫使容器64中的物质从针的末端40根据需要排出。针座22能够以多种已知方式固定在注射器主体62上。在一种例子中，在注射器主体62的针座22的内部和出口部分72之间提供了干涉配合。在另一种例子中，提供了常规的Luer配合结构，以便将针座22固定在注射器60的末端。正如从图10中可以看出的，这样设计的针组件能方便地适应多种常规注射器类型。本发明提供了皮内针形注射器，它可适应于多种注射器类型，因此，本发明提供了有利于批量生产并且组装皮内针的显著优点。在插入套管针24之前，选择并且清洗在动物皮肤上的注射部位。在选择并且清洗所述部位之后，将套管针24的前端40插入动物皮肤，插入角度大体上为90度，直到皮肤接合表面42接触皮肤。皮肤接合表面42能防止套管针42穿过皮肤的真皮层，并且将物质注射到皮下层。在将套管针42插入皮肤时，对所述物质进行真皮内注射。可以将所述物质预填充到注射器60中，在进行注射之前填充，并且保存在里面。根据个体偏好和注射器类型，可以使用若干种不同的方法进行注射。在任何场合下，套管针42的刺入深度最优选不超过大约1.5mm，因为皮肤接合表面42阻止了任何进一步的刺入。另外，在使用皮内注射期间，套管针42的前端40被包埋在皮肤的真皮层中，这导致了在注射物质期间产生合理大小的反压力。该反压力可以在76psi的级别上。为了使必须由用户施加在注射器的柱塞杆66上的最小的力达到该压力，优选使用具有小内径的注射器管60，如0.183英寸(4.65mm)或更小。因此，本发明的方法包括选择用于注射的注射器，其内径的宽度足以产生足够克服在将物质从注射器中排出进行注射时真皮层的反压力。另外，由于皮内注射通常是使用要注射的小体积的物质进行的，即，在不超过0.5ml,优选大约0.1ml的等级上，优选具有小内径的注射器管60，以便缩小静区，所述静区可能在注射结束之后导致浪费的物质滞留在注射的塞子70和肩部之间。另外，由于具有O.lml级别上的小体积的物质，优选具有小内径的注射器管，以便缩小在插入塞子的过程中位于物质液面和塞子70之间的空气顶部空间。另外，小内径增强了检查并且观察注射器针筒中的物质体积的能力。参见图8-10，可以用第一只手112抓住注射器60，并且用第二只手116的食指114按压柱塞杆66。另外，参见图8-10，可以用第二只手116的拇指118按压柱塞杆66，同时用第一只手抓住注射器60。在上述每一种变化形式中，都按压动物皮肤，并且通过皮肤接合表面42张紧在限制器26上。笫一只手112或第二只手116都不接触皮肤。业已证实其他变化形式能有效进行本发明的皮内注射。这种变化包括用同一只手抓握注射器60，并且用这只手按压柱塞杆66。图9表示用第一只手112抓握注射器60，同时用第一只手112的拇指120按压柱塞杆。这种变化形式包括用第二只手114张紧皮肤，同时进行注射。另外，参见图10,抓握部分是颠倒的，并且用第一只手112的食指122按压柱塞杆，同时用第二只手116张紧皮肤。不过，据信，这种对皮肤的手工张紧是最必要的，并且仅仅体现了从使用标准技术的习惯中产生的变化形式。在上述每一种变化形式中，套管针24仅被插入动物皮肤大约1.5mm。在进行注射之后，将套管针24从皮肤中取出，并且以合适的方式处理注射器60和针组件20。将每一种变化形式用于临床试验，以便确定针组件20和本发明的皮内注射方法的效果。器械。所使用的器械的性质并不重要，只要它能刺入对象皮肤到接:层部分的目标深度，而又不穿过它就行。优选的是，所述器械刺入皮肤的深度至少为大约2mm,至深度不超过大约3mm，最优选的是，不超过大约2.5mm。5.7表皮疫苗制剂的施用表皮施用方法包括本领域公知的用于精确靶定表皮区室的任何方法和器械，如在以下文献中所披露的方法和器械美国临时专利申请号60/330,713，60/333，162和美国专利申请流水号09/576，643，美国申请流水号10/282，231,申请日分别为2001年10月29日，2001年11月27日，和2000年5月22日，和2002年10月29日，以上所有文献都以它们的全文形式收作本文参考。本发明涉及精确靶定表皮空间的微型摩擦器械。这种器械可以具有实心或空心微型凸起。所述微型凸起的长度可以高达500pm。合适的微型凸起部分的长度为大约50-500jnm。优选的是，所述微型凸起的长度为大约50-300jjm，更优选在大约150-250Mm范围内，最优选180-220um。可用于本发明方法中的微型研磨器械优选是能够摩擦皮肤的器械，如在11-16中所示出的器械。在优选实施方案中，所述器械能够摩擦皮肤，以便刺入角而又不刺入角质层。在本文中，"刺入"表示进入角质层而又不完全穿过角质层和进入相邻的层。这并非是说角质层不能够完全穿透，以便暴露皮肤底层的界面。另一方面，穿刺表示完全通过角质层，并且进入角质层下面的相邻的层。在本文中，术语"摩擦"表示去掉至少一部分角质层，以便提高皮肤的渗透性，而又不导致过度的皮肤刺激或破坏皮肤对传染性制剂的屏障。在本文中，术语"摩损"表示破坏皮肤外层，例如，通过剐擦或摩擦，形成具有破坏的角质层的部位。它与"穿孔"不同，穿孔会产生穿过角质层的独立的孔，在这些孔之间具有未破坏的角质层部分。优选的是，用于本发明方法中的表皮递送的器械刺入，但不刺穿角质层。要通过本发明的方法施用的疫苗制剂可以在摩擦之前，在摩擦的同时，或摩擦之后施用。在具体实施方案中，本发明涉及用于将疫苗制剂递送到患者皮肤中的方法，包括以下步骤参见图IIB，用所述制剂涂敷患者外皮层或微型研磨机2，并且使微型研磨机2在患者皮肤上移动，以便提供摩擦，留下足以使所述制剂能够进入患者的活的表皮的皱紋。由于微型研磨机2的结构设计，微型研磨机2的前缘首先拉伸患者皮肤，然后微型研磨机2的上表面摩擦外侧防护制剂e,以便进入患者体内。在初次摩擦外部保护性皮层之后，微型研磨机2的尾端和前缘可以摩擦所述摩擦过的部位的表面，使所述制剂进入所述摩擦过的皮肤部位，从而改善它的医学效果。参见图IIB，12A和12B，微型研磨机2包括底座4，研磨表面5可以安装在它上面。另外，研磨表面可以与所述底部形成一体，并且作为单一的两个部分的部件进行生产。优选的是，底座4是整体模制件。在一种实施方案中，底座4被设计成具有蘑菇样冠4b，它是向上弯曲的，并且在顶部截短。底座4的顶部通常是扁平的，将研磨表面5安装在它上面，或者与它一体化。另外，截短的顶部可以具有凹槽，用于容纳研磨表面5。在所有实施方案中，研磨表面5包括具有一系列微型凸起的平台，这些突起延伸到截短的顶部上面。在微型研磨机的另一种实施方案中，手柄，底座和研磨表面可以彼此一体化，并且作为单一的三个部分的器械生产。将微型研磨机2放在对象身体上，使微型研磨机2通过对象皮肤运动，施加足够的压力，以便使研磨表面5能够打开对象的外部保护性皮肤或角质层。施加在底座上的向内的压力，导致微型研磨机2被压入对象皮肤。因此，优选的是，倾斜的蘑菇样冠4b的高度足以防止在使用微型研磨机2时所使用的物质流到表面4c上。正如下面将要说明的，研磨表面5包括一系列微型凸起。手柄6连接在底座4上，或者可以与底座4一体化。参见图12A，手柄的上端6a在底座4的内侧周向侧壁4a之间可以是搭扣配合或摩擦配合。另外，参见图11A和12A，手柄6可以用胶粘贴(例如，用环氧树脂)到底座4的下侧4c上。另外，所述手柄和底座可以作为一件两个部分的部件同时生产(例如，注模)。手柄的直径可以小于底座的直径或可以具有与底座类似的直径，底座4的下表面4c可以与蘑菇样冠4b平齐，或者延伸超过蘑菇样冠。手柄6的下端6b可以比手柄6的轴6c宽或者可以具有与轴类似的直径。下端6b可以包括凹痕6d，它被用作施用所述物质并且移动微型研磨机2的人放置拇指的部位。另外，在手柄6的外侧设置突出部分8,以便帮助用户在使手柄通过患者皮肤运动时牢固地抓住手柄6。正如在图12B中的图11B的剖视图所示出的，下端6b可以是筒状的。参见图12A,微型研磨机2可以用透明材料制成。在筒状下端6b的两侧设置凹痕6d，以便帮助使用微型研磨机2的人抓住它。就是说，微型研磨机2的运动可以通过手或手指实现。微型研磨机的手柄6和底座4优选是用塑料和类似材料模制的。微型研磨机2优选是廉价生产的，以便整个微型研磨机和研磨表面在一位患者身上用过之后可以丟弃。设计研磨表面5，以便当微型研磨机2通过患者皮肤移动时，所产生的摩擦刺入角质层。研磨表面5可以用需要的制剂涂敷，以便递送到患者的活的表皮中。为了获得理想的摩擦，微型研磨机2应当至少通过患者皮肤一次。可以沿交替的方向摩擦患者皮肤。本发明微型研磨机的结构设计，使得所述制剂能够更有效地吸收，从而可以将较少的制剂涂在患者皮肤上或涂在研磨表面5上。研磨表面5可以用希望递送到患者体内的制剂涂敷。在一种实施方案中，所述制剂可以是分散在研磨表面5上的粉末。在另一种实施方案中，要递送的制剂可以在涂敷之前直接涂在患者皮肤上，并且在患者皮肤上移动微型研磨机2。参见图13,本发明的微型研磨器械10包括大体上为平面的主体或研磨表面支撑装置12，它具有从支撑装置下表面上突出的多个微型凸起14。所述支撑装置通常具有足以将底座表面连接在微型研磨器械上的厚度，以便使得所述器械能够方便地操纵，参见图HE,12A和12B。另外，可以将不同的手柄或抓握装置连接或集成在研磨表面支撑装置12的上表面上，研磨表面支撑装置12的尺寸可以根据微型凸起的长度，特定面积上的微型凸起的数量和要施用到患者体内的制剂的量而改变。通常，研磨表面支撑装置12的表面积为大约l-4cm2。在优选实施方案中，研磨表面支撑装置12的表面积为大约lcm2。参见图13，14，14A和15，微型凸起14从研磨表面支撑装置12的表面上突出，并且大体上垂直于研磨表面支撑装置12的平面。在所示出的实施方案中，微型凸起排列成多行和多列，并且优选间隔均匀的距离。微型凸起14具有大体上为棱锥形状，侧面16延伸到顶部18。所示出的侧面16从剖面上看具有大体上的凹入形状，并且形成了从研磨表面支撑装置12延伸到顶部18的弧形表面。在所示出的实施方案中，微型凸起是有具有大体上相同的形状和尺寸的四个侧面16组成的。参见图14A和15，微型凸起14的每一个侧面16具有相对侧边，它与相邻的侧边接近，并且构成从研磨表面支撑装置12上延伸出来的切边22。切边22形成了大体上为三角形或梯形的刮擦表面，与侧面16形状相当。在其他实施方案中，微型凸起14可以具有更少或更多的侧面。微型凸起14优选止于平头顶端18。一般，顶端18大体上扁平的，并且平行于支撑装置14。当所述顶端是扁平的时候，微型凸起的总长度不会刺入皮肤。因此，微型凸起的长度大于刺入皮肤的微型凸起的总深度。顶端18优选构成了明晰的，锋利的边缘20，在这里，它与侧面16拟合。边缘20大体上平行于研磨表面支撑装置12延伸，并且形成另一个切边。在其他实施方案中，边缘20可以是略微圆形的，以便形成从侧面16到顶端18的顺畅的过度。优选的是，微型凸起是截头锥形或截头棱锥形形状的。微型研磨器械10和微型凸起可以用塑料材料制成，这种材料不会与施用的物质起反应。例如，正如本领域所公知的，合适塑料材料的非排他性的例子包括，聚乙烯，聚丙烯，聚酰胺，聚苯乙烯，聚酯，和聚碳酸酯。另外，微型凸起可以用金属制成，如不锈钢，鵠钢，镍合金，钼，铬，钴，钛，以及它们的合金，或用其他材料，如硅，陶瓷，和玻璃聚合物制成。余属微型凸起可以用各种技术加工，类似于显微机械加工。微型凸起还可以通过硅片的照相平版印刷蚀刻加工，使用本领域所公知的标准技术。它们还可以通过铸模工艺在塑料上加工，例如，参见美国专利申请流水号10/193，317，申请曰为2002年7月12日，该文献被收作本文参考。微型凸起的长度和厚度是根据要施用的特定物质和使用所述器械的角质层部位的厚度选择的。优选的是，微型凸起基本上刺入角质层，而又不会刺穿或穿过角质层。微型凸起的长度可以高达大约500ym。合适的微型凸起为大约50-500jam。优选的是，微型凸起的长度为大约50-大约300um,更优选在大约150-250jam范围内，最优选180-220nm。在所示出的实施方案中，微型凸起具有大体上的棱锥形形状，并且垂直于所述器械的平面。这种形状的特殊优点是，能确保在需要的深度上进行摩擦。在优选实施方案中，所述微型凸起是实心部件，在其他实施方案中，所述微型凸起可以中空的。参见图12和15，微型凸起优选是以行和列的形式均匀地分开的，并且形成阵列，用于在摩擦期间接触皮肤并且刺入角质层。微型凸起改变。通常，成行的微型凸起是分开的，以便提供每亳米(mm)大约2-大约IO个的密度。一般，行和列是以大体上与所述阵列上的微型凸起的间距相等的距离隔开的，以便提供大约4-大约100个微型凸起/咖2的密度。在另一种实施方案中，所述微型凸起可以排列成圆形形状。在另一种实施方案中，所述微型凸起可以排列成随机形状。当排列成行和列时，微型凸起的中心之间的距离优选至少为微型凸起长度的两倍。在一种优选实施方案中，微型凸起中心之间的距离是微型凸起长度110ym的两倍。还包括更宽的间距，高达3，4，5以及更多种类的微型凸起的长度。另外，如上文所述，微型凸起的形状可以是这样的，使得微型凸起的高度可以超过凸起将要进入皮肤的深度。截头锥形或截头棱锥形微型凸起的扁平的上表面的宽度为大约10-100，优选30-70，最优选35-50pm。在皮肤上准备递送部位的方法包括将微型研磨机放置在患者皮肤28的需要的部位。将微型研磨机轻轻地压在皮肤上，然后在皮肤上移动。微型研磨机的沖程长度可以根据递送部位的需要的尺寸而改变，该尺寸是由需要的递送的部位决定的。选择递送部位的尺寸，以便获得希望的结果，并且可以根据要递送的物质，以及物质的形式改变。例如，递送部位可以覆盖大的部位，用于治疗皮渗或皮肤病。一般，微型研磨机移动大约2-15厘米(cm)。在本发明的某些实施方案中，移动微型研磨机，以便产生表面积为大约4cm2-大约300cm2的摩擦部位。然后将微型研磨机从皮肤上抬起，以便暴露出研磨部位，并且将合适的递送器械，骨贴或局部制剂施用在所述摩擦部位。另外，要施用的物质可以在摩擦之前或在摩擦的同时涂在皮肤表面上。对角质层的摩擦程度取决于在运动期间所施加的压力和微型研磨机重复的次数。在一种实施方案中，在第一次通过之后，将微型研磨机从皮肤上抬起，并且返回到大体上相同的起始位置，并且定位。然后使微型研磨机沿相同的方向再次运动，并且移动相同的距离。在另一种实施方案中，让微型研磨机沿交替的方向反复通过相同的部位，而在进行第一次通过之后不将它从皮肤上抬起。一般，用微型研磨机进行两次或两次以上研磨。在其他实施方案中，微型研磨机可以仅沿相同的方向来回扫动，以网格状形式，以圆形形式，或以某些其他形式进行扫动，扫动的次数足以将角质层磨损到能增强所需物质递送的合适深度。微型研磨机通过皮肤28沿一个方向的线性运动，去掉了某些组织，以便形成槽26，这些槽被皮肤28上的峰27分开，大体上与每一行微型凸起相当，参见图16。微型凸起的边缘20，22和平头顶端18提供了刮擦或摩擦动作，以便去掉一部分角质层，在皮肤上形成槽或皱紋，而不是简单地切割作用。微型凸起14的平头顶端18的边缘刮擦并且去掉槽26底部的某些组织，使得它们保持开放，从而使得所述物质进入所述槽，以便被身体吸收。优选的是，微型凸起14具有足够的长度，以便刺入角质层，并且形成具有足够深度的槽26，以便可以吸收涂在摩擦部位上的物质，而又不会引起患者疼痛或不必要的不适。优选的是，槽26不会刺穿，但是可能延伸通过角质层。棱锥形微型凸起14的边缘22形成了从研磨表面支撑装置12延伸到顶部18的切边。与研磨表面支撑装置12相邻的边缘22形成了微型凸起之间的刮擦表面，它能刮擦和摩擦由槽26之间的皮肤形成的凸起27。在所述槽之间形成的凸起27—般受到轻微的摩擦。本领域已知的用于摩擦破坏角质层的任何器械都可用于本发明的方法。例如，这些器械包括显微机电(MEMS)器械，具有一系列短的微型操作针或微型凸起，砂纸样器械，和刮刀等。将本发明的表皮疫苗制剂导入表皮空间的具体方法并不重要，只要它能刺入对象皮肤到达理想的目标深度就行。所讨论的微型研磨机将首先将本发明的制剂放置到0.0-0.025mm的皮肤深度上，并且优选不超过角质层。5.8测定疫苗制剂的效力本发明涉及用于测定皮肤疫苗制剂的方法，可使用本领域所公知的或本文所披露的任何标准方法测定。用于测定本发明的皮肤疫苗制剂效力的特定方法可以是体外型测定方法或体内型测定方法，包括基于动物的测定方法。在某些实施方案中，本发明涉及在样品，例如，定量对本发明的皮肤疫苗制剂应。优选的是，将通过本发明的皮肤疫苗制剂刺激的体液免疫反应与从施用了对照制剂的类似对象获得的对照样品进行比较，所述对照制剂例如，仅舍有抗原性或免疫原性剂。用于测定体液免疫反应的测定方法为本领域所公知，例如，参见Coligan等,(eds.)，1997，CurrentProtocolsinImmunology,JohnWiley和Sons,Inc.,Section2.1。可以用本领域所公知的标准方法检测和/或定量体液免疫反应，这些方法包括，但不局限于ELISA测定。优选的是，体液免疫反应是通过检测和/或定量能专一性原性剂的抗体的量和未处理过的对象体内的抗体的量相比来测定的。ELISA测定可用于测定从用本发明的制剂处理的对象体内获得的样品的总抗体效价。在其他实施方案中，ELISA测定可用于通过本领域所公知的方法测定同种型专一性抗体的含量。ELISA型测定包括制备抗原，用所述抗原对96孔微量滴定板的孔进行涂敷，添加对与诸如酶促底物(例如，辣根过氧化酶或碱性磷酸酶)的可检测化合物缀合的抗原专一的抗体到所述孔中，培养一定的时间，并且检测所述抗原的存在。在ELISA测定中，抗体不一定与可检测化合物缀合；相反，可以将与可检测化合物缀合的笫二种抗体(它能识别第一种抗体)添加到所述孔中。另外，除了用抗原对所述孔进行包衣之外，还可以将抗体涂在所述孔上。在这种场合下，在将感兴趣的抗原添加到包衣过的孔中之后，可以添加与可检测化合物缀合的第二种抗体。正如本领域技术人员所公知的，可以改变所述参数，以便增强检测信号和本领域所公知的ELISAs的其他变量。有关ELISAs的进一步讨论，参见，例如，Ausubel等，eds，1994，CurrentProtocolsinMolecularBiology,Vol.1,JohnWiley&Sons,Inc.,NewYorkat11.2.1。在具体实施方案中，当所述疫苗制剂包括流感抗原时，本领域所公知的用于检测和/或定量对流感抗原的抗体反应的任何方法都属于本发明方法的范围。用于测定流感抗原引起的抗体反应的典型方法包括以下步骤将流感抗原用于对微量滴定板(Nunc平板)进行包衣；将来自用本发明的流感疫苗制剂处理过的对象的血清添加到所述平板上；将抗血清添加到平板上，并且培养足够的时间，以便形成复合物，即，血清中的抗体和抗原之间的复合物。然后用本领域的标准方法检测所述复合物。有关测定流感特异性抗体反应的典型测定方法参见，例如，Newman等，1997，Mechanismofaging&Development,93:189-203;Katz等，2000，Vaccine,18:2177-87;Todd等，(BrownandHaaheim编辑)，1998inModulationoftheimmuneresponsetoVaccineAntigens,Dev.Biol.Stand.Basel,Karger，92:341-51;Kendal等,1982，inConceptsandProceduresforLaboratory-basedInfluenzaSurveillance,Atlanta:CDC,B17-35;Rowe等，1999，JClin.Micro.37:937-43;Todd等，1997，Vaccine15:564-70;WHOCollaboratingCentersforReferenceandResearchonInfluenza,inConceptsandProceduresforLaboratory—basedInfluenzaSurveillance,1982，p.B-23;以上所有文献的内容都被全文收作本文参考。在具体实施方案中，对本发明的流感疫苗制剂的抗体反应包括将流感抗原，例如，来自A/PR8/34菌株的抗原(特别是纯化的/失活的甲型流感PR384，浓度为2mg/mL，购自CharlesRiverSPAFAS)作为测试抗原涂敷在微量滴定板(例如，96孔ImmunoPlato,具有MaxiSorpTM表面)。所述包衣溶液优选包括3.8pg/mL的流感抗原，它存在于pH9.6的碳酸盐緩沖液中(SigmaChemicalCompany)。通过在371C下培养大约1小时让所述抗原对平板表面进行包衣。随后，用封闭溶液，例如，含有Tween20(PBS-TW20)和5%(w/v)脱脂干奶的磷酸盐緩冲溶液封闭所述平板。用所述封闭緩冲液在37"C下将所述平板再培养2小时。然后用PBS-TW20洗涤平板表面至少2次。此时，分析业已施用了本发明的真皮内疫苗制剂的对象，例如小鼠的血清样品。让一级抗体，例如血清中的抗体在37C下与包衣过的和封闭的平板一起培养1小时。用PBS-TW20洗涤平板3次，并且添加抗小鼠辣根过氧化酶缀合物的混合物。在37。C下将HRP二级抗体混合物放在所述平板上再培养l小时。洗涤平板，并且添加TMB底物，以便产生颜色。在黑暗中让所述颜色显示30分钟。通过添加0.5M硫酸终止颜色的显现。在450nm波长下，在例如TECANSUNRISE平板读数仪上对平板进行读数。在另一种具体实施方案中，当所述疫苗制剂包括流感抗原时，本领域公知的用于检测和/或定量具有红血球凝集活性的抗体水平的任何方法都属于本发明的范围。红血球凝集抑制测定是基于流感病毒凝聚红血球的能力，和特异性HA抗体抑制凝聚的能力进行的。本领域所公知的红血球凝聚抑制测定任何方法都属于本发明的范围，如参见Newman等，1997，MechanismofAging&Development,93:189-203;Kendal等，1982，inConceptsandProceduresforLaboratory-basedInfluenzaSurveillance,Atlanta:CDC,B17-35;以上所有文献的内容都被全文收作本文参考。典型的红血球凝聚抑制测定方法包括以下步骤将来自用本发明的流感疫苗制剂处理过的对象的血清添加到微量滴定板上；将含有8个HA单位的HI-抗原性制剂添加到所述平板上；通过轻轻敲打所述平板充分混合所述成分，并且在41C下培养大约1小时；将红血球悬浮液，例如，0.5%鸡红血球添加到所述微量滴定板上，并且通过轻轻敲打平板充分混合有关成分；在4'C下进一步培养所述平板，直到细胞对照(对照含有盐水和cRBC)表现出正常沉积的扣状物。优选的是，血清样品用抑制剂，如神经氨酸酶或高碘酸钾处理，以便抑制血清因子的非专一性凝聚抑制作用。HI效价被确定为最高的稀释比例，此时，抑制了红血球凝聚作用。这一目的是通过倾斜平板，并且观察以与对照细胞相同的速度流动的细胞流的撕裂形状完成的。5.9预防性和治疗性用途本发明提供了治疗和预防方法，该方法包括给对象，优选哺乳动物，最优选人施用本发明的皮肤疫苗制剂(包括真皮内和表皮疫苗制剂)，用于治疗，控制或緩解与疾病或失调，特别是传染性疾病或癌症相关的症状。所述对象优选是哺乳动物，如非灵长类动物，例如，牛，猪，马，猫，犬，大鼠，和灵长类动物，例如，猴子，如猕猴和人类。在优选实施方案中，所述对象是人。本发明涉及用于在对象体内免疫和/或引起免疫反应的方法，包括将单一剂量的本发明的真皮内疫苗制剂真皮内递送对象，优选人体内。在某些实施方案中，本发明涉及一次或多次强化免疫接种。本发明的用方法的抗体反应水平方面特别有效。例如，本发明的真皮内疫苗制剂可以导致抗体反应，包括产生一种或多种类型的抗体，如IgM，IgG，和/或IgA。本发明涉及用于在对象体内免疫和/或引起免疫反应的方法，包括将一个剂量的本发明的表皮疫苗制剂表皮递送到对象，优选人体内。最优选的是，本发明的皮肤疫苗制剂能刺激系统性免疫反应，它能使所述对象对至少一种病原体免疫，本发明的皮肤疫苗制剂可以提供系统性，局部或黏膜或它们的组合的免疫性。5.9.1目标疾病本发明涉及皮肤疫苗递送系统，包括表皮和真皮内递送系统，用于在对象，优选人体内治疗和/或预防传染性疾病。能够用本发明的方法治疗或预防的传染性疾病是由传染性剂引起的，包括，但不局限于病毒，细菌，真菌，原生动物，蠕虫，和寄生虫。业已在人体中发现并且可以通过本发明的疫苗递送系统治疗的病毒的例子包括，但不局限于逆转录病毒科(例如，人免疫缺陷病毒，如HIV-1(又被称作HTLV-III，LAV或HTLV-III/LAV，或HIV-III;以及其他分离物，如HIV-LP);小RNA病毒科(例如，脊髓灰质炎病毒，甲型肝炎病毒；肠道病毒，人柯萨奇病毒，鼻病毒，艾柯病毒)；Calciviridae(例如，能导致胃肠炎的菌林)；Togaviridae(例如，马脑炎病毒，风疹病毒)；黄病毒科(例如，登革热病毒，脑炎病毒，黄热病病毒；冠状病毒(例如，冠状病毒)；棒状病毒科(例如，水泡性口膜炎病毒，狂犬病病毒)；Filoviridae(例如，埃博拉病毒；副黏病毒(例如，副流感病毒，腮腺炎病毒，麻渗病毒，呼吸道合胞病毒)；正黏病毒科(例如，流感病毒)；Bungaviridae(例如，Hantaanviruses,bungaviruses,phleboviruses和Nairoviruses)jArenaviridae(例如，出血热病毒)；肠孤病毒科(例如，呼肠孤病毒，环状病毒和轮状病毒)；Birnaviridae;肝病毒科(乙型肝炎病毒)；细小病毒科(细小病毒)；Papovaviridae(乳头瘤病毒，多瘤病毒)；腺病毒科(大部分腺病毒)；疱疹病毒科(单纯疱疹病毒(HSV)1和2，7jc痘带状疱渗病毒，巨细胞病毒(CMV)，疱渗病毒；Poxviridae(天花病毒，牛痘病毒，痘病毒)；和Iridoviridae(例如，非洲猪瘟病毒)；和非典型病毒(例如，海绵状脑炎的病原剂，5肝炎的病原剂(它被认为是乙型肝炎病毒的缺陷型卫星)。非甲，非乙肝炎的病原剂(l型-内部传播的；2型-肠胃外传播的，例如，丙型肝炎)；诺沃克及相关病毒，和astroviruses。在动物和人体内导致传染性疾病，并且可以用本发明的递送系统和方法治疗和/或预防的逆转录病毒包括简单的逆转录病毒和复杂的逆转录病毒。简单的逆转录病毒包括B-型逆转录病毒，C-型逆转录病毒和D-型逆转录病毒的亚型。B-型逆转录病毒的例子是小鼠乳腺瘤病毒(醒TV)。C-型逆转录病毒包括亚型C-型A类(包括劳氏肉瘤病毒(RSV)，禽类白血病病毒(ALV)，和禽类成髓细胞瘤病毒(AMV))和C-型B类(包括鼠白牟病病毒(MLV)，猫白血病病毒(FeLV)，鼠肉瘤病毒(MSV)，长臂猿白血病病毒(GALV)，脾坏死病毒(SNV),网状内皮组织增生病毒(RV)和猿肉瘤病毒(SSV))。D-型逆转录病毒包括梅-帕猴病毒(MPMV)和猿逆转录病毒l型(SRV-1)。复杂的逆转录病毒包括'隄病毒，T-细胞白血病病毒和泡沫病毒。'隄病毒包括HIV-1，不过还包括HIV-2,SIV，绵羊髓鞘脱落病毒，猫免疫缺陷病毒(FIV),和马传染性贫血病毒(EIAV)。T-细胞白血病病毒包括HTLV-1，HTLV-II，猿T-细胞白血病病毒(STLV)，和牛白血病病毒(BLV)。泡沫病毒包括人泡沫病毒(HFV)，猿泡沫病毒(SFV)和牛泡沫病毒(BFV)。作为脊推动物抗原的RNA病毒的例子包括，但不局限于以下抗原呼肠孤病毒科的成员，包括正呼肠孤病毒属(哺乳动物和禽逆转录病毒的多种血清型)，环状病毒属(蓝舌病病毒，Eugenangee病毒，克米罗沃病毒，非洲马痙病毒，和科洛拉多蜱传热病毒)，轮状病毒属(人轮状病毒，内布拉斯加牛腹泻病毒，鼠轮状病毒，猿轮状病毒，牛或绵羊轮状病毒，禽轮状病毒)；小RM病毒科，包括肠道病毒属(脊髓灰质炎病毒，柯萨奇病毒A和B，entericcytopathichumanorphan(ECHO)病毒，甲型肝炎病毒，猿肠道病毒，鼠脑脊髓炎(ME)病毒，脊髄灰质炎病毒muris，牛肠道病毒，猪肠道病毒，Cardiovirus属(脑心肌炎病毒(EMC)，门戈病毒)，鼻病毒属(人鼻病毒包括至少113种亚型；其他鼻病毒)，Apthovirus属(口蹄疫(FMDV);Calciviridae科，包括猪病毒7jc泡渗，SanMiguel海狮病毒，猫小RNA病毒和Norwalk病毒.'Togaviridae科，包括A病毒属(东方马脑炎病毒，Semliki森林病毒，辛德毕斯病毒，切昆贡亚热病毒，(TNyong-Nyong病毒，罗斯河病毒，委内瑞拉马脑炎病毒，西方马脑炎病毒)，黄病毒属(蚊子传播黄热病病毒，登革热病毒，日本脑炎病毒，St.Louis脑炎病毒,MurrayValley脑炎病毒,西尼罗河病毒，库宁病毒，中欧蜱传播病毒，远东蜱传播病毒，科萨努尔森林病毒，跳跃病病毒，Powassan病毒,鄂木斯克出血热病毒)，Rubivirus属(风渗病毒)，Pestivirus属(粘膜病病毒，猪霍乱病毒，边界病病毒)；Bunyaviridae科，包括Bunyvirus属(Bunyamwera和相关病毒，加利福尼亚脑炎型病毒)，Phlebovirus属(白蛉热西西里病毒，裂谷热病毒)，Nairovirus属(克里米出血热病毒，内罗毕绵羊病病毒)，和Uukuvirus属(Uukuniemi和相关病毒)；正粘病毒科，包括流感病毒属(甲型流感病毒，很多人类亚型)；猪流感病毒，和禽及马流感病毒；乙型流感(很多人类亚型)，和丙型流感(可能的独立的属)；副粘病毒科，包括副粘病毒属(副流感病毒1型，仙台病毒，血细胞吸附病毒，副流感病毒2-5,新城鸡痙病毒，腮腺炎病毒)，麻渗病毒属(麻渗病毒，亚急性硬化泛脑炎病毒，瘟热病毒，牛痘病毒)，肺炎病毒属(呼吸道合胞病毒(RSV)，牛呼吸道合胞病毒和小鼠肺炎病毒)；森林病毒，辛德毕斯病毒，切昆贡亚热病毒，0'Nyong-Nyong病毒，罗斯河病毒，委内瑞拉马脑炎病毒，西方马脑炎病毒)，黄病毒属(蚊子传播黄热病病毒，登革热病毒，日本脑炎病毒，St.Louis脑炎病毒，MurrayValley脑炎病毒，西尼罗河病毒，库宁病毒，中欧蜱传播病毒，远东蜱传播病毒，Kyasanur森林病毒，迢匕跃病病毒，Powassan病毒，鄂木斯克出血热病毒)，风渗病属(风渗病毒)，Pestivirus属(粘膜病病毒，猪霍乱病毒，边界病病毒)；Bunyaviridae科，包括Bunyvirus属(Bunyamwera和相关病毒，加利福尼亚脑炎型病毒)，Phlebovirus属(白蛉热西西里病毒，裂谷热病毒)，Nairovirus属(克里米出血热病毒，内罗毕绵羊病病毒)，和Uukuvirus属(Uukuniemi和相关病毒)；正粘病毒科，包括流感病毒属(甲型流感病毒，很多人类亚型)；猪流感病毒，和禽及马流感病毒；乙型流感(很多人类亚型)，和丙型流感(可能的独立的属)；副粘病毒科，包括副粘病毒属(副流感病毒1型，仙台病毒，血细胞吸附病毒，副流感病毒2-5，新城鸡瘕病毒，腮腺炎病毒)，麻渗病毒属(麻渗病毒，亚急性硬化泛脑炎病毒，痙热病毒，牛痙病毒)，肺炎病毒属(呼吸道合胞病毒(RSV)，牛呼吸道合胞病毒和小鼠肺炎病毒)；棒状病毒科，Vesiculovirus属(VSV)，钱迪普拉病毒，Flanders-HartPark病毒)，狂犬病病毒属(狂犬病病毒)，鱼棒状病毒，和两种可能的棒状病毒(马尔堡病毒和埃博拉病毒)；沙粒病毒科，包括淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCM),Tacaribe病毒复合物，和拉沙病毒；Coronoaviridae科，包括传染性支气管炎病毒(IBV)，小鼠肝炎病毒，人肠冠状病毒，和猫传染性腹膜炎(猫冠状病毒)。具有脊推动物抗原的典型RNA病毒包括，但不局限于痘病毒科，正痘病毒属(重型天花，类天花，猴痘，牛痘，水牛痘，野兔痘，缺肢畸形)，Leporipoxvirus属(粘液瘤，纤维瘤)，麻雀痘病毒属(鸟痘，其他禽痘病毒)，Capripoxvirus属(绵羊痘，山羊痘)，Suipoxvirus属(猪痘)，副痘病毒属(传染性postular皮炎病毒，假牛痘，牛丘渗性口内炎病毒)；Iridoviridae科(非洲猪瘟病毒，青蛙病毒2和3，鱼的Lymphocystis病毒)；疱渗病毒科，包括ot-疱渗病毒(单纯疱渗1和2型，水痘带状疱疹，马流产病毒，马疱渗病毒2和3，假狂犬病毒，传染性牛角膜结膜炎病毒，传染性牛鼻气管炎病毒，猫鼻气管炎病毒，传染性喉气管炎病毒)，B-疱疹病毒(人巨细胞病毒和啮齿类动物的巨细胞病毒)；Y-疱渗病毒(爱波斯坦-巴尔病毒(EBV)，马立克氏病病毒，Herpessaimiri，Herpesvirusateles，Herpesvirussylvilagus，豚鼠疱渗病毒，Lucke肺瘤病毒)；腺病毒科，包括乳腺病毒属(人类亚型A，B，C，D,E和未分类的；猿腺病毒(至少23种血清型)，传染性犬肝炎，和牛，猪，绵羊，青蛙和很多其他物种的腺病毒，禽腺病毒属(禽腺病毒)；和不可培养的腺病毒；Papoviridae科，包括乳头瘤病毒属(人乳头瘤病毒，牛乳头瘤病毒，Shope兔乳头瘤病毒，和其他物种的多种致病性乳头瘤病毒)，多瘤病毒属(多瘤病毒，猿成空泡剂(SV-40)，兔成空泡剂(RKV)，K病毒，BK病毒，JC病毒，和其他灵长类多瘤病毒，如嗜淋巴乳头瘤病毒)；细小病毒科，包括腺相关病毒属，细小病毒属(猫全白细胞减少病毒，牛细小病毒，犬细小病毒，阿留申貂病病毒等)。最后，DNA病毒可以包括不属于上述科的病毒，如苦鲁病和克雅氏病病毒，以及慢性传染性神经致病剂。可以用本发明的方法治疗或预防的细菌感染或疾病是由以下细菌引起的包括，但不局限于在它的生命周期中具有细胞内阶段的细菌，如分枝杆菌属(例如，结核分枝杆菌，M.bovis，M.avium,M.leprae,或M.africanum)，立克次氏体,支原体，衣原体，和legionella。所涉及的细菌感染的其他例子包括，但不局限于由革兰氏阳性杆菌属导致的感染(例如，李斯特氏菌，芽孢杆菌属，如炭疽杆菌，丹毒丝菌)，革兰氏阴性杆菌属(例如，巴尔通氏体，布鲁氏菌，Campylobacter，肠细菌，埃希氏菌，弗朗西斯氏菌，嗜血杆菌，克雷伯氏菌，Morganella，变形杆菌，Providencia，假单胞菌，沙门氏菌，沙雷氏菌，志贺氏菌，弧菌，和耶尔森氏菌)，螺旋菌(例如，包柔氏螺旋体菌，包括Borreliaburgdorferi,它能导致莱姆病)，厌氧细菌(例如，放线菌和梭菌)，革兰氏阳性和阴性球菌，肠球菌，链球菌，肺炎球菌，葡萄球菌，奈瑟氏菌。传染性细菌的具体例子包括，但不局限于幽门螺杆菌，Boreliaburgdorferi,Legionellapneumophi1ia,结核分枝杆菌，M.avium,M.intracelare，M.kansaii，M.gordonae，金黄色葡萄球菌，淋病奈瑟氏菌，奈瑟氏脑膜炎菌，单细胞李斯特氏菌，酿脓链球菌(A型链球菌)，无乳链球菌(B型链球菌)，绿色链球菌，粪链球菌，Streptococcusbovis，肺炎链球菌，流感嗜血杆菌，炭疽杆菌,白喉杆菌，rhusiopathiae丹毒丝菌，perfringers梭菌，破伤风杆菌，产气肠细菌，肺炎克雷伯氏菌，Pasturellamultocida，Fusobacteriumnucleatum,念珠状链杆菌，苍白密螺旋体，细弱密螺旋体，钩端螺旋体，立克次氏体，和以色列放线菌。可以通过本发明的方法治疗或预防的真菌疾病包括，但不局限于曲霉病，隐球菌病，孢子丝菌病，球孢子菌病，副球孢子菌病，组织胞浆菌病，芽生菌病，接合菌病，和念珠菌病。可以通过本发明的方法治疗或预防的寄生虫病包括，但不局限于，阿米巴病，痴疾，利什曼原虫，球虫目，贾第虫病，似隐孢菌病，弓形体病，和锥虫病。还包括由各种蠕虫引起的感染，例如，但不局限于鮰虫病，钩虫病，鞭虫病，类圆线虫病，toxoccariasis，旋毛虫病,盘尾丝虫病。丝虫和恶丝虫病。还涉及由各种吸虫引起的感染，例如，但不局限于血吸虫病，肺吸虫病，和支睾吸虫病。导致上述疾病的寄生虫可以根据它们是在细胞内或细胞外进行分类。在本文中，"细胞内寄生虫"是它的整个周期都在细胞内的寄生虫。人类细胞内寄生虫的例子包括利什曼原虫，疟原虫，克氏锥虫，鼠弓形体，巴贝西虫，和旋毛虫。在本文中，"细胞外寄生虫"是它的整个生命周期都在细胞外的寄生虫。能够感染人体的细胞外寄生虫包括痢疾内变形虫，兰伯氏贾第虫，Enterocytozoonbieneusi，Naegleria和Acanthamoeba以及大部分蠕虫。另一种类型的寄生虫被确定为主要是细胞外的，但是在它们生命周期的关键阶段具有专性的细胞内存在。这种寄生虫在本文中被称作"专性的细胞内寄生虫"。这些寄生虫的大部分生命或作为小部分的生命是在细胞外环境中度过的，不过，在它们的生命周期中都具有至少一个专性的细胞内阶段。后一种类型的寄生虫包括Trypanosomrhodesiense和Trypanosomagambiense，Isosporaspp.，Cryptosporidiumspp，艾美虫，Neosporaspp.，肉孢子虫，和裂体吸虫。本发明还涉及治疗和/或预防癌症的真皮疫苗制剂，包括，但不局限于新生瘤，肺瘤，转移瘤，或以不受控制的细胞生长为特征的任何疾病或失调。例如，但不局限于与上面所列举的癌和肿瘤抗原相关的癌和胂瘤，可以用本发明的皮肤疫苗制剂治疗和/或预防。6.实施例6.1制备普卢兰尼克S和/或粘膜附着性物质的母液，并且测定它们的胶凝特性普卢兰尼克F127:普卢兰尼克F127(本文称之为F127)是从BASFCorporationMountOlive,NJ.购买的。在初步实验中，20%(w/v)的F127在37X:下形成凝胶。因此，将足够的F127放入weighboat中，以便制备2(^(w/v)母液。将无菌的并且含有少量内毒素的组织培养级水用于水合F127。在水上搅拌该混合物，直到溶液澄清，并且用稀盐7jc将pH调整到7.2，然后通过0.2M瓜的GelmanAcrodiscPFSyringeFilter#4187过滤。将该溶液放入37C的水浴中，在这里，所述溶液马上形成凝胶。普卢兰尼克F127和生物附着性物质提供了含有F127(大约10%w/v)和粘膜附着性物质的透明溶液(pH7.2)。然后通过O.2jamGelmanAcrodiscPFSyringeFilter#4187对该溶液进行过滤。将该溶液放入37X:的水浴中，在这里所述溶液显著变稠，通过肉眼可以，见察到。明股明股来自牛皮(SigmaChemicalCompany,CatalogG9391)并且含有少量内毒素。将足够的明胶粉末分配到weighboat中，以便用组织培养级水制备O.5%(w/v)母液；将pH调整到7.2，并且通过0.2pmGelmanAcrodiscPFSyringeFilter#4187进行灭菌过滤。甲基纤维素曱基纤维素是从SigmaChemicalCompany购买的，CatalognumberM—0555。将足够的粉末分酉己至!]weighboat中，以<更在组织培养级水中制备l.375%(w/v)的母液；将pH调整到7.2，并且通过0.2ymGelmanAcrodiscPFSyringeFilter#4187进行灭菌过滤。普卢兰尼克F127和羧曱基纤维素羧曱基纤维素是从SigmaChemicalCompany购买的(CatC—9481)。用纟且织培养级水制备2.5%(w/v)的溶液；将pH调整到7.2，并且通过0.2jamGelmanAcrodiscPFSyringeFilter#4187进行灭菌过滤。用组织培养级水制备20%w/v的F127溶液；并且与羧甲基纤维素溶液混合；在冰上搅拌该混合物，直到溶液澄清，将pH调整到7.2,并且通过O.2nmGelmanAcrodiscPFSyringeFilter#4187进行灭菌过滤。6.2制备流感病毒疫苗接种物用于初步筛选普卢兰尼克F127:在免疫之前大约1小时，将以下成分分配到Nunc小瓶中进行混合125卩L的流感病毒疫苗和在6.1节中制备的375nL的F127母液。F127在用于免疫的溶液(接种物)中的最终浓度为大约15%。所述接种物在放入371C的水浴时很容易变稠，不过，它不会形成明胶。每一只动物接受lOOja1的接种物，即接受l/10th的人类小儿剂量。普卢兰尼克F127和生物附着性物质在免疫之前大约1小时，将以下成分分配到Nunc小瓶中进行混合125juL的流感病毒疫苗和375|uL按6.1节所述制备的母液。F127/粘膜附着性物质在用于免疫的溶液(接种物)的浓度为由买主收到的原始母液的大约75%(v/v)。所述接种物在放入37C的水浴时很容易变稠，不过它不会形成明胶。每一只动物接收100pl的接种物，即接受l/10'h的人类小儿剂量。明胶在免疫之前大约1小时，将以下成分分配到Nunc小瓶中进行混合125nL的流感病毒疫苗和50pL的按6.1节所述制备的母液和325mL的无菌Hanks緩冲盐溶液。最终的接种物为大约0.0625%w/v明胶，以便流感病毒疫苗成分占0.0125%(w/v)，而Sigma明胶添加剂为0.05%w/v。每一只动物接收100nl的接种物，即便接受l/10th的人类小儿剂量。曱基纤维素在免疫之前大约1小时，将以下成分分配到Nunc小瓶中进行混合175jjL的流感病毒疫苗和280jiL按6.1节所述制备的母液，和245juL的无菌Hanks緩沖盐溶液。最终的接种物为大约0.55%w/v甲基纤维素。每一只动物接受100pi的接种物，即接受l/10th的人类小儿剂量。普卢兰尼克F127和羧曱基纤維素在免疫之前大约l小时，将以下成分分配到Nunc小瓶中进行混合175u1的流感病毒疫苗和262.5jiL的按6.1.1节所述制备的F127母液，和262.5jjL按6.1节所述制备的羧甲基纤维素母液。最终的接种物为大约7.5%w/vF127和0.9°/。w/v羧曱基纤维素。每一只动物接受lOOnl的接种物，即接受l/10th的人类小儿剂量。对照制剂对照流感病毒疫苗制剂包括存在于375jiL的无菌Hanks緩冲盐溶液中的125nL的流感病毒疫苗。6.2.1制备用于测定终点效价的流感病毒疫苗接种物曱基纤维素在免疫之前大约1小时，将以下成分分配到Nunc小瓶中进行混合175nL的流感病毒疫苗和来自甲基纤维素母液的一定体积，以便使最终浓度为0.18%w/v甲基纤维素。每一只动物接受100jLil的接种物，即接受l/10th的人类小儿的流感病毒疫苗剂量。6.2.2制备用于DRAIZE评分的流感病毒疫苗接种物曱基纤维素制备1ml的接种物，以便流感病毒疫苗成分占体积的50%，并且最终接种物浓度为0.18%w/v曱基纤维素。约克郡猪接受3个独立的200yl的流感病毒疫苗-甲基纤维素接种物的水泡。6.3给小鼠真皮内施用流感病毒疫苗接种物用真皮内Mantoux方法将上文所述和所制备的流感病毒疫苗制剂递送到Balb/c小鼠的真皮内区室。所使用的Balb/c小鼠为4-8周大，并且是从CharlesRiver实验室获得的。所述接种物制备在制备之后1小时内施用。所述接种物制剂在每一种场合下用20号针吸入到lmL的无乳胶注射器中。在装载注射器之后，换上30号针，以便进行真皮内施用。小鼠皮肤以尽可能小的角度接近，使针的斜面朝上，并且将皮肤拉紧。然后用5-10秒时间緩慢推压注射体积，以便形成典型的"水泡"，并且随后将针緩慢取出。只使用了一个注射部位。注射体积不超过IOOmL，这在某种程度上是由于以下事实较大的注射体积可能增加溢出到周围的组织空间中，例如，皮下空间的风险。将小鼠背部的下部至中部用于注射。在注射之前用Conair电动剃须刀对小鼠进行干燥脱毛。在接受流感病毒疫苗注射之前大约15分钟，每只小鼠接受真皮内注射的克他命/曱苯噻嗪/乙酰丙嗪混合物用以镇静。在施用之后马上，施用之后24小时，以及施用之后3周监测动物的局部和系统性中毒症状。用上述任意一种制剂都没有发现局部或系统中毒的症状。6.4给猪真皮内施用流感病毒疫苗接种物约克郡猪是从Archer农场获得的，体重为20-30千克。用异氟烷对约克郡猪进行麻醉，以便完成所述方法。在给药之前对注射部位进行干燥脱毛并且清洗。每只动物接受3次重复的给药，使用31号x1.5mm的空心针。6.5测定流感病毒疫苗效力为了测定对按上述方法制备的流感病毒疫苗制剂的抗体反应，使用了以下ELISA测定。将存在于pH9.6的碳酸盐緩沖液(购自Sig迈aChemicalCompany)中的浓度为2mg/mL的曱型流感PR384纯化的/失活的抗原(来自CharlesRiverSPAFAS)用作测试抗原。用所述测试抗原涂敷微量滴定板(96—孑LImmunoPlate,具有MaxiSorp表面)。通过在37t:下培养大约1小时，用所述抗原对所述平板的表面进行包衣。然后，用封闭溶液，含有Tween20(PBS-TW20)和5%(w/v)脱脂干奶的磷酸緩冲的盐溶液封闭所述平板。在37T下用封闭緩冲液再培养所述平板2小时。然后用PBS-TW20洗涤平板表面两次。合并来自测试或对照组的每只小鼠的血清，并且以1:123和1:370的稀释比例测定合并的血清。在37C下用一级抗体与包衣的和封闭的平板一起培养1小时。用PBS-TW20洗涤平板3次，并且添加抗小鼠辣根过氧化酶缀合物的混合物。HRP缀合物库包括5种缀合物SigmaA4416,SouthernBiotech1090-05，SouthernBiotech1070-05，SouthernBiotech1080-05和SouthernBiotech1100-05。所有缀合物都以1:15，000的稀释比例存在于最终混合物中。在37n下让HRP二级抗体混合物在所述平板上再培养1小时。洗涤所述平板，并且添加TMB底物，以便显色，让颜色在黑暗中显现30分钟。通过添加0.5M硫酸终止显色。在450nm波长下对平板进行读数，使用TECANSUNRISE平板读数仪。用于测定终点效价的ELISA是以与上文所述相同的方式进行的，不过采用了更多的稀释比例(1:100，1:200，1:400，1:800,1:1600，1:3200，1:6400)。在图6中作图的效价值是通过发现内插数据曲线与3x的非免疫值的内插曲线的交点测定的。结果图1-5表示用流感病毒疫苗对小鼠进行免疫之后对上述各种流感病毒疫苗制剂的血清抗体反应。血清是在免疫之后20-22天之内获得的。在每一种场合下，通过上述ELISA测定在1:123的稀释比例下对甲型流感抗原的血清反应。参见图1-5，含有普卢兰尼克F127,明胶，甲基纤维素和羧甲基纤维素与F127组合的流感病毒疫苗制剂，导致了与单独使用流感病毒疫苗相比抗体血清反应的增强。最重要的是，用上述接种物制剂增强的抗体反应与真皮内区室兼容，因为用上述任一制剂都没有观察到阴性皮肤结果。另外，用于本发明的真皮内流感疫苗制剂的分子业已被批准临床使用，例如，甲基纤维素和普卢兰尼克F127,表明所述疫苗制剂可用于人体。图6表示在用流感病毒疫苗对小鼠免疫之后上述各种流感病毒疫苗制剂的血清抗体反应。其中，在图1-5中所示出的数据是通过分析来自特定测试或对照组的动物的血清库得到的。图6的数据提供了单个动物反应。P-值小于0.05表明接受甲基纤维素补充的流感病毒疫苗的动物的群体平均效价的显著改变。图7表示包括甲基纤维素和甲基纤维素与流感病毒疫苗的接种物与真皮组织兼容，这是在给药之后l小时，6小时和24小时对施用部位进行监测的结果。本文所披露并且要求保护的发明并不局限于由本文所披露的具体实施方案所限定的范围，因为这些实施方案是用于说明本发明的若干方面的。任何等同的实施方案都被认为属于本发明的范围。实际上，除了本文所示出的和所披露的之外，对本发明的各种改进对阅读以上说明的本领域技术人员来说是显而易见的。这种改进同样被认为属于所述权利要求书的范围。在本申请中，引用了不同的文献。这些文献的内容被以全文形式出于各种目的收作本申请的参考。权利要求1.一种用于施用到对象皮肤的真皮内区室的真皮内疫苗制剂，包括抗原性或免疫原性剂和一种分子，其中，所述分子能增强免疫反应。2.—种用于施用到对象皮肤的真皮内区室的真皮内疫苗制剂，包括抗原性或免疫原性剂、胶凝剂和粘膜附着性分子，其中，所述免疫反应被增强了。3.—种用于施用到对象皮肤的真皮内区室的真皮内疫苗制剂，包括抗原性或免疫原性剂、胶凝剂和生物附着性分子，其中，所述免疫反应被增强了。4.如权利要求1-3中任意一项的真皮内疫苗制剂，其中，所述制剂不是脂质体或胶束。5.如权利要求2的真皮内疫苗制剂，其中，所述胶凝剂是普卢兰尼克F127，而所述粘膜附着性分子是羧甲基纤维素。6.如权利要求3的真皮内疫苗制剂，其中，所述胶凝剂是普卢兰尼克F127，而所述生物附着性分子是羧甲基纤维素。7.—种真皮内疫苗制剂，包括抗原性或免疫原性剂和胶凝剂。8.如权利要求7的真皮内疫苗制剂，其中，所述胶凝剂是发生热诱导的物理转变的聚合物，其在所述制剂的温度提高到超过由第一温度和第二温度组成的温度范围时，从液体转变成凝胶。9.如权利要求8的真皮内疫苗制剂，其中，所述物理转变不包括脂质体或胶束。10.如权利要求8的真皮内疫苗制剂，其中，所述第一温度为1-20而所述第二温度为25-37X:。11.如权利要求8的真皮内疫苗制剂，其中，所述从液体到凝胶的物理转变是在生理温度下逸行的。12.如权利要求11的真皮内疫苗制剂，其中，所述生理温度低于40°C。13.如权利要求8的真皮内疫苗制剂，其中，所述聚合物是聚氧化烯嵌段共聚物。14.如权利要求13的真皮内疫苗制剂，其中，所述聚氧化烯嵌段共聚物包括第一种聚氧化烯的至少一个嵌段和第二种聚氧化烯的至少一个嵌段。15.如权利要求14的真皮内疫苗制剂，其中，所述第一种聚氧化烯是聚氧化乙烯，而第二种聚氧化烯是聚氧化丙烯。16.如权利要求8的真皮内疫苗制剂，其中，所述聚合物选自下列一组普卢兰尼克F127，普卢兰尼克F68,普卢兰尼克F108，普卢兰尼克F87，普卢兰尼克L81,普卢兰尼克L92，普卢兰尼克LlOl，普卢兰尼克L121，普卢兰尼克L122，普卢兰尼克L141，PlurinicL180，和普卢兰尼克L185。17.如权利要求1-3中任意一项的真皮内疫苗制剂，其中，所述抗原性或免疫原性剂是来自动物、植物、细菌、原生动物、寄生虫、病毒或它们的组合的抗原。，18.如权利要求1-3中任意一项的真皮内疫苗制剂，其中，所述抗原性或免疫原性剂是胂瘤特异性抗原。19.如权利要求l-3中任意一项的真皮内疫苗制剂，其中，所述所述制剂包括至少两种抗原性或免疫原性剂。20.—种用于施用到对象皮肤的真皮内区室的真皮内疫苗制剂，包括抗原性或免疫原性剂和粘膜附着性物质。21.—种用于施用到对象皮肤的真皮内区室的真皮内疫苗制剂，包括抗原性或免疫原性剂和生物附着性物质。22.如权利要求20的真皮内疫苗制剂，其中，所述粘膜附着性物质选自下列一组聚卡波非、carobopol、卡波姆、壳聚糖、外源凝集素、甲基纤维素、羧曱基纤维素、藻酸钠、明胶、果胶、阿拉伯胶和聚维酮。23.如权利要求21的真皮内疫苗制剂，其中，所述生物附着性物质选自下列一组聚卡波非、carobopol、卡波姆、壳聚糖、外源凝集素、甲基纤维素、羧曱基纤维素、藻酸钠、明胶、果胶、阿拉伯胶和聚维酮。24.如权利要求1-3中任意一项的真皮内疫苗制剂，还包括至少一种添加剂。25.如权利要求24的真皮内疫苗制剂，其中，所述添加剂选自下列一组佐剂、赋形剂、雖定剂、渗透促进剂、粘膜附着性分子和生物附着性分子。26.如权利要求25的真皮内疫苗制剂，其中，所述佐剂是选自下列一组的佐剂单磷酸类脂A(MPL);包括CpG基序的寡核苷酸、DDA、细胞因子、皂苷、热休克蛋白、MF-59、明矾盐和磷酸钙。27.—种用于施用到对象皮肤的皮肤区室的皮肤疫苗制剂，包括抗原性或免疫原性剂和一种分子，其中，所述分子能增强所述免疫反应。28.—种用于施用到对象皮肤的皮肤区室的皮肤疫苗制剂，包括抗原性或免疫原性剂、胶凝剂和粘膜附着性分子，其中，所述免疫反应被增强了。29.—种用于施用到对象皮肤的皮肤区室的皮肤疫苗制剂，包括抗原性或免疫原性剂、胶凝剂和生物附着性分子，其中，所述免疫反应被增强了。30.如权利要求27-29中任意一项的皮肤疫苗制剂，其中，所述制剂不是脂质体或胶束。31.如权利要求29的皮肤疫苗制剂，其中，所述胶凝剂是普卢兰尼克F127，而所述粘膜附着性分子是羧甲基纤维素。32.如权利要求29的皮肤疫苗制剂，其中，所述胶凝剂是普卢兰尼克F127,而所述生物附着性分子是羧甲基纤维素。33.包括抗原性或免疫原性剂和胶凝剂的皮肤疫苗制剂。34.如权利要求33的皮肤疫苗制剂，其中，所述胶凝剂是发生热诱导的物理转变的聚合物，当所述制剂的温度提高到超过由第一温度和第二温度组成的温度范围时，它从液体转变成凝胶。35.如权利要求34的皮肤疫苗制剂，其中，所述物理转变不包括脂质体或胶束。36.如权利要求34的皮肤疫苗制剂，其中，所述第一温度为1-20'C，而所述笫二温度为25-37匸。37.如权利要求34的皮肤疫苗制剂，其中，所述从液体到凝胶的物理转变是在生理温度下进行的。38.如权利要求34的皮肤疫苗制剂，其中，所述生理温度低于40r。39.如权利要求34的皮肤疫苗制剂，其中，所述聚合物是聚氧化烯嵌段共聚物。40.如权利要求39的皮肤疫苗制剂，其中，所述聚氧化烯嵌段共聚物包括第一种聚氧化烯的至少一个嵌段和第二种聚氧化烯的至少一个嵌段。41.如权利要求39的皮肤疫苗制剂，其中，所述第一种聚氧化烯是聚氧化乙烯，而第二种聚氧化烯是聚氧化丙烯。42.如权利要求34的皮肤疫苗制剂，其中，所述聚合物选自下列一组普卢兰尼克F127，普卢兰尼克F68，普卢兰尼克F108,普卢兰尼克F87，普卢兰尼克L81，普卢兰尼克L92,普卢兰尼克LlOl，普卢兰尼克L121,普卢兰尼克L122，普卢兰尼克L141，PlurinicL180,和普卢兰尼克L185。43.如权利要求27-29中任意一项的皮肤疫苗制剂，其中，所述抗原性或免疫原性剂是来自动物、植物、细菌、原生动物、寄生虫、病毒或它们的组合的抗原。44.如权利要求27-29中任意一项的皮肤疫苗制剂，其中，所述抗原性或免疫原性剂是肿瘤特异性抗原。45.如权利要求27-29中任意一项的皮肤疫苗制剂，其中，所述制剂包括至少两种抗原性或免疫原性剂。46.—种用于施用到对象皮肤的皮肤区室的皮肤疫苗制剂，包括抗原性或免疫原性剂和粘膜附着性物质。47.—种用于施用到对象皮肤的皮肤区室的皮肤疫苗制剂，包括抗原性或免疫原性剂和生物附着性物质。48.如权利要求46的皮肤疫苗制剂，其中，所述粘膜附着性物质选自下列一组聚卡波非、carobopol、卡波姆、壳聚糖、外源凝集素、曱基纤维素、羧甲基纤维素、藻酸钠、明胶、果胶、阿拉伯胶和聚维酮。49.如权利要求47的皮肤疫苗制剂，其中，所述生物附着性物质选自下列一组聚卡波非、carobopol、卡波姆、壳聚糖、外源凝集素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、藻酸钠、明胶、果胶、阿拉伯胶和聚维酮。50.如权利要求27-29中任意一项的皮肤疫苗制剂，还包括至少一种添力口剂。51.如权利要求50的皮肤疫苗制剂，其中，所述添加剂选自下列一组佐剂、赋形剂、稳定剂、渗透促进剂、粘膜附着性分子和生物附着性分子。52.如权利要求51的皮肤疫苗制剂，其中，所述佐剂是选自下列一组的佐剂单磷酸类脂A(MPL)、包括CpG基序的寡核苷酸、DDA、细胞因子、皂苷、热休克蛋白、MF-59、明矾盐和磷酸钙。53.—种用于施用到对象皮肤的表皮内区室的表皮疫苗制剂，包括抗原性或免疫原性剂和一种分子，其中，所述分子能增强所述免疫反应。54.—种用于施用到对象皮肤的表皮区室的表皮疫苗制剂，包括抗原性或免疫原性剂、胶凝剂和粘膜附着性物质，其中，所述免疫反应被增强了。55.—种用于施用到对象皮肤的表皮区室的表皮疫苗制剂，包括抗原性或免疫原性剂、胶凝剂和生物附着性分子，其中，所述免疫反应被增强了。56.如权利要求27-29中任意一项的表皮疫苗制剂，其中，所述制剂不是脂质体或胶束.57.如权利要求54的表皮疫苗制剂，其中，所述胶凝剂是普卢兰尼克F127,而所述粘膜附着性分子是羧甲基纤维素。58.如权利要求54的表皮疫苗制剂，其中，所述胶凝剂是普卢兰尼克F127，而所述生物附着性分子是羧甲基纤维素。59.—种表皮疫苗制剂，包括抗原性或免疫原性剂和胶凝剂。60.如权利要求59的表皮疫苗制剂，其中，所述胶凝剂是发生热诱导的物理转变的聚合物，当所述制剂的温度提高到超过由第一温度和第二温度组成的温度范围时，所述聚合物从液体转变成凝胶。61.如权利要求60的表皮疫苗制剂，其中，所述物理转变不包括脂质体或胶束。62.如权利要求60的表皮疫苗制剂，其中，所述第一温度为1-20X:，而所述第二温度为25-37TC。63.如权利要求60的表皮疫苗制剂，其中，所述从液体到凝胶的物理转变是在生理温度下进行的。64.如权利要求60的表皮疫苗制剂，其中，所述生理温度低于40n。65.如权利要求60的表皮疫苗制剂，其中，所述聚合物是聚氧化烯嵌段共聚物。66.如权利要求65的表皮疫苗制剂，其中，所述聚氧化烯嵌段共聚物包括第一种聚氧化烯的至少一个嵌段和第二种聚氧化烯的至少一个嵌段。67.如权利要求66的表皮疫苗制剂，其中，所述第一种聚氧化烯是聚氧化乙烯，而第二种聚氧化烯是聚氧化丙烯。68.如权利要求60的表皮疫苗制剂，其中，所述聚合物选自下列一组普卢兰尼克F127,普卢兰尼克F68，普卢兰尼克F108，普卢兰尼克F87，普卢兰尼克L81，普卢兰尼克L92，普卢兰尼克LlOl，普卢兰尼克L121，普卢兰尼克L122，普卢兰尼克L141，PlurinicL180，和普卢兰尼克L185。69.如权利要求53-55中任意一项的表皮疫苗制剂，其中，所述抗原性或免疫原性剂是来自动物、植物、细菌、原生动物、寄生虫、病毒或它们的组合的抗原。70.如权利要求53-55中任意一项的表皮疫苗制剂，其中，所述抗原性或免疫原性剂是肿瘤特异性抗原。71.如权利要求53-55中任意一项的表皮疫苗制剂，其中，所述制剂包括至少两种抗原性或免疫原性剂。72.—种用于施用到对象皮肤的真皮区室的表皮疫苗制剂，包括抗原性或免疫原性剂和粘膜附着性物质.73.—种用于施用到对象皮肤的真皮区室的表皮疫苗制剂，包括抗原性或免疫原性剂和生物附着性物质。74.如权利要求72的表皮疫苗制剂，其中，所述粘膜附着性物质选自下列一组聚卡波非、carobopol、卡波姆、壳聚糖、外源凝集素、曱基纤维素、羧曱基纤维素、藻酸钠、明胶、果胶、阿拉伯胶和聚维酮。75.如权利要求73的表皮疫苗制剂，其中，所述生物附着性物质选自下列一组聚卡波非、carobopol、卡波姆、壳聚糖、外源凝集素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、藻酸钠、明胶、果胶、阿拉伯胶和聚维酮。76.如权利要求53-55中任意一项的表皮疫苗制剂，还包括至少一种添加剂。77.如权利要求76的表皮疫苗制剂，其中，所述添加剂选自下列一组佐剂、赋形剂、稳定剂、渗透促进剂、粘膜附着性分子和生物附着性分子。78.如权利要求77的表皮疫苗制剂，其中，所述佐剂是选自下列一组的佐剂单磷酸类脂A(MPL)、包括CpG基序的寡核苷酸、DDA、细胞因子、皂苷、热休克蛋白、MF-59、明矾盐和磷酸钙。79.—种用于将疫苗制剂施用到对象皮肤的真皮内区室的方法，所述方法包括将含有抗原性或免疫原性剂和一种分子的疫苗制剂施用到真皮内区室，其中，所述分子能增强所述制剂对免疫细胞的呈递。80.—种用于将疫苗制剂施用到对象皮肤的真皮内区室的方法，其中，所述制剂包括抗原性或免疫原性剂和一种分子，所述方法包括用小号针将所述制剂递送到真皮内区室，所述针的长度足以刺入真皮内区室，并且出口的深度位于真皮内区室内，以便所述制剂沉积到1-2mm真皮内区室的深度上，并且所述分子能增强所述制剂对真皮内区室的免疫细胞的呈递。81.如权利要求80的方法，其中，当所述针插入皮肤时，所述出口深度为大约500jam-2mm。82.如权利要求80的方法，其中，当所述针插入皮肤时，所述出口$罙度为大约750jim-l.5mm。83.如权利要求80的方法，其中，所述针的长度为大约300um—2mni。84.如权利要求80的方法，其中，所述针的长度为大约500jim-lmm。85.—种用于将疫苗制剂施用到对象皮肤的真皮内区室的方法，所皮内区室。86.—种用于将疫苗制剂施用到对象皮肤的真皮内区室的方法，所述方法包括将含有抗原性或免疫原性剂和粘膜附着性物质的疫苗制剂施用到真皮内区室。87.—种用于将疫苗制剂施用到对象皮肤的真皮内区室的方法，所述方法包括将含有抗原性或免疫原性剂和一种分子的疫苗制剂施用到真皮内区室，其中，所述分子能增强所述制剂对免疫细胞的呈递。88.—种用于将疫苗制剂施用到对象皮肤的真皮内区室的方法，所皮内区室。89.—种用于将疫苗制剂施用到对象皮肤的真皮内区室的方法，所述方法包括将含有抗原性或免疫原性制剂和粘膜附着性物质的疫苗制剂施用到真皮内区室。90.—种用于真皮内递送包括抗原性制剂和一种分子的疫苗制剂的方法，其中，所述分子能增强对所述抗原性制剂的免疫反应，并且其中所述疫苗制剂沉积在1-2mm的深度。91.一种用于表皮递送包括抗原性制剂和一种分子的疫苗制剂的方法，其中，所述分子能增强对所述抗原性制剂的免疫反应，并且，其中，所述疫苗制剂沉积在大约0-250jam的深度。92.如权利要求85-89中任意一项的方法，还包括通过小号针递送所述制剂，所述针的长度足以刺入真皮内区室，并且出口位于真皮内区室的深度，以便制剂沉积在l-2mm的真皮内区室深度。93.—种将疫苗制剂施用到对象皮肤的表皮区室的方法，其中，所述制剂包括抗原性或免疫原性剂和一种分子，所述方法包括使用微型研磨器械将所述制剂递送到表皮区室，其中，所述微型研磨器械包括微型凸起，其长度足以刺入皮肤的角质层。94.如权利要求21的真皮内疫苗制剂，其中，所述生物附着性物质选自下列一组聚卡波非、carobopol、卡波姆、壳聚糖、外源凝集素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、藻酸钠、明胶、果胶、阿拉伯胶和聚维酮。全文摘要本发明涉及皮肤疫苗制剂，它被设计成将免疫原性组合物定向递送到皮肤的皮肤区室，包括真皮内和表皮区室。本发明的皮肤疫苗制剂包括抗原性或免疫原性剂和至少一种分子，例如，化学制剂，它能增强抗原性或免疫原性剂向真皮内区室或表皮区室的免疫细胞的呈递和/或可利用性，导致了增强的免疫反应。本发明的皮肤疫苗制剂具有增强了的效力，因为在将抗原性或免疫原性剂递送到真皮内区室或表皮区室时，对存在于它里面的免疫细胞具有增强了的呈递和/或可利用性。所述皮肤疫苗制剂增强了的效力导致了在一个真皮内或表皮剂量之后产生治疗有效的免疫反应，所用抗原性或免疫原性剂的剂量比常规更低，并且没有必要进行强化免疫。文档编号A61K31/716GK101115472SQ200480017751公开日2008年1月30日申请日期2004年5月12日优先权日2003年5月12日发明者G·蒋,K·马尔,P·洛朗,R·坎贝尔,V·沙利文申请人:贝克顿·迪金森公司