专利名称：取代的4－氨基－1－(吡啶基甲基)哌啶化合物的萘－1,5－二磺酸盐的制作方法
背景技术：
发明领域本发明涉及4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的萘-1，5-二磺酸盐，该盐可用作毒蕈碱性受体拮抗剂。本发明也涉及包含这些盐形式的药物组合物、使用这些盐形式治疗由毒蕈碱性受体介导的医学病症的方法以及制备这些盐形式的方法。
技术现状毒蕈碱性受体拮抗剂可用于治疗各种由毒蕈碱性受体介导的医学病症，例如活动过度性膀胱(OAB)、肠易激综合征(IBS)、哮喘和慢性阻塞性肺疾病(COPD)。2002年10月30日和2003年7月11日提交的普通转让的美国临时申请No.60/422,229和60/486,483、和2003年10月29日提交的美国专利申请10/696,464公开了新颖的取代的4-氨基-1-(吡啶基甲基)哌啶和相关化合物，它们可用作毒蕈碱性受体拮抗剂。更具体地，在这些申请中具体公开了化合物4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶是有效的毒蕈碱性受体拮抗剂。
4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的化学结构由式I所代表
为了有效地使用这种化合物作为治疗剂，期望具有能够容易制造的并且具有可接受的化学和物理稳定性的盐形式。例如，高度期望这样一种盐形式，在该盐的制备和随后的贮存期间杂质的形成最小化。另外，盐形式应当具有可接受的吸湿性，也就是说它应当保持为自由流动的粉末，当暴露于大气水分时不被潮解。以前没有报道过这样的盐形式。因此，存在对式I化合物的稳定的、非潮解的盐形式的需求。
发明概述本发明提供4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的萘-1，5-二磺酸盐，它们可用作毒蕈碱性受体拮抗剂。在本发明的盐中，萘-1，5-二磺酸与4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的摩尔比或化学计量从约0.7至约1.1。
不象这种化合物的其他盐那样，已经发现本发明的萘-1，5-二磺酸盐在该盐的形成和随后的贮存期间不产生显著量的不需要的杂质。另外，不象其他盐形式那样，已经发现本发明的萘-1，5-二磺酸盐具有可接受的吸湿性，当暴露于大气水分时不被潮解。
因此，在其组合物方面之一，本发明提供4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶或其溶剂化物的萘-1，5-二磺酸盐；其中萘-1，5-二磺酸与4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的摩尔比从约0.7至约1.1。在本发明这方面的具体实施方式
中，该盐形式是无定形粉末。
在另一个其组合物方面，本发明提供药物组合物，包含药学上可接受的载体和本发明的4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐。
式I化合物是毒蕈碱性受体拮抗剂。因此，在其方法方面之一，本发明提供治疗哺乳动物通过用毒蕈碱性受体拮抗剂治疗而缓解的医学病症的方法，该方法包含给予该哺乳动物治疗有效量的药物组合物，所述组合物包含药学上可接受的载体和本发明的4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐。
在另一个其方法方面，本发明提供治疗哺乳动物活动过度性膀胱的方法，该方法包含给予该哺乳动物治疗有效量的药物组合物，所述组合物包含药学上可接受的载体和本发明的4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐。
本发明还涉及制备式I化合物的萘-1，5-二磺酸盐的方法。因此，在另一个其方法方面，本发明提供制备4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的萘-1，5-二磺酸盐的方法，该方法包含使4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶与约0.7至约1.1摩尔当量的萘-1，5-二磺酸或其水合物接触。
本发明还涉及用在疗法中或者用作药物的本发明的4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐。
另外，本发明涉及本发明的4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐用于制备药物的用途，尤其用于制备治疗通过用毒蕈碱性受体拮抗剂治疗而缓解的医学病症、例如活动过度性膀胱的药物。
发明的详细说明本发明提供4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的某些萘-1，5-二磺酸盐。这些盐中的活性成分(也就是式I化合物)含有一个具有(S)构型的手性中心。不过，本领域技术人员将理解，除非另有指定，微量的(R)立体异构体也可能存在于本发明的组合物中，只要该组合物作为整体的实用性不因这样的异构体的存在而削弱即可。
如果需要的话，可以利用可供选择的命名法来描述式I化合物及其萘-1，5-二磺酸盐。例如，式I化合物也可以用AutoNom(MDL，SanLeandro California)命名如下2-[(S)-1-(7-{异丙基-[1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶-4-基]氨基}庚基)吡咯烷-3-基]-2，2-二苯基乙酰胺。另外，萘-1，5-二磺酸盐也被称为萘二磺酸盐。
定义在描述本发明的化合物、组合物、方法和过程时，下列术语具有下列含义，另有指定除外。
术语“活动过度性膀胱”或“OAB”指在症状上以尿急、尿失禁、排尿频率增加和/或夜间排尿等为特征的病症。术语“尿急”指强烈和突然的排空膀胱的欲望。
术语“溶剂化物”指由一个或多个溶质分子、即本发明化合物和一个或多个溶剂分子形成的复合物或聚集体。代表性的溶剂例如包括水、甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸等。当溶剂是水时，所形成的溶剂化物是水合物。
术语“治疗有效量”表示在对需要治疗的患者给药时足以实现治疗的量。
本文所用的动词“治疗”或名词“治疗”表示治疗患者、例如哺乳动物(特别是人类或陪伴动物)的疾病或医学病症(例如活动过度性膀胱)或者治疗的行为，这包括(a)防止患者该疾病或医学病症的发生，也就是预防性治疗；(b)改善患者该疾病或医学病症，也就是消除该疾病或医学病症或者导致其消退；(c)抑制患者该疾病或医学病症，也就是延缓或阻止该疾病或医学病症的发展；或者(d)缓解患者该疾病或医学病症的症状。
术语“单位剂型”表示适合于给患者服用的物理离散单元，也就是说，每个单元含有预定量的本发明盐，经过计算其单独或者与一个或多个另外的单元组合产生所需的治疗效果。例如，这类单位剂型可以是胶囊剂、片剂、丸剂等。
本发明的萘-1，5-二磺酸盐本发明的4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐可以从4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶和萘-1，5-二磺酸或其水合物制备。
在本发明的盐类中，萘-1，5-二磺酸与4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的摩尔比从约0.7至约1.1，包括约0.8至约1.05和约0.9至约1。该摩尔比的其他范围包括约0.7至约1.05、约0.7至约1、约0.7至约0.95、约0.8至约1.1、约0.8至约1、约0.8至约0.95、约0.9至约1.1、约0.9至约1.05、约0.9至约0.95、约0.95至约1.05和约0.95至约1。
萘-1，5-二磺酸与4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的摩尔比可以借助本领域技术人员可用的各种方法加以测定。例如，这样的摩尔比可以借助1H NMR测定。在使用1H NMR时，摩尔比通常是这样测定的，比较萘-1，5-二磺酸萘环质子的积分(integration)与式I化合物吡啶环质子的积分。作为替代选择，可以利用元素分析和HPLC方法测定摩尔比。
用于本发明的4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶可以利用下列实施例所述工艺容易从商业上可获得的原料和试剂加以制备；或者利用本申请背景一节所述普通转让的美国申请所描述工艺。
萘-1，5-二磺酸(也被称为阿姆斯特朗酸)在商业上例如可从Aldrich，Milwaukee，Wisconsin获得。在一种实施方式中，用于本发明的萘-1，5-二磺酸是水合物，例如四水合物。
为了制备本发明的盐，通常使4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶与约0.7至约1.1摩尔当量的萘-1，5-二磺酸或其水合物接触。一般而言，这种反应是在惰性稀释剂中、在约-20℃至约40℃的温度下进行的；包括约0℃至约20℃，例如约2℃至约15℃。适合于这种反应的惰性稀释剂包括但不限于甲醇、乙醇、异丙醇、异丁醇、乙酸乙酯等。
一旦反应完成，借助任意常规手段从反应混合物中分离4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐，例如沉淀、浓缩、离心等。
在一种实施方式中，本发明的盐是无定形粉末。这类无定形粉末通常是这样制备的，(1)形成该盐在第一惰性稀释剂中的溶液，在其中该盐是易溶的(也就是说溶解度通常大于约50mg/mL)；然后(2)使此溶液与第二惰性稀释剂(其可以是惰性稀释剂的组合)接触，在其中该盐具有较低或没有溶解度(也就是说溶解度通常小于约1mg/mL)，形成沉淀。
适合于形成所述的盐溶液的第一惰性稀释剂包括但不限于甲醇、乙醇、异丙醇等，或者它们的组合。一般而言，将盐溶于形成基本上均匀的溶液所必需的最少量的第一惰性稀释剂。
适合于使盐沉淀的第二惰性稀释剂包括但不限于甲基叔丁基醚、乙酸异丙酯，或者它们与异丙醇的组合。在一种实施方式中，采用异丙醇与甲基叔丁基醚的2∶1v/v混合物作为第二惰性稀释剂。
如果需要的话，在将该溶液加入第二惰性稀释剂之前，可以将盐在第一惰性稀释剂中的溶液用活性炭处理。通常，向溶液加入活性碳，并将所得混合物在0℃至约30℃的温度下混合、搅拌或搅动约0.5至约2小时。然后过滤混合物，以除去活性炭和任何其他可能存在的不溶物。
为了形成无定形粉末，通常向第二惰性稀释剂缓慢加入盐在第一惰性稀释剂中的溶液以生成沉淀。这种过程通常是在约0℃至约10℃的温度下进行的，例如约2℃至约8℃。就含有约0.20g/mL至约0.40g/mL所要沉淀的盐的溶液而言，加入速率通常从约50mL/分钟至约70mL/分钟。
形成后，利用常规工艺分离沉淀，例如过滤等，得到无定形粉末。如果需要的话，可以将沉淀用惰性稀释剂洗涤，例如甲基叔丁基醚，然后充分干燥。
除了别的性质之外，已经发现本发明的4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐与这种化合物的其他盐形式相比具有意外的和惊人的化学与物理稳定性。在这一点上，已经发现4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的某些盐有化学分解的倾向，从而导致杂质的形成。例如，在4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的某些盐中检测到的两种杂质是3-[4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}哌啶-1-基甲基]-4-甲氧基-1-甲基吡啶盐(杂质A)和4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-氧代-1，4-二氢吡啶-3-基甲基)哌啶(杂质B)。
令人吃惊地，已经发现本发明的4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐在该盐的形成或长期贮存后不会生成显著量的杂质A或B。因此，本发明的组合物通常将含有少于0.2wt.％、包括少于0.1wt.％的杂质A或B或此二者。在一种实施方式中，本发明的组合物基本上不含杂质A或B或此二者，也就是说，这些杂质低于使用标准分析方法的定量限，例如HPLC。
另外，已经发现本发明的4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐在暴露于大气水分时具有意外的和惊人的物理稳定性。具体地说，已经发现本发明的盐在暴露于大气水分时不会潮解，并保持为自由流动的粉末。例如，当在30℃和60％相对湿度下贮存15天时，本发明的盐保持为自由流动的粉末。相反，其他的盐、例如二-和三甲磺酸盐在相同贮存条件下吸收水分形成半固体或油。
本发明盐的这些性质进一步阐述在下列实施例中。
药物组合物本发明的4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐通常是以药物组合物的形式给予患者。这类药物组合物可以借助任何可接受的给药途径对患者给药，包括但不限于口服、直肠、阴道、鼻、吸入、局部(包括透皮)和肠胃外给药方式。
因此，在其组合物方面之一，本发明涉及药物组合物，其包含药学上可接受的载体或赋形剂和治疗有效量的本发明的4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐。任选地，如果需要的话，这类药物组合物可以含有其他治疗剂和/或配制剂。
本发明的药物组合物通常含有治疗有效量的本发明盐(也就是活性成分)。通常，这类药物组合物将含有约0.1至约95重量％的活性成分，优选约5至约70重量％、更优选约10至约60重量％的活性成分。
在本发明的药物组合物中可以使用任意常规的载体或赋形剂。特定载体或赋形剂或者载体或赋形剂组合的选择将依赖于用于治疗特定患者或者医学病症或疾病状态类型的给药方式。在这一点上，适合于特定给药方式的药物组合物的制备完全在药学领域技术人员的技能范围内。另外，这类组合物的成分在商业上例如可从Sigma，P.O.Box14508，St.Louis，MO 63178获得。进一步阐述的话，常规的制剂工艺参见RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，20thEdition，Lippincott Williams & White，Baltimore，Maryland(2000)和H.C.Ansel et al.，Pharmaceutical Dosage Forms and DrugDelivery Systems，7th Edition，Lippincott Williams & White，Baltimore，Maryland(1999)。
能够充当药学上可接受的载体的材料的代表性实例包括但不限于下列(1)糖类，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素，例如微晶纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和纤维素乙酸盐；(4)粉碎的黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂用蜡；(9)油类，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇类，例如丙二醇；(11)多元醇类，例如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯类，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)藻酸；(16)无热原的水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；和(21)其他用于药物组合物中的无毒的相容性物质。
本发明的药物组合物通常是这样制备的，充分地和紧密地将本发明化合物与药学上可接受的载体和一种或多种任选的成分混合或掺合。如果必要或需要的话，然后可以利用常规工艺和设备将所得均匀掺合的混合物成形或装入到片剂、胶囊剂、丸剂等中。
在一种实施方式中，本发明的药物组合物适合于口服给药。适合于口服给药的药物组合物可以是胶囊剂、片剂、丸剂、锭剂、扁囊剂、糖锭剂、粉末剂、颗粒剂的形式，或者在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液，或者水包油或油包水液体乳剂，或者酏剂或糖浆剂等等，各自含有预定量的本发明化合物作为活性成分。
当打算以固体剂型(也就是胶囊剂、片剂、丸剂等)口服给药时，本发明的药物组合物将通常将包含作为活性成分的本发明化合物和一种或多种药学上可接受的载体，例如柠檬酸钠或磷酸二钙。任选地或者作为替代选择，这类固体剂型还可以包含(1)填充剂或增容剂，例如淀粉、微晶纤维素、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)保湿剂，例如甘油；(4)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和/或碳酸钠；(5)溶解延迟剂，例如石蜡；(6)吸收加速剂，例如季铵化合物；(7)湿润剂，例如鲸蜡醇和/或甘油单硬脂酸酯；(8)吸收剂，例如高岭土和/或膨润土；(9)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和/或其混合物；(10)着色剂；和(11)缓冲剂。
在本发明的药物组合物中还可以存在释放剂、湿润剂、包衣剂、甜味剂、矫味与香味剂、防腐剂和抗氧化剂。药学上可接受的抗氧化剂的实例包括(1)水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、偏硫酸氢钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，例如棕榈酸抗坏血酸酯、丁基化羟基茴香醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、丙基棓酸酯、α-生育酚等；和(3)金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。片剂、胶囊剂、丸剂等的包衣剂包括用于肠包衣的那些，例如纤维素乙酸邻苯二甲酸酯(CAP)、聚乙酸乙烯酯邻苯二甲酸盐(PVAP)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、异丁烯酸-异丁烯酸酯共聚物、纤维素乙酸苯三酸酯(CAT)、羧甲基乙基纤维素(CMEC)、羟丙基甲基纤维素乙酸琥珀酸酯(HPMCAS)等。
如果需要的话，本发明的药物组合物也可以被配制成提供活性成分的缓慢或控制释放，例如使用不同比例的羟丙基甲基纤维素，或者其他聚合物基质、脂质体和/或微球体。
另外，本发明的药物组合物可以任选地含有乳浊剂，经过配制以使它们可以仅仅或者优先在胃肠道的某一部分释放活性成分，并且任选地以延迟方式释放。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡类。活性成分也可以是微囊包封的形式，如果适当的话还有一种或多种上述赋形剂。
用于本发明药物组合物口服给药的固体剂型优选地被包装在单位剂型中，包括胶囊剂、片剂、丸剂等。
适合于口服给药的液体剂型例如包括药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆剂和酏剂。这类液体剂型通常包含活性成分和惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄基酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油类(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨醇的脂肪酸酯及其混合物。悬浮液除了活性成分以外还可以含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇与脱水山梨醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶及其混合物。
在另一种实施方式中，本发明的药物组合物适合于吸入给药。适合于吸入给药的药物组合物通常将是气雾剂或粉末剂的形式。这类组合物一般是利用熟知的递送装置给药的，例如计量-剂量吸入器、干粉吸入器、雾化器或类似的递送装置。
在利用加压容器吸入给药时，本发明的药物组合物通常将包含活性成分和适合的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他适合的气体。
另外，药物组合物可以是胶囊或药筒的形式(例如由明胶制成)，包含本发明化合物和适合用在粉末吸入器中的粉末。适合的粉末基质例如包括乳糖或淀粉。
本发明的化合物也可以利用已知的透皮递送系统和赋形剂透皮给药。例如，可以将本发明化合物与渗透增强剂混合，例如丙二醇、聚乙二醇单月桂酸酯、氮杂环烷-2-酮等，再掺入到贴剂或类似递送系统中。如果需要的话，在这类透皮组合物中可以使用另外的赋形剂，包括胶凝剂、乳化剂和缓冲剂。
如果需要的话，本发明的药物组合物还可以含有与本发明盐共同给药的其他治疗剂。例如，本发明的药物组合物可以进一步包含一种或多种治疗剂，选自由β2肾上腺素能受体激动剂、抗炎剂(例如皮质甾类和非甾族抗炎剂(NSAID))、其他毒蕈碱性受体拮抗剂(例如抗胆碱能剂)、抗感染剂(例如抗生素或抗病毒剂)和抗组胺剂组成的组。其他治疗剂可以使用药学上可接受的盐或溶剂化物的形式。另外，如果适当的话，其他治疗剂可以使用光学纯的立体异构体。
下列制剂阐述本发明的代表性药物组合物制剂实施例A如下制备用于口服给药的硬明胶胶囊剂成分量本发明的盐 100mg乳糖(喷雾干燥) 200mg硬脂酸镁10mg代表性工艺将各成分充分掺合，然后装入硬明胶胶囊中(每粒胶囊310mg组合物)。
制剂实施例B如下制备用于口服给药的硬明胶胶囊剂
成分 量本发明的盐20mg淀粉 89mg微晶纤维素89mg硬脂酸镁 2mg代表性工艺将各成分充分掺合，然后通过No.45目U.S.筛，装入硬明胶胶囊中(每粒胶囊 200mg组合物)。
制剂实施例C如下制备口服给药胶囊剂成分 量本发明的盐 100mg聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯 50mg淀粉粉末 250mg代表性工艺将各成分充分掺合，然后装入明胶胶囊中(每粒胶囊300mg组合物)。
制剂实施例D如下制备口服给药片剂成分 量本发明的盐 10mg淀粉 45mg微晶纤维素 35mg聚乙烯吡咯烷酮(10wt.％水溶液) 4mg羧甲基淀粉钠 4.5mg硬脂酸镁 0.5mg滑石 1mg代表性工艺将活性成分、淀粉和纤维素通过No.45目U.S.筛，充分混合。将聚乙烯吡咯烷酮溶液与所得粉末混合，然后将这种混合物通过No.14目U.S.筛。将所形成的颗粒在50-60℃下干燥，通过No.18目U.S.筛。然后向颗粒中加入羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石(预先通过No.60目U.S.筛)。混合后，将混合物在压片机上压制得到重100mg的药片。
制剂实施例E如下制备口服给药片剂成分 量本发明的盐 100mg微晶纤维素 400mg发烟二氧化硅 10mg硬脂酸 5mg代表性工艺将各成分充分掺合，然后压制成片(每片515mg组合物)。
制剂实施例F如下制备用于口服给药的单划痕片成分量本发明的盐 100mg玉米淀粉50mg交联羧甲基纤维素钠 25mg乳糖120mg硬脂酸镁5mg代表性工艺将各成分充分掺合，压制成单划痕片(每片200mg组合物)。
制剂实施例G如下制备口服给药悬液成分 量本发明的盐 1.0g富马酸 0.5g氯化钠 2.0g对羟基苯甲酸甲酯 0.15g对羟基苯甲酸丙酯 0.05g
颗粒糖 25.5g山梨糖醇(70％溶液) 12.85gVeegum k (Vanderbilt Co.) 1.0g矫味剂 0.035mL着色剂 0.5mg蒸馏水 适量至100mL代表性工艺将各成分混合形成悬浮液，每10mL悬浮液含有100mg活性成分。
制剂实施例H如下制备吸入给药的干粉剂成分量本发明的盐 1.0mg乳糖25mg代表性工艺将活性成分微粉化，然后与乳糖掺合。然后将这种经过掺合的混合物装入明胶吸入药筒中。利用粉末吸入器给予药筒内容物。
制剂实施例I如下制备处于计量剂量吸入器中的吸入给药的干粉剂代表性工艺将具有平均粒径小于10μm的微粉化粒子的10g活性化合物分散在由0.2g卵磷脂的200mL去矿物质水溶液形成的溶液中，制备含有5wt.％本发明盐和0.1wt.％卵磷脂的悬浮液。将悬浮液喷雾干燥，将所得产物微粉化成平均直径小于1.5μm的粒子。将粒子装入带有加压1，1，1，2-四氟乙烷的药筒中。
制剂实施例J如下制备可注射制剂成分量本发明的盐 0.2g乙酸钠缓冲溶液(0.4M)2.0mLHCl(0.5N)或NaOH(0.5N) 适量至pH4
水(蒸馏，无菌) 适量至20mL代表性工艺掺合上述成分，并用0.5N HCl或0.5N NaOH调节pH至4±0.5。
制剂实施例K如下制备口服给药胶囊剂成分 量本发明的盐 40.05mg微晶纤维素(Avicel PH103) 259.2mg硬脂酸镁 0.75mg代表性工艺将各成分充分掺合，然后装入明胶胶囊中(#1，White，Opaque)(每粒胶囊300mg组合物)。
制剂实施例L如下制备口服给药胶囊剂成分 量本发明的盐 99.2mg微晶纤维素(Avicel PH103) 100.05mg硬脂酸镁 0.75mg代表性工艺将各成分充分掺合，然后装入明胶胶囊中(#1，White，Opaque)(每粒胶囊200mg组合物)。
实用性本发明的4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐可用作毒蕈碱性受体拮抗剂，因此预期这类盐可用于治疗由毒蕈碱性受体介导的医学病症，也就是任意可用毒蕈碱性受体拮抗剂治疗而改善的医学病症。这类医学病症例如包括泌尿生殖道障碍，例如活动过度性膀胱或逼肌活动过多和它们的症状；胃肠道障碍，例如肠易激综合征、憩室疾病、弛缓不能、胃肠运动过多症和腹泻；呼吸道障碍，例如慢性阻塞性肺疾病、哮喘和肺纤维变性；心律失常，例如窦性心动过缓；帕金森氏病；认知障碍，例如阿尔茨海默氏病；痛经；等等。
具体地说，本发明的4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐可用于治疗哺乳动物、包括人类的平滑肌障碍。这类平滑肌障碍例如包括活动过度性膀胱、哮喘、慢性阻塞性肺疾病和肠易激综合征。
在用于治疗平滑肌障碍或其他由毒蕈碱性受体介导的病症时，本发明化合物通常将是口服、直肠、肠胃外或吸入给药的，每日一次或每天多次。活性成分的每剂给药量或每天总给药量通常将取决于患者的医师，并且将依赖于这样的因素，例如患者病症的属性与严重性、所治疗的病症、患者的年龄与一般健康状况、患者对活性成分的耐受性、给药途径等。
通常，适合于治疗平滑肌障碍或其他由毒蕈碱性受体介导的障碍的剂量将从约0.01至约50mg/kg/天的活性成分，包括约0.02至约10mg/kg/天，例如0.1至1mg/kg/天。就平均70kg的人而言，剂量将为约0.7至约3500mg活性成分/天，包括7至70mg/天。
在一种实施方式中，使用本发明的4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐治疗活动过度性膀胱。在用于治疗活动过度性膀胱时，本发明的盐通常将是经口服给药的，每日一次或每天多次，优选每日一次。优选地，治疗活动过度性膀胱的剂量将从约1至约200mg/天，包括5至100mg/天。
在另一种实施方式中，使用本发明的盐治疗呼吸障碍，例如慢性阻塞性肺疾病或哮喘。在用于治疗慢性阻塞性肺疾病或哮喘时，本发明的盐通常将是经吸入给药的，每日一次或每天多次。优选地，治疗慢性阻塞性肺疾病或哮喘的剂量将从约10μg/天至约10mg/天。
在另一种实施方式中，使用本发明的盐治疗肠易激综合征。在用于治疗肠易激综合征时，本发明的盐通常将是经口服或直肠给药的，每日一次或每天多次。优选地，治疗肠易激综合征的剂量将从约1.0至约2000mg/天。
如果需要的话，本发明的盐可以与其他治疗剂联合给药，例如在本申请背景一节公开的普通转让的美国专利申请所列举的那些。
除了别的性质之外，已经发现式I化合物及其盐是M2毒蕈碱性受体活性的强抑制剂。用于证明毒蕈碱性受体活性的大量体外和体内测定法是本领域技术人员熟知的。例如，下列实施例和在本申请背景一节公开的普通转让的美国专利申请进一步详细描述了代表性测定法。
实施例下列合成和生物学实施例供阐述本发明，并且决不被解释为限制本发明的范围。在下列实施例中，除非另有指定，下列缩写具有下列含义。下面没有定义的缩写具有它们被公认的含义。
BSA＝牛血清白蛋白CHO＝中国仓鼠卵巢DCM＝二氯甲烷DIPEA ＝二异丙基乙胺DME＝乙二醇二甲醚DMSO ＝二甲基亚砜dPBS ＝Dulbecco氏磷酸盐缓冲盐水，不含CaCl2和MgCl2EDTA ＝乙二胺四乙酸EtOAc ＝乙酸乙酯FBS＝胎牛血清FTIR ＝傅里叶变换红外HEPES ＝4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪-乙磺酸hM1＝人毒蕈碱性受体亚型1hM2＝人毒蕈碱性受体亚型2hM3＝人毒蕈碱性受体亚型3hM4＝人毒蕈碱性受体亚型4hM5＝人毒蕈碱性受体亚型5
HPLC ＝高效液相色谱Ki＝抑制作用离解常数MS ＝质谱MTBE ＝甲基叔丁基醚[3H]NMS ＝1-[N-甲基-3H]东莨菪碱甲基氯TEA ＝三乙胺THF ＝四氢呋喃TLC ＝薄层色谱TFA ＝三氟乙酸VIBC ＝容量-诱导的膀胱收缩VIBCAmp＝容量-诱导的膀胱收缩幅度在下列实施例中报道的所有温度均为摄氏度(℃)，另有指定除外。而且，除非另有注解，试剂、原料和溶剂是从供应商购买的(例如Aldrich，Fluka，Sigma等)，并且无需进一步纯化即可使用。
在下列指定条件下，利用Agilient 1100HPLC或等价仪器进行HPLCHPLC方法A柱子Agilent ZorbaxBonu s-RP 5μ4.6×250mm检测器波长 214nm柱温40℃流速1.0mL/min移动相 A＝2％乙腈，98％水，0.1％TFAB＝90％乙腈，10％水，0.1％TFA注射体积5μL运行时间62min梯度含2-40％B的AHPLC方法B柱子YMC ODSA 5μC18 4.6×50mm检测器波长 220nm
柱温 35℃流速 4.0mL/min移动相 A＝10％甲醇，90％水，0.1％TFAB＝90％甲醇，10％水，0.1％TFA注射体积 5μL运行时间 5min梯度 含0-100％B的AHPLC方法C柱子 Inertsil ODS-2C18检测器波长 254nm柱温 35℃流速 1.0mL/min移动相 A＝5％甲醇，95％水，0.1％TFAB＝95％甲醇，5％水，0.1％TFA注射体积 5μL运行时间 15min梯度 含0-100％B的AHPLC方法D柱子 ACE5C18，4.6mm×25cm检测器 DAD1，信号＝230nm/10nm，Ref＝360nm柱温 45℃流速 1.5mL/min移动相 A＝20mM TEA(pH5.65)/乙腈(98∶2，v/v)B＝100mM TEA(pH5.5)/乙腈(20∶80，v/v)注射体积 20μL运行时间 38min梯度 含10-80％B的A实施例1(S)-3-(1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷的制备步骤A-(S)-1-苄基-3-(对-甲苯磺酰氧基)吡咯烷的制备在0℃氮气氛下，于20分钟内向搅拌着的(S)-1-苄基-3-吡咯烷醇(44.3g，0.25mol)与1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(33.7g，0.3mol)的250mL叔丁基甲基醚溶液逐份加入对-甲苯磺酰氯(52.4g，0.275mol)。将反应混合物在0℃下搅拌1h。除去冰浴，将混合物在环境温度下搅拌过夜(20±5h)。加入乙酸乙酯(100mL)，继之以饱和碳酸氢钠水溶液(250mL)。将所得混合物在环境温度下搅拌1h。分离各层，将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(250mL)、饱和氯化铵水溶液(250mL)、饱和氯化钠水溶液(250mL)洗涤，然后经硫酸钠(80g)干燥。滤出硫酸钠，用乙酸乙酯(20mL)洗涤，在真空中除去溶剂，得到78.2g标题中间体，为灰白色固体(94％收率；95％纯度，HPLC方法B)。
步骤B-(S)-1-苄基-3-(1-氰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷的制备在0℃下，于5分钟内，向搅拌着的二苯基乙腈(12.18g，61.8mmol)的无水THF(120mL)溶液加入叔丁醇钾(10.60g，94.6mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌1h。在0℃下向反应混合物一次性加入(S)-1-苄基-3-(对-甲苯磺酰氧基)吡咯烷(20.48g，61.3mmol)。除去冷却浴，将反应混合物搅拌5-10min，此时反应混合物已经变为褐色均匀溶液。然后将反应混合物在40℃下加热过夜(20±5h)。使反应混合物(浅黄色悬液)冷却至室温，然后加入水(150mL)。然后在真空中除去大多数THF，加入乙酸异丙酯(200mL)。分离各层，将有机层用饱和氯化铵水溶液(150mL)、饱和氯化钠水溶液(150mL)洗涤，然后经硫酸钠(50g)干燥。滤出硫酸钠，用乙酸异丙酯(20mL)洗涤，在真空中除去溶剂，得到23.88g标题中间体，为浅褐色油(＞99％收率，75％纯度，HPLC方法B，主要被过量二苯基乙腈污染)。
步骤C-(S)-3-(1-氰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷的制备将(S)-1-苄基-3-(1-氰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷溶于乙酸异丙酯(ca.1g/10mL)，该溶液与等体积1N盐酸水溶液混合。分离所得各层，水层用等体积乙酸异丙酯萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤。在真空中除去溶剂，得到(S)-1-苄基-3-(1-氰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷盐酸盐，为浅黄色泡沫状固体(注也可以在步骤B的操作期间制备这种盐酸盐)。
向搅拌着的(S)-1-苄基-3-(1-氰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷盐酸盐(8.55g，21.98mmol)的甲醇(44mL)溶液加入披钯碳(1.71g)和甲酸铵(6.93g，109.9mmol)。将反应混合物加热至50℃，同时搅拌3h。将反应冷却至环境温度，加入水(20mL)。将所得混合物通过硅藻土垫过滤，用甲醇(20mL)洗涤。收集滤液，在真空中除去大多数甲醇。将残余物与乙酸异丙酯(100mL)和10％碳酸钠水溶液(50mL)混合。分离所得各层，水层用乙酸异丙酯(50mL)萃取。合并有机层，经硫酸钠(20g)干燥。滤出硫酸钠，用乙酸异丙酯(20mL)洗涤。在真空中除去溶剂，得到5.75g标题中间体，为浅黄色油(99.7％收率，71％纯度，HPLC)。
步骤D-(S)-3-(1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷的制备向带有磁搅拌棒和氮入口的200mL烧瓶装入(S)-3-(1-氰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷(2.51g)和80％H2SO4(19.2mL；用16mL 96％H2SO4和3.2mL H2O制备)。然后将反应混合物在90℃下加热24h或者直至根据HPLC所示原料被消耗。使反应混合物冷却至室温，然后倒在冰上(ca.50mL体积比)。向混合物缓慢加入50％氢氧化钠水溶液，同时在冰浴上搅拌，直至pH约12。加入二氯甲烷(200mL)，与水溶液混合，此时硫酸钠沉淀出来，滤出。收集滤液，分离各层。水层用二氯甲烷(100mL)萃取，合并有机层，经硫酸钠(5g)干燥。滤出硫酸钠，用二氯甲烷(10mL)洗涤。在真空中除去溶剂，得到粗产物，为浅黄色泡沫状固体(ca.2.2g，86％纯度，HPLC)。
将粗产物溶于乙醇(18mL)，同时搅拌。向该溶液加入温热的L-酒石酸(1.8g)的乙醇(14mL)溶液，将所得混合物搅拌过夜(15±5h)。过滤分离所得沉淀，得到灰白色固体(ca.3.2g，＞95％纯度，HPLC)。向该固体加入甲醇(15mL)，将所得浆液在70℃下搅拌过夜(15h)。使浆液冷却至环境温度，过滤后得到白色固体(～2.6g，＞99％纯度，HPLC)。向该固体加入乙酸乙酯(30mL)和1N氢氧化钠水溶液(25mL)。混合这种混合物，直至形成两个不同的层，然后分离两层，水层用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并有机层，经硫酸钠(10g)干燥。过滤除去硫酸钠，在真空中蒸发溶剂，得到1.55g标题中间体，为灰白色泡沫状固体(58％收率；＞99％纯度，HPLC方法C)。
实施例24-甲氧基吡啶-3-甲醛的制备在室温氮气氛下，将叔丁基锂(90.6mL，154mmol；1.7M戊烷溶液)经由套管加入到搅拌着的四氢呋喃溶液(380mL)中。将反应混合物冷却至-78℃，然后滴加2-溴(11.3mL，74.1mmol)。将反应混合物在-78℃下搅拌1小时。在-78℃下向反应混合物滴加4-甲氧基吡啶(5.79mL，57mmol)，将所得混合物在-23℃下搅拌3小时。然后将反应混合物重新冷却至-78℃，加入二甲基甲酰胺(6.62mL，85.5mmol)，继续在-78℃下搅拌1小时。然后在-78℃下将反应混合物用饱和氯化钠水溶液(100mL)缓慢猝灭，缓慢升温至室温。向反应混合物加入二乙醚(200mL)，分离各层。水层用二乙醚萃取(2×150mL)，合并有机层，经碳酸钾(20g)干燥。过滤除去碳酸钾，用二乙醚(100mL)洗涤，在减压下除去溶剂。所得粗的4-甲氧基-3-吡啶甲醛经过柱色谱纯化(SiO2，5∶95乙醇∶乙酸乙酯)，得到4.79g标题中间体，为黄色固体(61％收率；＞98％纯度，1H NMR)。
分析数据1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.43(s，1H，CHO)，8.87(s，1H，ArH)，8.63(d，1H，J＝6，ArH)，6.92(d，1H，J＝6，ArH)，3.98(s，3H，CH3O).
实施例3A4-异丙氨基-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶一苯甲酸盐的制备步骤A-1-苄基-4-异丙氨基哌啶的制备将4-氨基-1-苄基哌啶(45.8g，0.24mol)与丙酮(531mL)的溶液在室温下搅拌12小时。然后在真空中浓缩反应混合物至ca.150mL。向该混合物加入甲醇(100mL)，所得混合物在冰/水浴中冷却至5℃。加入预先在冰/水浴中冷却至5℃的三乙酰氧基硼氢化钠(61.2g，0.29mol)的甲醇(350mL)溶液，将该反应混合物在5℃下搅拌0.5小时。除去冰/水浴，将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后在冰/水浴中重新冷却至5℃。向该混合物加入浓盐酸(75mL)，直至反应混合物的pH为约3。将该混合物搅拌1小时，然后在真空中浓缩至约600mL，加入1N盐酸水溶液(200mL)，以溶解固体。水层用乙酸异丙酯(400mL)洗涤，分离各层。水层用10N氢氧化钠水溶液(200mL)调节至pH12，加入乙酸异丙酯(600mL)。将该混合物在室温下搅拌1小时，然后分离各层，将有机层用饱和氯化钠水溶液(600mL)洗涤，经硫酸钠(80g)干燥。滤出硫酸钠，用乙酸乙酯(20mL)洗涤。在真空中除去溶剂，得到52.0g标题中间体，为黄色的油(95％收率)。
步骤B-1-苄基-4-(N-叔丁氧羰基-N-异丙氨基)哌啶的制备将1-苄基-4-异丙氨基哌啶(69.7g，0.30mol)的二氯甲烷(200mL)溶液在冰/水浴中冷却至5℃。向该溶液加入二碳酸二叔丁酯(72.0g，0.33mol)的二氯甲烷(180mL)溶液。在加入期间温度没有上升超过5℃。将反应混合物在5℃下搅拌0.5小时，然后除去冰/水浴。将反应混合物搅拌24小时，然后在真空中浓缩。将所得黄色的油置于真空下达2小时，此时缓慢结晶，得到98g标题中间体，为浅黄色针形晶体(＞99％收率)。
步骤C-4-(N-叔丁氧羰基-N-异丙氨基)哌啶的制备将1-苄基-4-(N-叔丁氧羰基-N-异丙氨基)哌啶(79.0g，0.24mol)的乙醇(140mL)溶液用氮冲洗15分钟。然后将该溶液加入到2L Parr烧瓶中，其中含有10％披钯碳(15.8g；ca.50％wt.水)在乙醇(100mL)中的混合物，该溶液已用氮冲洗15分钟。在50psi氢下将该反应混合物置于Parr摇动器上达24小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，硅藻土用乙醇洗涤。然后在真空中浓缩滤液，得到57.0g标题中间体，为白色固体(＞99％收率)。
步骤D-4-(N-叔丁氧羰基-N-异丙氨基)-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的制备将4-(N-叔丁氧羰基-N-异丙氨基)哌啶(118g，0.49mol)的二氯乙烷(600mL)溶液在室温下搅拌1小时，然后加入4-甲氧基吡啶-3-羧酸酯(63.5g，0.46mol)。将所得溶液在室温下搅拌2.5小时，然后在冰/水浴中冷却至5℃。加入三乙酰氧基硼氢化钠(124g，0.58mol)的二氯乙烷(600mL)溶液，将反应混合物在5℃下搅拌15分钟。然后除去冰浴，将反应混合物在室温下搅拌4小时。然后向反应混合物加入乙酸(30mL)，将所得混合物搅拌0.5小时，然后浓缩至原始体积的一半。将该溶液在干冰/丙酮浴中冷却，加入10N氢氧化钠水溶液(350mL)。将该混合物搅拌0.5小时，然后分离有机层，用1N氢氧化钠水溶液(400mL)洗涤。水层然后用二氯甲烷(400mL)洗涤三次，合并有机层，经硫酸钠(40g)干燥。滤出硫酸钠，用二氯甲烷(100mL)洗涤，合并有机层，在真空中浓缩，得到177g标题中间体，为黄色的油(＞99％收率；74％纯度，GC)。
步骤E-4-异丙氨基-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的制备将4-(N-叔丁氧羰基-N-异丙氨基)-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶(17.0g，0.047mol)的二烷(93mL)溶液在冰/水浴中冷却至5℃。向该溶液加入浓盐酸(40mL)，将所得混合物在5℃下搅拌15分钟。然后除去冰/水浴，将反应混合物搅拌12小时。然后在真空中浓缩反应混合物至干，用二氯甲烷(100mL)稀释，缓慢加入10N氢氧化钠水溶液(注意剧烈放热)直至pH为14。将混合物搅拌0.5小时，然后分离有机层，水层用二氯甲烷(200mL)洗涤三次。然后分离有机层，经硫酸钠(10g)干燥。过滤除去硫酸钠，在真空中浓缩有机层，得到7.8g标题中间体，为黄色的油(65％收率；83％纯度，GC)。
步骤F-4-异丙氨基-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶一苯甲酸盐的制备向装有机械搅拌器和氮入口的1L反应烧瓶中加入4-异丙氨基-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶(45.7g，0.174mol)和200mL MTBE。将所得混合物加热至50-55℃以溶解固体。在50-55℃下向该溶液加入苯甲酸(21.3g，0.174mol)的100mL MTBE溶液(注可能需要加热使苯甲酸溶于MTBE)。将该混合物在50-55℃下搅拌30分钟，然后在室温下搅拌16小时。将所得固体过滤，用50mL MTBE洗涤，然后在40℃真空下干燥16小时，得到54.9g标题中间体，为白色固体(82％收率；≥99％纯度)。
实施例3B4-异丙氨基-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶一苯甲酸盐的制备步骤A-1-苄基-4-异丙氨基哌啶的制备向装有机械搅拌器、温度探针、氮入口和冷却浴的50L 3-颈圆底反应烧瓶中加入4-氨基-1-苄基哌啶(2000g，10.5mol)和二氯甲烷(20L)。加入丙酮(610.5g，10.5mol)，将反应混合物在室温下搅拌2.5小时。然后将反应混合物用冰/甲醇浴冷却至0℃至5℃，加入三乙酰氧基硼氢化钠(2673g，12.6mol)，同时维持反应混合物的温度低于25℃。然后除去冷却浴，搅拌反应混合物，直至根据GC分析仅有不到1％的原料存在(约3小时)。加入浓盐酸直至反应混合物的pH为7(约500mL)。将所得浆液通过聚丙烯滤垫过滤，固体用二氯甲烷洗涤(2×2L)。保存固体，供滤液浓缩之后使用。在40℃下浓缩滤液，直至没有冷凝物剩余。在40L分液漏斗中，将固体和蒸馏残余物溶于水(15L)，加入浓盐酸直至溶液的pH为3(约2.5L)。水层然后用二氯甲烷洗涤(2×2L)。将水层的pH用50％氢氧化钠水溶液调节至11至12(约4.5L)，该混合物用二氯甲烷萃取(5×3L)。合并有机层，用木炭(50g)脱色，经无水硫酸镁(200g)干燥。利用玻璃纤维滤垫滤出固体，浓缩滤液，直至没有冷凝物剩余，得到标题化合物(2336g，96％收率)。
步骤B-4-异丙氨基哌啶的制备将来自步骤A的产物(18g，77mmol)和甲醇(200mL)加入到500mL圆底烧瓶中，搅拌所得混合物，直至得到澄清的溶液。然后加入含有披钯碳(400mg，10％)的甲醇(2mL)，将反应混合物置于氢填充气囊下，在环境温度下搅拌18小时。然后将反应混合物通过硅藻土垫过滤，以除去催化剂，在旋转蒸发器上浓缩滤液，得到标题化合物，为黄色的油(11g，定量收率)。
步骤C-4-异丙氨基-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的制备将4-异丙氨基哌啶(1.32g，9.3mmol)和二氯甲烷(40mL)加入到装有冷却浴的100mL圆底烧瓶中。加入4-甲氧基吡啶-3-甲醛(1.44g，10.5mmol)，将反应混合物在室温下搅拌1小时。然后将反应混合物用甲醇/冰浴冷却至0℃至5℃，以这样一种速率加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.54g，12mmol)，以便维持反应混合物的温度低于10℃。当加入完全时，将反应混合物在环境温度下搅拌，直至根据GC分析仅有不到1％的原料存在(约3小时)。然后加入1N盐酸水溶液(20mL)，分离各层。将水层的pH用50％氢氧化钠水溶液调节至12，所得混合物搅拌1小时。水层然后用乙酸乙酯萃取(2×20L)，合并有机层，用木炭(1g)脱色，经无水硫酸镁(5g)干燥。通过玻璃纤维滤垫过滤除去固体，在真空下浓缩滤液。将残余物进一步在高真空下干燥1小时，得到标题化合物(2.1g，80％收率)。
步骤D-4-异丙氨基-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶一苯甲酸盐的制备将苯甲酸(1451g，11.9mol)和MTBE(5.8L)加入到装有机械搅拌器、温度计、氮入口和加热套的50L 3-颈圆底烧瓶中。将所得浆液在45℃至50℃下加热以溶解苯甲酸。在45℃至50℃下加入4-异丙氨基-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶(3130g，11.9mol)的MTBE(13.7L)溶液，将所得混合物在回流(50℃至55℃)下搅拌30分钟，然后在环境温度下搅拌16小时。然后将反应混合物用冰/甲醇浴冷却至0℃至5℃，搅拌30分钟，此时已有固体形成。将固体通过聚丙烯滤垫过滤，用MTBE(3×2L)和乙醚(3×2L)洗涤。然后将固体在室温真空烘箱中托盘干燥，直至达到恒重，得到标题化合物(3805g，82％收率)。
实施例44-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的合成(方法A)步骤A-(S)-3-(1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)-1-(7-羟基庚-1-基)吡咯烷的制备在40℃氮气氛下，向搅拌着的(S)-3-(1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷(40g，142.7mmol)与三乙胺(59.6mL，428mmol)的乙腈(1.1L)溶液滴加7-溴-1-庚醇(24mL，146mmol)的乙腈(100mL)溶液。将反应混合物加热至50℃达9小时。使反应混合物冷却，然后在减压下除去溶剂。将粗残余物溶于二氯甲烷(500mL)，有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(2×300mL)、继之以水(300mL)和饱和氯化钠水溶液(300mL)洗涤，然后经硫酸镁(10g)干燥。滤出硫酸镁，用二氯甲烷(100mL)洗涤。然后在真空中除去溶剂，得到粗产物，在短柱(SiO2)上纯化，洗脱剂为19∶1∶0.1至3∶1∶0.1的CH2Cl2/MeOH/NH4OH，得到31.35g标题中间体，为白色固体(56％收率；＞95％纯度，HPLC方法A)。
步骤B-(S)-3-(1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)-1-(7-氧代庚-1-基)吡咯烷的制备在-15℃氮气氛下，于40分钟内，向搅拌着的(S)-3-(1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)-1-(7-羟基庚-1-基)吡咯烷(31.00g，78.57mmol)、N，N-二异丙基乙胺(68.4mL，392.8mmol)与二甲基亚砜(60.7mL，785.7mmol)的二氯甲烷(780mL)溶液逐份加入三氧化硫吡啶复合物(37.5g，235.71mmol)。在加入期间维持反应混合物在-10℃与-20℃之间。然后将反应在该温度范围内搅拌40±10min。加入去离子水(300mL)，将混合物搅拌10分钟。分离有机层，用去离子水(200mL)、继之以饱和氯化钠水溶液(200mL)洗涤，有机层然后用硫酸镁(10g)干燥。滤出硫酸镁，用二氯甲烷(50mL)洗涤，在真空中减少溶剂。将所得浆状物用石油醚洗涤(2×200mL)，以除去剩余的吡啶和DMSO，所得白色固体在真空中干燥，得到33.02g标题中间体(98％收率；＞93％纯度，手性HPLC方法A)。
步骤C-4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的制备向装有氮入口的50mL烧瓶中加入(S)-3-(1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)-1-(7-氧代庚-1-基)吡咯烷(2.36g，6.0mmol)、4-异丙氨基-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶(1.61g，6.1mmol)和二氯甲烷(12mL)。将该混合物在室温下搅拌1小时，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.65g，7.8mmol)，继续在室温下搅拌20小时(此时根据HPLC测定，基本上所有起始的吡咯烷化合物都已反应)。然后加入6N盐酸水溶液(12mL)猝灭反应，分离各层。水层用二氯甲烷(12mL)洗涤，分离后，向水层加入乙酸异丙酯(40mL)。然后加入10N氢氧化钠水溶液调节水层至碱性pH14(作为替代选择，可以使用浓氢氧化铵)。分离各层，将有机层用饱和氯化钠水溶液(40mL)洗涤，经硫酸钠(5g)干燥。滤出硫酸钠，在真空中除去溶剂，得到2.4g粗产物，为浅黄色泡沫状固体(63％收率；Rf＝0.4，CH2Cl2/MeOH/NH4OH＝88∶10∶2)。粗产物进一步经过SiO2色谱纯化(60g，SiO2，CH2Cl2/MeOH/NH4OH＝90∶10∶1(300mL)至85∶15∶1(300mL))。合并适当的级分，得到0.98g标题化合物，为白色固体(26％收率；98％纯度，HPLC方法A)。
实施例54-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的合成(方法B)步骤A-己-5-炔-1-醛的制备在氮气氛下，向搅拌着的5-己炔-1-醇(10.0g，0.10mol)的二氯甲烷(1L)溶液加入DMSO(71mL，1.0mol)、继之以DIPEA(174mL，1.0mol)。将反应混合物冷却至-15℃，历经60min每10g一份加入三氧化硫吡啶复合物(79.6g，0.5mol)。将反应混合物在-15℃下搅拌1小时，然后用TLC检查(30％EtOAc/己烷)，观察到原料的完全消耗。向反应混合物加入1N盐酸水溶液(1L)，分离有机层，用1N盐酸水溶液(3×500mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(500mL)、盐水(1L)洗涤，经硫酸镁干燥，在真空中减少溶剂，得到标题中间体(注产物是挥发性的，使用冷水浴，在蒸发溶剂时除去)。
步骤B-(S)-3-(1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)-1-(己-5-炔-1-基)吡咯烷的制备在室温下，向搅拌着的(S)-3-(1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷(64.4g，0.23mol)、三乙酰氧基硼氢化钠(50.9g，0.24mol)与乙酸(13mL，0.23mol)的二氯甲烷(511mL)溶液加入己-5-炔-1-醛(26.14g，0.27mol)的二氯甲烷(256mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌过夜(ca.8小时)，然后加入浓盐酸(30mL)猝灭反应混合物，继续在室温下搅拌1小时。然后将混合物用水(750mL)稀释，用10N氢氧化钠(18mL)碱化至pH5。分离各层，有机层用1N氢氧化钠(200mL)洗涤。将有机层经硫酸镁(10g)干燥，过滤，然后在真空中浓缩，得到67.6g标题中间体，为黄色胶状固体(83％收率)。
步骤C-4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-2-炔-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的合成在55℃氮下，向(S)-3-(1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)-1-(己-5-炔-1-基)吡咯烷(17.8g，49.4mmol)、低聚甲醛(1.93g，64.2mmol)与4-异丙氨基-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶(14.3g，54.3mmol)的THF(247mL)溶液加入氯化亚铜(I)(copper(I)chloride)(0.978g，9.88mmol)。将反应混合物在55℃下搅拌5小时，然后在减压下除去溶剂。将粗残余物溶于二氯甲烷(250mL)，通过硅藻土过滤，用二氯甲烷(50mL)洗涤。将滤液用5N氢氧化钠洗涤(3×100mL)，经硫酸镁(10g)干燥。然后在真空中除去溶剂，得到29.8g标题中间体，为淡黄色固体(95％收率)。
步骤D-4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的制备将来自步骤C的炔烃中间体(28.4g，47mmol)和对-甲苯磺酰肼(87.5g，470mmol)溶于DME(700mL)，加热至回流(ca.85℃)。然后以约20mL/小时的速率滴加乙酸钠(77.1g，940mmol)的水(470mL)溶液，反应混合物继续回流18小时。然后使反应混合物冷却至室温，加入10N氢氧化钠调节pH至12。分离有机层，水层用乙酸乙酯萃取(2×400mL)。合并有机层，用1N氢氧化钠洗涤(2×350mL)，然后用1N盐酸萃取(2×350mL)。合并酸水萃取液，用10N氢氧化钠碱化至pH12，用乙酸乙酯萃取(2×400mL)。合并有机层，用饱和氯化钠水溶液(400mL)洗涤，经硫酸镁(10g)干燥。滤出硫酸镁，用乙酸乙酯(200mL)洗涤，在真空中除去溶剂，得到标题化合物。
实施例64-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的合成(方法C)步骤A-7，7-二甲氧基庚醛(heptanal)的制备将环庚烯(20.0g，0.208mol)加入到含有低水分UV-级甲醇(浓度0.5M)的三颈圆底烧瓶中。将反应混合物冷却至-78℃，通入臭氧达45分钟。用氮净化溶液，目的是防止过度氧化。加入对-甲苯磺酸(3.96g，0.021mol)，使反应混合物缓慢升温至0℃(总反应时间2小时)。加入过量固体碳酸氢钠(69.9g，0.832mol)中和酸，混合物搅拌15分钟后，加入二甲基硫(28.6g，0.46mol)。16h后，在旋转蒸发器上除去溶剂，浓缩反应混合物。加入水(10mL/g)，将不均匀混合物搅拌30分钟。粗产物用MTBE萃取(2×20mL/g)，合并有机萃取液，用硫酸钠干燥，在减压下浓缩。粗产物经过真空蒸馏纯化(观察到b.p.80-85℃，压力约1.0mm)，得到28.95g标题中间体。
步骤B-(S)-3-(1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)-1-(7，7-二甲氧基庚-1-基)吡咯烷向装有机械搅拌器、氮入口、冷却浴和温度计的三颈500mL烧瓶中加入(S)-3-(1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷(25g，0.089mol)和二氯甲烷(200mL)。将该混合物冷却至约0℃，缓慢加入7，7-二甲氧基庚醛(18.6g，0.107mol)。在加入期间，维持反应温度在5℃或以下。将反应混合物在0℃至5℃下搅拌1小时，然后历经30分钟加入三乙酰氧基硼氢化钠(24.6g，0.116mol)。在此加入期间，也维持反应温度在5℃或以下。然后将反应混合物在0至5℃下搅拌6小时。然后加入5％碳酸钾水溶液(200mL)猝灭反应，同时保持反应温度低于约20℃，将所得混合物在室温下搅拌1小时。分离有机层，用盐水(100mL)洗涤，然后用硫酸钠(20g)干燥。然后将有机层在真空下浓缩至体积约100mL，该混合物经过硅胶色谱纯化，用1至10％v/v甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱。合并含有所需产物的级分，在真空下浓缩，得到28g标题中间体，为油(72％收率)。
分析数据1H NMR(CDCl3)δ7.44-7.15(m，10H)；5.88(s，2H)；4.33(t，J＝6.7Hz，1H)；3.70-3.58(m，1H)；3.30(s，6H)；3.10-2.92(m，3H)；2.76-2.64(m，1H)；2.61-2.52(m，2H)；2.30(m，1H)；2.20(m，1H)；1.56(m，4H)；1.26(m，7H).
作为替代选择，如下制备这种中间体向装有机械搅拌器、氮入口、冷却浴和温度计的三颈50L烧瓶中加入(S)-3-(1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷(2.5kg，8.93mol)和二氯甲烷(20L)，搅拌该混合物直至固体溶解。然后将反应混合物冷却至0℃，缓慢加入7，7-二甲氧基庚醛(1.71kg，9.82mol)，同时维持反应温度低于5℃。将该反应混合物在0℃至5℃下搅拌1hr，然后历经30分钟逐份加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.27kg，10.72mol)，同时维持反应温度低于5℃。然后将反应混合物在室温下搅拌6hr。然后加入5％碳酸钾水溶液(20L)，同时维持反应温度低于20℃，然后将反应混合物在室温下搅拌1hr。然后分离各层，将有机层用盐水(10L)洗涤，然后经硫酸钠(2kg)干燥约3hr。从硫酸钠中分离有机层后，在减压下浓缩有机层至约10L。该混合物然后经过硅胶色谱(40kg)纯化，使用下列洗脱剂顺序二氯甲烷(100L)；3％MeOH，97％DCM，根据需要；5％MeOH，95％DCM，根据需要；和10％MeOH，90％DCM，根据需要。然后合并含有所需中间体的级分(Rf0.3；10％MeOH/90％DCM)，在低于30℃的温度下浓缩，得到3.3kg标题中间体。
步骤C-(S)-3-(1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)-1-(7-氧代庚-1-基)吡咯烷向装有机械搅拌器、氮入口、冷却浴和温度计的三颈500mL烧瓶中加入(S)-3-(1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)-1-(7，7-二甲氧基庚-1-基)吡咯烷(16g，0.036mol)和乙腈(100mL)。将该混合物冷却至约10℃，加入100mL 1N盐酸水溶液，同时维持反应温度在20℃或以下。将所得混合物在20±5℃下搅拌2小时。反应混合物然后用二氯甲烷萃取(1×200mL和2×100mL)。合并有机层，用盐水(200mL)洗涤，用硫酸钠(40g)干燥。然后在约25℃真空下浓缩有机层至体积约200mL。这种含有标题中间体盐酸盐的溶液无需进一步纯化即可直接用于下一步。
作为替代选择，如下制备这种中间体向装有机械搅拌器、氮入口、冷却浴和温度计的三颈50L烧瓶中加入步骤B中间体(3.3kg，7.25mol)和乙腈(15L)。将该混合物冷却至低于10℃，加入1N盐酸水溶液(15L)，同时维持反应温度低于20℃。然后将反应混合物在室温下搅拌2hr。然后加入二氯甲烷(20L)，将该混合物搅拌30分钟，然后分离。水层用二氯甲烷萃取(2×10L)，合并有机层，用盐水(20L)洗涤，经硫酸钠(4kg)干燥至少3小时。从硫酸钠中分离有机层后，在低于25℃的温度下、在减压下浓缩有机层至约20L。这种含有约1.5kg标题中间体盐酸盐的溶液无需进一步纯化即可用于随后的反应。作为替代选择，如果需要的话，可以进一步浓缩溶液，所得残余物经过常规工艺纯化。
步骤D-4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的制备向装有机械搅拌器、氮入口、冷却浴和温度计的三颈500mL烧瓶中加入4-异丙氨基-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶苯甲酸盐(14.1g，0.036mol)和来自上步C的(S)-3-(1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)-1-(7-氧代庚-1-基)吡咯烷盐酸盐溶液(200mL)。将该混合物在室温下搅拌1小时，然后冷却至10℃至15℃。历经30分钟逐份加入三乙酰氧基硼氢化钠(9.3g，0.044mol)，将所得混合物在室温下搅拌15至20小时。然后将反应混合物冷却至0℃至10℃，加入6N盐酸水溶液(200mL)猝灭反应，同时维持反应温度在25℃或以下。分离水层，用二氯甲烷洗涤(3×100mL)，然后加入浓氢氧化铵水溶液碱化至约pH12。所得混合物用二氯甲烷萃取(1×200mL和1×100mL)，合并有机层，用水(100mL)洗涤，然后在真空下浓缩。将所得残余物溶于MTBE(250mL)，该MTBE溶液然后用水(3×100mL)、盐水(100mL)洗涤，经硫酸钠(30g)干燥，过滤。然后在真空下浓缩MTBE溶液，得到19g标题化合物，为油(81.5％收率；94.9％纯度，HPLC方法D)。
标题化合物(1g)经过硅胶色谱纯化，用含有0.5％浓氢氧化铵的3％至10％v/v甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱。合并含有标题化合物的级分，在真空下浓缩，得到0.6g标题化合物，为油(98.6％纯度，HPLC方法D).
分析数据1H NMR(CDCl3)δ8.41(s，1H)；8.39(d，J＝5.7Hz，1H)；7.44-7.41(m，2H)；7.33-7.14(m，8H)；6.76(d，J＝5.6Hz，1H)；5.74(s，2H)；3.85(s，3H)；3.52(s，2H)；3.42(m1H)；3.10-2.78(m，4H)；2.70-2.25(m，8H)；2.10-1.85(m，3H)；1.70-1.52(m，4H)；1.48-1.15(m，10H)；0.97(d，J＝6.6Hz，6H).
实施例74-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐向100mL烧瓶中加入4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶(10.45g，16.33mmol)和甲醇(53mL)。化合物溶解后，将该溶液冷却至约10℃，逐份加入萘-1，5-二磺酸四水合物(4.37g，15.15mmol)，同时维持反应温度低于10℃。当加入完全时，将反应混合物搅拌30分钟。然后在0-5℃下于2h内将反应混合物缓慢加入到异丙醇(530mL)与MTBE(265mL)的混合物中。然后将该混合物搅拌1小时，过滤所得固体，用MTBE(50mL)洗涤。然后将固体在室温真空下干燥5天。在此期间，在第2和4天从干燥室内移出固体，用球磨机研磨(400rpm，3×2分钟)。这种过程得到12g标题盐(80％收率)，为无定形白色粉末(98.9％纯度，HPLC方法D；65.1％游离碱含量，相对于参照标准而言)。
分析数据FTIR(cm-1)1671.7(w)，1593.5(w)，1497.6(w)，1291.2(w)，1220.9(m)，1180.3(m)，1030.1(s)；MS m/z 640.8(MH+游离碱)；928.8(MH+游离碱+盐)；C50H65N5O8S2计算值C，63.30；H，7.52；N，7.14；S，6.15.实测值C，63.53；H，7.65；N，7.23；S，6.30.
根据1H NMR测定，这种盐中萘-1，5-二磺酸与4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的摩尔比为约0.95比1(萘环质子与吡啶环质子之比)。
如果需要的话，本发明的萘-1，5-二磺酸盐可以进一步利用下列浆液工艺纯化向4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的萘-1，5-二磺酸盐(8.0g)加入异丙醇(80mL)。将所得浆液在室温下搅拌6hr。然后将混合物过滤，固体用MTBE洗涤(2×40mL)，然后在真空和氮下干燥16小时，得到7.8g标题化合物(97.5重量％回收率)。
实施例84-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐的合成步骤A-(7，7-二甲氧基庚基)异丙基-[1-(4-甲氧基吡啶-3-基)哌啶-4-基]胺的制备向含有二氯甲烷(4L)的反应器中加入4-异丙氨基-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶一苯甲酸盐(1.5kg，3.89mol)，同时维持混合物的温度在-5℃至5℃。将用于加入盐的容器用二氯甲烷(1.5L)冲洗，向反应混合物加入冲洗液。然后调节反应混合物的温度至0℃至5℃，加入7，7-二甲氧基庚醛(790g，4.25mol，93.8％纯度，GC)，同时维持反应混合物的温度在0℃至5℃之间。将用于加入7，7-二甲氧基庚醛的容器用二氯甲烷(0.8L)冲洗，向反应器中加入冲洗液。然后将所得反应混合物在0℃至5℃下搅拌1小时。然后历经1小时分7等份加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.07kg，5.05mol)，同时维持反应混合物的温度在-5℃至5℃之间。将用于加入三乙酰氧基硼氢化钠的容器用二氯甲烷(0.8L)冲洗，向反应混合物加入冲洗液。然后将反应混合物在0℃至5℃下搅拌21小时。然后向反应混合物加入碳酸钾(500g)在去离子水(8.6L)中的水溶液，同时维持混合物的温度在0℃至25℃之间。将所得混合物在15℃至25℃之间的温度下搅拌2小时。然后历经30分钟使之分层，收集有机层。用碳酸钾水溶液重复2次洗涤工艺。然后向有机层加入氯化钠(5.7kg)在去离子水(15L)中的水溶液，同时维持温度在15℃至25℃之间。将所得混合物在15℃至25℃之间的温度下搅拌30分钟，然后历经30分钟分离各层。收集有机层，向其中加入二氯甲烷(1.5L)。将所得含有标题化合物的溶液贮存在氮气氛、避光、0℃至5℃下，直至用于随后的反应。
步骤B-7-{异丙基-[1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)-哌啶-4-基]氨基}庚醛将来自步骤A的溶液的温度调节至5℃至15℃，加入盐酸水溶液(向14.2L去离子水中加入1.4L浓盐酸)，同时维持反应混合物的温度低于20℃。将所得两相混合物在15℃至25℃下搅拌11小时。将混合物放置30分钟，无需搅拌，除去有机层。向水层加入二氯甲烷(6L)，将该混合物搅拌30分钟。然后历经30分钟分离各层，除去有机层。用二氯甲烷重复另外2次洗涤水层的工艺。将所得含有标题化合物的水溶液贮存在氮气氛、避光、0℃至5℃下，直至用于随后的反应。
步骤C-4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的制备将来自步骤B的溶液的温度调节至-5℃至5℃，加入氢氧化钠水溶液(将230g氢氧化钠溶于2.9L去离子水)，同时维持反应混合物的温度在-5℃至5℃的范围内。然后加入乙腈(9.3L)，同时维持反应混合物的温度在-5℃至5℃的范围内。然后加入(S)-3-(1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷(988g，3.52mol)，将所得混合物在-5℃至5℃下搅拌1小时。然后历经1小时分7等份加入三乙酰氧基硼氢化钠(853g，4.02mol)，同时维持反应混合物的温度在-5℃至5℃之间。然后将反应混合物在0℃至5℃下搅拌4.25小时。然后向反应混合物加入浓盐酸(8.2L)，直至pH在2至3的范围内，同时维持温度低于20℃。然后加入MTBE(9.8L)，将所得混合物在15℃至25℃下搅拌45分钟。将混合物放置30分钟，无需搅拌，分离水层。用MTBE重复这种水层的洗涤工艺，然后向水层加入MTBE(19.4L)。加入氢氧化钠水溶液(将910g氢氧化钠溶于5.7L去离子水)，直至水层的pH为11至12，同时维持温度低于20℃。将该混合物在15℃至25℃下搅拌30分钟。然后历经30分钟分离各层。向有机层加入碳酸钾与偏硫酸氢钠的水溶液(将970g碳酸钾和970g偏硫酸氢钠溶于19.4L去离子水)，将所得混合物在15℃至25℃下搅拌3小时。将混合物放置30分钟，无需搅拌，分离各层。向有机层加入碳酸氢钠水溶液(将1.4kg碳酸氢钠溶于15L去离子水)，将所得混合物在15℃至25℃下搅拌30分钟。将混合物放置30分钟，无需搅拌，然后分离各层。向有机层加入去离子水(15L)，将所得混合物在15℃至25℃下搅拌30分钟。将混合物放置30分钟，无需搅拌，然后分离各层。向有机层加入磷酸盐缓冲溶液(7.5L)(将2.396kg磷酸氢钠的67.5L去离子水溶液与675g磷酸二氢钠的22.5L去离子水溶液混合)，将所得混合物在15℃至25℃下搅拌30分钟。将混合物放置10分钟，然后分离各层。这种工艺重复11次，然后合并水层。向所合并的水层加入MTBE(19.4L)，然后加入氢氧化钠水溶液(将290g氢氧化钠溶于1.8L去离子水)，同时维持温度低于20℃，直至水层的pH为11至12。将该混合物在15℃至25℃下搅拌30分钟。将混合物放置30分钟，无需搅拌，分离各层。向有机层加入去离子水(15L)，将所得混合物在15℃至25℃下搅拌1.5小时。将混合物放置1小时，无需搅拌，然后分离各层。向有机层加入无水硫酸镁(3kg)，将所得混合物在15℃至30℃下搅拌2.25小时。然后将混合物过滤，滤饼用MTBE(4.5L)洗涤。将所得含有标题化合物的溶液贮存在氮气氛、避光、0℃至5℃下，直至用于随后的反应。
步骤D-4-(N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶萘-1，5-二磺酸盐的制备向甲醇(6L)加入萘-1，5-二磺酸(641.33g，2.22mol)，搅拌所得混合物直至萘-1，5-二磺酸完全溶解。向该溶液加入异丙醇(6L)，调节所得混合物的温度至15℃至25℃。向来自步骤C的溶液加入MTBE(114L)，然后历经2小时加入萘-1，5-二磺酸的溶液，同时维持反应混合物的温度在15℃至25℃。然后加入异丙醇(6L)，同时维持反应混合物的温度在15℃至25℃，将所得混合物在15℃至25℃范围内的温度下搅拌12小时。然后将混合物冷却至0℃至5℃的温度，搅拌2小时。然后在氮下过滤收集所生成的沉淀，滤饼用冷却至0℃至5℃的MTBE(6L)洗涤三次。然后将沉淀在环境温度真空下干燥，得到标题化合物(1452.6g，40％总收率，99.6％纯度，HPLC)。
实施例9(对比)4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶二甲磺酸盐的合成向5L烧瓶中加入4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶(593g，0.93mol)和1.44L无水乙醇，搅拌混合物使油溶解。然后将该混合物冷却至0-5℃，在5℃下加入甲磺酸(142.5g，1.48mol)的98mL无水乙醇溶液。将混合物在5-10℃下搅拌1h，然后缓慢加入到37.5L MTBE中，将该混合物在10-15℃下搅拌30min。将所得固体过滤，溶于5L蒸馏水。将水溶液用活性碳(70g)处理，过滤。将滤液冷冻在-40℃下并冻干72小时，得到481g二甲磺酸盐(79％收率，99.1％纯度，HPLC)。
实施例10(对比)4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶三甲磺酸盐的合成向100mL Erlenmeyer烧瓶装入4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶(3.9g，6.1mmol)和乙腈(32mL)，溶解后，加入水(25mL)和甲磺酸(1.29mL，1.91g，19.9mmol)，pH变为约5。然后将溶液在干冰/丙酮浴中冷冻，冻干48h，得到5.5g三甲磺酸盐，为灰白色固体(100％收率；97.4％纯度，HPLC)。
分析数据MS m/z 640.5(MH+).
实施例11制备其他对比性盐形式的通用工艺方法A向4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的醇溶液(甲醇、乙醇或异丙醇)加入一、二或三摩尔当量酸的醇溶液或固体(acid as either an alcoholic solution or as a solid)。搅拌所得混合物直至均匀(如果必要的话，加热混合物至＜50℃)。然后将混合物滴加到剧烈搅拌着的MTBE中，生成沉淀(通常为白色固体)。过滤分离沉淀，用MTBE洗涤(3x)，在真空氮下干燥，得到对比性盐。
利用这种工艺，制备4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的下列对比性盐实施例11A一硫酸盐；实施例11B一酒石酸盐；和实施例11C二乳清酸盐(diorotic acid salt)。
方法B在从约22℃至50℃的温度下，向剧烈搅拌着的4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶在异丙醇、异丁醇或乙酸乙酯中的均匀溶液加入一、二或三摩尔当量酸(在相同溶剂中)的溶液，得到白色沉淀。将所得混合物缓慢冷却至0℃至20℃，过滤分离沉淀。然后将沉淀用溶剂、MTBE或此二者洗涤(3x)，然后在真空氮下干燥，得到对比性盐。
利用这种工艺，制备4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的下列对比性盐实施例11D二水杨酸盐；实施例11E三水杨酸盐；和实施例11F缩二龙胆酸盐。
方法C利用实施例9的工艺，也就是冷冻干燥，制备4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的下列对比性盐实施例11G二盐酸盐。
实施例12测定盐形式化学稳定性的方法通过测定盐形式在40℃下贮存后样品纯度的变化，评价每种盐形式的化学稳定性。
在贮存之前，用HPLC(方法D)分析每种盐形式，以测定样品纯度，具体地，测定存在于样品中的下列杂质的含量A.3-[4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}哌啶-1-基甲基]-4-甲氧基-1-甲基吡啶盐(杂质A)；B.4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-氧代-1，4-二氢吡啶-3-基甲基)哌啶(杂质B)。
然后将大约50-100mg盐形式置于两个热密封的低密度聚乙烯袋中。然后将袋子置于预先设置在40℃和75％相对湿度的稳定性室内。7天后，取出袋子，用HPLC分析内容物。结果如表I所示。
表I盐形式的化学稳定性
表I中的数据证明，4-{N-[7-(3-(s)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的萘-1，5-二磺酸盐具有优异的化学稳定性。相反，其他所测试的盐形式具有较大的纯度变化和/或生成较大量的杂质A或B或此二者。
实施例13测定盐形式物理稳定性的方法通过测定盐形式在30℃和60％相对湿度下贮存后样品外观的任何变化，评价某些盐形式的物理稳定性。
向打开的小瓶中加入50-100mg每种盐形式。将打开的小瓶置于预先设置在30℃和60％相对湿度的稳定性室内。定期将每种盐形式的外观与其初始外观比较，记录任何差异。结果如表II所示。
表II盐形式的物理稳定性
表II中的数据证明，在所测试的盐形式中，只有萘-1，5-二磺酸盐在30℃和60％相对湿度下15天后保持为自由流动性粉末。相反，其他所测试的盐形式要么潮解，要么没有保持自由流动性。
实施例14测定药物制剂物理稳定性的方法通过测定药物制剂在贮存后外观上的任何变化，评价含有某些盐形式的包封药物制剂的物理稳定性。
在下列条件下贮存含有盐形式和微晶纤维素(Avecil)的1∶1混合物(wt/wt)的胶囊剂(1)在预先设置在25℃和60％相对湿度的稳定性室内，将胶囊置于开口的容器中；或者(2)在并排放置温度计和湿度计的实验台顶上，将胶囊剂置于开口的容器中。
定期将每种制剂的外观与其初始外观比较，记录任何差异。结果如表III所示。
表III药物制剂的物理稳定性
表III中的数据证明，含有萘-1，5-二磺酸盐的药物制剂在25℃与60％相对湿度和环境温度与相对湿度下都保持为自由流动性粉末。相反，含有一酒石酸盐的药物制剂在相同条件下形成非流动性颗粒状饼。
实施例15放射性配体结合测定法A.来自表达hM1、hM2、hM3和hM4毒蕈碱性受体亚型的细胞的膜制备分别稳定表达克隆的人hM1、hM2、hM3和hM4毒蕈碱性受体亚型的CHO(中国仓鼠卵巢)细胞系在由HAM’s F-12组成的培养基中生长至接近融合，所述培养基补充有10％FBs(胎牛血清)和250μg/mL遗传霉素。细胞生长在5％CO2、37℃温育器中，用dPBS+2mM EDTA脱附。在650xg下离心5分钟收集细胞，将细胞颗粒冷冻贮存在-80℃下或者立即制备膜。关于膜制备，将细胞颗粒重新悬浮在溶解缓冲液中，用Polytron PT-2100组织破碎器均质化(Kinematica AG；20秒×2个脉冲)。在4℃下将粗的膜在40,000xg下离心15分钟。然后将膜颗粒用重悬浮缓冲液重新悬浮，用Polytron组织破碎器再次均质化。借助Lowry，O.et al.，(1951)Journal of Biochemistry193，265的方法测定膜悬液的蛋白质浓度。将膜以等分试样冷冻贮存在-80℃下。
从Perkin Elmer直接购买制备的hM5受体膜的等分试样，贮存在-80℃下直至使用。
B.毒蕈碱性受体亚型hM1、hM2、hM3、hM4和hM5的放射性配体结合测定法在96孔微量滴定平板中进行放射性配体结合测定法，总测定体积为100μL。将含有每一各自毒蕈碱亚型的膜在测定缓冲液中稀释至下列特定的靶蛋白浓度(μg/孔)hM1为10μg，hM2为10-15μg，hM3为10-20μg，hM4为18-20μg，hM5为10-12μg。在测定平板加入之前，将膜用Polytron组织破碎器简单均质化(10秒)。使用浓度从0.001nM至20nM的1-[N-甲基-3H]东莨菪碱甲基氯([3H]NMS)(TRK666，84.0Ci/mmol，Amersham Pharmacia Biotech，Buckinghamshire，England)进行饱和结合研究，以测定放射性配体的KD值。利用1nM的[3H]NMS和十一种不同的供试化合物浓度进行置换测定，以测定供试化合物的Ki值。首先将供试化合物溶于稀释缓冲液，浓度为400μM，然后用稀释缓冲液系列稀释5x，至最终浓度为10pM至100μM。向测定平板加入的顺序和体积如下25μL放射性配体、25μL经过稀释的供试化合物和50μL膜。将测定平板在37℃下温育60分钟。经过预先用1％BSA处理过的GF/B玻璃纤维过滤平板(Perkin Elmer Inc.，Wellesley，MA)的快速过滤终止结合反应。将过滤平板用洗涤缓冲液(10mM HEPES)冲洗三次，以除去未结合的放射性。将平板风干，向每孔加入50μL Microscint-20液体闪烁流体(Perkin Elmer Inc.，Wellesley，MA)。然后在Perkin Elmer Topcount液体闪烁计数器(Perkin Elmer Inc.，Wellesley，MA)中计数平板。利用单位点竞争模型，用GraphPad Prism软件包(GraphPad Software，Inc.，SanDiego，CA)借助非线性回归分析法分析结合数据。利用Cheng-Prusoff方程(Cheng Y；Prusoff WH.(1973)Biochemical Pharmacology，22(23)3099-108)，从所观测到的放射性配体的IC50值和KD值计算供试化合物的Ki值。将Ki值转化为pKi值，以确定几何平均和95％置信区间。然后将这些概括性统计资料转化回Ki值供数据报道。
在这种测定法中具有较低K1值的供试化合物对毒蕈碱性受体具有较高的结合亲和性。在这种测定法中式I化合物就hM2而言的Ki值小于1nM，hM3/hM2之比大于40。因而，在这种测定法中发现式I化合物与hM2受体亚型有力地结合，相对于hM3受体亚型而言对hM2受体亚型具有更高的结合亲和性。
实施例16体内大鼠膀胱测定法将体重200至300g的雌性Sprague-Dawley大鼠(Harlan，Indianapolis，IN)用尿烷麻醉(1.5g/kg，s.c.，Sigma，St.Louis，MO)，根据需要补充0.25g/kg，s.c.尿烷。尿烷的给药浓度为0.25g/mL。
大鼠的手术准备是剪去颈部和腹部的毛，用乙醇擦拭清洁。首先，在腹表面进行切开。通过分离和结扎股静脉放置静脉内导管。在结扎位置近端切开小口，向其中插入填充有D5W的导管(micro-Renathanetubing，0.30mm ID×0.64mm OD，Becton Dickinson，Sparks，MD)，用4.0缝合丝线(Ethicon，Johnson and Johnson，Somerville，NJ)固定在适当位置。与之相似，向股动脉插入导管，用于测量心血管参数。分离气管并在两个气管环之间打一小孔进行气管切开术。朝着肺的方向向气管插入PE 205管(1.57mm ID×2.08mm OD，BectonDickinson，Sparks，MD)。用9mm伤口夹关闭颈部切口，使导管和气管远端暴露。
随后，在下腹部的皮肤和肌肉层作3cm中线S形切开。借助组织钳分离和暴露膀胱和输尿管。在膀胱远端结扎和断开输尿管。经由尿道向膀胱插PE50套管(0.58mm ID×0.965mm OD，Becton Dickinson，Sparks，MD)。套管与微量输注泵连接，以便通过压力传感器(Argon，Athen，TX)向膀胱输注盐水。利用purse stfing缝合线(4.0丝线)在适当位置固定套管。为了确保密封，用2.0缝合丝线在外尿道口附近适当位置系住套管。将膀胱放回腹腔后，用手排空膀胱，以便内容物流出，直至膀胱排空。用9mm伤口夹关闭切口。
手术准备之后，向膀胱填充盐水，以200μL/min的恒定速率填充5分钟或者直至膀胱压力平均达到30mmHg。随后，维持5μL/min的膀胱输注。当观察到节律性容量-诱导的膀胱收缩(VIBC)时，调节维持输注为2至5μL/min。在实验中仅使用证明有相似峰高的节律性膀胱收缩的大鼠。用CO2窒息使在60分钟内没有证明有这种行为的动物安乐死。
一旦在维持输注期间观察到稳定的节律性VIBC达至少30分钟，静脉内输注(1mL/kg)载体(D5W)，并记录VIBC幅度(VIBCAmp)变化15分钟。然后，给予静脉内剂量的供试化合物，并记录VIBCAmp15分钟。然后静脉内给予(1mL/kg)阿托品(0.1mg/kg)作为阳性对照，并记录VIBCAmp数据达另外15分钟。在这种模型中以半对数增量(at half logincrements)测试每种供试化合物的至少四种剂量。
作为替代选择，在载体之后，每隔15分钟给予增加的蓄积性静脉内剂量的供试化合物(1mL/kg)，并记录VIBCAmp15分钟。以半对数增量(at half log increments)给予至少四种剂量的供试化合物。
测定在供试化合物和阿托品给药后5-15分钟期间的平均VIBCAmp，从载体给药后5-15分钟期间的平均VIBCAmp中扣除，得到供试化合物或阿托品诱导的VIBCAmp变化。使供试化合物的抑制效应标准化为阿托品响应，并将所得剂量-响应曲线用四参数逻辑方程拟合，得到ID50(产生50％最大响应所需剂量)的估计值。
在这种测定法中具有较低ID50的供试化合物可更有效地降低峰膀胱收缩压。在这种测定法中，式I化合物的ID50值小于或等于约0.1mg/kg。
尽管已经参照其特定实施方式描述了本发明，不过应当为本领域技术人员所理解的是，可以进行各种变化和等价替换，而不背离发明的真实精神和范围。另外，可以进行很多调整，使特定的情形、材料、物质组成、方法、方法步骤适应于本发明的目标、精神和范围。所有这样的调整都意在落入所要求保护的范围。另外，在适用专利法规和条例允许的程度上，本文引用的所有出版物、专利和专利文献都全文引入在此作为参考，好像它们分别引入在此作为参考。
权利要求
1.4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的萘-1，5-二磺酸盐或其溶剂化物；其中该盐的萘-1，5-二磺酸与4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的摩尔比从约0.7至约1.1。
2.权利要求1的盐，其中萘-1，5-二磺酸与4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的摩尔比从约0.8至约1.05。
3.权利要求1的盐，其中萘-1，5-二磺酸与4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的摩尔比从约0.9至约1。
4.权利要求1至3任意一项的盐，其中该盐是无定形粉末。
5.权利要求1至3任意一项的盐，其中该盐是以具有下列峰的FTIR光谱为特征的约1671.7、1593.5、1497.6、1291.2、1220.9、1180.3和1030.1cm-1。
6.权利要求1至3任意一项的盐，其中该盐的纯度大于约98重量％。
7.权利要求1至3任意一项的盐，其中该盐基本上不含3-[4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}哌啶-1-基甲基]-4-甲氧基-1-甲基吡啶盐。
8.4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶一萘-1，5-二磺酸盐。
9.药物组合物，包含药学上可接受的载体和治疗有效量的4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的萘-1，5-二磺酸盐或其溶剂化物；其中该盐的萘-1，5-二磺酸与4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的摩尔比从约0.7至约1.1。
10.权利要求9的药物组合物，其中萘-1，5-二磺酸与4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的摩尔比从约0.8至约1.05。
11.权利要求9的药物组合物，其中萘-1，5-二磺酸与4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的摩尔比从约0.9至约1。
12.权利要求9至11任意一项的药物组合物，其中该组合物是单位剂型。
13.权利要求12的药物组合物，其中该组合物是片剂、胶囊剂或丸剂。
14.治疗哺乳动物的通过毒蕈碱性受体拮抗剂治疗而缓解的医学病症的方法，该方法包括给予该哺乳动物治疗有效量的药物组合物，所述组合物包含药学上可接受的载体和4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的萘-1，5-二磺酸盐或其溶剂化物；其中该盐的萘-1，5-二磺酸与4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的摩尔比从约0.7至约1.1。
15.治疗哺乳动物活动过度性膀胱的方法，该方法包括给予该哺乳动物治疗有效量的药物组合物，所述组合物包含药学上可接受的载体和4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的萘-1，5-二磺酸盐或其溶剂化物；其中该盐的萘-1，5-二磺酸与4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的摩尔比从约0.7至约1.1。
16.权利要求14或15的方法，其中萘-1，5-二磺酸与4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的摩尔比从约0.8至约1.05。
17.权利要求14或15的方法，其中萘-1，5-二磺酸与4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的摩尔比从约0.9至约1。
18.制备4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的萘-1，5-二磺酸盐或其溶剂化物的方法；其中该盐的萘-1，5-二磺酸与4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的摩尔比从约0.7至约1.1；该方法包括使4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶与约0.7至约1.1摩尔当量的1，5-萘二磺酸或其水合物接触。
19.权利要求18的方法，其中该方法进一步包括形成4-{N-[7-(3-(S)-1-氨基甲酰基-1，1-二苯基甲基)吡咯烷-1-基)庚-1-基]-N-(异丙基)氨基}-1-(4-甲氧基吡啶-3-基甲基)哌啶的萘-1，5-二磺酸盐或其溶剂化物的无定形粉末的步骤。
20.由权利要求18或19的方法所制备的产物。
21.用在疗法中的根据权利要求1至8任意一项的盐。
22.根据权利要求1至8任意一项的盐用于制备药物的用途。
23.根据权利要求22的用途，其中该药物用于治疗通过用毒蕈碱性受体拮抗剂而缓解的医学病症。
24.根据权利要求23的用途，其中该药物用于治疗活动过度性膀胱。
全文摘要
本发明提供4－{N－[7－(3－(S)－1－氨基甲酰基－1，1－二苯基甲基)吡咯烷－1－基)庚－1－基]－N－(异丙基)氨基}－1－(4－甲氧基吡啶－3－基甲基)哌啶的萘－1，5－二磺酸盐，该盐可用作毒蕈碱性受体拮抗剂。本发明也涉及包含这些盐形式的药物组合物、使用这些盐形式治疗由毒蕈碱性受体介导的医学病症的方法以及制备这些盐形式的方法。
文档编号A61K31/4545GK1875017SQ200480032279
公开日2006年12月6日 申请日期2004年10月28日 优先权日2003年10月29日
发明者R·D·威尔逊, J·康登, M·马门, 张纬江, R·曹 申请人:施万制药