专利名称：野木瓜皂甙在制备抗肿瘤药中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于药物化学技术领域，具体涉及野木瓜皂甙在制备抗肿瘤药中的应用。
背景技术：
野木瓜(Stauntonia chinensis DC)又名假荔枝，绕绕藤，为木通科野木瓜属植物。药理实验证明野木瓜全植物及其提取物都有镇痛、镇静和解痉作用，用于治疗风湿性关节炎、跌打损伤，各种神经性疼痛，可长期使用及连续用药，剂量与效用成正相关关系，而镇痛作用不影响人的意识和感觉，无耐药性，不成瘾，是一种有效的中药镇痛药。公开号CN1562275A公开的中国发明专利申请就公开了一种野木瓜皂甙及其注射剂。该注射剂具有镇痛作用。目前未见有野木瓜皂甙在制备抗肿瘤药中的公开报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于研究野木瓜皂甙在制备抗肿瘤药中的应用。
本发明用MTT法证明野木瓜皂甙对肿瘤细胞有细胞毒效应，抑制细胞的分裂，其抑制率与野木瓜皂甙浓度成正相关。
具体实施例方式
下面通过实施例进一步阐述本发明。
一、准备实验药物和试剂1、野木瓜皂甙(Stauntoniae Saponin，SS)的提取取野木瓜注射液(广东和平制药厂产品)于锥形瓶中，加入2倍体积的无水乙醇，摇匀，再加入5倍体积的丙酮与乙醚混合液(丙酮∶乙醚＝9∶1)。搅拌，在室温下静止20hrs.。经抽滤，滤渣用丙酮洗三次，得皂甙固体。提取方法参照徐任生、陈仲良编著的《中草药有效成分提取与分离》(第二版).上海上海科学技术出版社，1989，313。
2、实验前用RPMI-1640培养液(美国GiBCo公司产品)配制野木瓜皂甙溶液。溶液于4℃冷藏。
3、新生小牛血清(FCS)华美生物工程公司产品，56℃，30分钟灭活，分装，-20℃冷冻保存。
4、四甲基偶氮唑蓝(MTT)试剂(Sigma公司生产)。
二、使用的仪器和设备1、超净工作台安泰技术有限公司产品，洁净度＜3.5粒/L(＞0.5μm尘埃)。
2、CO2细胞培养箱Thermo公司Forma Scientific，Inc。
3、倒置光显微镜日本尼康公司(NIKON)型号810818型。
4、96孔平板美国Costar公司。
5、酶联免疫检测仪Bio-RAD Model 680，单波长为550nm。
三、药物效果鉴定的方法1、细胞培养在K562悬浮细胞液中加入等容积的10％新生小牛血清的RPMI-1640营养液，吹打均匀，置饱和湿度，37℃，5％CO2的细胞培养箱中培养。
2、药效测定a、设置5个药物实验组和1个对照组。每个组中在含有105个处于对数生长期的K562细胞的悬浮细胞液中加入200μl的FCS、100μl的SS(浓度分别为0.0361mg/ml、0.1802mg/ml、0.9012mg/ml、4.506mg/ml、22.53mg/ml)，然后加入RPMI-1640培养液至总容积1ml。对照组不加SS。各组的溶液被充分混匀后接种于96孔板。每个组接种8个小孔，每孔100μl。然后，置于37℃、饱和湿度的CO2培养箱中静止培养。终止培养前4小时，每孔加入5mg/ml的MTT10μl，继续培养。终止培养时，每孔加入10％SDS100μl，室温静止过夜。用酶联免疫检测仪(550nm单波长)测OD值。
b、相对抑制率(IR)的计算 c、统计学处理利用STATISTICA 6.0软件进行方差分析和多重比较(LSD法)；以直线回归法求药物浓度与其对细胞增殖的抑制率的回归方程，并通过相关系数分析回归方程能否正确反映浓度与抑制率之间的关系。根据回归方程推算出半数致死浓度LD50。
四、实验结果1、SS影响K562细胞增殖的量效关系(均值±标准差)，见下表。
五、方差分析和多重比较方差分析F＝224.7377 P＝0.000000多重比较(LSD法)结果(1)对照组-实验组1×对照组-实验组2×对照组-实验组3√ 照组-实验组4√ 对照组-实验组5√(2)实验组1-实验组2√ 实验组1-实验组3×实验组1-实验组4√ 实验组1-实验组5√(3)实验组2-实验组3√ 实验组2-实验组4√ 实验组2-实验组5√(4)实验组3-实验组4√ 实验组3-实验组5√(5)实验组4-实验组5√(×P＞0.05，无显著性差异；√P＜0.01，差异极显著)六、SS影响K562细胞增殖的量效关系的线性回归和相关系数分析将SS浓度为0.02253mg/ml、0.0912mg/ml、0.2253mg/ml、0.4506mg/ml、2.253mg/ml的抑制率进行一元线性回归，得到的回归直线y＝34.40715x+3.034355。通过测定相关系数r表明，抑制率与SS浓度成正相关(r＝0.972119，r＞r0.05)，回归直线可以表示浓度(x)与抑制率(y)的关系。
七、半数抑制浓度LD50的计算根据回归直线y＝34.40715x+3.034355得到LD50＝1.365mg/ml。
结论上述实验结果和统计学分析表明，野木瓜皂甙对肿瘤细胞有毒效应，抑制细胞的分裂，其抑制率与野木瓜皂甙浓度成正相关。
权利要求
1.一种野木瓜皂甙在制备抗肿瘤药中的应用。
2.根据权利要求1所述的野木瓜皂甙在制备抗肿瘤药中的应用，其特征在于其中所述的野木瓜皂甙在0.02253mg/ml低浓度情况下对肿瘤细胞有细胞毒效应，抑制细胞的分裂，其抑制率与野木瓜皂甙浓度成正相关。
全文摘要
本发明属于药物化学技术领域。其公开了一种野木瓜皂甙在制备抗肿瘤药中的应用。通过实验表明野木瓜皂甙对肿瘤细胞有细胞毒效应，抑制细胞的分裂，其抑制率与野木瓜皂甙浓度成正相关。
文档编号A61P35/00GK1762371SQ20051002998
公开日2006年4月26日 申请日期2005年9月23日 优先权日2005年9月23日
发明者叶文博, 李兴玉 申请人:上海师范大学