专利名称：知母总皂苷在制备治疗或预防糖尿病的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及知母总皂苷的新的医药用途，具体地涉及知母总皂苷在制备治疗或预防糖尿病的药物中的应用。
背景技术：
知母是百禾科(liliaceae)植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)的干燥根茎。大量研究证明，知母总皂苷是其主要活性成分，17种单体皂苷已见报道，但尚未见有关知母总皂苷抑制α-葡萄糖苷酶活性，降低餐后血糖；促进糖代谢，平衡血糖，降低血脂，促进胰岛素分泌，保持血糖长期稳定的药物的报道。
发明内容
本发明提供了知母总皂苷在制备治疗或预防糖尿病的药物中的应用。
本发明提供了知母总皂苷在抑制α-葡萄糖苷酶，降低餐后血糖；促进糖代谢，平衡血糖，降低血脂，促进胰岛素分泌，保持血糖长期稳定方面的应用。
本发明所述的知母总皂苷，其中100％＞知母总皂苷的含量≥50％，100％＞菝蓣皂苷元的含量≥30％，其可以通过如下方法制备知母药材粉碎成粗粉，加乙醇浸泡，然后常温超声提取，提取液合并过滤，滤液浓缩，浓缩液上大孔吸附树脂，不同醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩至浓膏，干燥得知母总皂苷；但不限于此。
具体实施例方式
制备例1制备知母总皂苷知母药材粉碎成粗粉，加70％乙醇先浸泡4小时，然后常温超声提取三次，溶剂倍数为4∶4∶3，提取时间每次3小时，提取液合并过滤，滤液减压浓缩至乙醇含量30％左右，浓缩液上处理好的AB-8大孔吸附树脂，上样后的AB-8大孔吸附树脂分别用30％乙醇洗脱2个柱体积，50％乙醇洗脱1个柱体积，95％乙醇洗脱2个柱体积，95％乙醇洗脱液减压浓缩至浓膏，将浓膏真空干燥得知母总皂苷；其总皂苷含量54％，菝蓣皂苷元的含量32.3％。
制备例2制备知母总皂苷知母药材粉碎成粗粉，加70％乙醇先浸泡4小时，然后常温超声提取三次，溶剂倍数为4∶4∶3，提取时间每次3小时，提取液合并过滤，滤液减压浓缩至乙醇含量30％左右，浓缩液上处理好的AB-8大孔吸附树脂，上样后的AB-8大孔吸附树脂分别用30％乙醇洗脱2个柱体积，50％乙醇洗脱1个柱体积，95％乙醇洗脱2个柱体积，95％乙醇洗脱液减压浓缩至浓膏，将浓膏真空干燥得知母总皂苷；其总皂苷含量84％，菝蓣皂苷元的含量52.3％。
试验例一对α-葡萄糖苷酶的体外抑制实验1.材料知母总皂苷按制备例1制备；大鼠山东省天然药物工程技术研究中心提供拜糖苹德国拜耳医药保健有限公司，批号1011812.方法取大白鼠上端小肠20g，加4℃预冷的PH6.8磷酸缓冲液60ml，匀浆，4℃、4000rpm离心20min，取上清分装入试管中，-20℃冷冻保存备用；取酶液(小肠匀浆液)0.2ml加PH6.8磷酸缓冲液0.7ml，37℃水浴10min，加入0.5mol/L蔗糖0.1ml，反应20min后，加入1ml0.1mol/LNaCO3终止反应；酶法测定葡萄糖浓度，分3组，空白对照组，知母总皂苷组和拜糖苹组，每组三管，平行测定；将在37℃，每分钟1L溶液中生成0.01mmol葡萄糖定义为一个酶活力单位，见表1。
表1知母总皂苷对α-葡萄糖苷酶活性的体外抑制
试验例二对正常小鼠血糖的影响实验1.材料小白鼠山东省天然药物工程技术研究中心提供；知母总皂苷按制备例2方法制备；2.方法取小白鼠50只，雌雄各半，体重24-28g，测空腹血糖，随机分为5组正常对照组，知母总皂苷4个剂量组(50mg/Kg、150mg/Kg、450mg/Kg、1350mg/Kg)。连续灌胃7天，末次给药7h后断尾采血，测血糖浓度；然后断头处死小鼠，取血液离心分离血清，置-20℃冰箱保存，做胰岛素放射免疫测定备用；小鼠剖腹，自肝内门静脉按10ml/只的剂量，用注射器将生理盐水缓慢注入肝脏，将肝脏中残留血液冲洗掉，取出肝脏，称重，按1g肝加入PH7.4等渗磷酸盐缓冲液50ml用组织研磨器制备匀浆，取匀浆液0.5ml，加入4％的磺基水杨酸溶液0.5ml，充分混匀，离心，弃沉淀，蒽酮法测定肝糖原含量，见表2。
表2知母总皂苷对正常小鼠血糖、血胰岛素水平和肝糖原含量的影响
与正常对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01试验例三对糖尿病模型小鼠血糖的影响实验1.材料小白鼠山东省天然药物工程技术研究中心提供；知母总皂苷按制备例方法制备；优降糖天津力生制药厂产品，批号9903042.方法取小白鼠150只，雌雄各半，体重24-28g，10只为正常对照组，其余尾静脉注射四氧嘧啶55mg/Kg，72h后测空腹血糖，选取血糖值＞11mmo/L的高血糖小鼠60只，按血糖高低随机分为6组糖尿病模型对照组、优降糖组和知母总皂苷4个剂量组(50mg/Kg，150mg/Kg，450mg/Kg，1350mg/Kg)，使各组的血糖无显著性差异。灌胃给药10d，于末次给药后7h，断尾采血，测血糖浓度；然后断头处死小鼠，取血液离心分离血清，置-20℃冰箱保存，做胰岛素放射免疫测定备用；小鼠剖腹，自肝内门静脉按10ml/只的剂量，用注射器将生理盐水缓慢注入肝脏，将肝脏中残留血液冲洗掉，取出肝脏，称重，按1g肝加入PH7.4等渗磷酸盐缓冲液50ml用组织研磨器制备匀浆，取匀浆液0.5ml，加入4％的磺基水杨酸溶液0.5ml，充分混匀，离心，弃沉淀，蒽酮法测定肝糖原含量，见表3。
表3知母总皂苷对四氧嘧啶高血糖小鼠血糖、血胰岛素水平和肝糖原含量的影响
与正常对照组相比△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01试验例四对正常小鼠糖耐量的影响实验1.材料知母总皂苷按制备例1制备；大鼠山东省天然药物工程技术研究中心提供拜糖苹德国拜耳医药保健有限公司，批号1011812.方法取小白鼠60只，雌雄各半，体重24-28g，测空腹血糖，随机分为6组正常对照组、拜糖苹组和知母总皂苷4个剂量组(50mg/Kg、150mg/Kg、450mg/Kg、1350mg/Kg)，使各组的血糖无显著性差异。给药后，以10g/Kg剂量淀粉灌胃，分别于给淀粉后0.5h、1h、2h测血糖，见表4。
表4知母总皂苷对正常小鼠糖耐量的影响
与正常对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01
试验例五对糖尿病小鼠糖耐量的影响实验1.材料知母总皂苷按制备例1制备；大鼠山东省天然药物工程技术研究中心提供拜糖苹德国拜耳医药保健有限公司，批号1011812.方法取小白鼠150只，雌雄各半，体重24-28g，10只作为正常对照组，其余尾静脉注射四氧嘧啶55mg/Kg，72h后测空腹血糖，选取血糖值＞11mmo/L的高血糖小鼠50只，随机分为5组拜糖苹组和知母总皂苷4个剂量组(50mg/Kg、150mg/Kg、450mg/Kg、1350mg/Kg)，使各组的血糖无显著性差异。给药后，以10g/Kg剂量淀粉灌胃，分别于给淀粉后0.5h、1h、2h测血糖，见表5。
表5知母总皂苷对四氧嘧啶模型小鼠糖耐量的影响
与模型对照组相比*P＜0.05，**P＜0.0权利要求
1.知母总皂苷在制备治疗或预防糖尿病的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，知母总皂苷在抑制α-葡萄糖苷酶，降低餐后血糖；促进糖代谢，平衡血糖，降低血脂，促进胰岛素分泌，保持血糖长期稳定方面的应用。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其中知母总皂苷中100％＞知母总皂苷含量≥50％，100％＞菝蓣皂苷元含量≥30％。
4.一种知母总皂苷的制备方法将知母药材粉碎，加70％乙醇浸泡4小时，常温超声提取三次，溶剂倍数为4，4，3，提取时间为3小时，合并滤液，过滤后减压浓缩至醇含量为30％，上处理好的AB-8大孔树脂，用30％乙醇洗脱2个柱体积，50％乙醇洗脱1个柱体积，95％乙醇洗脱2个柱体积，收集95％乙醇洗脱液，浓缩至膏，真空干燥即得。
全文摘要
本发明提供了知母总皂苷在制备治疗或预防糖尿病的药物中应用，具体地提供了知母总皂苷在抑制α－葡萄糖苷酶，降低餐后血糖；促进糖代谢，平衡血糖，降低血脂，促进胰岛素分泌，保持血糖长期稳定方面的应用。
文档编号A61K31/7042GK1679866SQ20051005463
公开日2005年10月12日 申请日期2005年3月7日 优先权日2004年3月8日
发明者刘志峰, 李春梅, 雷庆忠, 李大磊, 李慎军 申请人:山东绿叶天然药物研究开发有限公司