专利名称：拟人参皂苷元在制备治疗或预防老年性痴呆的药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及拟人参皂苷元在制备治疗或预防老年性痴呆的药物中的应用。
背景技术：
老年性痴呆主要包括阿尔茨海默病(AD)和血管性痴呆(VD)，阿尔茨海默病约占60～70％，血管性痴呆约占20～30％。
阿尔茨海默病是一种由多源性因素引起的原发性大脑神经退行性病变，为特有的中枢胆碱能神经元的大量死亡及丢失。主要发生在皮质区、杏仁核、嗅球和少数皮质下核团，如前脑基底部的Meynert氏核、蓝斑核、外侧下丘脑和内侧网状结构等，伴有神经炎斑、神经纤维缠结的形成，并有含β折片结构的淀粉样蛋白(Aβ)沉积。Aβ沉积导致胆碱能神经细胞的损害，胆碱乙酰基转移酶水平下降和乙酰胆碱递质合成的降低和抑制释放。患者的主要表现为大脑皮层获得性高级障碍，包括记忆、语言、感觉和运动等功能的进行性损害。
血管性痴呆(VD)是由脑血管因素导致脑组织损害引起的痴呆综合征，包括缺血性脑卒中、出血性脑卒中以及急或慢性缺氧性脑血管病变引起的痴呆，可能是老年性痴呆中仅有的可预防和治疗的一种痴呆，血管性痴呆能加重阿尔茨海默病的症状。血管性痴呆病程呈阶梯性恶化，早期功能缺陷呈“斑块”状分布，有局灶性神经症状和体征。绝大多数研究证实，脑血管病是血管性痴呆的基本原因。综上所述，开发研制新型有效、不良反应极小的治疗或预防老年性痴呆的药物已经是刻不容缓。
拟人参皂苷元(ocotillol)是由拟人参皂苷F11(从西洋参中分离提取的四环三萜类人参二醇型皂苷)转化得到的苷元。
拟人参皂苷元结构式本发明人通过大量的实验研究，发现拟人参皂苷元具有治疗或预防老年性痴呆的医药用途。
发明内容
本发明提供了拟人参皂苷元在制备治疗或预防老年性痴呆的药物中的应用。
本发明提供了拟人参皂苷元在制备治疗或预防阿尔茨海默病(AD)的应用。
本发明提供了拟人参皂苷元在制备治疗或预防血管性痴呆(VD)的应用。
本发明所述的拟人参皂苷元在用于上述任一用途时，其使用剂量范围为5mg～400mg/天，优选50mg～200mg/天。
本发明提供了以拟人参皂苷元为活性成分的用于治疗或预防老年性痴呆的药物组合物，拟人参皂苷元的含量为5mg～400mg，优选为50mg～200mg。
本发明所述的拟人参皂苷元可以按CN200410023510.7中所述的方法制备。
本发明中使用的拟人参皂苷元可以单独使用或以药物组合物形式使用。药物组合物包括作为活性成分的拟人参皂苷元及药用载体。该药物组合物可以通过口服、舌下、经皮、经肌肉或静脉途径给药。药物组合物可以以粉针剂、注射液、片剂、胶囊、软胶囊、滴丸、糖浆、口嚼剂、贴剂或口服液的形式存在。本发明所提供的各种药物剂型均可以以药学常规方法制备而成。
本发明人通过下列试验证实了拟人参皂苷元(ocotillol)具有治疗或预防老年性痴呆的作用，但并不限于此。试验所用的拟人参皂苷元由山东省天然药物工程技术研究中心天然药物化学研究室提供，经HPLC检测含量＞95％。
具体实施例方式制备例1制备拟人参皂苷元将10升甘油加入小型具油浴加热和搅拌的反应罐中，再分别加入1kg的氢氧化钠和1kg西洋参茎叶皂苷，搅拌，常压下持续加热升温，升温至210℃下保温反应40分钟，反应完毕，将反应液倾入60倍冷水中并搅拌，析出沉淀。静置，过滤，水洗至中性，即得拟人参皂苷元粗品。再将此粗品经硅胶柱层析，以正己烷/乙酸乙酯(2∶1)洗脱，回收溶剂，以甲醇-乙酸乙酯混合溶剂重结晶得到40g拟人参皂苷元，收率4％。
制备例2制备拟人参皂苷元片剂称取拟人参皂苷元50g，葡甲胺30g，与120g微晶纤维素用5％PVP-乙醇溶液制粒，干燥后，加1％的硬脂酸镁，压片，规格为50mg/粒(以拟人参皂苷元计)。
制备例3制备拟人参皂苷元胶囊称取拟人参皂苷元50g，葡甲胺45g，与95g微晶纤维素用5％PVP-乙醇溶液制粒，干燥后，装入胶囊，规格为50mg/粒(以拟人参皂苷元计)。
制备例4制备拟人参皂苷元滴丸称取拟人参皂苷元5g，葡甲胺6g，溶于41gPEG6000中，90℃下保温，滴速1个/秒，规格为5mg/粒(以拟人参皂苷元计)，丸重约为50mg，溶出度90％以上/30分钟。
试验例1拟人参皂苷元对侧脑室注射β淀粉肽所致痴呆大鼠记忆获得性障碍的影响1材料拟人参皂苷元(ocotillol)按制备例方法制备。
β淀粉样肽25～35片段，Sigma公司。
哈伯因(石杉碱甲，Huperzine A)，河南竹林众生制药股份有限公司豫中制药厂产品，批号为0008036。
大鼠跳台装置，北京医科大学仪器厂生产。
Y型水迷宫装置，中国医学科学院药物所产品。
动物普通级Wistar大鼠，雌雄各半，体重250g-280g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，合格证号鲁动质字200106005号。
2方法与结果取大鼠60只，随机分为正常对照组，模型对照组，ocotillol小剂量组(0.5mg/kg)，ocotillol中剂量组(5mg/kg)，ocotillol大剂量组(40mg/kg)，哈伯因组(0.2mg·kg-1)，各组动物分别按文献陈勤，夏宗勤，胡雅儿.知母皂苷元对拟痴呆大鼠β-淀粉样肽沉积及胆碱能系统功能的影响.中国药理学通报，2002，18(4)390-3.所述方法，行脑定位右侧单侧脑室注射β淀粉样肽4μg/只，正常对照组注射等量生理盐水。造模结束后，灌胃相应药物，每天1次，连续30天后按文献徐淑云，卞如濂，陈修.药理实验方法学.北京人民卫生出版社，1991，662所述方法进行训练。训练前，先将大鼠放在梯子附近使其自行爬上2次，之后分3阶段进行训练。第1阶段用挡板在A处拦住，使大鼠从A处开始训练；第2阶段用挡板拦住B处，由此开始训练；第3阶段由起点C处开始训练。每一阶段学习训练2次，休息5min后再进行下一阶段训练。全部训练完毕后使大鼠休息5min，再将其放于爬梯附近使其自行爬上2次，然后直接将其放于C处，记录大鼠游完全程到达爬梯的时间和进入盲端的次数(错误次数)，5min不能游出者按5min计，以此作为学习成绩。24h后重复测试，作为记忆成绩。
结果如表1显示，模型组大鼠的学习成绩、记忆成绩与假手术组相比，错误次数明显增多、游泳时间明显延长；ocotillol剂量组、哈博因组与模型组比，错误次数、游泳时间明显减少。表明ocotillol对β-淀粉肽所致痴呆大鼠记忆获得性障碍有明显的治疗作用。
表1 ocotillol对血管性痴呆大鼠水迷宫试验的影响(x±s，n＝10)
**P＜0.001vs假手术组；ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01vs模型对照组试验例2拟人参皂苷元对血管性痴呆大鼠学习记忆的影响1材料ocotillol按制备例方法制备。
尼莫地平片由正大青春宝药业有限公司生产，批号000605，每片20mg。
硝普钠由北京双鹤现代医药技术有限责任公司生产，批号005071。
大鼠跳台装置，北京医科大学仪器厂生产。
Y型水迷宫装置，中国医学科学院药物所产品。
动物普通级Wistar大鼠，雌雄各半，体重250g-280g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，合格证号鲁动质字200106005号。
2方法与结果2.1拟人参皂苷元对血管性痴呆大鼠跳台试验的影响取大鼠60只，随机分为假手术组，模型组，尼莫地平组(10mg/kg)，ocotillol小剂量组(0.5mg/kg)，ocotillol中剂量组(5mg/kg)，ocotillol大剂量组(40mg/kg)，分别灌胃相应药物，每天1次，3天后按文献周小青，刘旺华，李花，等.丹龙醒脑片对血管性痴呆大鼠学习记忆及脑组织兴奋性氨基酸影响的实验研究.湖南中医学院学报，2002，22(2)4-7所述血管性痴呆大鼠模型建立方法，将水合氯醛麻醉的大鼠腹腔注射0.05％硝普钠(5ml/kg)，常规消毒，分离双侧颈总动脉，用无创动脉夹夹闭，10min后，再通10min，再夹闭10min。再通后，伤口严格消毒，缝合，回笼室温(27±0.5)℃饲养并灌胃相应药物，每天1次，连续30天。假手术组麻醉及手术过程同模型组，但不阻断双侧颈总动脉，不注射硝普钠。
造模后第11天开始按文献周小青，刘旺华，李花，等.丹龙醒脑片对血管性痴呆大鼠学习记忆及脑组织脂质过氧化和钙超载的影响.湖南中医学院学报，2002，22(3)1-5所述方法进行学习训练。训练前先将动物放入箱中自由活动3min，熟悉环境，然后将动物置于圆台上，接通铜栅电源，记录动物3min内错误次数(动物跳下圆台次数)及受电击总时间，作为学习训练成绩。24h后直接将动物置于圆台上，记录其放入至第1次下台受到电击的时间(潜伏期)、3min内错误次数及受电击总时间，作为记忆测试成绩。
结果如表2显示，模型组大鼠的学习成绩、记忆成绩与假手术组相比，错误次数及受电击时间显著增多，潜伏期(记忆成绩)明显缩短。Ocotillol剂量组、尼莫地平组与模型组比较，错误次数、受电击时间均明显减少；潜伏期(记忆成绩)明显延长。
表2 ocotillol对血管性痴呆大鼠跳台试验的影响(x±s)
**P＜0.01vs假手术组；ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01vs模型对照组2.2拟人参皂苷元对血管性痴呆大鼠水迷宫试验的影响分组、给药、造模同上。造模后第30天按文献徐淑云，卞如濂，陈修.药理实验方法学.北京人民卫生出版社，1991，662所述方法进行训练。训练前，先将大鼠放在梯子附近使其自行爬上2次，之后分3阶段进行训练。第1阶段用挡板在A处拦住，使大鼠从A处开始训练；第2阶段用挡板拦住B处，由此开始训练；第3阶段由起点C处开始训练。每一阶段学习训练2次，休息5min后再进行下一阶段训练。全部训练完毕后使大鼠休息5min，再将其放于爬梯附近使其自行爬上2次，然后直接将其放于C处，记录大鼠游完全程到达爬梯的时间和进入盲端的次数(错误次数)，5min不能游出者按5min计，以此作为学习成绩。24h后重复测试，作为记忆成绩。
结果如表3显示，模型组大鼠的学习成绩、记忆成绩与假手术组相比，错误次数明显增多、游泳时间明显延长；ocotillol剂量组、尼莫地平组与模型组比，错误次数、游泳时间明显减少。
表3 ocotillol对血管性痴呆大鼠水迷宫试验的影响(x±s)
***P＜0.001vs假手术组；ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01vs模型对照组试验例3拟人参皂苷元对血管性痴呆大鼠脑神经细胞的保护作用1材料ocotillol按制备例方法制备。
尼莫地平片由正大青春宝药业有限公司生产，批号000605，每片20mg。
硝普钠由北京双鹤现代医药技术有限责任公司生产，批号005071。
动物普通级Wistar大鼠，雌雄各半，体重250g-280g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，合格证号鲁动质字200106005号。
2方法与结果2.1拟人参皂苷元对血管性痴呆大鼠跳台试验的影响取大鼠60只，随机分为假手术组，模型组，尼莫地平组(10mg/kg)，ocotillol小剂量组(0.5mg/kg)，ocotillol中剂量组(5mg/kg)，ocotillol大剂量组(40mg/kg)，分别灌胃相应药物，每天1次，3天后按文献周小青，刘旺华，李花，等.丹龙醒脑片对血管性痴呆大鼠学习记忆及脑组织兴奋性氨基酸影响的实验研究.湖南中医学院学报，2002，22(2)4-7所述血管性痴呆大鼠模型建立方法，将水合氯醛麻醉的大鼠腹腔注射0.05％硝普钠(5ml/kg)，常规消毒，分离双侧颈总动脉，用无创动脉夹夹闭，10min后，再通10min，再夹闭10min。再通后，伤口严格消毒，缝合，回笼室温(27±0.5)℃饲养并灌胃相应药物，每天1次，连续7天。假手术组麻醉及手术过程同模型组，但不阻断双侧颈总动脉，不注射硝普钠。给药7天后处死大鼠，取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，冠状切成5片，脑片置10％福尔马林中固定，经脱水、浸蜡、包埋、切片等步骤后，制成8um厚的组织切片，甲苯胺蓝染色，选择每只大鼠视交叉与漏斗柄连线中点处按文献刘小光，冯亦璞.丁基苯酞对局部脑缺血大鼠行为和病理改变的保护作用.药学学报.1995，30(12)896-903.所述方法用细胞计数器进行细胞计数，细胞核消失、细胞体暗染作为神经元坏死的指标，计算坏死神经元数占总神经元数的百分比。数据用x±SD表示，组内给药前后、组间均以参比差值法(ANOVA)进行统计学处理。
结果显示，模型对照组大鼠神经元周围间隙扩大，出现散在的暗染神经元，神经细胞出现不同程度的皱缩。给予ocotillol组动物有不同程度的减轻。我们以相同切面的脑片半影区来进行细胞计数。由表2可见，ocotillol大剂量、中剂量治疗组皮层、纹状体神经元坏死百分比明显减少，与模型对照组比较差异显著(P＜0.05或P＜0.01)。表明ocotillol能够明显抑制痴呆大鼠脑神经细胞的损伤。
表4 ocotillol对局部脑缺血大鼠神经元坏死百分比的影响(x±SD，n＝6)
与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01试验例4拟人参皂苷元急性毒性试验1材料ocotillol按制备例方法制备。
清洁级昆明系小鼠，18～22g，由山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供，合格证号鲁动质字200106003号。饲料由中国药品生物制品鉴定检验所提供。按SOP要求检疫一周，剔除不合格动物。试验室与饲养室条件一致。室温18～25℃，湿度40～60％，过滤送风，光照12小时。自由摄食和饮水，每日更换饮水瓶一次。
2方法2.1剂量设计动物药效试验显示小鼠口服10mg/kg即有明显的抗老年性痴呆作用。拟人参皂苷元能够配制的可供灌胃用的混悬液为100mg/ml，小鼠灌胃给药的最大允许体积为1ml/只，故设计给药剂量为小鼠5.0g/kg，每日给药1次。
2.2分组、给药取健康小鼠40只，雌雄各半。随机分为生理盐水组和拟人参皂苷元组，每组20只。称重后，按5.0g/kg的剂量、1ml/20g的给药体积灌胃，对照组灌胃等体积生理盐水。给药后密切观察小鼠的毒性反应和死亡情况；4小时后，改为每天观察一次，连续14天。每周测量体重1次。
3结果结果如表5所示，灌胃给予ocotillol后，小鼠活动未见异常。4小时内，未见耳朵、眼睑、四足等部位颜色的改变，尿液颜色未见明显异常。14天内，小鼠毛色光亮，饮食、活动以及体重都与对照组无显著差异。
表5小鼠口服5.0g/kg拟人参皂苷元体重的变化(x±s)
权利要求
1.拟人参皂苷元在制备治疗或预防老年性痴呆的药物中的应用。
2.拟人参皂苷元在制备治疗或预防阿尔茨海默病的药物中的应用。
3.拟人参皂苷元在制备治疗或预防血管性痴呆的药物中的应用。
4.根据权利要求1-3任一所述的应用，拟人参皂苷元的使用剂量为5mg～400mg/天。
5.根据权利要求4所述的应用，拟人参皂苷元的使用剂量优选为50mg～200mg/天。
6.以拟人参皂苷元为活性成分的用于治疗或预防老年性痴呆的药物组合物，拟人参皂苷元的含量为5mg～400mg。
7.根据权利要求6所述的组合物，拟人参皂苷元的含量优选为50mg～200mg。
8.根据权利要求6或7所述的药物组合物，其可以通过口服、舌下、经皮、经肌肉或静脉途径给药。
9.根据要求6或7所述的药物组合物，其可以以粉针剂、注射液、片剂、胶囊、软胶囊、滴丸、糖浆、口嚼剂、贴剂或口服液形式存在。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其优选以粉针剂、注射液、片剂、胶囊、软胶囊、滴丸或糖浆的形式存在。
全文摘要
本发明提供了拟人参皂苷元在制备治疗或预防老年性痴呆的药物中的用途。具体地提供了其在制备治疗或预防阿尔茨海默病的药物中的应用，在制备治疗或预防血管性痴呆的药物中的应用。本发明还提供了含有拟人参皂苷元的用于老年痴呆的药物组合物。
文档编号A61K9/14GK1762368SQ200510113960
公开日2006年4月26日 申请日期2005年10月18日 优先权日2004年10月19日
发明者孙芳, 张太平, 马双刚, 田京伟 申请人:山东绿叶制药有限公司