专利名称：微生物多糖在抗肿瘤和降血糖血脂药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种抗肿瘤和降血糖血脂药物的制备和应用，具体是微生物多糖在抗肿瘤和降血糖血脂药物中的应用。
背景技术：
至今，几百种天然多糖的发现，已给人类提供了丰富的生物多聚体的宝库。多糖不但是动植物的主要结构支持物质(如甲壳动物中的几丁质，植物中的纤维亲)，而且也是生物体主要能量来源(如淀粉、糖原)。同时多糖也是工业上重要多聚体的原料来源。不但如此，多糖还具复杂的多方面的生物活性与功能，多糖的糖链能控制细胞的分裂与分化，调节细胞的生长与衰老。特别是多糖作为广谱免疫调节剂在免疫疾病治疗上的应用。多糖是一种非特异性免疫调节剂，不仅能治疗机体免疫系统受到严重损伤的癌症和艾滋病，还能治疗多种免疫缺损疾病和某些细菌、病毒引起的疾病。多糖的免疫疗法已给近代肿瘤、艾滋病治疗及其他疾病治疗开辟了新方向。目前，癌症的治疗主要有三种方法，即化学疗法、放射疗法和外科手术。免疫疗法不同于化疗及放疗，它是通过宿主中介而起作用，所以没有直接细胞毒，不影响正常细胞，毒副作用小，治疗后白细胞不会下降，并使因化疗或放疗引起的白细胞下降维持到正常水平。它也不像手术疗法具有不彻底性，因为免疫疗法是整体的治疗。
现在国际上多糖研究以日本、美国、德国和加拿大处于领先地位，我国多糖的研究虽然起步较晚，但自80年代以后各地的研究如雨后春笋般掀起。国内外研究的主要目标之一是进一步寻找活性更高，特别是对肿瘤、艾滋病更有效的多糖。
发明内容
本发明的目的在于提供一种微生物多糖在抗肿瘤和降血糖血脂药物中的应用。以该种微生物多糖为成份制备的药物或保健药品对抗肿瘤和降血糖血脂有明显效果。
本发明的技术方案是该种微生物多糖在抗肿瘤和降血糖血脂药物中的应用，其特征在于，微生物多糖分子量范围在3000-100000D；分子式结构如下
该微生物多糖支链上的丙酮酸并不存在于所有的单元结构中，有的单元结构中并不存在丙酮酸。
如前所述的微生物多糖在抗肿瘤和降血糖血脂药物中的应用，其特征在于，微生物多糖的制备方法是(1)、以黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris)为菌种，以葡萄糖或蔗糖或淀粉为主要原料发酵生产；(2)、在发酵中采用滤膜分离将发酵液中的产物及时分离，控制产物聚合度的增加，或者采用物理方法处理产品，控制其分子量。
使用的微生物菌种名称本领域常见的黄单胞杆菌细胞形态该菌在蔗糖琼脂斜面上培养24-48hr，细胞呈杆状，单个，少数相连，细胞大小0.5×1.3-1.5μ。
普通肉汁琼脂斜面中间划线培养，生长较好，线状，24hr呈淡黄色，随培养时间延长，颜色逐渐加深，有非水溶性色素，边缘整齐，湿润，扩散生长。冰箱放置月余，色素加深，菌落呈稀流状，自行下流，转接不易存活。
普通肉汁琼脂平板培养48hr，菌落2-3mm，淡黄色；72hr菌落圆形，隆起，表面光滑湿润，粘稠，边缘整齐，产生非水溶性色素，用接种针挑起不粘连，从平板背面透光观察，不透明，可见菌落中心有芯，随培养时间的延长，菌落直径可达1cm左右。如放置时间过长，浅黄色会变为桔黄色，呈稀状，转接不活。
生理生化特征生长温度最适25-28℃，34℃不生长，72℃脱脂牛奶热处理10min致死。发酵液80℃热处理15min可灭活。初始生长pH6.0-8.5均可生长，7.0-7.5生长良好，pH9.0以上生长延迟，pH5.3以下不生长。
培养基组成平板、斜面培养基蔗糖1％；蛋白胨0.5％；牛肉膏0.3％；NaCl0.2％；pH7.0种子培养基葡萄糖1％；蛋白胨0.3％；酵母膏0.5％；pH7.0发酵培养基蔗糖4％；蛋白胨0.4％；酵母膏0.1％；CaCO3O0.15％；pH7.0本发明所述在发酵中采用滤膜分离器是将发酵液中的产物及时分离，控制产物聚合度的增加可以是在发酵进行24hr后，将发酵液泵入微滤膜分离器，微滤膜孔径以能截留黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris)为准则，截留液返回发酵罐，透过液进入超滤膜分离器，超滤膜的截留分子量为3000-100000D，具体以所需的产品分子量为准则，透过液返回发酵罐继续发酵，截留液补加无菌水继续泵入超滤膜分离器。
本发明所述控制产品分子量的物理方法可以是超声波技术、辐照技术等物理方法。此物理方法在本技术领域常见。
本发明微生物多糖在药物中应用，可以制成水剂、粉剂、片剂或滴丸。
本发明的有益效果是本发明微生物多糖活性更高，在药物中应用对抗肿瘤和降血糖血脂效果明显。实验情况如下(一)、该微生物多糖对糖尿病小白鼠降血糖血脂作用采用该微生物多糖(平均分子量70000D)对糖尿病小白鼠灌胃做降血糖血脂的实验，实验结果如表1、表2
表1 对糖尿病小白鼠血糖的影响
从表1中数据可以看出720mg/Kg剂量时，该微生物多糖可明显糖尿病小白鼠的血糖浓度。
表2 对糖尿病小白鼠血脂的影响
从表2中数据可以看出720mg/Kg剂量时，该微生物多糖可明显降低糖尿病小白鼠的血液中的TG浓度。
(二)、该微生物多糖对小白鼠的抗肿瘤作用，见表3。
表3 微生物多糖(平均分子量6000D)抑制小白鼠S-180肿瘤的实验
供试的微生物多糖样品经腹腔给药，从表中数据可以看出样品对S-180腹水癌细胞表现出较强的抑制作用，25mg/kg剂量时，表现出抑制肿瘤的作用较强，抑制率达40.94％。
具体实施例方式
该微生物多糖的制备菌种名称黄单胞杆菌三角瓶种子培养基葡萄糖1％；蛋白胨0.3％；酵母膏0.5％；PH7.0；瓶装量200ml；灭菌1kg/cm225min茄瓶斜面接种入瓶2～3铲摇瓶时间200rpm，18hr左右，发黄，稍稠厚。
一级种子罐培养基葡萄糖1％；蛋白胨0.3％；酵母膏0.5％；PH7.0消泡剂0.5‰运行参数定容100L转数250rpm风量27m3/hr罐压1kg/cm2罐温29±1℃泡敌750ml NaOH330-350g发酵培养基蔗糖4％；蛋白胨0.4％；酵母膏0.1％；CaCO3O0.15％；参数及控制转数120-150rpm，变频可调，0-12hr 120rpm，13hr后150rpm，发酵罐定容1m3，罐温28-29℃，罐压0.1Mpa风量0-12hr(1∶0.2)；13hr后(1∶0.23)；发酵进行24hr后，将发酵液泵入微滤膜分离器，微滤膜孔径0.1微米，截留液返回发酵罐，透过液进入超滤膜分离器，超滤膜的截留分子量为50000D，透过液返回发酵罐继续发酵，截留液补加无菌水继续泵入超滤膜分离器；72hr后停止发酵，对超滤截留液进行超滤浓缩，除蛋白，喷雾干燥得到样品12Kg。
权利要求
1.一种微生物多糖在抗肿瘤和降血糖血脂药物中的应用，其特征在于，微生物多糖分子量范围在3000-100000D；分子式结构如下 该微生物多糖支链上的丙酮酸并不存在于所有的单元结构中，有的单元结构中并不存在丙酮酸。
2.根据权利要求1所述的微生物多糖在抗肿瘤和降血糖血脂药物中的应用，其特征在于，微生物多糖的制备方法是包括(1)、以黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris)为菌种，以葡萄糖或蔗糖或淀粉为主要原料发酵生产；(2)、在发酵中采用滤膜分离器将发酵液产物及时分离，控制产物聚合度的增加。
3.根据权利要求1所述的微生物多糖在抗肿瘤和降血糖血脂药物中的应用，其特征在于，微生物多糖的制备方法是包括(1)、以黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris)为菌种，以葡萄糖或蔗糖或淀粉为主要原料发酵生产；(2)、采用物理方法处理产品，控制其分子量。
4.根据权利要求2或3所述的微生物多糖在抗肿瘤和降血糖血脂药物中的应用，其特征在于培养基组成平板、斜面培养基蔗糖1％；蛋白胨0.5％；牛肉膏0.3％；NaCl0.2％；PH7.0种子培养基葡萄糖1％；蛋白胨0.3％；酵母膏0.5％；pH7.0发酵培养基蔗糖4％；蛋白胨0.4％；酵母膏0.1％；CaCO30.15％；pH7.0发酵温度为25-30℃。
5.根据权利要求2所述的微生物多糖在抗肿瘤和降血糖血脂药物中的应用，其特征在于，在发酵进行24hr后，将发酵液泵入微滤膜分离器，微滤膜孔径以能截留黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris)为准则，截留液返回发酵罐，透过液进入超滤膜分离器，超滤膜的截留分子量为3000-100000D，具体以所需的产品分子量为准则，透过液返回发酵罐继续发酵，截留液补加无菌水继续泵入超滤膜分离器。
6.根据权利要求3所述的微生物多糖在抗肿瘤和降血糖血脂药物中的应用，其特征在于，所述控制产品分子量的物理方法可以是超声波技术或辐照技术。
全文摘要
微生物多糖在抗肿瘤和降血糖血脂药物中的应用，是关于利用黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris)生产一种具有明显保健作用的微生物多糖工艺方法，使用黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris)作为菌种发酵，以及多糖发酵液的膜滤分离、除蛋白、分子量分级、脱色、脱盐和浓缩，得到微生物多糖分子量范围在3000－100000D内。本发明微生物多糖在药物中应用，可以制成水剂、粉剂、片剂或滴丸，具有明显抗肿瘤和降血糖血脂功能。
文档编号A61P3/00GK1679617SQ200510042019
公开日2005年10月12日 申请日期2005年1月11日 优先权日2005年1月11日
发明者苏理, 兰文忠 申请人:苏理, 兰文忠